SERPINC1 iRNA組合物及其使用方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及靶向Serpinc1基因的iRNA例如雙鏈核糖核酸(dsRNA)組合物，和使用這類(lèi)iRNA例如dsRNA組合物來(lái)抑制Serpinc1表達(dá)的方法以及治療患有出血性障礙例如血友病的受試者的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】SERPINC1iRNA組合物及其使用方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本專(zhuān)利申請(qǐng)要求于2012年4月26日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/638, 952、于2012 年7月9日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/669, 249、于2012年12月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng) 號(hào)61/734, 573以及于2013年3月15日所提交的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?3/837, 129的優(yōu)先權(quán)。通過(guò) 引用將前述申請(qǐng)的每個(gè)的全部?jī)?nèi)容結(jié)合在此。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] Serpincl是絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin)超家族的一個(gè)成員。Serpincl是一種 血漿蛋白酶抑制劑，其抑制凝血酶以及凝固系統(tǒng)的其他激活的絲氨酸蛋白酶，例如因子X(jué)、 IX、XI、XII和VII，并且從而調(diào)節(jié)凝血級(jí)聯(lián)（參見(jiàn)例如圖1)。通過(guò)肝素和催化凝血酶：抗 凝血酶（TAT)復(fù)合體形成的其他相關(guān)糖胺聚糖的存在增強(qiáng)Serpincl的抗凝活性。
[0005] 出血性障礙（無(wú)論遺傳性的或獲得性的）是存在不完全血液凝結(jié)的病況。例如， 血友病是一組世代相傳的遺傳性出血性障礙，其損害身體控制血液凝結(jié)或凝固的能力。血 友病A是一種隱性伴X的遺傳性障礙，涉及缺失機(jī)能性凝血因子VIII，并代表80%的血友 病案例。血友病B是一種隱性伴X的遺傳性障礙，涉及缺失機(jī)能性凝血因子IX。它包括大 約20%血友病案例。血友病C是一種常染色體遺傳性障礙，涉及缺失機(jī)能性凝血因子X(jué)I。 血友病C是不完全隱性的，因?yàn)殡s合的個(gè)體也顯示增加的出血。
[0006] 盡管目前不存在對(duì)血友病的治愈，但它可以用定期輸注缺失的凝結(jié)因子例如血友 病A中的因子VIII得以控制。然而，一些血友病患者發(fā)展了針對(duì)給予他們的替代因子的抗 體（抑制劑），并從而對(duì)替代凝結(jié)因子變得不應(yīng)。因此，在這類(lèi)受試者中的出血不能被恰當(dāng) 地的控制。
[0007] 高效價(jià)抑制劑（例如，對(duì)于因子VIII和其他凝結(jié)因子）的發(fā)展是血友病療法 最嚴(yán)重的并發(fā)癥，并且使得治療出血非常具有挑戰(zhàn)性。當(dāng)前，在這類(lèi)受試者中停止出血 的唯一策略是使用"旁路劑"，例如因子八抑制劑旁路活性（FEIBA)以及激活的重組因子 VII(rFVIIa)、血漿去除術(shù)、連續(xù)因子替代、以及免疫耐受療法，這些中沒(méi)有一個(gè)是完全有效 的。因此，本領(lǐng)域需要用于患有出血性障礙例如血友病的受試者的替換治療。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明提供了iRNA組合物，該iRNA組合物影響Serpinc基因的RNA轉(zhuǎn)錄本的RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC)介導(dǎo)的切割。該Serpincl基因可以在細(xì)胞例如受試者（例如人）體 內(nèi)的細(xì)胞的內(nèi)部。本發(fā)明還提供了一種使用和運(yùn)用本發(fā)明的iRNA組合物來(lái)抑制Serpincl 基因表達(dá)和/或治療患有將從抑制或減少Serpincl表達(dá)受益的障礙例如出血性障礙（例 如血友?。┑氖茉囌叩姆椒?。
[0010] 因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于抑制Serpincl表達(dá)的雙鏈核糖核酸 (dsRNA)。該dsRNA包括有義鏈和反義鏈，其中該有義鏈包括與SEQIDN0:1的核苷酸序列 差異不超過(guò)3個(gè)核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸，并且該反義鏈包括與SEQIDN0:5的核苷 酸序列差異不超過(guò)3個(gè)核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
