專(zhuān)利名稱(chēng)：一種豬去氧膽酸的精制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種豬去氧膽酸的精制方法。
背景技術(shù)：
豬去氧膽酸又稱(chēng)異去氧膽酸，α -豬去氧膽酸，分子量為392. 58，可以從豬膽汁中提取得到。豬去氧膽酸為降血脂藥，能抑制膽酸的形成及溶解脂肪，降低血中膽固醇和甘油三酯，適用于Ia或Ib型高血脂癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥。對(duì)百日咳桿菌、白喉?xiàng)U菌、金黃色葡萄球菌等有一定的抑菌作用。它能刺激膽汁分泌，使膽汁稀釋而不增加固含量，適用于膽道炎、膽囊炎、膽石癥和其它非阻塞性膽汁郁積，尚能促進(jìn)腸道脂肪分解和脂溶性維生素吸收，可用于肝膽疾患引起的消化不良。臨床上還作為中藥清開(kāi)靈注射劑、清開(kāi)靈滴丸的有效成分，是人工牛黃配方的重要原料。目前，豬去氧膽酸主要從豬膽汁中提取，豬膽汁中豬去氧膽酸的含量約為40%，鵝去氧膽酸約為25%，其次是豬膽酸和3 α -醛基-6-酮基-膽烷酸，是豬去氧膽酸的主要原料來(lái)源?，F(xiàn)有的生產(chǎn)豬去氧膽酸的方法主要包括兩種，一種是經(jīng)皂化、脫色、脫脂后的粗品用乙酸乙酯結(jié)晶，該工藝使用大量的乙酸乙酯，得到的豬去氧膽酸純度不高，收率低；另一種是甲酯化法，CN101037463A中公開(kāi)了一種從豬膽汁中制備高純度豬去氧膽酸的方法，該方法利用不同膽汁酸甲酯與苯加成物在苯中的不同溶解度分離得到豬去氧膽酸，該法工藝復(fù)雜，為獲得高純度產(chǎn)品，使用了苯、乙醚、硫酸等有害化學(xué)品，對(duì)環(huán)境不友好，且不利于大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高且對(duì)環(huán)境友好的豬去氧膽酸的精制方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種豬去氧膽酸的精制方法，包括溶解豬膽汁提取膽紅素后的下腳料，脫色，過(guò)濾，皂化成鹽，調(diào)PH值3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品，將粗品進(jìn)行純化，獲得豬去氧膽酸純品。具體地，前述的精制方法包括以下步驟I)溶解脫色，用5 10倍重量的有機(jī)溶劑回流f 2小時(shí)溶解豬膽汁提取膽紅素后的下腳料，加入下腳料重量59TlO%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘；2)過(guò)濾后降至4(T50°C，加入堿性物質(zhì)皂化成鹽，降至15 25°C，保溫1 2小時(shí)，過(guò)濾得到豬去氧膽酸鹽沉淀；3)向豬去氧膽酸鹽中加入1(Γ20倍重量的水，加熱至45飛(TC溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)ρΗ3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥；4)向豬去氧膽酸粗品I中加入5 10倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流廣2小時(shí)，待其全部溶解后降至15 25°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II ；
5)向豬去氧膽酸粗品II中加入5 10倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f 2小時(shí)，待其全部溶解后降至15 25で，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥即得豬去氧膽酸純品。前述的精制方法，步驟I)中所述有機(jī)溶劑任選下組中的ー種こ酸こ酷、こ酸丁酷、こ醇、丙酮、異丙醇、仲丁醇等，用量為下腳料重量的5 10倍。前述的精制方法，步驟2)中使用的堿性物質(zhì)為ニ水氯化鈣等。前述的精制方法，步驟2)具體為過(guò)濾后降至50°C，加入堿性物質(zhì)皂化成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到豬去氧膽酸鹽沉淀。
前述的精制方法，步驟3)具體為向豬去氧膽酸鹽中加入10倍重量的水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥，干燥溫度為75°C。前述的精制方法，步驟4)和5)中使用的水溶性有機(jī)溶劑任選下組中的ー種甲
醇、こ醇、こニ醇、N，N-ニ甲基甲酰胺、冰醋酸、異丙醇等。前述的精制方法，步驟4)具體為向豬去氧膽酸粗品I中加入5倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f 2小時(shí)，待其全部溶解后降至25°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II。前述的精制方法，步驟5)具體為向豬去氧膽酸粗品II中加入5倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流廣2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥即得豬去氧膽酸純品。本發(fā)明提供的豬去氧膽酸的精制方法，以提取膽紅素后的下腳料為原料，從中分離純化出豬去氧膽酸，經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)分析，精制得到的純品中豬去氧膽酸含量大于98%，雜質(zhì)含量小，整套方法具有安全無(wú)毒，操作簡(jiǎn)便，成本低，周期短，產(chǎn)品純度高，易于大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。本發(fā)明中涉及到的百分號(hào)“％”，若未特別說(shuō)明，是指重量百分比；但溶液的百分比，除另有規(guī)定外，是指IOOml溶液中含有溶質(zhì)的克數(shù)。實(shí)施例I豬膽汁提取膽紅素后的下腳料的制備取新鮮豬膽汁IOOOmL,用5%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12，加熱至沸騰保溫2小吋，在攪拌下加入10%氯化鈣溶液IOOmL,加熱至沸騰，冷卻后傾去上清液，過(guò)濾，收集膽紅素鈣鹽。將膽紅素鈣鹽加入5倍重量的水溶解后，加入適量的偏重亞硫酸鈉抗氧化，用稀鹽酸酸化至PH值I. 5，加入三氯甲烷提取得到膽紅素結(jié)晶。在過(guò)濾膽紅素鈣鹽后得到的上清液中，按100g/L加入固體氫氧化鈉，加熱煮沸24小時(shí)皂化，冷卻靜置分層，虹吸除去上層淡黃色液體，沉淀物加入適量的水使之溶解，用稀鹽酸酸化至pH值2 3，過(guò)濾水洗至中性，得到黃色的固體，即為下腳料。