專利名稱：一種隱丹參酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明具體的涉及一種隱丹參酮的制備方法。
背景技術(shù)：
丹參是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥中最常用藥物之一，來(lái)源于唇型科鼠尾草屬植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根莖。丹參最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品藥物，主要用于心腦血管疾病的治療。2005年《藥典》(中藥部)記載，丹參具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效。丹參的活性成分分為脂溶性和水溶性兩部分。丹參水溶性部分是以丹酚酸B為代表的酚酸類化合物，而丹參的脂溶性活性成分為丹參酮，是萜菲醌類化合物，其化學(xué)成分主要有丹參酮I，丹參酮II A，隱丹參酮等，它們都是二萜醌類的四環(huán)化合物，在丹參藥材和其 制劑中，隱丹參酮，丹參酮IIA的含量最高?！端幍洹分幸?guī)定，丹參中丹參酮IIA含量不少于0. 2%，丹酚酸B含量不少于3%。目前市售的丹參藥物根據(jù)給藥方式可分為兩大類(I)丹參口服藥物主要有丹參片、復(fù)方丹參片和復(fù)方丹參滴丸幾種；(2)丹參注射藥物主要有丹參注射液、丹參酮IIA磺酸鈉注射液、丹參多酚酸鹽注射液，其中后兩者有效成分明確，質(zhì)量控制嚴(yán)格，是市場(chǎng)上的質(zhì)量較高的丹參注射液。我國(guó)丹參產(chǎn)量巨大、價(jià)格低廉，但是丹參脂溶性活性成分含量較低，而其藥品價(jià)格較高。提高其主要活性成分隱丹參酮含量，對(duì)于中藥丹參的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用，具有重要的意義。徐燕等人發(fā)表的“丹參中隱丹參酮的分離工藝研究”(徐燕，薛峰，賈曉妮，張?jiān)?，王軍?丹參中隱丹參酮的分離工藝研究[J].西北藥學(xué)雜志.2008. 23(3) =145-147)中采用硅膠柱層析的方法得到純度較高的隱丹參酮精制品，其缺點(diǎn)是硅膠載量太低，難以多次回收利用，無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化放大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是現(xiàn)有的隱丹參酮的提取分離方法中，收率和純度都很低，且無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的缺陷，而提供了一種隱丹參酮的制備方法。本發(fā)明的制備方法不僅產(chǎn)物收率高，且可以達(dá)到很高的產(chǎn)物純度。本發(fā)明的方法可以進(jìn)行放大生產(chǎn)，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量研究，發(fā)現(xiàn)采用一種特別選擇的大孔反相吸附樹(shù)脂對(duì)丹參脂溶性成分進(jìn)行分離，可得到很高收率的隱丹參酮。本發(fā)明人還進(jìn)一步優(yōu)化了吸附洗脫條件，使得該步驟隱丹參酮的收率大于85 %，且純度大于70%，并且可通過(guò)兩次結(jié)晶使得隱丹參酮的純度達(dá)到98%以上。因此，本發(fā)明涉及一種隱丹參酮的制備方法，其包含下列步驟將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可；其中，所述的大孔反相吸附樹(shù)脂的參數(shù)如下粒徑為50 100 V- m,孔徑為90 110人，介質(zhì)為聚苯乙烯-二乙烯苯。所述的孔徑較佳的為100人。所述的大孔反相吸附樹(shù)脂更佳的為深圳納微科技公司生產(chǎn)的大孔反相吸附脂，型號(hào)為匪PS100，其粒徑為50-100 iim，孔徑為100 A,樹(shù)脂骨架為聚苯乙烯-二乙烯苯。所述的大孔反相吸附樹(shù)脂在使用前，較佳的先進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理的方法可為本領(lǐng)域常規(guī)的預(yù)處理該類樹(shù)脂的方法。優(yōu)選的方法如下用酸水溶液沖洗樹(shù)脂，再用去離子水洗到中性，即可。其中，所述的酸水溶液中的酸可為無(wú)機(jī)酸，如鹽酸，其摩爾濃度較佳的為0. 5 2. 5N，優(yōu)選IN。酸水溶液較佳的為酸的丙酮水溶液，丙酮的體積濃度較佳的為60 90%,優(yōu)選70%。酸水溶液的用量較佳的為2 5個(gè)柱體積，優(yōu)選2 3個(gè)柱體積。更佳的預(yù)處理步驟如下將含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量為3BV，再用去離子水洗到中性。其中，所述的丹參脂溶性成分可由本領(lǐng)域常規(guī)的提取丹參脂溶性成分的方法制得，較佳的包含下列步驟將丹參醇提物混于pH為5 8的水中，過(guò)濾，得濾渣，即可。其中，所述的PH值較佳的為6 7。過(guò)濾前，較佳的還進(jìn)行振蕩混合的步驟。 其中，所述的丹參醇提物可由本領(lǐng)域常規(guī)的制備丹參醇提物的方法制得，較佳的包含下列步驟將粉碎后的丹參藥材用乙醇水溶液浸泡，然后離心，取上清液，濃縮，即可。其中，所述的粉碎后的丹參藥材的粒徑較佳的為20 50目，更佳的為20目。所述的乙醇水溶液與粉碎后的丹參藥材的體積質(zhì)量比較佳的為5 10L/Kg，更佳的為6 8L/Kg。所述的乙醇水溶液的體積濃度較佳的為70% 100%，優(yōu)選90%以上。所述的浸泡的溫度較佳的為60 80°C。所述的浸泡的時(shí)間較佳的為0. 5 2小時(shí)，更佳的為I小時(shí)。