專利名稱：洋薊中高純度抗病毒活性組分的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥或天然產(chǎn)物中有效成分的分離純化方法，主要涉及從中藥或天
然產(chǎn)物中提取、分離單體化合物的方法，具體涉及一種高純度咖啡?？鼘幩犷惢衔?br> l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩?，5-0-咖啡?？鼘幩?，1，
3- 二-0-咖啡?？鼘幩?，1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸，3，
4- 二 -0-咖啡?？鼘幩岷?， 5- 二 -0-咖啡?？鼘幩岬姆蛛x制備方法。
背景技術(shù)：
洋薊(Cynara scolymus L.，又名菜薊、朝鮮薊、洋百合、法國(guó)百合、荷花百合) 系菊科多年生草本植物。原產(chǎn)地中海沿岸。我國(guó)在20世紀(jì)90年代從國(guó)外引種，目前湖 南、浙江和云南等地均有大規(guī)模的種植。洋薊的花蕾(肉質(zhì)花托和總苞片)、莖葉自古藥 食兩用，具有豐富的食用和生理活性價(jià)值，傳統(tǒng)用于消化不良、肝膽疾患、利尿解毒、 降脂、降壓等。藥理研究表明，洋薊中含有多種抗病毒活性組分，如單咖啡?？鼘幩犷?化合物(1-0-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡酰奎寧酸，4-0-咖啡?？鼘幩岷?-0-咖啡酰奎寧 酸)以及二咖啡?？鼘幩犷惢衔?l， 3-二-0-咖啡酰奎寧酸，1， 5-二-0-咖啡?？鼘?br> 酸，3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?等。 咖啡?？鼘幩犷惢衔锸怯煽崴岷涂Х人峥s合而成的一類多酚類化合物，廣 泛存在于植物界中，廣為分布的單咖啡酰奎寧酸類化合物l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖 啡?？鼘幩?，4-0-咖啡酰奎寧酸和5-0-咖啡酰奎寧酸為同分異構(gòu)體，此類化合物的區(qū) 別在于一分子的咖啡酰基在奎寧酸上的連接位置不同，分子式均為(^16111809;而二咖 啡?；鼘幩犷惢衔餅?， 3-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3，
5- 二-0-咖啡酰奎寧酸，3， 4-二-0-咖啡酰奎寧酸和4， 5-二-0-咖啡?？鼘幩嵋不橥?分異構(gòu)體，五者之間的的區(qū)別在于兩個(gè)咖啡?；诳鼘幩嵘系倪B接位置不同，分子式均 為(^251124012，分子量為516。結(jié)構(gòu)式如下
R4Os
R30 4 1 COOH
OR OR,
咖Bfft基=HO —-、 J)
HO&=咖啡?；?，=R3=R4=H1-0-咖啡?？鼘幩?咖啡?；?R3=R4=H3-0-咖啡?？鼘幩酭3=咖啡?；?，=R2=R4=H 44-0-咖啡?？鼘幩?br> R4=咖啡?；?，R丄=R2=R3=H5-0-咖啡酰奎寧酸(綠原酸)=R2 =咖啡?；琑3=R4=H1， 3-二-0-咖啡?？鼘幩?洋薊酸)&=R4 =咖啡?；琑2=R3=H1， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸&=R4 =咖啡?；琑2=R3=H1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩酭2=R4 =咖啡?；?，&=R3=H3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩酭2=R3 =咖啡酰基，=R4=H3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩酭3=R4 =咖啡?；?，=R2=H4， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸 近代藥理學(xué)試驗(yàn)研究表明咖啡?？鼘幩犷惢衔锞哂卸喾N重要生理活性，主 要是針對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，抑制乙肝病毒、艾滋病毒、單純皰疹病毒及流感病毒，抑制 白三烯合成和釋放，抑制組胺釋放，從而可用于抗病毒、抗炎和治療過敏性疾病。