一種用核桃粕制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用核桃粕制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，該方法包括以下步驟：將核桃粕加水磨漿，加入堿性蛋白酶和纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到10-15%時(shí)，滅酶，離心，得到核桃粕酶解液；將酶解液過(guò)超濾膜和強(qiáng)酸型凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，得到具有降尿酸功效的生物活性肽。本發(fā)明結(jié)合生物酶解和色譜分離技術(shù)，制備出生物活性肽，目標(biāo)活性肽的降尿酸作用顯著。經(jīng)大鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明采用本發(fā)明方法制備的降尿酸肽可顯著降低大鼠的血肌酐水平，并對(duì)大鼠的腎臟功能具有一定程度的保護(hù)作用，降尿酸活性強(qiáng)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種用核桃粕制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]高尿酸血癥是指細(xì)胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)，當(dāng)男性血尿酸鹽≥ 416umol/L,而女性≥357umol/L時(shí)應(yīng)考慮高尿酸血癥。
[0003]高尿酸血癥分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)纱箢?lèi)，原發(fā)性高尿酸血癥由尿酸生成增加或排泄減少或二者同時(shí)并存引致。痛風(fēng)是尿酸鹽晶體沉積引起的臨床綜合征，是以高尿酸血癥為主要特征，表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石形成和關(guān)節(jié)畸形，累及腎臟可引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸性腎石病，嚴(yán)重者可出現(xiàn)關(guān)節(jié)致殘、腎功能不全。因此，降尿酸治療是非常必要的。
[0004]目前，降尿酸治療的藥物主要分為三大類(lèi):(1)促進(jìn)尿酸排泄藥，主要的藥物有苯溴馬龍、丙吡酮，這些藥物主要是抑制近端腎小管對(duì)尿酸的重吸收，以利于尿酸排泄。(2)抑制尿酸生成藥，主要的藥物有別嘌呤醇和非布索坦，主要通過(guò)肝臟代謝，不依賴(lài)腎排除。(3)促尿酸分解藥，主要的藥物有拉布立酶和聚乙二醇尿酸酶，它們主要通過(guò)分解尿酸為易于分泌排泄出的尿囊而發(fā)揮作用。但這些降尿酸藥物均為合成藥物，其副作用大，容易損害腎功能，如果長(zhǎng)期服用甚至?xí)a(chǎn)生腎衰竭。
[0005]目前也有中藥制劑用于治療高尿酸癥，該類(lèi)中草藥能有一定的治療效果，但由于制劑中藥成分較多，質(zhì)量控制相對(duì)困難，服用不方便。
[0006]也有研究者對(duì)報(bào)道中具有降尿酸功效的原料中有效成分進(jìn)行了分離提純，發(fā)現(xiàn)一些黃酮物質(zhì)具有明顯的降尿酸作用。如孫瑋研究了樺褐孔菌提取物對(duì)注射氧嗪酸鉀造成高尿酸大鼠的血清指標(biāo)和腎功能的影響，發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠有一定的治療作用。趙贊采用腺嘌呤聯(lián)合高糖飲食誘導(dǎo)的高尿酸血癥大鼠模型研究了越桔果渣黃酮對(duì)其血尿酸的作用，結(jié)果表明越桔果渣黃酮對(duì)高尿酸血癥及腎損傷具有明顯的防治作用。王瑞坡從桑椹中提取粗黃酮，并進(jìn)行大鼠實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)桑椹粗黃酮對(duì)大鼠肝臟黃嘌呤氧化酶酶活性具有較好的抑制作用，從而有效的降低大鼠的尿酸水平。但提取該類(lèi)黃酮的工藝復(fù)雜、能耗加大、得率低，不利于在我國(guó)大面積推廣。
[0007] 自1902年倫敦大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Buyliss和starlling首次發(fā)現(xiàn)活性多肽物質(zhì)-
促胰激素以來(lái)，人們對(duì)肽的研究逐漸深入，世界上許多科學(xué)家都在致力于活性多肽物質(zhì)的研究。近一個(gè)世紀(jì)的研究表明，肽是由20個(gè)天然氨基酸以不同的組成和排列方式構(gòu)成的二肽到復(fù)雜的線性和環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肽類(lèi)總稱(chēng)，是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物?？茖W(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)活性肽具有免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、酶調(diào)節(jié)、抗病毒、降血壓和降血脂等功能。由于功能性肽的特殊功能，使得人們對(duì)它的需求增加，現(xiàn)在已提取出的多種功能性肽多用于醫(yī)用和保健，如功能性大豆蛋白肽已經(jīng)用于降血脂。伴隨肽的結(jié)構(gòu)和功能研究逐漸深入，越來(lái)越多的具有新的功能特性的多肽被發(fā)現(xiàn)。
[0008]我國(guó)年產(chǎn)核桃30萬(wàn)噸以上，占世界三分之一。我國(guó)的核桃制品主要為核桃油、核桃乳、核桃粉、核桃干等。核桃柏為核桃榨完油后所剩的殘柏，其含有30%以上的蛋白質(zhì)，18種氨基酸齊全，8種必需氨基酸中的精氨酸和谷氨酸含量較高，但由于其色澤和氣味在加工過(guò)程中劣化，限制了去應(yīng)用領(lǐng)域，目前，多數(shù)廠家把其當(dāng)作飼料原料低價(jià)出售。
[0009]蛋白質(zhì)酶解是改造蛋白質(zhì)、實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)功能多兀化、提聞蛋白質(zhì)價(jià)值的最有效途徑之一，目前可采用酶解手段獲得具多種生物活性的蛋白肽，如抗氧化肽、降血壓肽、抗疲勞肽等，然而不同分子量分布、不同極性和不同氨基酸序列及空間構(gòu)效的蛋白肽具有的生物活性，通過(guò)控制酶解工藝來(lái)調(diào)節(jié)獲取目標(biāo)功能的蛋白肽是科研工作者一直努力追求的目標(biāo)。因此，以核桃柏為原料制備生物活性肽，具有較大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的首要目的在于提供一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，該方法的創(chuàng)新點(diǎn)在于對(duì)水解酶和水解程度的具體選擇，以及采用了膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集步驟(包括對(duì)超濾膜和離子交換樹(shù)脂的選擇)。
[0011]本發(fā)明的另一目的在于提供由上述方法制得的具有降尿酸功效的生物活性肽。
[0012]本發(fā)明的再一目的在于提供上述的具有降尿酸功效的生物活性肽的用途。
