專利名稱：一種同步提取分離花生球蛋白與伴球蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種同步提取分離花生球蛋白與伴球蛋白(也即伴花生球蛋白)的方法。
背景技術(shù)：
花生蛋白分為兩大類，即水溶性蛋白和鹽溶性蛋白，其中鹽溶性蛋白占總蛋白質(zhì)的90%左右，主要包括花生球蛋白(14S，占73%左右)、伴花生球蛋白1(7. 8S，占6%左右)、伴花生球蛋白II(2S，占18%左右)。有研究表明，花生球蛋白由兩個酸性亞基和三個堿性亞基組成，伴花生球蛋白僅有一個亞基，而2S蛋白由6個多肽組成。目前，花生蛋白的提取廣泛采用的是堿溶酸沉法制備花生分離蛋白和醇洗法制備花生濃縮蛋白，分離制備花生球/伴球蛋白則主要是利用鹽析的原理，采用飽和硫酸銨分級沉淀的方法，而適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的分離制備方法仍未見相關(guān)報道。此外，花生球蛋白和伴球蛋白分別具有 獨特的物化特性，例如粘度、凝膠性、流變性、持水持油性等，因此通過對花生球蛋白和伴球蛋白的分級分離，就有可能對花生蛋白不同組分的性質(zhì)分別加以利用，以期擴大花生蛋白在食品工業(yè)中的應(yīng)用。早在上世紀七十年代，國際上就已開展針對大豆球蛋白(IlS)與伴球蛋白(7S)的工業(yè)化分級分離方法的研究，目前其分離提取工藝也已比較成熟和完善，這使所有針對大豆蛋白分級組分的理論研究和產(chǎn)品開發(fā)都具備了有望指導(dǎo)或?qū)崿F(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的可能性。例如利用等電點的差異而進行的蛋白組分的分離，該方法是調(diào)節(jié)溶液PH接近至大豆IlS球蛋白等電點的時候?qū)⑵溥M行分離，這樣就可以提取純度比較高的大豆IlS球蛋白(JP55-124457A);利用與鈣反應(yīng)性不同的方法，在大豆蛋白提取的時候向溶液中加入少量的鈣鹽，提取高純度的大豆IlS球蛋白(JP 48-56843A);利用在一定的pH和離子濃度條件下，大豆蛋白不同級分溶解度不同的方法，包括在pH在I. 2至4. 0的條件下，含有氯化鈉或氯化鉀的大豆蛋白溶液中制備富含大豆蛋白7S組分(JP49-31843A);或者將等電點條件下的沉降物調(diào)節(jié)PH到5. 0至5. 6，然后將溶液中氯化鈉的離子強度調(diào)節(jié)到0. 01至0. 2M，分離純度較高的大豆蛋白7S和IlS組分(JP58-36345A);有一篇和本專利比較相似，但僅適用于大豆蛋白組分分級分離的相關(guān)專利，是利用低溫沉淀現(xiàn)象和還原劑對大豆蛋白進行分級分離，在低溫條件下減小大豆IlS球蛋白的溶解度，并在一定pH中溶液中，亞硫酸化合物、谷光氨肽化合物或半胱氨酸化合物存在的條件下，對大豆蛋白的水溶液中進行處理，然后再調(diào)節(jié)pH到5.5至7.0，就可以分離出大豆蛋白7S和IlS組分(JP 61-187755A)。目前國內(nèi)外針對花生球/伴球蛋白組分的分級分離主要采用僅適用于小規(guī)模提取的實驗室研究方法——飽和硫酸銨法。由于以此法制備的分級組分的相關(guān)研究實用(產(chǎn)業(yè)化)預(yù)期不明顯，進而影響了國內(nèi)外研究者在花生蛋白及其組分相關(guān)理論與產(chǎn)品研發(fā)方面的投入。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種同步提取分離花生球蛋白與伴球蛋白的方法。
