一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。在分離、純化過程中，依次使用D101型大孔吸附樹脂、H103型大孔吸附樹脂和活性炭三種常用色譜填料，即可從中藥地黃中獲得純度高于95%的梓醇。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢：所選用的三種填料經(jīng)常規(guī)再生處理后均可以反復(fù)利用；資金投入少，運行成本低；在分離與純化過程中僅使用乙醇和水，更加符合環(huán)保要求；在進行三聯(lián)柱層析前，提取液和大孔樹脂洗脫液均無需濃縮和進行除雜處理，極大地簡化了操作步驟和縮短了運行時間，并且降低了人力和能源消耗。
【專利說明】—種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分罔梓醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及快速分離梓醇的方法，特別涉及三聯(lián)柱層析技術(shù)從中藥地黃中快速分離梓醇的方法，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]中藥地黃(Rehmanniae Radix)為玄參科(Scrophulariaceae)多年生草本植物地j^XRehmannia glutinosa Libosch.)的干燥塊根,性甘、寒,歸心、肝、腎經(jīng),具有清熱涼血、養(yǎng)陰生津的功效，主治熱入營血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血等。藥理實驗證明，環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)成分是地黃的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，尤其以梓醇具有突出的抗癌、神經(jīng)保護、降血糖及抗肝炎病毒等作用，為2010版《中國藥典》中地黃的質(zhì)量控制指標成分。[0004]目前，地黃中梓醇的分離方法主要有三種:一、以水或含水醇提取，回收溶劑后，有機溶劑萃取除雜，水溶液載入大孔吸附樹脂或活性炭單一填料，以水和不同濃度乙醇洗脫，收集含有梓醇的流分，減壓濃縮，干燥，反復(fù)重結(jié)晶。例如，中國專利200710159335.8中，將地黃80%乙醇提取液回收乙醇，水分散，石油醚、乙酸乙酯依次萃取除雜，萃余水溶液載入H103大孔吸附樹脂后以水和含水乙醇梯度洗脫，收集80%乙醇流分，減壓濃縮并干燥，干燥物以甲醇-乙醇混合溶液反復(fù)重結(jié)晶，最終得到梓醇；二、將水提液進行多級膜分離后，載入活性炭和多種樹脂組成的串聯(lián)柱層析系統(tǒng)，以水和不同濃度乙醇洗脫，收集含有梓醇的流分，減壓濃縮，干燥。例如，中國專利200710026330.8中，將水提取液經(jīng)過微濾、超濾、納濾三級膜過濾過程，再以活性炭、大孔吸附樹脂、陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂連續(xù)柱層析系統(tǒng)進行分離，最終得到純度約為65%的梓醇產(chǎn)品；三、以水、醇或含水醇提取，初步除雜后，載入大孔吸附樹脂柱以水和含水乙醇梯度洗脫，收集含有梓醇的洗脫液，濃縮，再以混合溶劑進行硅膠柱層析分離，收集流份，回收溶劑并濃縮，結(jié)晶或重結(jié)晶，最終得到梓醇。例如，中國專利201110184807.1，將水提液減壓濃縮，濃縮液中加入95%乙醇，靜置過夜，上清液濃縮后，載入XAD-16大孔樹脂柱，先用水洗脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，濃縮物再如硅膠柱，以乙酸乙酯-甲醇混合溶劑洗脫，收集目標流份，減壓濃縮，干燥，含水乙醇重結(jié)晶，得到純度約為95%的梓醇；中國專利200810016005.8、201010529437.6和201110275524.8中，將由鮮地黃制得的含梓醇水溶液，以活性炭或大孔吸附樹脂分離，得到粗品，再載入硅膠柱層析用氯仿-甲醇、乙酸乙酯-乙醇或甲醇-乙酸乙酯等混合溶劑洗脫，濃縮，干燥或再以甲醇、丙酮-水進行結(jié)晶等操作，得到梓醇。此外，2008年張秀麗等(中國生物工程雜志，第28卷，第I期，P65飛9)將鮮地黃勻漿液以95%乙醇溫浸提取，提取液濃縮后以DlOl大孔吸附樹脂分離，收集5%乙醇洗脫液，濃縮干燥后，進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，濃縮，干燥，得到純度為90%的梓醇；2010年劉海洋等(中醫(yī)藥信息，第27卷，第I期，P8618)以80%乙醇加熱回流提取，提取液濃縮干燥后，以水溶解，載入H103大孔吸附樹脂分離，用水和含水乙醇洗脫，收集含有梓醇的流份，減壓濃縮至干，得到純度約為40%的梓醇，此后用甲醇-乙醇混合溶劑反復(fù)重結(jié)晶處理，獲得了梓醇。
