專利名稱：一種從空柄假牛肝中提取空柄牛肝素a的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種從空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。
背景技術(shù)：
空柄牛肝素A是一種二萜類化合物，分子式為C3tlH42O8,分子量為530. 66，主要存在于牛肝菌科空柄假牛肝的子實(shí)體中。藥理研究表明，空柄牛肝素A具有抗真菌活性。目前，對空柄牛肝素A的研究較少，經(jīng)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)適宜于大量制備空柄牛肝素 A的工業(yè)化方法的公開報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，本發(fā)明的目的是提供一種從空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
(1)將空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，以75-90%乙醇為提取溶媒進(jìn)行回流提取1-2次，過濾得到提取液；
(2)提取液加活性炭攪拌，40-60°C溫度下保溫脫色20-60min，過濾，得到脫色液；
(3)脫色液濃縮至相對密度為1.05-1.12，通過3000-10000道爾頓的中空纖維超濾膜， 操作壓力為0. 1-0. 3MPa ；
(4)透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，先用水和15-30%乙醇溶液洗脫，再用 3-6BV60-75%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；
(5)粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相色譜儀，紫外在線監(jiān)測，檢測波長209nm，收集目標(biāo)流分，真空干燥得到空柄牛肝素A。所述步驟(2)中活性炭為藥用活性炭，加入量為藥材量的0. 5-洲。所述步驟(4)中大孔吸附樹脂型號可選AB-8、HP20、HZ841或LDA-10型等。所述步驟(5)中流動相為乙腈-水，體積比為(48-55) (52-45)，流速20-50ml/
mirio本發(fā)明的有益效果是采用大孔樹脂吸附洗脫，提高了產(chǎn)品的純度；采用反相高效液相色譜法精制純化，純度高達(dá)98%以上，所得產(chǎn)品可作為對照品使用，同時(shí)可進(jìn)行大量制備；本發(fā)明工藝穩(wěn)定，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。實(shí)施例1:
將空柄假牛肝原料粉碎，稱取lOOOg，加入相當(dāng)于原料量3倍的80%乙醇溶液回流提取 2次，每次池，過濾得到提取液，加活性炭攪拌，45°C溫度下保溫脫色40min，過濾，得到脫色液，濃縮至相對密度為1. 12，通過10000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 3MPa，透過液上AB-8大孔吸附樹脂柱，依次用水洗脫至洗脫液流出無色、用20%乙醇溶液沖柱至洗脫液流出無色，最后用3BV75%乙醇溶液洗脫，收集75%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品。將空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，乙腈-水(48:52) 為流動相，流速35ml/min，以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長209nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有空柄牛肝素A的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品liang，含量為98. 6%。實(shí)施例2:
將空柄假牛肝原料粉碎，稱取lOOOg，加入相當(dāng)于原料量5倍的75%乙醇溶液浸回流提取2次，每次lh，過濾得到提取液，加活性炭攪拌，50°C溫度下保溫脫色40min，過濾，得到脫色液，濃縮至相對密度為1. 10，通過6000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 3MPa，透過液上HZ841大孔吸附樹脂柱，依次用水洗脫至洗脫液流出無色、用30%乙醇溶液沖柱至洗脫液流出無色，最后用5BV75%乙醇溶液洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品。將空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，乙腈-水(48:52) 為流動相，流速20ml/min，以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長209nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有空柄牛肝素A的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品107mg，含量為98. 9%。實(shí)施例3:
將空柄假牛肝原料粉碎，稱取lOOOg，加入相當(dāng)于原料量4倍的90%乙醇溶液回流提取 2次，每次lh，過濾得到提取液，加活性炭攪拌，40°C溫度下保溫脫色60min，過濾，得到脫色液，濃縮至相對密度為1.08，通過3000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 2MPa，透過液上HP20大孔吸附樹脂柱，依次用水洗脫至洗脫液流出無色、用20%乙醇溶液沖柱至洗脫液流出無色，最后用5BV65%乙醇溶液洗脫，收集65%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品。將空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，乙腈-水(50 50 )為流動相，流速50ml/min，以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長209nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有空柄牛肝素A的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品14;3mg，含量為98. 4%。實(shí)施例4:
將空柄假牛肝原料粉碎，稱取lOOOg，加入相當(dāng)于原料量3倍的80%乙醇溶液回流提取 2次，每次lh，過濾得到提取液，加活性炭攪拌，40°C溫度下保溫脫色50min，過濾，得到脫色液，濃縮至相對密度為1. 10，通過3000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 3MPa，透過液上HP20大孔吸附樹脂柱，依次用水洗脫至洗脫液流出無色、用15%乙醇溶液沖柱至洗脫液流出無色，最后用5BV65%乙醇溶液洗脫，收集65%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品。將空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，乙腈-水(49:51)為流動相，流速45ml/min，以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長209nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有空柄牛肝素A的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品120mg，含量為98. 0%。實(shí)施例5:
將空柄假牛肝原料粉碎，稱取lOOOg，加入相當(dāng)于原料量6倍的75%乙醇溶液回流提取2h，過濾得到提取液，加活性炭攪拌，60°C溫度下保溫脫色20min，過濾，得到脫色液，濃縮至相對密度為1.05，通過3000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. IMPa，透過液上 LDA-10大孔吸附樹脂柱，依次用水洗脫至洗脫液流出無色、用30%乙醇溶液沖柱至洗脫液流出無色，最后用6BV60%乙醇溶液洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮干燥得到粗品。將空柄牛肝素A粗品用甲醇溶解，微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，乙腈-水(52:48)為流動相，流速35ml/min，以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長209nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有空柄牛肝素A的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品156mg，含量為98. 7%。
權(quán)利要求
1.一種從空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法，其特征在于包括以下步驟(1)將空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，以75-90%乙醇為提取溶媒進(jìn)行回流提取1-2次，過濾得到提取液；(2)提取液加活性炭攪拌，40-60°C溫度下保溫脫色20-60min，過濾，得到脫色液；(3)脫色液濃縮至相對密度為1.05-1.12，通過3000-10000道爾頓的中空纖維超濾膜， 操作壓力為0. 1-0. 3MPa ；(4)透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，先用水和15-30%乙醇溶液洗脫，再用 3-6BV60-75%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；(5)粗品用甲醇溶解，注入制備型高效液相色譜儀，紫外在線監(jiān)測，檢測波長209nm，收集目標(biāo)流分，真空干燥得到空柄牛肝素A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中活性炭為藥用活性炭，加入量為藥材量的0. 5-洲。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(4)中大孔吸附樹脂型號可選 AB-8、HP20、HZ841 或 LDA-10 型等。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(5)中高效液相色譜流動相為乙腈-水，體積比為(48-55) (52-45)，流速 20_50ml/min。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從空柄假牛肝中提取空柄牛肝素A的方法，包括以下步驟將空柄假牛肝原料粉碎成粗粉，加入溶媒提取，提取液中加活性炭脫色，脫色液通過3000-10000道爾頓的超濾膜，透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，乙醇水溶液洗脫，得到的洗脫液濃縮干燥得到粗品，采用制備型高效液相色譜分離得到空柄牛肝素A。本發(fā)明工藝簡單，得率高，產(chǎn)品質(zhì)量好、純度高。
文檔編號C07C69/593GK102503822SQ20111030372
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司