所述的浸泡和離心的次數(shù)較佳的為I 3次，更佳的為2次。所述的濃縮較佳的為濃縮至干，可通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在35 50°C (優(yōu)選40°C )的溫度下蒸干。所述的丹參醇提物的最佳的制備方法如下將丹參干藥材粉碎過(guò)20目篩，用70 100%乙醇的水溶液在60 80°C下浸泡提取Ih后離心取上清液，其中乙醇的水溶液與丹參干藥材的體積質(zhì)量比為6 8L/Kg ;此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸至干，得到丹參醇提物。本發(fā)明中，所述的用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離的方法和條件均可為本領(lǐng)域常規(guī)的用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離的方法和條件，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量研究，摸索出以下特別優(yōu)選的步驟和條件以體積濃度60% 95%的乙醇水溶液為洗脫劑，將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可。大孔反相吸附樹(shù)脂的種類同前所述。較佳的，在所述的柱層析分離中，收集隱丹參酮的純度大于70%的洗脫液，即可。其中，所述的柱層析分離的步驟較佳的如下將丹參脂溶性成分上柱后，先用體積濃度60 % 70 %的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度90 % 95 %的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集隱丹參酮的純度大于70%的洗脫液，即可。其中，所述的體積濃度為60% 70%的乙醇水溶液的用量較佳的為2-4個(gè)柱體積，優(yōu)選3個(gè)柱體積，體積濃度90% 95%的乙醇水溶液的用量較佳的為2 4個(gè)柱體積，優(yōu)選3個(gè)柱體積。本發(fā)明中，隱丹參酮的純度的檢測(cè)方法可為本領(lǐng)域常規(guī)的檢測(cè)方法,如通過(guò)HPLC或GC等方法，以隱丹參酮純品為對(duì)照進(jìn)行檢測(cè)。
本發(fā)明中，在將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離之前，較佳的，先將丹參脂溶性成分溶于體積濃度60% 70%的乙醇水溶液中，得丹參脂溶性成分的乙醇溶液，再上柱進(jìn)行柱層析分離。本發(fā)明中，所述的大孔反相吸附樹(shù)脂的質(zhì)量(或體積)可按本領(lǐng)域常規(guī)知識(shí)進(jìn)行選擇，較佳的，前述的粉碎后的丹參藥材與樹(shù)脂體積比為50 200g/L，更佳的為100 150g/L。樹(shù)脂柱的規(guī)格可為本領(lǐng)域常規(guī)規(guī)格，較佳的為高徑比為5 : I 3 : 1，優(yōu)選4 I。本發(fā)明中，在大孔反相吸附樹(shù)脂柱層析分離結(jié)束后，較佳的還包含下列步驟將柱層析分離所得物質(zhì)進(jìn)行本領(lǐng)域常規(guī)的結(jié)晶步驟，得隱丹參酮晶體，即可。
其中，所述的結(jié)晶步驟較佳的包含下列步驟(I)將柱層析分離所得的洗脫液濃縮，得濃縮物，用丙酮溶解，向所得丙酮溶液中滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將所得渾濁液于2-8°C (優(yōu)選4°C )，條件下靜置24 72小時(shí)(最佳為48小時(shí))，得隱丹參酮粗晶體；(2)將步驟(I)所得粗晶體用蒸餾水洗，再用丙酮溶解后加入蒸餾水，至溶液出現(xiàn)渾濁，將所得渾濁液于2-8°C (優(yōu)選4°C )，條件下靜置24 72小時(shí)(最佳為48小時(shí))，得隱丹參酮晶體。步驟(I)中，所述的濃縮為常規(guī)操作，可以是濃縮至干。丙酮的體積較佳的為至濃縮物溶解即可，更佳的，其體積為所述濃縮物體積的2 4倍(優(yōu)選2倍)。根據(jù)本領(lǐng)域常識(shí)，在靜置結(jié)晶后，可通過(guò)抽濾得到隱丹參酮粗晶體。步驟(2)中，所述的蒸餾水洗的次數(shù)可為I 3次，每次用蒸餾水洗滌的用量與粗晶體的體積質(zhì)量比較佳的為10 20L/kg。步驟(2)中所述丙酮的體積較佳的為至粗晶體溶解即可，其體積更佳的為所述粗晶體體積的2 4倍(優(yōu)選2倍)。本發(fā)明中，在上述結(jié)晶步驟之后，得到的晶體的純度大于98% (HPLC檢測(cè))。本發(fā)明中，最佳的，所述的隱丹參酮的制備方法包含下列步驟I、取一定量丹參干藥材粉碎過(guò)20目篩，用體積濃度70-100%乙醇的水溶液在60-80°C下浸泡提取Ih后離心取上清液，所述的乙醇水溶液與粉碎過(guò)篩后的丹參藥材的體積質(zhì)量比為6-8L/Kg，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸至干，得到丹參醇提物。2、用pH7_8的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。
3、用體積濃度60-70 %的乙醇溶解丹參脂溶性成分，上大孔反相吸附樹(shù)脂NMPS-100吸附，用3倍柱體積的60-70%乙醇除雜，用90-95%的乙醇洗脫樹(shù)脂，分步收集，將分步收集的樣品HPLC分析，將純度達(dá)到70%以上的樣品混合。4、將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，至溶液出現(xiàn)渾濁，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98%。本發(fā)明中，上述各優(yōu)選技術(shù)特征可在不違背本領(lǐng)域常識(shí)的前提下任意組合，即得本發(fā)明的各較佳實(shí)例。除特殊說(shuō)明外，本發(fā)明所用的試劑和原料均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于