本發(fā)明提供的同步分離制備花生球蛋白和伴花生球蛋白的方法，包括如下步驟包括如下步驟將花生脫脂粉與緩沖液混勻后進行第一次離心，取上清液靜置，將靜置所得體系中的上清液進行第二次離心，所得沉淀干燥后即為花生球蛋白；再將第二次離心所得上清液的pH值調(diào)節(jié)至4-6后進行第三次離心，收集沉淀，加水使沉淀均勻分散，干燥后得到所述伴花生球蛋白。上述方法中，所述花生脫脂粉中，脂肪的質(zhì)量百分含量< 5%，NSI值彡60% ；所述緩沖液的pH值為7. 1-8. 5，優(yōu)選7.3-8. 0 ;磷酸根濃度或氫離子濃度均為0. 1-2M，優(yōu)選 0. 2-1M ；所述緩沖液具體為pH值為7. 1-8. 5、磷酸根濃度均為0. 1-2M的磷酸緩沖液或Tris-HCl緩沖液；所述pH值為7. 1-8. 5、磷酸根濃度為0. 1-2M的磷酸緩沖液具體為由 Na2HPO4 12H20、NaH2PO4 2H20 和水組成。所述花生脫脂粉與所述緩沖液的質(zhì)量比為(1-5) 10，優(yōu)選(2-4) 10，具體為I : 10 或 3 : 10 或 4 : 10 ;所述混勻步驟中，時間為1-2小時；所述第一次離心步驟中，溫度為20-25 V，離心力為4000-8000g，優(yōu)選5000-7000g ;時間為15-40分鐘，優(yōu)選20-30分鐘；所述取上清液靜置步驟中，時間為6-24小時，優(yōu)選8-20小時；溫度為0_15°C，優(yōu)選 2-10。。；所述第二次離心步驟中，溫度為0-15 V，離心力為4000-12000g，優(yōu)選5000-10000g ;時間為15-60分鐘，優(yōu)選20-50分鐘；所述第三次離心步驟中，溫度為20-25 V，離心力為4000-8000g，優(yōu)選5000-7000g ;時間為15-40分鐘，優(yōu)選20-30分鐘。所述向所得沉淀中加入水分散均勻步驟中，水的用量為所得沉淀質(zhì)量的1-3倍。上述方法中，干燥步驟所用方法均為常規(guī)方法，如冷凍或噴霧干燥方法，可根據(jù)實際情況選取。另外，按照上述方法得到的花生球蛋白和伴花生球蛋白中的至少一種，也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述花生球蛋白具體可為分子量為40. 5kDa、37. 5kDa、35. 5kDa和23. 5kDa花生球蛋白中的至少一種，而伴花生球蛋白具體為61kDa、18. lkDa、17. 0kDa、16. 3kDa和15. 5kDa伴花生球蛋白中的至少一種。 所述花生球蛋白的NSI值為90. 3-96. 2 %或90. 3-92. 6 %或92. 6-96. 2 %，伴花生球蛋白的凝膠硬度為 176. 5-220. 7g 或 176. 5-196. 5g 或 196. 5-220. 7g。本發(fā)明以粉末狀的花生脫脂粉為原料，在提取、分離制備的過程中，盡可能避免高速攪拌、強酸強堿或者加熱等條件下引起的花生蛋白變性，通過弱堿性的緩沖溶液提取，低溫沉淀，低溫離心等技術(shù)，將花生球蛋白和伴花生球蛋白提取分離，達到較好的分離效果，可以分別利用各個組分不同的性質(zhì)，來進行理論研究或者應(yīng)用于不同的食品體系。并且，本發(fā)明發(fā)明者通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)差示掃描量熱法(Differential ScanningCalorimetry,DSC)測定，采用本發(fā)明所述方法制備的花生球蛋白和伴花生球蛋白的焓變值高于花生分離蛋白或花生濃縮蛋白相應(yīng)組分的焓變值，說明本發(fā)明所述操作可保護花生蛋白組分天然結(jié)構(gòu)不至嚴重變性；研究也發(fā)現(xiàn)花生球蛋白組分具有良好的溶解性，而伴花生球蛋白所制備的熱誘導(dǎo)凝膠的凝膠硬度遠超商業(yè)化大豆分離蛋白，說明花生蛋白單一組分的性質(zhì)和花生分離蛋白具有很大的差異，可根據(jù)不同組分優(yōu)勢物化特性針對不同的食品體系進行研發(fā)和應(yīng)用。本發(fā)明較現(xiàn)有方法大大簡化了工藝流程，在保證分離效果的同時降低了相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)成本，基本不破壞蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值。利用該方法所分離的花生球蛋白中的球蛋白含量可達89. 71 %，分離純度不小于80 %，伴花生球蛋白中的伴花生球蛋白含量可達92. 52%，分離純度不小于70%。