[0005]以上方法存在以下幾處不足，難以滿足規(guī)模化生產(chǎn)梓醇的要求:一、以硅膠柱進行分離，填料不能得以反復(fù)利用，而且梓醇的極性大，嚴重的死吸附導(dǎo)致梓醇大量損失；二、純化過程中使用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮等有毒、易燃、管制試劑，環(huán)境負擔(dān)重，管理成本高；三、在進行柱層析前，提取液需要經(jīng)過濃縮、初步除雜等處理，人力、時間和能源消耗大；四、微濾、超濾、納濾等膜分離技術(shù)資金投入大，運行成本高，而且最終產(chǎn)品的質(zhì)量不佳。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的以上四點不足，通過聯(lián)用DlOl型大孔吸附樹脂、H103型大孔吸附樹脂和活性炭，提供一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思如下:
梓醇為環(huán)烯醚萜苷類化合物，極性大，DlOl型和H103型大孔吸附樹脂均為非極性樹月旨，兩者常被用于從地黃中分離梓醇，但是單獨使用時效果不佳，需結(jié)合硅膠柱層析、重結(jié)晶等方法提高產(chǎn)品純度，原因在于前者的比表面約為400m2/g，孔徑約為lOOnm，對梓醇的吸附作用很弱，在上樣和以水進行洗脫時，梓醇與糖類、氨基酸等成分一同流出；后者的比表面為100(Tll00m2/g，孔徑約為8.5^9.5nm，對梓醇的吸附作用較前者明顯增強，而對糖類、氨基酸等強極性成分幾乎沒用吸附，但是在以含水醇洗脫時，梓醇易與提取液中的水溶性色素、毛蕊花糖苷一同流出；活性炭是另一種常用于分離梓醇的填料，但是由于地黃中的毛蕊花糖苷與梓醇同為單糖苷，在洗脫過程中，兩者難以分離。
[0009]本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思是創(chuàng)新性地按照特定順序聯(lián)合使用DlOl型大孔吸附樹脂、H103型大孔吸附樹脂和活性炭三種可反復(fù)使用的色譜填料，首先由DlOl型大孔吸附樹脂除去地黃提取液中的水溶性色素和毛蕊花糖苷，再由H103型大孔吸附樹脂除去一部分糖類和氨基酸等成分，最后由活性炭除去剩余的雜質(zhì)，即可得到純度達95%以上的梓醇產(chǎn)品；在整個分離過程中，唯一使用的有機溶劑為安全無毒的乙醇；此外，除最后一步減壓濃縮至干外，無需除去乙醇等溶劑，也無需特殊設(shè)備，并且避免了導(dǎo)致大量損失的硅膠柱層析，操作簡便，可以快速地用于從地黃中制備高純度的梓醇。
[0010]本發(fā)明一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法，按照下述步驟進行:
1)取市售地黃，于60°c以下烘干，粉碎，過20目篩，收集細粉，按每千克地黃加入8~12L水,加熱至微沸,煎煮2~3次，每次f 2 h,濾過，收集濾液，得到水煎液；
2)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:大孔吸附樹脂質(zhì)量為1: 5~10 (kg/kg)稱取DlOl型大孔吸附樹脂，用乙醇濕法裝柱并進行常規(guī)預(yù)處理，將I)中水煎液載入DlOl型大孔吸附樹脂柱，以水進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5-1: I (L.h-1，每小時流出體積/質(zhì)量)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4飛:I (L/kg)，收集水洗脫液；
3)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:大孔吸附樹脂質(zhì)量為1: 5~10 (kg/kg)稱取H103型大孔吸附樹脂，用乙醇濕法裝柱并進行常規(guī)預(yù)處理，將2)中水洗脫液載入H103型大孔吸附樹脂柱，以水進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5^1:1 (L.h_Vkg)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4飛:I (L/kg)，棄去水洗脫液；換用10%~30%乙醇(tyV)進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5^2:1 (L.h_7kg)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4~6: I (L/kg)，收集10%~30%乙醇(iyV)洗脫液；