此外 還發(fā)現(xiàn)其具有強(qiáng)效的抗氧化作用、抑制脂氧酶抗動(dòng)脈粥硬化作用、抗血小板聚集活性以 及降血脂作用等活性。 咖啡?？鼘幩犷惢衔餅榘咨勰罟腆w，易溶于熱水、熱甲醇、熱乙醇，不 溶于乙醚、苯等極性較小的有機(jī)溶劑，受熱發(fā)生氧化分解或轉(zhuǎn)化為其它二咖啡?？鼘幩?類化合物，此外，三個(gè)化合物在溶液中不穩(wěn)定，能夠相互轉(zhuǎn)化，這給它們的分離純化造 成很大的困難。因此，建立一種高效、快速的從中藥或天然藥物中分離純化高純度的多 個(gè)咖啡?？鼘幩犷惢衔?，對(duì)開發(fā)具有特殊療效的現(xiàn)代中藥制劑和充分利用我國(guó)的藥材 資源等具有重要意義。 目前通用的咖啡?？鼘幩犷惢衔锓蛛x提取方法是用甲醇、乙醇或水回流提 取，減壓濃縮分離提取液得到浸膏，將浸膏懸浮于水，依次用石油醚或正己烷、氯仿或 乙酸乙酯、水飽和的正丁醇等不同極性的溶劑萃取?？Х弱？鼘幩犷惢衔镆话慵性?正丁醇相，再利用正相硅膠柱層析，使用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇等溶劑洗脫， 以及過Sephadex LH-20柱色譜或制備液相色譜得到單一化合物。這些方法步驟復(fù)雜， 費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且回收率低，成本高，不適合工業(yè)化。高速逆流色譜(high speed counter current chromatography, HSCCC)是20世紀(jì)80年代初期發(fā)展起來的一種無需使用任何固 態(tài)支持介質(zhì)的液-液分配色譜技術(shù)，其基本原理是根據(jù)被分離的物質(zhì)在兩相溶劑系統(tǒng)中的 分配系數(shù)不同而得到最終分離；這種分離技術(shù)由于不使用固體支持介質(zhì)，避免了因與固 體填料發(fā)生不可逆吸附而造成的樣品損失、失活變性等常規(guī)填料易產(chǎn)生的弊端，可使樣 品得以全部回收，且具有分離容量大、性能強(qiáng)、高效、快速的特點(diǎn)，尤其適用于制備性 分離，逆流色譜已廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離和純化。逆 流色譜技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用結(jié)合高效制備液相色譜高效的分離純化能力解決了目前咖啡酰 奎寧酸類化合物分離純化技術(shù)面臨的難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服傳統(tǒng)分離技術(shù)的缺陷，提供一種從粗提物中分 離純化l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘?酸，l， 3-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸，3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?3， 4-二-O-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩岬闹苽浞椒?，該方法具有操作簡(jiǎn) 便，分離量大，回收率高等優(yōu)點(diǎn)。3/5頁 本發(fā)明的技術(shù)方案主要包括
a)粗提物的制備 將洋薊植物粉碎，用水-強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑提取，提取液減壓濃縮至無醇味，并 經(jīng)離心去除雜質(zhì)后得到澄清的濃縮液，進(jìn)行大孔吸附樹脂柱層析，先以水洗至近無色， 再以不同濃度的乙醇水溶液梯度洗脫，接收50 70%的乙醇洗脫物，將洗脫液減壓濃縮 至無醇味，加入乙醇至含醇量70 80%，除去沉淀，取上清液濃縮，得含咖啡?？鼘幩?類化合物的粗品。 b)目標(biāo)化合物的分離純化 將富含咖啡?？鼘幩犷惢衔锏拇痔嵛镎婵崭稍锖螅酶咚倌媪魃V結(jié)合高效 制備液相色譜進(jìn)行分離制備，根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖或者TLC圖譜收集目標(biāo)組份。