[0013]本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0014]一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，包括以下步驟:
[0015](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到10-15% (w/w)，在100_121°C下加熱30-45min，然后過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液；
[0016](2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至45_55°C，加入堿性蛋白酶和纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到10-15%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液；以原料核桃柏的質(zhì)量為計(jì)算基準(zhǔn)，堿性蛋白酶的加入量占0.6-1.2%，纖維素酶的加入量占1.0-1.5% ；
[0017](3)膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集降尿酸肽:將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)強(qiáng)酸型凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以酸性水為洗脫劑洗脫，收集洗脫液；真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，得到具有降尿酸功效的生物活性肽；
[0018]步驟(1)所用的核桃柏是油脂含量不高于10%的低溫壓榨核桃柏；
[0019]步驟(2)所述的滅酶是將核桃柏漿液加熱至95-100°C保持15_30min ；
[0020]步驟(3)所述的強(qiáng)酸型凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂優(yōu)選001X7凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂；
[0021]步驟(3)所述的酸性水優(yōu)選pH值為2.5-4的水。
[0022]由上述方法制得的具有降尿酸功效的生物活性肽可以用于制備降尿酸藥物。
[0023]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0024](I)本發(fā)明結(jié)合生物酶解和色譜分離技術(shù)，制備出生物活性肽，目標(biāo)活性肽的降尿酸作用顯著。經(jīng)大鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明采用本專(zhuān)利方法制備的降尿酸肽可顯著降低大鼠的血肌酐水平，并對(duì)大鼠的腎臟功能具有一定程度的保護(hù)作用。 [0025]( 2 )本發(fā)明工藝操作簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、沒(méi)有任何污染、體外篩選指標(biāo)簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，所得生物活性肽的降尿酸活性強(qiáng)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】[0026]圖1是實(shí)施例中降尿酸肽及市售大豆肽的尿酸峰色譜圖。
[0027]圖2是對(duì)比例中核桃肽的尿酸峰色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0029]以下各實(shí)施例中，采用反相高效液相色譜法測(cè)定尿酸值的方法如下:
[0030](I)溶液的配置
[0031]0.2mol/L (ρΗ7.5)磷酸緩沖液(PBS):準(zhǔn)確稱(chēng)取 30.0838g Na2HPO4.12H20 和
2.4962g NaH2PO4.2H20，用去離子水溶解，定容至500ml。
[0032]黃嘌呤:準(zhǔn)確稱(chēng)取6.4mg,先用ImllM NaOH溶解黃嘌呤，再加入100mlPBS,以IMHCl調(diào)節(jié)pH值至7.5。
[0033]黃嘌呤氧化酶:取120 μ I酶液，以PBS稀釋至8ml。
[0034]尿酸標(biāo)曲:準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg，加入IOml水，再稀釋至0.1~0.9mg/ml。
[0035]醋酸胺-冰醋酸:準(zhǔn)確稱(chēng)取醋酸胺3.85g定容至1000ml，然后加入4ml冰醋酸。
[0036](2)樣品預(yù)處理:
[0037]將樣品稀釋至40mg/m·l，在96孔酶標(biāo)板中依次加入50 μ I樣品與50 μ I黃嘌呤，每個(gè)樣品做3個(gè)平行，以50，25，10，5，2.5 μ g/ml別嘌呤醇為陽(yáng)性對(duì)照。37°C保溫IOmin后加入150 μ I黃嘌呤氧化酶，30s讀一次吸光值，總計(jì)60次30min。讀數(shù)完后以80 μ IlM HCl終止反應(yīng)，過(guò)0.25 μ m水性膜，待測(cè)。
[0038]色譜柱:ZorbaxEclipse XDB-C18 柱(5 μ m, 4.6 X 250mm,安捷倫)，
[0039]液相條件:洗脫液為10%甲醇+90%醋酸胺-冰醋酸溶液，進(jìn)樣體積為20 μ L，流速lml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm,運(yùn)行時(shí)間lOmin。
[0040]以下各實(shí)施例中，生物活性肽對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用的實(shí)驗(yàn)方法如下:
[0041](I)實(shí)驗(yàn)材料
[0042]動(dòng)物:SPF級(jí)SD大鼠110只，雄性，體重200土20g，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(許可證號(hào):SCXK (粵)2013-0020)。
[0043]藥品和試劑:別嘌醇片(廣東彼迪藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)20130302);氧嗪酸鉀(山東中科泰斗化學(xué)有限公司，批號(hào)=Batch N0.120901);羧甲基纖維素鈉(上海賽璐珞廠，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào):GB2760);尿酸試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號(hào):20130529)。
[0044]儀器:TGL-16G型高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);多功能酶標(biāo)儀(BioTelcUSA, Synergy HT)。
[0045]動(dòng)物飼養(yǎng)狀況:動(dòng)物飼養(yǎng)于暨南大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)鼠料、鋪料均由暨南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。自由食水，燈照12h，室溫為(20±2) °C，相對(duì)濕度(60~70)%。
[0046](2)實(shí)驗(yàn)方法