圖I為采用本發(fā)明所述方法與飽和硫酸銨法所提取分離的花生球/伴花生球蛋白 的SDS-PAGE圖譜。圖2為采用差示掃描量熱儀(DSC)測定本發(fā)明所述方法分離制備的伴花生球蛋白(A)與花生球蛋白⑶的相應(yīng)圖譜。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規(guī)方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑而得。下述實施例中涉及的檢測方法均如下所示在對花生脫脂粉進行檢測時，氮溶解指數(shù)(NSI)的檢測方法參照GB5511-85附錄A的大豆水溶性蛋白測定方法進行。該測定方法的具體步驟為精確稱取樣品5. OOg于磨口具塞錐形瓶中，加水200ml，搖勻使均勻分散，然后在25-30°C溫度下震蕩2h，取出后將混合液轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻后靜置l_2min，將上層清液倒入離心管中，1500 Xg離心lOmin，再將上清液用快速濾紙或玻璃纖維過濾，收集清晰液于錐形瓶中，取IOml液體進行凱氏定氮，計算水溶液中的蛋白質(zhì)含量。NSI計算公式如下氮溶解指數(shù)(NSI)=(水溶液中蛋白質(zhì)總含量/測量前固體中蛋白質(zhì)質(zhì)量)X 100%。蛋白質(zhì)凝膠的制備及其凝膠硬度的測定具體如下配制蛋白濃度(m/V)為14%的花生球蛋白、伴花生球蛋白溶液，室溫下攪拌120min。各取20mL溶液于50ml燒杯中，用保鮮膜封口后置于90°C下水浴加熱2小時。取出后迅速用流動水冷卻至室溫后，置于4°C冰箱中過夜14h，制成蛋白凝膠。在運用TA-TX2i質(zhì)構(gòu)儀(探頭類型為PO. 5R，直徑為12_)在室溫25°C下進行測定其凝膠硬度，測定結(jié)果采用TPA-macix)工具進行分析計算蛋白凝膠體的硬度。蛋白質(zhì)質(zhì)量(含量)的測定均是基于Kjeldahl方法進行，測定氮含量并乘以系數(shù)
5.46轉(zhuǎn)換為花生蛋白質(zhì)量(含量)。蛋白提取率是花生脫脂粉樣品中可被提取的花生蛋白質(zhì)量占花生脫脂粉中蛋白質(zhì)總量的百分比。采用飽和硫酸銨鹽析制備花生球蛋白和伴花生球蛋白的提取分離方法如下脫脂花生粉按I : 20的比例加入含0. 5mol/L NaCl，pH 7. 9的磷酸鹽緩沖溶液中，在室溫下攪拌2h后，于10000Xg，20°C下離心30min。上清液加入硫酸銨使溶液飽和度達到40%，在4°C下攪拌Ih后，再于10000父8，41下離心301^11，沉淀用上述磷酸鹽緩沖液按1 : 5的比例復(fù)溶，透析48h并冷凍干燥后得到花生球蛋白。離心后的上清液加入硫酸銨使其飽和度達到60%,在4°C下攪拌Ih后，于10000Xg,4°C下離心30min。所得上清液繼續(xù)加入硫酸銨使溶液飽和度達到85%，在4°C下攪拌Ih后，于10000 X g，4°C下離心30min，所得沉淀用磷酸鹽緩沖液按I : 5的比例復(fù)溶，透析48h并冷凍干燥后得到伴花生球蛋白。十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)參考Laemmli (1970)的方法。濃縮膠濃度為5 %，分離膠濃度為13%，電泳進樣前，將樣品溶液與樣品緩沖液震蕩混勻，煮沸5min，迅速冷卻，并離心5min，電泳上樣量為IOy L。凝膠電泳于恒壓下進行，在濃縮膠中電壓為80V，進入分離膠后增至110V。等電泳前沿跑至距玻璃板邊緣Icm左右時停止電泳。將凝膠膠片取出放入適量考馬斯亮藍R250染色lh，再用甲醇和醋酸混合液脫色，期間換脫色液2-3次，至蛋白質(zhì)譜帶清晰時為止?；ㄉ?或伴球)蛋白分離純度是指最終制備獲得的花生球蛋白產(chǎn)品中花生 球(或伴球)蛋白/(花生球蛋白+伴花生球蛋白)的比值或百分比。具體是通過上述SDS-PAGE電泳得到的譜帶通過光密度測定，純度用相應(yīng)譜帶面積與總面積的百分比表示(%)o所述花生球蛋白的含量是指分子量為40. 5kDa、37. 