目標(biāo)組分經(jīng)真空干燥后，用有機(jī)溶劑或水-有機(jī)溶劑的混合液進(jìn)行重結(jié)晶即可得 高純度的l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩?，5-0-咖啡酰奎寧 酸，1， 3-二-0-咖啡酰奎寧酸，1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?， 3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩釂误w化合物。
制備方法中，步驟a)中所用原料優(yōu)選菊科洋薊；提取溶劑為醇水混合溶劑， 其中醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇等或它們的混合物，優(yōu)選甲醇或乙醇， 醇水混合溶劑可以是醇和水以任何比例混合的溶劑，優(yōu)選乙醇和水混合溶劑，其間優(yōu)選 70 80%的乙醇水溶液。提取溶劑的重量為藥材重量的1 20倍，優(yōu)選6 10倍；提 取時(shí)間為0.5-5小時(shí)，優(yōu)選2小時(shí)；提取次數(shù)為l-5次，優(yōu)選3次；柱層析所用介質(zhì)為大孔 吸附樹脂、聚酰胺、反相硅膠或葡聚糖凝膠類，優(yōu)選DIOI， AB-8， HPDIOO， HPD300， D1或D2型大孔吸附樹脂，洗脫溶劑優(yōu)選30 40%乙醇水溶液；步驟b)中，優(yōu)選脂肪 酯-脂肪醇-水或者鹵代烴-脂肪醇-水組成的溶劑體系進(jìn)行高速逆流色譜，脂肪酯可以是 乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、甲酸乙酯，最優(yōu)選為乙酸乙酯，鹵代烴可以是氯仿、 二氯甲烷或四氯甲烷，最優(yōu)選為氯仿，脂肪醇可以是甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇，最 優(yōu)選為甲醇，其中主機(jī)轉(zhuǎn)速正轉(zhuǎn)為600 1200rpm，優(yōu)選800rpm，流動(dòng)相泵入柱內(nèi)的流速 為0.5 5mL/min，優(yōu)選1.5mL/min，實(shí)驗(yàn)條件溫度為10 30°C ，優(yōu)選為25。C，上相為固 定相，下相為流動(dòng)相；優(yōu)選脂肪醇-水-酸或者脂肪腈-水-酸組成的溶劑體系進(jìn)行高效液 相色譜分離制備，脂肪醇可以是甲醇、乙醇等，最優(yōu)選為甲醇，脂肪腈最優(yōu)選為乙腈， 酸可以是甲酸、乙酸、磷酸鹽緩沖溶液等，最優(yōu)選為乙酸，其中流速為5 20mL/min， 優(yōu)選10mL/min，實(shí)驗(yàn)條件溫度為10 30°C，優(yōu)選為25t:，采用梯度洗脫的方式；由于 咖啡?？鼘幩犷惢衔锏牟环€(wěn)定性，分離和收集到的目標(biāo)成分，必須立即真空干燥后重 結(jié)晶，重結(jié)晶溶劑為有機(jī)溶劑或水-有機(jī)溶劑的混合液，優(yōu)選80%甲醇水溶液或80%乙 醇水溶液。 本發(fā)明采用高速逆流色譜儀，其根據(jù)被分離的物質(zhì)在兩相溶劑系統(tǒng)中的分配系 數(shù)不同而得到最終分離，這種分離技術(shù)由于不使用固體支持介質(zhì)，避免了因與固體填料 發(fā)生不可逆吸附而造成的樣品損失、失活變性等常規(guī)填料易產(chǎn)生的弊端，可使樣品得以 全部回收，具有分離容量大、性能強(qiáng)、高效、快速的特點(diǎn)。對(duì)純度達(dá)不到98%的咖啡酰 基奎寧酸類化合物結(jié)合高效制備液相色譜進(jìn)行分離。通過控制實(shí)驗(yàn)條件，可以獲得高純 度的1-0-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡酰奎寧酸，4-0-咖啡?？鼘幩?，5-0-咖啡?？鼘幩?，1， 3-二-0-咖啡?？鼘幩?，1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 4-二-0-咖啡酰奎寧酸和4， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?