[0047]動(dòng)物分組和造模:取正常健康SD雄性大鼠185只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(20只)和造模組(165只)，造模組大鼠每天灌胃氧嗪酸鉀(2g.kg—1 )，連續(xù)處理7天，然后3%戊巴比妥鈉(30mg ?kg—1)腹腔注射麻醉,眼結(jié)膜取血(0.5ml),以4°C、3000rpm、離心15min,取上層血清測(cè)定尿酸含量；正常對(duì)照組大鼠灌胃給予等容積的溶媒。將尿酸含量高于IlOumol -L-1的大鼠確定為造模成功。將造模成功的大鼠按尿酸含量隨機(jī)分為模型對(duì)照組(等容積溶媒)、受試藥肽樣品組降尿酸肽I (200mg.kg4)、降尿酸肽2 (200mg.kg4)、降尿酸肽3(200mg ?1^_1)、核桃肽六(20011^ ?1^_1)、核桃肽13(20011^.kg—1)、核桃肽 C(200mg ?kg—1)、核桃肽 D (200mg *kgH)、核桃肽 E (200mg -kg—1)大豆肽(200mg *kg4)和別嘌醇組(50mg.kg-1),每組大鼠15只，灌胃給藥(給藥容積10ml/kg)，模型大鼠給予等容積的蒸餾水。上述肽樣品處理10d、20d時(shí)，于末次給藥50min，3%戊巴比妥鈉(30mg.kg—1)后，眼結(jié)膜取血(0.5ml),測(cè)定血清尿酸含量；抗痛風(fēng)肽處理第30d時(shí)，3%戊巴比妥鈉麻醉后腹腔動(dòng)脈取血5ml，除測(cè)定血清尿酸含量外，同時(shí)測(cè)定血清肌酐和尿素氮含量。
[0048]血清尿酸測(cè)定:采用鎢酸法并嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作和測(cè)定。
[0049]血清尿素氮和肌酐測(cè)定:采用二乙酰肟法測(cè)定血清尿素氮含量；采用苦味酸法測(cè)定血清肌酐含量，具體操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定。
[0050]統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)均以(i±S )表示，采用spssie.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組組間
差異比較采用t檢驗(yàn)方法，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0051]實(shí)施例1
[0052]一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，包括以下步驟:
[0053](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到10% (w/w)，在100°C下加熱45min,并過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液。
[0054](2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量0.6%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.0%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到10%時(shí)，滅酶(加熱至95-100°C保持15-30min),離心，取上清液，為核桃柏酶解液；
[0055](3)膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集降尿酸肽:將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)001 X 7凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以水(pH值4)為洗脫劑洗脫，收集洗脫液。
[0056](4)真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，得降尿酸肽I。
[0057]降尿酸肽高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖1。
[0058]降尿酸肽對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0059]實(shí)施例2
[0060]一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，包括以下步驟:
[0061](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到12% (w/w)，在110°C下加熱40min,并過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液。
[0062](2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至55°C，加入核桃柏質(zhì)量0.8%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.5%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到12%時(shí)，滅酶(加熱至95-100°C保持15-30min),離心，取上清液，為核桃柏酶解液；
[0063](3)膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集降尿酸肽:將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)001 X 7凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以水(pH值3.0)為洗脫劑洗脫，收集洗脫液。
[0064](4)真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，得降尿酸肽2。[0065]降尿酸肽2高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖1。
[0066]降尿酸肽2對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0067]實(shí)施例3
[0068]一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，包括以下步驟:
[0069](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到15% (w/w)，在100°C下加熱45min,并過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液。
[0070](2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量1.2%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.2%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到15%時(shí)，滅酶(加熱至95-100°C保持15-30min),離心，取上清液，為核桃柏酶解液；
[0071](3)膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集降尿酸肽:將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)001 X 7凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以水(pH值2.5)為洗脫劑洗脫，收集洗脫液。