[0011] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于抑制Serpincl表達(dá)的雙鏈核糖核酸（dsRNA)。 該dsRNA包括有義鏈和反義鏈，該反義鏈包括一個(gè)互補(bǔ)區(qū)域,該互補(bǔ)區(qū)域包括與表3、4、8、 11、 12、14、15、20、和21中任一個(gè)列出的反義序列中的任意一個(gè)差異不超過(guò)3個(gè)核苷酸的至 少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
[0012] 在一個(gè)實(shí)施例中，該有義和反義鏈包括選自下組的序列，該組由以下各項(xiàng)組成： AD-50487.UAD-50477.UAD-50483.UAD-50475.UAD-50495.UAD-50476.UAD-50499. 1、AD-50478.UAD-50489. 1、AD-50501.UAD-50507.UAD-50484.UAD-50515.UAD-50540. 1、 AD-50528.UAD-50549.UAD-50539.UAD-50534.UAD-50527.UAD-50514.UAD-50509. 1、 AD-50529. 1、AD-54944、AD-56813、AD-57205、AD-57214、和AD-57213,以及表 3、4、8、11、 12、 14、15、20、以及21中任一個(gè)列出的序列，或與那些序列至少95%、96%、97%、98%、或 99%相同的序列中的任一個(gè)。在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，該dsRNA包括至少一個(gè)經(jīng)修飾的 核苷酸。在一個(gè)實(shí)施例中，該修飾的核苷酸中的至少一個(gè)選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成： 2' -0-甲基修飾的核苷酸、包括5' -硫代磷酸基團(tuán)的核苷酸和與膽留烯基衍生物或十二烷 酸雙癸酰胺基團(tuán)連接的末端核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施例中，該修飾的核苷酸選自下組，該組由 以下各項(xiàng)組成：2' -脫氧-2' -氟修飾的核苷酸、2' -脫氧修飾的核苷酸、鎖定的核苷酸、脫堿 基核苷酸、2' -氨基修飾的核苷酸、2' -烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸、以及 包括非天然堿基的核苷酸。
[0013] 該dsRNA的互補(bǔ)區(qū)域可以是至少17個(gè)核苷酸長(zhǎng)度、在19個(gè)和21個(gè)核苷酸長(zhǎng)度之 間、或19個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施例中，dsRNA的每條鏈不多于30個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
[0015] dsRNA的至少一條鏈可包括至少1個(gè)核苷酸或至少2個(gè)核苷酸的3'突出。
[0016] 在某些實(shí)施例中，dsRNA進(jìn)一步包括一個(gè)配體。在一個(gè)實(shí)施例中，該配體共軛至該 dsRNA的有義鏈的3'末端。
[0017] 在一些實(shí)施例中，該配體是通過(guò)二價(jià)或三價(jià)分支連接物而附接的一個(gè)或多個(gè) N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。在具體實(shí)施例中，該配體是：
[0018]
【權(quán)利要求】
1. 一種用于抑制Serpincl表達(dá)的雙鏈核糖核酸（dsRNA)，其中所述dsRNA包括有義鏈 和反義鏈，其中所述有義鏈包括與SEQ ID NO: 1的核苷酸序列差異不超過(guò)3個(gè)核苷酸的至 少15個(gè)連續(xù)核苷酸，并且所述反義鏈包括與SEQ ID NO: 5的核苷酸序列差異不超過(guò)3個(gè)核 苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
2. -種用于抑制Serpincl表達(dá)的雙鏈核糖核酸（dsRNA)，其中所述dsRNA包括有義 鏈和反義鏈，該反義鏈包括一個(gè)互補(bǔ)區(qū)域，該互補(bǔ)區(qū)域包括與表3、4、8、11、12、14、15、20、和 21中任一個(gè)列出的反義序列中的任意一個(gè)差異不超過(guò)3個(gè)核苷酸的至少15個(gè)連續(xù)核苷酸。
3. 如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該有義和反義鏈包括選自下組的序列，該組由以下 各項(xiàng)組成：AD-50487. 1、AD-50477. 1、AD-50483. 1、AD-50475. 1、AD-50495. 1、AD-50476. 1、 AD-50499. UAD-50478. UAD-50489. 1、AD-50501. UAD-50507. UAD-50484. UAD-50515. 1、 AD-50540. UAD-50528. UAD-50549. UAD-50539. UAD-50534. UAD-50527. UAD-50514. 1、 AD-50509. UAD-50529. 1、以及 AD-54944,以及表 3、4、8、11、12、14、15、20、以及21中任一個(gè) 列出的序列中的任一個(gè)。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括至少一個(gè)經(jīng)修飾的核苷酸。