純度大于98% )。 本發(fā)明方法適 合于從各種工藝途徑制備的含不同含量的咖啡?？鼘幩犷惢衔锏拇痔嵛镏兄苽涓呒兌?的l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡?？鼘幩?，4-0-咖啡酰奎寧酸，5-0-咖啡酰奎寧酸， 1， 3-二-0-咖啡酰奎寧酸，1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩釂误w化合物，適合于各種型號(hào)高速逆 流色譜儀以及高效制備液相色譜儀制備l-O-咖啡酰奎寧酸，3-0-咖啡?？鼘幩?，4-0-咖 啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩?，1， 3-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡酰奎寧 酸，3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?單體化合物，能直接使用大量咖啡酰奎寧酸粗提物或其中幾種的混合物或其它類似合成 物進(jìn)行進(jìn)樣。 下面通過實(shí)施例及附圖進(jìn)一步說明本發(fā)明。必須說明下述實(shí)施例是用于說明本 發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行簡(jiǎn)單的改進(jìn)都屬于本發(fā)明 要求保護(hù)的范圍。


圖1為洋薊粗提物的高效液相色譜圖(HPLC)
圖2為本發(fā)明的工藝流程圖
具體實(shí)施例方式
1.將洋薊全草于5(TC干燥，粉碎。取200g生藥，置2000mL圓底燒瓶中，加 入75%乙醇1600mL，回流提取3次，每次2h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味， 回收有機(jī)溶劑。將濃縮液進(jìn)行D101大孔吸附樹脂柱層析，先用水洗至無醇味，再依次 用20%， 40%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集40%乙醇洗脫液，減壓濃縮至無醇味，加入 乙醇至含醇量80%，濾去沉淀，取上清液真空干燥得含二咖啡酰奎寧酸類化合物粗品。
將粗品進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為轉(zhuǎn)速800rpm;溶劑體系乙酸乙酯-正
丁醇-水(3 :2:5， v/v);流速1.5mL/min;溫度25°C ;上相為固定相，下相為流 動(dòng)相；固定相保留率65%。逆流色譜的操作步驟為將HSCCC溶劑體系按比例配制于 分液漏斗中并劇烈振蕩，體系分相平衡后分離出上下相，分別超聲脫氣30min。將固定 相泵入高速逆流色譜儀的螺旋管，待螺旋管完全充滿后，開啟速度控制器，使高速逆流 色譜儀按順時(shí)針方向以800rpm旋轉(zhuǎn)，同時(shí)以1.5mL/min的流速泵人流動(dòng)相。當(dāng)體系達(dá) 到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，將樣品由進(jìn)樣閥注入分離管路。柱后流出物以紫外檢測(cè)器檢測(cè)。 根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到九個(gè)流份，將各流份合并濃縮，使用分析型高效 液相色譜儀進(jìn)行純度檢測(cè)。HPLC分析條件:色譜+卞Symmetry⑧(;(l()()r誦X:",mmi. d.， 5iim)，流動(dòng)相為甲醇0.1%醋酸(40 : 60)，流速0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)326nm， 柱溫3(TC (在此條件下，洋薊粗提物高效液相色譜圖見圖1)。對(duì)純度小于98%的流 份經(jīng)過0.45ym的膜過濾，進(jìn)入制備型的高校液相色譜儀分離，制備柱為ZorbaxODS 9.4X250mm，流速為10ml/min，得到純品。各純品用80%乙醇進(jìn)行重結(jié)晶得高純度的 l-O-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡酰奎寧酸，4-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩幔?，3- 二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3，