(I)本發(fā)明的制備方法中，得到的隱丹參酮不僅收率較高，且可以達(dá)到很高的純度。(2)本發(fā)明的制備方法中，用特別選擇的樹(shù)脂來(lái)代替硅膠，不但使載量有較大的提高，而且該樹(shù)脂可以非常容易的再生利用，便于進(jìn)行放大生產(chǎn)，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下述各實(shí)施例中丹參來(lái)源丹參干藥材(產(chǎn)地河南)
型號(hào)為NM PS100大孔樹(shù)脂為深圳納微科技公司生產(chǎn)的大孔反相吸附脂，其粒徑為50-100 μ m,孔徑為100人，樹(shù)脂骨架為聚苯乙烯-二乙烯苯。HPLC條件如下甲醇水=75 25進(jìn)樣量10 μ I 柱溫 35°C流速 O. 8ml/min停止時(shí)間20min檢測(cè)波長(zhǎng)UV 270nmAgilent Eclipsepius C18 柱 5 μ m 4.6X 250nm實(shí)施例中的BV表示柱體積，為本領(lǐng)域常規(guī)單位。以下各實(shí)施例中，原料丹參藥材中的隱丹參酮含量均按本領(lǐng)域常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，丙酮水溶液和乙醇水溶液的濃度均為體積濃度。實(shí)施例I取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加600mL含80%乙醇的水溶液在60°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去乙醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH7的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用70%的乙醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL(樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分乙醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV60%乙醇的水溶液除雜，再用4BV含90%乙醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合，混合液的純度為95. 6%，此步的收率為86. 3%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. 2%，結(jié)晶質(zhì)量為269. 6mg,收率64. 2%。實(shí)施例2取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加700mL含80%乙醇的水溶液在70°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去乙醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH7的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用60%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含60%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含90%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合?；旌弦旱募兌葹?5. I %，此步的收率為86. I %。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. I %，結(jié)晶質(zhì)量為267. 9mg,收率63. 8%。實(shí)施例3取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加700mL含90%こ醇的水溶液在80°C下浸泡提取Ih后離心,取上清液,此操作重復(fù)兩 次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH7的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用70%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含60%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含95%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合。混合液的純度為95. 9%，此步的收率為86. 4%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. 5%，結(jié)晶質(zhì)量為265. 4mg,收率63. 2%。實(shí)施例4取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加800mL含100%こ醇的水溶液在70°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH7的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用70%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含60%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含95%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合?