5kDa、35. 5kDa和23. 5kDa亞基條帶的總量，而伴花生球蛋白的含量是指61kDa、18. IkDa, 17. OkDa, 16. 3及15. 5kDa亞基條帶的總量。洽變值的測定采用差示掃描量熱法(Differential Scanning Calorimetry,DSC)。具體是配制10%的球蛋白或伴花生球蛋白分散液在室溫下放置Ih后，吸取IOii L蛋 白分散液至鋁盒，壓盤，以空盤為對照。溫度掃描范圍0-120°C;升溫速率10°C /min ;保護氣氮氣流速50mL/min。采用the universal analyzer 2000軟件計算蛋白質(zhì)的變性j含變值。所有的實驗結(jié)果為三次測定值的平均值。實施例I :將脂肪的質(zhì)量百分含量為4%、NSI值為60%的花生脫脂粉按照質(zhì)量比I : 10，于pH 8. O、磷酸根濃度為0. 4M的由Na2HPO4 12H20和NaH2PO4 *2H20和水組成的磷酸緩沖溶液中充分混勻攪拌Ih后，25°C 8000 Xg進行第一次離心20分鐘，取上清液放置在溫度為4°C的環(huán)境中靜置12h，然后再用低溫冷凍離心機在4°C，8000 Xg條件下進行第二次離心30分鐘，收集離心所得沉淀，向該沉淀中加入3倍于其質(zhì)量的去離子水，均勻分散后經(jīng)冷凍干燥得到花生球蛋白粉狀產(chǎn)品；再將離心所得上清液的pH值調(diào)節(jié)至4. 5后，在20°C、6000Xg條件下進行第三次離心20分鐘，將所得沉淀(也即凝乳)與3倍其質(zhì)量的去離子水均勻分散后直接進行均質(zhì)冷凍干燥，得到伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品。所述花生脫脂粉與緩沖液混勻攪拌步驟中，緩沖液對花生蛋白的提取率為70. 85%，表明該實施例所用花生脫脂粉所含花生蛋白中總計有70. 85%的花生蛋白可被該緩沖液提取。經(jīng)測定，該實施例所得花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為85.61% (干基)，按照實施例3所示方法進行SDS-PAGE圖譜測定，得到花生球蛋白的分離純度為85.7% ；
伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的伴花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為89. 61 % (干基)，按照實施例3所示方法進行SDS-PAGE圖譜測定，得到伴花生球蛋白的分離純度為75. 1%?；ㄉ虻鞍椎腘SI值為90. 3%，伴花生球蛋白的凝膠硬度為196. 5g。另外，該實施例制備所得伴花生球蛋白和花生球蛋白的變性峰焓變值與實施例3所得結(jié)果無實質(zhì)性差別，不再贅述，表明伴花生球蛋白和花生球蛋白的變性程度均很小。實施例2 將脂肪的質(zhì)量百分含量為3%、NSI值為65%的花生脫脂粉按照質(zhì)量比3 10，于PH7. 9、氫離子濃度為0. IM的Tris-HCl緩沖溶液中，充分混勻攪拌Ih后，20°C 6000Xg進
行第一次離心30分鐘，取上清液放置在溫度為TC的環(huán)境中靜置24h，然后在用低溫冷凍離心機在10°C、8000 X g條件下進行第二次離心40分鐘，收集離心所得沉淀，將該沉淀分散于其2倍質(zhì)量的去離子水中，經(jīng)冷凍干燥得到花生球蛋白粉狀產(chǎn)品；再將離心所得上清液的pH值調(diào)節(jié)至4. 0后，在25°C、7000Xg條件下進行第三次離心30分鐘，將所得沉淀(也即凝乳)與其2. 5倍質(zhì)量的去離子水均勻分散后直接進行冷凍干燥，得到伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品。所述花生脫脂粉與緩沖液混勻攪拌步驟中，緩沖液對花生蛋白的提取率為66. 12%，表明該實施例所用花生脫脂粉所含花生蛋白中總計有66. 12%的花生蛋白可被該緩沖液提取。經(jīng)測定，該實施例所得花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為88. 