4- 二 -0-咖啡酰奎寧酸和4， 5- 二 -0-咖啡酰奎寧酸單體化合物(工藝流程圖見圖2)。
權(quán)利要求
一種洋薊中高純度抗病毒活性組分1-O-咖啡?？鼘幩?，3-O-咖啡?？鼘幩?，4-O-咖啡酰奎寧酸，5-O-咖啡?？鼘幩?，1，3-二-O-咖啡?？鼘幩?，1，5-二-O-咖啡酰奎寧酸，3，5-二-O-咖啡酰奎寧酸，3，4-二-O-咖啡?？鼘幩岷?，5-二-O-咖啡?？鼘幩岬姆蛛x純化方法，由粗提物的制備和分離純化兩部分組成。其特征在于a)取含單咖啡?？鼘幩犷惢衔锖?或)雙咖啡?？鼘幩犷惢衔锏闹参餅樵?，粉碎或切成小段，用水或水-強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑的混合液提取，濃縮提取液，回收溶劑，得濃縮液；b)取步驟a)得到的濃縮液經(jīng)柱層析，水洗，然后用醇、酮或它們與水的混合溶劑洗脫；c)將步驟b)得到的洗脫液減壓濃縮至無醇味或無酮味，干燥得含單咖啡?？鼘幩犷惢衔锖?或)雙咖啡?？鼘幩犷惢衔锏拇制?；d)將步驟c)得到的粗品醇沉除雜后，使用高速逆流色譜結(jié)合高效制備液相色譜分離和純化，根據(jù)檢測(cè)譜圖接收目標(biāo)成分流份；e)將步驟d)得到的流份減壓濃縮至一定體積，真空干燥得目標(biāo)化合物；f)將步驟e)得到的化合物，采用重結(jié)晶的方法進(jìn)行精制，得到高純度的1-O-咖啡?？鼘幩?，3-O-咖啡?？鼘幩幔?-O-咖啡?？鼘幩幔?-O-咖啡?？鼘幩幔?，3-二-O-咖啡?？鼘幩?，1，5-二-O-咖啡?？鼘幩?，3，5-二-O-咖啡?？鼘幩?，3，4-二-O-咖啡?？鼘幩岷?，5-二-O-咖啡酰奎寧酸單體化合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度1-0-咖啡?？鼘幩?，3-0-咖啡?？鼘幩?，4-0-咖啡 ?？鼘幩?，5-0-咖啡?？鼘幩?，1， 3-二-0-咖啡?？鼘幩?，1， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?， 3， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩岬姆?離純化方法，其特征步驟在于a)中所用原料優(yōu)選洋薊，還包括含以上九種咖啡?？鼘幩?類化合物中的一種或幾種成分的天然產(chǎn)物；提取溶劑為醇水混合溶劑，提取溶劑的重量 為藥材重量的1 20倍，提取時(shí)間為0.5 5小時(shí)，提取次數(shù)為1 5次；步驟b)中柱 層析所用介質(zhì)為大孔吸附樹脂、聚酰胺、反相硅膠或葡聚糖凝膠類；步驟c)減壓濃縮至 無醇味或無酮味；步驟d)中除雜優(yōu)選醇沉工藝，高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)優(yōu)選脂肪酯-脂 肪醇-水或者卣代烴-脂肪醇-水進(jìn)行；高效制備液相色譜溶劑系統(tǒng)優(yōu)選脂肪醇-水-酸或 者脂肪腈-水-酸進(jìn)行；步驟e)中為真空干燥；步驟f)中重結(jié)晶溶劑為有機(jī)溶劑或水-有 機(jī)溶劑的混合液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1和2的提取植物，其中提取部位是根、莖、葉、種子、花、皮，或 者它們的混合物。
4. 權(quán)利要求3的植物提取物的制備方法，步驟a)中用70 80X的乙醇提取，提取 1 5次，每次用3 10倍量，每次提取0.5 4小時(shí)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2的植物提取物，其中步驟b)中柱層析所用介質(zhì)為市售的大孔吸附 樹脂或聚酰胺樹脂以及改良的大孔吸附樹脂或聚酰胺樹脂，先用0 15%的乙醇水溶液 洗脫，接著用50 70%的乙醇水溶液洗脫，收集50 70%的乙醇洗脫液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，步驟c)的乙醇洗脫液濃縮后，先加入乙醇至含醇量 70 80%，除去沉淀，取上清液濃縮，得咖啡?？鼘幩犷惢衔锎制?。