實(shí)施例2以豬膽汁提取膽紅素后的下腳料為原料精制豬去氧膽酸稱(chēng)取一定量實(shí)施例I中制備的下腳料，用5倍重量的異丙醇回流2小時(shí)，加入下腳料重量5%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘，過(guò)濾后降至50°C，加入15% ニ水氯化鈣溶液成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸鹽沉淀。將豬去氧膽酸鹽用10倍重量的飲用水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸緩慢調(diào)節(jié)pH值3，析出白色的豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥(干燥溫度為75°C)。稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品I，加入5倍重量的乙二醇，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至25 °C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品II，加入5倍重量的乙二醇，加熱回流，2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥得到白色的豬去氧膽酸成品，經(jīng)HPLC分析，成品中豬去氧膽酸含量為98. 5%。實(shí)施例3以豬膽汁提取膽紅素后的下腳料為原料精制豬去氧膽酸稱(chēng)取一定量實(shí)施例I中制備的下腳料，用5倍重量的乙酸乙酯回流2小時(shí)溶解下腳料，加入下腳料重量5%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘，過(guò)濾后降至50°C，加入20% 二水氯化鈣溶液成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸鹽沉淀。將豬去氧膽酸鹽 用10倍重量的飲用水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸緩慢調(diào)節(jié)pH值3. 5，析出白色的豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥(干燥溫度為75°C)。稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品I，加入5重量的冰醋酸，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至25V,向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品II，加入5倍重量的冰醋酸加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸成品，經(jīng)HPLC分析，成品中豬去氧膽酸含量為98. 8%。實(shí)施例4以豬膽汁提取膽紅素后的下腳料為原料精制豬去氧膽酸稱(chēng)取一定量實(shí)施例I中制備的下腳料，用10倍重量的乙酸乙酯回流2小時(shí)溶解下腳料，加入下腳料重量5%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘，過(guò)濾后降至50°C，加入30% 二水氯化鈣溶液成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸鹽沉淀。將豬去氧膽酸鹽用10倍重量的飲用水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸緩慢調(diào)節(jié)pH3. 5，析出白色的豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥(干燥溫度為75°C)。稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品I，加入5重量的冰醋酸，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至25°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品II，加入5倍重量的冰醋酸加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸成品，經(jīng)HPLC分析，成品中豬去氧膽酸含量為99. 2%。實(shí)施例5以豬膽汁提取膽紅素后的下腳料為原料精制豬去氧膽酸稱(chēng)取一定量實(shí)施例I中制備的下腳料，用5倍重量的丙酮回流2小時(shí)溶解下腳料，加入下腳料重量5%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘，過(guò)濾后降至50°C，加入30% 二水氯化鈣溶液成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸鹽沉淀。將豬去氧膽酸鹽用10倍重量的飲用水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸緩慢調(diào)節(jié)pH3，析出白色的豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥(干燥溫度為75°C)，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品I，加入5倍重量的乙醇，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至25°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴力口，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品II，加入5倍重量的乙醇，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中緩慢地滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物后，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥得到白色的豬去氧膽酸成品，經(jīng)HPLC分析，成品中豬去氧膽酸含量為99. 5%。實(shí)施例6以豬膽汁提取膽紅素后的下腳料為原料精制豬去氧膽酸稱(chēng)取一定量實(shí)施例I中制備的下腳料，用10倍重量的丙酮回流2小時(shí)溶解下腳料，加入下腳料重量5%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘，過(guò)濾后降至50°C，加入30% ニ水氯化鈣溶液成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到白色的豬去氧膽酸鹽沉淀。