30% (干基)，按照實施例3所示方法進行SDS-PAGE圖譜測定，得到花生球蛋白的分離純度為83.2% ；伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的伴花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為90. 92 % (干基)，按照實施例3所示方法進行SDS-PAGE圖譜測定，得到伴花生球蛋白的分離純度為72. 4%。花生球蛋白的NSI值為92. 6%，伴花生球蛋白的凝膠硬度為176. 5g。另外，該實施例制備所得伴花生球蛋白和花生球蛋白的變性峰焓變值與實施例3所得結(jié)果無實質(zhì)性差別，不再贅述，表明伴花生球蛋白和花生球蛋白的變性程度均很小。實施例3 將脂肪的質(zhì)量百分含量為1%、NSI值為65%的花生脫脂粉按照質(zhì)量比4 10，于PH7. 5、氫離子濃度為0. 2M的Tris-HCl緩沖溶液中充分混勻攪拌Ih后，25°C 7000 Xg進行第一次離心40分鐘，取上清液放置在溫度為2 V的環(huán)境中靜置18h，然后在用低溫冷凍離心機在2°C條件10000 Xg下進行第二次離心50分鐘，收集離心所得沉淀，將該沉淀在室溫下溶解于適量的去離子水中，使其溶液蛋白濃度在18%，經(jīng)噴霧干燥得到花生球蛋白粉狀產(chǎn)品;再將離心所得上清液的pH值調(diào)節(jié)至5. 0后，在20°C、8000Xg條件下進行第三次離心40分鐘，分離出伴花生球蛋白凝乳，后加入凝乳質(zhì)量的3倍去離子水，采用2M的NaOH溶液將凝乳懸濁液PH值調(diào)整至7. 0，噴霧干燥得到伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品。所述花生脫脂粉與緩沖液混勻攪拌步驟中，緩沖液對花生蛋白的提取率為64. 27%，表明該實施例所用花生脫脂粉所含花生蛋白中總計有64. 27%的花生蛋白可被該緩沖液提取。圖I為采用該實施例方法與飽和硫酸銨法所提取分離的花生球/伴花生球蛋白的SDS-PAGE圖譜。如圖I所示，樣品1，2分別為采用飽和硫酸銨法獲得的花生球蛋白和伴花生球蛋白，由于其分離純度高，可被用來作為標準對照樣品。樣品3，4分別為采用該實施例方法制備得到的花生球蛋白與伴花生球蛋白，其圖中所示電泳亞基條帶可對照樣品1，2相應(yīng)位置條帶確定歸屬，通過光密度掃描分析，確認樣品3中40. 5kDa、37. 5kDa、35. 5kDa和23. 5kDa所在條帶分別占所有條帶總量的20. 7%、18. 7%、11. 7%和34. 3%，加和后總計花生球蛋白的分離純度為85. 4% ;樣品4中61kDa、18. lkDa、17. 0kDa、16. 3及15. 5kDa所在條帶分別占所有條帶總量的41. 7%、6. 6%、8. 6%、12. I %和9. 4%，加和后總計花生球蛋白的分離純度為78. 4%。圖2為采用差示掃描量熱儀(DSC)測定本發(fā)明所述方法分離制備的伴花生球蛋白(A)與花生球蛋白(B)的相應(yīng)圖譜?；ㄉ虻鞍自诘蜏叵氯芙舛冉档偷默F(xiàn)象，僅在其結(jié)構(gòu)處于未變性狀態(tài)下才能發(fā)生，且此低溫冷沉的現(xiàn)象是一個熱可逆過程，即在低溫下冷沉的蛋 白質(zhì)在溫度升至常溫后，蛋白質(zhì)仍然可以復(fù)溶，且蛋白結(jié)構(gòu)性質(zhì)不發(fā)生改變?nèi)蕴幱谖醋冃誀顟B(tài)。在DSC譜圖中，焓變值越高則說明相應(yīng)蛋白質(zhì)的變性程度越小。如圖所示，伴花生球蛋白和花生球蛋白所在變性峰焓變值分別為4. 56 ±0. 03J/g和18. 65 ±0. 44J/g，具有較小的變性程度。經(jīng)測定，該實施例所得花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為87. 21% (干基)；伴花生球蛋白粉狀產(chǎn)品中的伴花生球蛋白的質(zhì)量百分含量為92. 36% (干基)。花生球蛋白的NSI值為96. 2%，伴花生球蛋白的凝膠硬度為220. 7g。