4)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:顆粒狀活性炭質(zhì)量為1: 6"10 (kg/kg)稱取顆粒狀或粉末狀商品活性炭，進行常規(guī)預(yù)處理后用水濕法裝柱，將3)中109T30% (Κ/V)乙醇洗脫液載入活性炭柱，以10%~30%乙醇(iyV)進行洗脫，流速:活性炭質(zhì)量為0.5^1:1 (L.h_Vkg)，洗脫體積:活性炭質(zhì)量為3飛:l(L/kg)，棄去洗脫液，換用50%飛0%乙醇(κ/V)進行洗脫，流速:活性炭質(zhì)量為0.5~1: I (L.h_7kg)，洗脫體積:活性炭質(zhì)量為:3-6: I (L/kg),收集50%~60%乙醇(tyV)洗脫液，60°C以下減壓濃縮至干，即得白色固體，經(jīng)過核磁共振氫譜和碳譜分析，并與文獻數(shù)據(jù)進行對照，確認白色固體為梓醇，再以高效液相色譜分析其純度為95%以上。
[0011]所述的梓醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)和分子量如下所示:
【權(quán)利要求】
1.一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法，其特征在于按照下述步驟進行: . 1)取市售地黃，于60°c以下烘干，粉碎，過20目篩，收集細粉，按每千克地黃加入8~12L水,加熱至微沸,煎煮2~3次，每次f 2 h,濾過，收集濾液，得到水煎液； .2)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:大孔吸附樹脂質(zhì)量為1:5~10 (kg/kg)稱取DlOl型大孔吸附樹脂，用乙醇濕法裝柱并進行常規(guī)預(yù)處理，將I)中水煎液載入DlOl型大孔吸附樹脂柱，以水進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5^1:1 (L.17?^，每小時流出體積/質(zhì)量)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4飛:1 (L/kg)，收集水洗脫液； 3)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:大孔吸附樹脂質(zhì)量為1:5~10(kg/kg)稱取H103型大孔吸附樹脂，用乙醇濕法裝柱并進行常規(guī)預(yù)處理，將2)中水洗脫液載入H103型大孔吸附樹脂柱，以水進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5^1:1 (L.h_7kg)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4飛:1 CL/kg)，棄去水洗脫液；換用10%~30%乙醇(iyV)進行洗脫，流速:樹脂質(zhì)量為0.5^2:1 (L -r1/kg)，洗脫體積:樹脂質(zhì)量為4~6:1 (L/kg)，收集10%~30%乙醇(iyV)洗脫液； 4)以步驟(1)中地黃質(zhì)量:顆粒狀活性炭質(zhì)量為1:6"10 (kg/kg)稱取顆粒狀或粉末狀商品活性炭，進行常規(guī)預(yù)處理后用水濕法裝柱，將3)中10%~30% (κ/κ)乙醇洗脫液載入活性炭柱，以10%~30%乙醇(—)進行洗脫，流速:活性炭質(zhì)量為0.5~I:1 (L.h_7kg)，洗脫體積:活性炭質(zhì)量為3飛:1 (L/kg)，棄去洗脫液，換用50%~60%乙醇(iyV)進行洗脫,流速:活性炭質(zhì)量為0.5~I:1 (L fVkg),洗脫體積:活性炭質(zhì)量為3飛:1 (L/kg)，收集50%~60%乙醇(Κ/V)洗脫液，60°C以下減壓濃縮至干，即得白色固體為梓醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法，其特征在于其中所述的梓醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)和分子量如下所示:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用三聯(lián)柱層析技術(shù)從地黃中快速分離梓醇的方法，其特征在于其中市售地黃為市售地黃藥材、生地黃飲片或熟地黃飲片。
【文檔編號】C07H1/08GK103524579SQ201310476980
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】楊歡, 王海艷, 顧芹英, 沈玉萍, 夏國華 申請人:江蘇大學(xué)