[0072](4)真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，得降尿酸肽3。
[0073]降尿酸肽3高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖1。
[0074]降尿酸肽3對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0075]對(duì)比例I
[0076](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到12% (w/w)，在110°C下加熱40min,并過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液。
[0077](2)限制性酶解:
[0078]A、將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量0.8%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.0%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到12%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液A ；
[0079]B、將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量0.8%的酸性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.0%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到12%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液B ;
[0080]C、將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量0.8%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量
1.0%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到6%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液C ；
[0081](3)分別將核桃柏酶解液A、B、C真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，分別得核桃肽A、核桃肽B和核桃肽C。
[0082]核桃肽A、B、C高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖2。
[0083]核桃肽A、B、C對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0084]對(duì)比例2
[0085](I)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到10% (w/w)，在100°C下加熱45min,并過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液。
[0086](2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至50°C，加入核桃柏質(zhì)量0.8%的堿性蛋白酶和核桃柏質(zhì)量1.0%纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到12%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液；
[0087]( 3 )分離富集核桃肽:
[0088]D、將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，得超濾液D。
[0089]E、將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)GM201強(qiáng)堿型陰離子交換樹(shù)脂，以水(pH值8)為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，得洗脫液E。[0090](4)分別將上述核桃柏酶解液分離物真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，分別得核桃肽D和核桃肽E。
[0091]核桃肽D、E高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖2。
[0092]核桃肽D、E對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0093]對(duì)比例3
[0094]市售大豆肽產(chǎn)品
[0095]大豆肽高效液相色譜測(cè)定的尿酸峰形圖及峰面積如圖1。
[0096]大豆肽對(duì)氧嗪酸鉀誘致大鼠高尿酸血癥的治療作用如表1和表2。
[0097]表1抗痛風(fēng)肽對(duì)氧嗪酸鉀誘致高尿酸血癥大鼠不同時(shí)間血清尿酸含量的影響
(X±s)
[0098]
【權(quán)利要求】
1.一種用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)核桃柏的預(yù)處理:加水使核桃柏質(zhì)量含量達(dá)到10-15%(w/w)，在100-121°c下加熱30-45min，然后過(guò)膠體磨得到核桃柏漿液； (2)限制性酶解:將核桃柏漿液加熱至45-55°C，加入堿性蛋白酶和纖維素酶，當(dāng)水解度達(dá)到10-15%時(shí)，滅酶，離心，取上清液，為核桃柏酶解液；以原料核桃柏的質(zhì)量為計(jì)算基準(zhǔn)，堿性蛋白酶的加入量占0.6-1.2%，纖維素酶的加入量占1.0-1.5% ； (3)膜分離-大孔樹(shù)脂聯(lián)用分離富集降尿酸肽:將核桃柏酶解液通過(guò)膜通量為1000ODa的超濾膜，收集透過(guò)液，再過(guò)強(qiáng)酸型凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，以酸性水為洗脫劑洗脫，收集洗脫液；真空濃縮洗脫液，噴霧干燥，得到具有降尿酸功效的生物活性肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，其特征在于:步驟(3)所述的強(qiáng)酸型凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為001X7凝膠型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核桃柏制備具有降尿酸功效的生物活性肽的方法，其特征在于:步驟(3)所述的酸性水是pH值為2.5-4的水。
4.一種具有降尿酸功效的生物活性肽，其特征在于是由權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法制備得到。
5.權(quán)利要求4所述的具有降尿酸功效的生物活性肽在制備降尿酸藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK103627760SQ201310485124
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日
【發(fā)明者】蘇國(guó)萬(wàn), 趙謀明, 趙強(qiáng)忠, 崔春, 孫為正 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)