將豬去氧膽酸鹽用10倍重量的飲用水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸緩慢調(diào)節(jié)pH3. 5，析出白色的豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥(干燥溫度為75°C)，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品I，加入5倍重量的異丙醇，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至25°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II，稱(chēng)取一定量的豬去氧膽酸粗品II，加入5倍重量的異丙醇，加熱回流2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中緩慢滴加純化水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥得到白色的豬去氧膽酸成
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作ー些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種豬去氧膽酸的精制方法，其特征在于，所述方法包括溶解豬膽汁提取膽紅素后的下腳料，脫色，過(guò)濾，皂化成鹽，調(diào)PH值3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品，將粗品進(jìn)行純化，獲得豬去氧膽酸純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的精制方法，其特征在于，包括以下步驟 1)溶解脫色，用5 10倍重量的有機(jī)溶劑回流f2小時(shí)溶解豬膽汁提取膽紅素后的下腳料，加入下腳料重量59TlO%的活性炭繼續(xù)回流30分鐘； 2)過(guò)濾后降至4(T50°C，加入堿性物質(zhì)皂化成鹽，降至15 25°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到豬去氧膽酸鹽沉淀； 3)向豬去氧膽酸鹽中加入1(Γ20倍重量的水，加熱至45飛(TC溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)ρΗ3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥； 4)向豬去氧膽酸粗品I中加入5 10倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f2小時(shí)，待其全部溶解后降至15 25°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II ； 5)向豬去氧膽酸粗品II中加入5 10倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f2小時(shí)，待其全部溶解后降至15 25°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥即得豬去氧膽酸純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征在于，步驟I)中所述有機(jī)溶劑任選下組中的ー種こ酸こ酷、こ酸丁酷、こ醇、丙酮、異丙醇、仲丁醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的精制方法，其特征在于，步驟I)中有機(jī)溶劑的用量為下腳料重量的5 10倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征在于，步驟2)中使用的堿性物質(zhì)為ニ水氯化鈣。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征在于，步驟2)為過(guò)濾后降至50°C，加入堿性物質(zhì)皂化成鹽，降至15°C，保溫2小時(shí)，過(guò)濾得到豬去氧膽酸鹽沉淀。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征在于，步驟3)為向豬去氧膽酸鹽中加入10倍重量的水，加熱至50°C溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH3 4，析晶得到豬去氧膽酸粗品I，過(guò)濾干燥，干燥溫度為75°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的精制方法，其特征在于，步驟4)和5)中使用的水溶性有機(jī)溶劑任選下組中的一種甲醇、こ醇、こニ醇、N，N-ニ甲基甲酰胺、冰醋酸、異丙醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的精制方法，其特征在干，步驟4)為向豬去氧膽酸粗品I中加入5倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f 2小時(shí)，待其全部溶解后降至25°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾得豬去氧膽酸粗品II。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的精制方法，其特征在于，步驟5)為向豬去氧膽酸粗品II中加入5倍重量的水溶性有機(jī)溶劑，加熱回流f 2小時(shí)，待其全部溶解后降至15°C，向其中滴加水，直至出現(xiàn)混濁物，立即停止滴加，繼續(xù)攪拌I小時(shí)，過(guò)濾干燥即得豬去氧膽酸純品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種豬去氧膽酸的精制方法，包括溶解豬膽汁提取膽紅素后的下腳料，脫色，過(guò)濾，皂化成鹽，調(diào)pH值3~4，析晶得到豬去氧膽酸粗品，將粗品進(jìn)行純化，獲得豬去氧膽酸純品。整套方法具有安全無(wú)毒，操作簡(jiǎn)便，成本低，周期短，產(chǎn)品純度高，易于大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)C07J9/00GK102863497SQ20121037513
公開(kāi)日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者陸其華, 周大海 申請(qǐng)人:蘇州天綠生物制藥有限公司, 山東天綠制藥有限公司