免疫球蛋白k輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽治療急性炎癥藥物中應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有促進(jìn)免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白，具有減輕急性炎癥反應(yīng)對機(jī)體破壞的多肽。其序列為AMVEPHSQARMRCGF是全新的序列，它們可以在體內(nèi)試驗(yàn)中增加內(nèi)毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽治療急性炎癥藥物中應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有促進(jìn)免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白、具有減輕急性炎癥反應(yīng)對機(jī)體破壞的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]膿毒血癥(i^psis) —直是一個(gè)嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)問題。早期膿毒血癥不經(jīng)過及時(shí)有效治療可進(jìn)展為重癥膿毒血癥和膿毒血癥性休克，兩者死亡率分別為20%~30%和40%~70%。醫(yī)學(xué)界一直在研究有效的治療手段，如早期對癥治療、激活蛋白C、皮質(zhì)激素治療等。近年來隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，對膿毒血癥的認(rèn)識和治療取得了很大進(jìn)展。其中，免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白(IKB-α)在內(nèi)毒素休克中扮演著重要角色。
[0003]IKB 蛋白家族成員有 IKB a (MAD-3, pp40)、IKB β、IKB Y /ρ105、IKB δ /ρΙΟΟ、IKB ε、Bcl_3以及果蠅屬的Cactus等。其家族結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是均有多個(gè)約33個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，稱為崐SWI6/錨蛋白重復(fù)序列，主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用。IKB蛋白主要有以下三個(gè)部分構(gòu)成:1.與蛋白降解有關(guān)的N-末端區(qū)；2.能與NF-κ B相互作用的內(nèi)部區(qū)(區(qū)內(nèi)含有錨蛋白重復(fù)序列ANK)(家族共有結(jié)構(gòu))主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用；
3.稱為PEST的C 一端區(qū)， 主要參與“囚禁"NF-κ B在細(xì)胞漿中。IKBs家族參與兩個(gè)信號通路:NF- κ B和Toll-like Receptor信號通路。NF- κ B的激活必須通過兩個(gè)步驟:①IKB從NF-K B復(fù)合體中解離并降解，暴露NF-κ B的核定位序列；②NF-κ B發(fā)生核易位，并與特異的κ B序列結(jié)合。
[0004]因此，IKB通過介導(dǎo)這兩條通路，從而調(diào)控前炎癥性細(xì)胞因子、細(xì)胞表面受體、轉(zhuǎn)錄因子、粘附分子等的生成。最終產(chǎn)生抗炎的作用。因而成為治療中性粒細(xì)胞為主的炎癥反應(yīng)的主要靶點(diǎn)。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽抑制劑問世，用于治療膿毒血癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽，對急性炎癥具有很好的療效。
[0006]技術(shù)方案
免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽5，其特征在于其序列為AMVEPHSQARMRCGFο
[0007]免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽5在治療急性炎癥藥物中的應(yīng)用。
[0008]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽5，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外促進(jìn)免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白活力。在內(nèi)毒素休克模型實(shí)驗(yàn)中成功的增加了小鼠的生存率。單核巨噬細(xì)胞表達(dá)腫瘤壞死因子釋放酶，這種酶可切割并釋放腫瘤壞死因子，腫瘤壞死因子是炎癥反應(yīng)的核心細(xì)胞因子，有加重炎癥反應(yīng)的作用。我們發(fā)現(xiàn)的多肽抑制劑可以抑制腫瘤壞死因子釋放酶的酶活力，從而減輕了炎癥反應(yīng),保護(hù)機(jī)體并減輕炎癥的破壞作用。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例1
多肽抑制劑體外祀點(diǎn)酶:腫瘤壞死因子釋放酶(均購于sigma公司)的IC50值。
[0010]腫瘤壞死因子釋放酶的活力是通過切割熒光產(chǎn)生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 檢測的(激發(fā)波長=320 nm,發(fā)射波長=405 nm)。反應(yīng)在37° C下100 μL反應(yīng)體系中進(jìn)行。反應(yīng)開始時(shí)向反應(yīng)體系中加4 μL基質(zhì)金屬蛋白酶-3存儲液(I ng/μL)底物的終濃度為10 μΜ。測得的IC50值為52.12ymoL.[0011]實(shí)施例2
用內(nèi)毒素休克模型檢測多肽的體內(nèi)活力
在建立內(nèi)毒素休克模型之前，我們首先測定了 LPS (E.coli 0111:B4)小白鼠的LD50為50 Pg每只小鼠，在實(shí)驗(yàn)中我們采用了 100 Pg每只小鼠，這樣，對照組的小鼠可全部死亡。用Regas印in2做了一個(gè)陽性對照實(shí)驗(yàn)。對照組小鼠注射100 μg LPS，而Regasepin2實(shí)驗(yàn)組的小鼠在注射LPS 5分鐘之后,每只小鼠再注射0.7 mg的多肽。通過制作Kaplan-Meier生存曲線發(fā)現(xiàn)Regasepin2可有效的保護(hù)注射了 100 Kg的小鼠，提高了生存率。成功地在小白鼠上建立內(nèi)毒素休克模型之后，用該模型檢測AMVEPHSQARMRCGF的體內(nèi)活力。對照組小鼠(12只)注射100 μg LPS，而多肽抑制劑組小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射0.7 mg多肽抑制劑。用Kaplan-Meier生存曲線分析，多肽AMVEPHSQARMRCGF可有效地保護(hù)小白鼠，提高內(nèi)毒素休克小鼠的生存率。
【權(quán)利要求】
1.免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽5，其特征在于其序列為AMVEPHSQARMRCGFo
2.免疫球蛋白K輕鏈基因增強(qiáng)子抑制蛋白多肽5在治療急性炎癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07K7/08GK103923188SQ201410020899
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月17日
【發(fā)明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國, 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴(yán)明 申請人:南通誠信氨基酸有限公司