7. 權(quán)利要求1 6之一的咖啡酰奎寧酸粗提物中咖啡?？鼘幩犷惢衔锏目偤繛?0% -90%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2中所述的1-0-咖啡?？鼘幩幔?-0-咖啡?？鼘幩?，4-0-咖啡?？?寧酸，5-0-咖啡?？鼘幩幔?， 3-二-0-咖啡?？鼘幩幔?， 5-二-0-咖啡?？鼘幩?，3， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸，3， 4-二-0-咖啡?？鼘幩岷?， 5-二-0-咖啡酰奎寧酸的純化制 備方法，其特征在于，所述的步驟d)中優(yōu)選脂肪酯-脂肪醇-水或者鹵代烴-脂肪醇-水組 成的溶劑體系進(jìn)行高速逆流色譜，脂肪酯可以是乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、甲酸 乙酯等；鹵代烴可以是氯仿、二氯甲烷或四氯甲烷等，脂肪醇可以是甲醇、乙醇、異丙 醇或正丁醇。在氯仿-甲醇-水體系中，優(yōu)選用量體積比為2 :2:1;在乙酸乙酯-正丁醇-水體系中，優(yōu)選用量體積比為3 :2:5，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相。所述的步驟d)中優(yōu)選脂肪醇-水-酸或者脂肪腈-水-酸組成的溶劑體系進(jìn)行高效制備液相色 譜分離，脂肪醇可以是甲醇和乙醇等，脂肪腈可以是乙腈等，酸可以是乙酸、甲酸、磷 酸鹽溶液等，采用梯度洗脫。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種高純度咖啡?？鼘幩犷惢衔锏闹苽浞椒?，其特征在 于在高速逆流色譜儀中，先用固定相存滿逆流色譜儀柱子，調(diào)節(jié)主機(jī)轉(zhuǎn)速，將流動(dòng)相 泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜接收目標(biāo) 成分；其中主機(jī)轉(zhuǎn)速正轉(zhuǎn)為600 1200rpm，所述的流動(dòng)相泵入柱內(nèi)的流速為0.5 5mL/ min，實(shí)驗(yàn)條件溫度為10 3(TC;在高效制備液相色譜儀中，色譜柱為半制備型C18柱， 流速為5 20mL/min，實(shí)驗(yàn)條件溫度為10 30°C 。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的九個(gè)目標(biāo)產(chǎn)物的純化方法，其特征在于，所述的步驟f) 中，優(yōu)選80 %的甲醇或80 %的乙醇進(jìn)行重結(jié)晶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效分離制備洋薊中高純度抗病毒活性組分(單咖啡酰奎寧酸類化合物以及二咖啡?？鼘幩犷惢衔?的方法，主要包括使用醇水溶液提取洋薊鮮品或干品，濃縮后進(jìn)行柱層析分離，制備富含抗病毒活性組分的粗提物，然后對(duì)粗提物再以高速逆流色譜結(jié)合高效制備液相色譜進(jìn)行分離純化，最后采用重結(jié)晶的方法進(jìn)行精制，得到高純度的1-O-咖啡?？鼘幩?，3-O-咖啡?？鼘幩?，4-O-咖啡酰奎寧酸，5-O-咖啡?？鼘幩?，1，3-二-O-咖啡?？鼘幩?，1，5-二-O-咖啡?？鼘幩幔?，5-二-O-咖啡?？鼘幩?，3，4-二-O-咖啡?？鼘幩岷?，5-二-O-咖啡?？鼘幩?。該方法適用于以各種途徑獲得的各種含以上咖啡?？鼘幩犷惢衔镏械囊环N或幾種成分的天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物提取物為原料制備高純度單體，并且步驟簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，效率高，成本低，易于重復(fù)，分離制備量大。使用該方法制備的咖啡?？鼘幩犷惢衔锏募兌瓤蛇_(dá)98％。
文檔編號(hào)C07C67/56GK101691330SQ20091004442
公開日2010年4月7日 申請(qǐng)日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者張宇平, 施樹云 申請(qǐng)人:中南大學(xué)