；旌弦旱募兌葹?6. I %，此步的收率為86. 9%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. 9%，結(jié)晶質(zhì)量為273. 4mg,收率65. I %。實(shí)施例5取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加800mL含100%こ醇的水溶液在70°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH8的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用70%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含70%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含90%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合?；旌弦旱募兌葹?6. 6%，此步的收率為88. I %。 將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于99. 3%，結(jié)晶質(zhì)量為282. 7mg,收率67. 3%。實(shí)施例6取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加600mL含80%こ醇的水溶液在80°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH8的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用70%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含60%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含90%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合。混合液的純度為95. 8%，此步的收率為86. 9%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. 6%，結(jié)晶質(zhì)量為270. 5mg,收率64. 4%。實(shí)施例7取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加700mL含70%こ醇的水溶液在80°C下浸泡提取Ih后離心，取上清液，此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用PH7的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用60%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-IOO。上柱后先用5BV含70%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含95%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合?；旌弦旱募兌葹?5. 7%，此步的收率為86. 7%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于98. 4%，結(jié)晶質(zhì)量為273. Img,收率65. 0%。實(shí)施例8取IOOg經(jīng)粉碎過(guò)20目篩的丹參藥材粉末(隱丹參酮含量為O. 42% (重量百分比)，加800mL含90%こ醇的水溶液在70°C下浸泡提取Ih后離心,取上清液,此操作重復(fù)兩次，合并兩次上清液，在40°C下旋蒸除去こ醇，得到丹參醇提物濃縮液。用pH8的水溶解丹參醇提物，振蕩混合后過(guò)濾，濾渣即為丹參脂溶性成分。用60%的こ醇溶解丹參脂溶性成分。取預(yù)處理后的大孔反相吸附樹(shù)脂匪PS-100 IL (樹(shù)脂預(yù)處理步驟采用含IN鹽酸的70%丙酮水溶液沖洗樹(shù)脂，用量約為3BV，再用去離子水洗到中性)裝于Φ80Χ350πιπι層析柱中，將丹參脂溶性成分こ醇溶液上NMPS-100。上柱后先用5BV含70%こ醇的水溶液除雜，再用4BV含95%こ醇將隱丹參酮集中洗下，分步收集洗脫液，并通過(guò)HPLC檢測(cè)，將隱丹參酮純度大于70%的洗脫液混合。混合液的純度為96. 2%，此步的收率為87. 2%。將混合液濃縮至干，以2倍樣品體積丙酮溶解，向丙酮溶液中慢慢滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將渾濁液放置于4°C冰箱靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮粗晶體，抽濾，蒸餾水 洗粗晶體一次，再用2倍樣品體積丙酮溶解后加入少量蒸餾水，于4°C冰箱中靜置過(guò)夜結(jié)晶，得到隱丹參酮晶體，HPLC檢測(cè)其純度大于99. 0%，結(jié)晶質(zhì)量為278. 5mg，收率66. 3%。
權(quán)利要求
1.ー種隱丹參酮的制備方法，其特征在于包含下列步驟將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可；其中，所述的大孔反相吸附樹(shù)脂的參數(shù)如下粒徑為50 100 μ m,孔徑為90 110人，介質(zhì)為聚苯こ烯-ニこ烯苯。
