專利名稱：一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法。
背景技術(shù)：
廣金錢草為豆科植物廣金錢M^Desmodiuin styracifoilum (Osb. )Merr.的地上部分，又叫落地金錢草、假花生、山地豆。具有清熱除濕，利尿通淋功效，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用于治療熱淋,砂淋,石淋,小便澀痛,水腫尿少,黃疸尿赤,尿路結(jié)石。現(xiàn)代研究表明，廣金錢草中含有大量黃酮類物質(zhì)，具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗血小板凝聚作用。其中夏佛塔苷為廣金錢草中的指標(biāo)性成分，藥典-2010版規(guī)定其含量不得少于O. 13%。夏佛塔苷(Schaftoside)為黃酮類物質(zhì)，CAS號51938-32-0，分子式C26H28014，分子量564. 49，結(jié)構(gòu)式
OH
HO、人,,OH T T
HO L0A0
HO,. ,A, HO, X ,O. zU 。
丫 ο ^I
OH OH O通過文獻(xiàn)檢索，從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，多為固體填充柱法。如文獻(xiàn)“廣金錢草的生物活性成分研究”公開的方法是廣金錢草的水提取物經(jīng)過大孔吸附樹脂60%乙醇洗脫物進(jìn)行了研究，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜、聚酰胺柱色譜、ODS、Sephadex LH-20、制備薄層和反復(fù)重結(jié)晶等手段從廣金錢草中分離得到包括夏佛塔苷在內(nèi)的14個化合物。還有王植柔等發(fā)表的“廣金錢草化學(xué)成分的提純夏佛塔苷的方法。如上所述，現(xiàn)有方法操作復(fù)雜，尤其是硅膠柱層析重現(xiàn)性較差，制備量較小，收率低，不適合制備夏佛塔苷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，其特征在于以下步驟
i.取廣金錢草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮得粗提物；
.把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得夏佛塔苷。
步驟i中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的1-5%。。步驟i中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量100-400的中空纖維素納濾膜。步驟ii中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選乙酸乙酯、正丁醇、水組合，比例為3-5:1-2:4-7，下相為流動相，上相為固定相。本發(fā)明采用生物酶發(fā)酵，可以縮短提取周期，提高提取率。本發(fā)明采用膜過濾技術(shù)分離，物理方法除雜，操作簡單，不污染環(huán)境。本發(fā)明采用高速逆流色譜分離，分離速度快，樣品無損失，溶劑可以循環(huán)使用，制備量大。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明。實施例I :
取纖維酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg廣金錢草中拌勻，常溫酶解5天，酶解原料用70°C溫水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液過濾后用截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量200的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積乙酸乙酯萃取3次，萃取液濃縮得粗提物20g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:1:4混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉(zhuǎn)主機(jī)900rpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色夏佛塔苷I. 4g，經(jīng)HPLC檢測，純度98. 2%。實施例2:
取淀粉酶5和果膠酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg廣金錢草中拌勻，常溫酶解4天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積乙酸乙酯萃取3次，萃取液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉(zhuǎn)主機(jī)SOOrpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色夏佛塔苷I. 5g，經(jīng)HPLC檢測，純度98. 7%。權(quán)利要求
1. 一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，其特征在于以下步驟 1.取廣金錢草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮得粗提物； .把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得夏佛塔苷。
2.據(jù)權(quán)利要求I所述的從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，其特征在于步驟i中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的1-5%。。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，其特征在于步驟i中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量100-400的中空纖維素納濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法，其特征在于步驟ii中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)可選乙酸乙酯、正丁醇、水組合，比例為3-5:1-2:4-7，下相為流動相，上相為固定相。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從廣金錢草中制備夏佛塔苷的方法。方法步驟如下i.取廣金錢草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮得粗提物；ii.把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得夏佛塔苷。采用本發(fā)明制備夏佛塔苷，方法操作簡單、效率高、制備量大，所得產(chǎn)品純度高。
文檔編號C07H17/07GK102627679SQ20121011477
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月19日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司