權(quán)利要求
1.一種同步提取分離花生球蛋白與伴花生球蛋白的方法，包括如下步驟將花生脫脂粉與緩沖液混勻后進行第一次離心，取上清液靜置，將靜置所得體系中的上清液進行第二次離心，所得沉淀干燥后即為花生球蛋白； 再將第二次離心所得上清液的PH值調(diào)節(jié)至4-6后進行第三次離心，收集沉淀，加水使沉淀均勻分散，干燥后得到所述伴花生球蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述花生脫脂粉中，脂肪的質(zhì)量百分含量≤5%, NSI 值≥ 60%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于所述緩沖液的pH值為7.1-8. 5，優(yōu)選7.3-8. 0 ;磷酸根濃度或氫離子濃度均為0. 1-2M，優(yōu)選0. 2-1M ； 所述緩沖液具體為PH值為7. 1-8. 5、磷酸根濃度均為0. 1-2M的磷酸緩沖液或Tris-HCl緩沖液； 所述PH值為7. 1-8. 5、磷酸根濃度為0. 1-2M的磷酸緩沖液具體為由Na2HPO4 12H20、NaH2PO4 2H20 和水組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述花生脫脂粉與所述緩沖液的質(zhì)量比為(1-5) 10，優(yōu)選(2-4) 10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述混勻步驟中，時間為1-2小時； 所述第一次離心步驟中，溫度為20-25°C，離心力為4000-8000g，優(yōu)選5000-7000g ;時間為15-40分鐘，優(yōu)選20-30分鐘； 所述取上清液靜置步驟中，時間為6-24小時，優(yōu)選8-20小時；溫度為0-15°C，優(yōu)選2-10。。； 所述第二次離心步驟中，溫度為0-15°C，離心力為4000-12000g，優(yōu)選5000_10000g ;時間為15-60分鐘，優(yōu)選20-50分鐘； 所述第三次離心步驟中，溫度為20-25°C，離心力為4000-8000g，優(yōu)選5000-7000g ;時間為15-40分鐘，優(yōu)選20-30分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的方法，其特征在于所述向所得沉淀中加入水分散均勻步驟中，水的用量為所得沉淀質(zhì)量的1-3倍。
7.權(quán)利要求1-6任一所述方法得到的花生球蛋白和伴花生球蛋白中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同步提取分離花生球蛋白與伴花生球蛋白的方法。該方法，包括如下步驟將花生脫脂粉與緩沖液混勻后進行第一次離心，取上清液靜置，將靜置所得體系中的上清液進行第二次離心，所得沉淀干燥后即為花生球蛋白；再將第二次離心所得上清液的pH值調(diào)節(jié)至4-6后進行第三次離心，收集沉淀，加水使沉淀均勻分散，干燥后得到所述伴花生球蛋白。本發(fā)明較現(xiàn)有方法大大簡化了工藝流程，在保證分離效果的同時降低了相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)成本，基本不破壞蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值。利用該方法所分離的花生球蛋白中的球蛋白含量可達89.71％，分離純度不小于80％，伴花生球蛋白中的伴花生球蛋白含量可達92.52％，分離純度不小于70％。
文檔編號C07K1/14GK102757489SQ20121025593
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月24日
發(fā)明者劉麗, 劉紅芝, 封小龍, 王強, 胡暉, 趙冠里 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所