2.如權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于所述的孔徑為100A。
3.如權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于所述的大孔反相吸附樹(shù)脂為深圳納微科技公司生產(chǎn)的大孔反相吸附脂，型號(hào)為NM PS100，其粒徑為50-100 μ m，孔徑為100人，樹(shù)脂骨架為聚苯こ烯-ニこ烯苯。
4.如權(quán)利要求I 3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于所述的大孔反相吸附樹(shù)脂在使用前，先進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理的方法如下用酸水溶液沖洗樹(shù)脂，再用去離子水洗到中性，即可。
5.如權(quán)利要求I 3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于所述的丹參脂溶性成分由下列方法制得將丹參醇提物混于pH為5 8的水中，過(guò)濾，得濾渣，即可。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的pH值為6 7。
7.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的丹參醇提物由下列方法制得將粉碎后的丹參藥材用こ醇水溶液浸泡，然后離心，取上清液，濃縮，即可；其中，所述的粉碎后的丹參藥材的粒徑為20 50目；所述的こ醇水溶液與粉碎后的丹參藥材的體積質(zhì)量比為5 10L/Kg ;所述的こ醇水溶液的體積濃度為70% 100%;所述的浸泡的溫度為60 800C ;所述的浸泡的時(shí)間為O. 5 2小時(shí)；所述的浸泡和離心的次數(shù)為I 3次。
8.如權(quán)利要求I 3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于所述的用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離的方法包含下列步驟以體積濃度60% 95%的こ醇水溶液為洗脫劑，將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述的柱層析分離的步驟如下將丹參脂溶性成分上柱后，先用體積濃度60% 70%的こ醇水溶液進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度90% 95%的こ醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集隱丹參酮的純度大于70%的洗脫液，即可。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于所述的體積濃度為60% 70%的こ醇水溶液的用量為2-4個(gè)柱體積，體積濃度90% 95%的こ醇水溶液的用量為2 4個(gè)柱體積。
11.如權(quán)利要求I 3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于在將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離之前，先將丹參脂溶性成分溶于體積濃度60% 70%的こ醇水溶液中，得丹參脂溶性成分的こ醇溶液，再上柱進(jìn)行柱層析分離。
12.如權(quán)利要求I 3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于在大孔反相吸附樹(shù)脂柱層析分離結(jié)束后，還包含下列步驟將柱層析分離所得物質(zhì)進(jìn)行本領(lǐng)域常規(guī)的結(jié)晶步驟，得隱丹參酮晶體，即可；所述的結(jié)晶的包含下列步驟 (1)將柱層析分離所得的洗脫液濃縮，得濃縮物，用丙酮溶解，向所得丙酮溶液中滴加蒸餾水至溶液出現(xiàn)渾濁，將所得渾濁液于2-8°C，條件下靜置20小時(shí)以上，得隱丹參酮粗晶體； (2)將步驟(I)所得粗晶體用蒸餾水洗，再用丙酮溶解后加入蒸餾水，至溶液出現(xiàn)渾濁，將所得渾濁液于2-8°C條件下靜置20小時(shí)以上，得隱丹參酮晶體。
13.如權(quán)利要求12所述的制備方法，其特征在干步驟⑴或(2)中，所述的將所得渾濁液靜置的溫度為4°C。
14.如權(quán)利要求12所述的制備方法，其特征在干步驟(I)中，丙酮的體積為所述濃縮物體積的2 4倍； 和/或步驟(2)中，所述的蒸餾水洗的次數(shù)為I 3次，毎次用蒸餾水洗滌的用量與粗晶體的體積質(zhì)量比為10 20L/kg ； 和/或步驟(2)中，所述丙酮的體積為所述粗晶體體積的2 4倍。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種隱丹參酮的制備方法，其包含下列步驟將丹參脂溶性成分用大孔反相吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，即可；其中，所述的大孔反相吸附樹(shù)脂的參數(shù)如下粒徑為50～100μm，孔徑為90～110，介質(zhì)為聚苯乙烯-二乙烯苯。本發(fā)明的制備方法不僅產(chǎn)物收率高，且可以達(dá)到很高的產(chǎn)物純度。本發(fā)明的方法還可以進(jìn)行放大生產(chǎn)，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C07J73/00GK102675407SQ201110059589
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者盧亮, 呂靜嫻, 李繼安, 郭瑞峰 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院