5. 如權(quán)利要求4所述的dsRNA，其中所述經(jīng)修飾的核苷酸中的至少一個(gè)選自下組，該組 由以下各項(xiàng)組成：2'-0-甲基修飾的核苷酸、包括5'-硫代磷酸基團(tuán)的核苷酸、和與膽甾烯 基衍生物或十二烷酸雙癸酰胺基團(tuán)連接的末端核苷酸。
6. 如權(quán)利要求4所述的dsRNA，其中所述經(jīng)修飾的核苷酸選自下組，該組由以下各項(xiàng)組 成：2' -脫氧-2' -氟修飾的核苷酸、2' -脫氧修飾的核苷酸、鎖定的核苷酸、脫堿基核苷酸、 2' -氨基修飾的核苷酸、2' -烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸、以及包括非天然 堿基的核苷酸。
7. 如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補(bǔ)區(qū)域是至少17個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
8. 如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補(bǔ)區(qū)域是在19個(gè)和21個(gè)核苷酸長(zhǎng)度之間。
9. 如權(quán)利要求8所述的dsRNA，其中該互補(bǔ)區(qū)域是19個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
10. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中每條鏈不多于30個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
11. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一條鏈包括至少1個(gè)核苷酸的3'突出 端。
12. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一條鏈包括至少2個(gè)核苷酸的3'突出 端。
13. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA,進(jìn)一步包括配體。
14. 如權(quán)利要求13所述的dsRNA，其中該配體共軛至該dsRNA的有義鏈的3'末端。
15. 如權(quán)利要求13所述的dsRNA，其中該配體是一種N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生 物。
16. 如權(quán)利要求15所述的dsRNA，其中該配體是
17. 如權(quán)利要求15所述的dsRNA，其中該dsRNA共軛至以下示意圖中所示的配體
并且其中X是O或S。
18. 如權(quán)利要求17所述的dsRNA，其中X是0。
19. 如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補(bǔ)區(qū)域由表3、4、8、11、12、14、15、20、以及21 中任一個(gè)的反義序列中的一個(gè)組成。
20. 如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中該dsRNA包括由選自表3、4、8、11、12、14、15、 20、和21中任一個(gè)的序列的有義鏈序列組成的有義鏈以及由選自表3、4、8、11、12、14、15、 20、和21的任一個(gè)的序列的反義序列組成的反義鏈。
21. -種細(xì)胞，含有如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA。
22. -種編碼dsRNA的至少一條鏈的載體，其中所述dsRNA包括與編碼Serpincl的 mRNA的至少一部分互補(bǔ)的一個(gè)區(qū)域，其中所述dsRNA是30個(gè)或更少堿基對(duì)長(zhǎng)度，并且其中 所述dsRNA靶向所述mRNA以便切割。
23. 如權(quán)利要求22所述的載體，其中該互補(bǔ)區(qū)域是至少15個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
24. 如權(quán)利要求22所述的載體，其中該互補(bǔ)區(qū)域是19個(gè)至21個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。
25. -種細(xì)胞，包括如權(quán)利要求22所述的載體。
26. -種藥物組合物，用于抑制Serpincl基因表達(dá)，該藥物組合物包括權(quán)利要求1或2 所述的dsRNA或權(quán)利要求22所述的載體。
27. -種抑制細(xì)胞中Serpincl表達(dá)的方法，該方法包括： (a)使該細(xì)胞與權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或權(quán)利要求22所述的載體進(jìn)行接觸；并 且 (b)維持步驟（a)中產(chǎn)生的細(xì)胞一段時(shí)間，該時(shí)間足以獲得Serpincl基因的mRNA轉(zhuǎn)錄 本的降解，由此抑制該細(xì)胞中的Serpincl基因的表達(dá)。
28. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述細(xì)胞在受試者體內(nèi)。
29. 如權(quán)利要求28所述的方法，其中該受試者為人類(lèi)。
30. 如權(quán)利要求29所述的方法，其中該人類(lèi)受試者患有出血性障礙。
31. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中該出血性障礙是血友病。
32. 如權(quán)利要求27-31中任一項(xiàng)所述的方法，其中該Serpincl表達(dá)被抑制至少約 30%。
33. -種用于治療患有將從減少Serpincl表達(dá)受益的障礙的受試者的方法，該方法包 括向該受試者給予治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求22所述的 載體，由此治療所述受試者。
34. -種用于預(yù)防患有將從減少Serpincl表達(dá)受益的障礙的受試者的至少一種癥狀 的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán) 利要求22所述的載體，由此預(yù)防患有將從減少Serpincl表達(dá)受益的障礙的受試者的至少 一種癥狀。
35. 如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中該障礙是一種出血性障礙。
36. 如權(quán)利要求35所述的方法，其中該出血性障礙是血友病。
37. 如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中向該受試者給予該dsRNA造成血液凝結(jié)的增 加和/或Serpincl蛋白質(zhì)積累的減少。
38. 如權(quán)利要求33或34所述的方法，其中該dsRNA共軛至一個(gè)配體。
39. 如權(quán)利要求38所述的方法，其中該配體共軛至該dsRNA的有義鏈的3'末端。
40. 如權(quán)利要求39所述的方法，其中該配體是一種N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。
41. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中將該dsRNA以大約0. 01mg/kg至大約10mg/kg或 大約0· 5mg/kg至大約50mg/kg的劑量給予。
42. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中將該dsRNA以大約10mg/kg至大約30mg/kg的劑 量給予。
43. 如權(quán)利要求41所述的方法，其中將該dsRNA以選自下組的劑量給予，該組由以下各 項(xiàng)組成：〇.311^/1^、0.511^/1^、111^/1^、1.511^/1^、311^/1^、1〇11^/1^、以及3〇11^/1^。
44. 如權(quán)利要求42或43所述的方法，其中將該dsRNA每周給予該受試者一次。
45. 如權(quán)利要求42或43所述的方法，其中將該dsRNA每月給予該受試者兩次。
46. 如權(quán)利要求33或34所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)量所述受試者體內(nèi)的凝血酶水平。
47. 如權(quán)利要求34或35所述的方法，其中將該dsRNA以大約0. 5mg/kg至大約5mg/kg 的周累積劑量皮下給予該受試者，并且其中該dsRNA是AD-57213。
48. -種抑制受試者體內(nèi)Serpincl的表達(dá)的方法，該方法包括 向所述受試者給予治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求22所 述的載體，由此抑制所述受試者體內(nèi)Serpincl的表達(dá)。
49. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中該dsRNA共軛至一個(gè)配體。
50. 如權(quán)利要求49所述的方法，其中該配體共軛至該dsRNA的有義鏈的3'末端。
51. 如權(quán)利要求50所述的方法，其中該配體是一種N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。
52. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中將該dsRNA以大約0. Olmg/kg至大約lOmg/kg或 大約0· 5mg/kg至大約50mg/kg的劑量給予。
53. 如權(quán)利要求52所述的方法，其中將該dsRNA以大約10mg/kg至大約30mg/kg的劑 量給予。
54. 如權(quán)利要求52所述的方法，其中將該dsRNA以選自下組的劑量給予，該組由以下各 項(xiàng)組成：lmg/kg、3mg/kg、10mg/kg、以及 30mg/kg。
55. 如權(quán)利要求54所述的方法，其中將該dsRNA每周給予該受試者一次。
56. 如權(quán)利要求54所述的方法，其中將該dsRNA每月給予該受試者兩次。
57. 如權(quán)利要求48所述的方法，其中將該dsRNA以大約0. 5mg/kg至大約5mg/kg的周 累積劑量皮下給予該受試者，并且其中該dsRNA是AD-57213。
58. 如權(quán)利要求48所述的方法，進(jìn)一步包括測(cè)量所述受試者體內(nèi)的凝血酶水平。
【文檔編號(hào)】C07H21/04GK104520310SQ201380034051
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月26日
【發(fā)明者】A·埃金克, A·塞加爾, I·圖德加斯卡, D·福斯特, S·米爾斯坦, B·貝滕考特, M·梅爾, K·查理斯, S·庫(kù)奇曼奇, K·G·拉杰夫, M·瑪諾哈蘭 申請(qǐng)人:阿爾尼拉姆醫(yī)藥品有限公司