專利名稱：脫氧核糖核酸(dna)提取工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及脫氧核糖核酸的提取工藝，進一步涉及從魚性腺如精巢提取脫氧核糖核酸(DNA)的工藝。
脫氧核糖核酸(Deoxytihonucleicacid-簡寫DNA)是人體和生物體的主要遺傳物質，它對生物的生長、發(fā)育、遺傳、變異、代謝等生命活動，起著控制作用。
脫氧核糖核酸產(chǎn)品，應用譜極廣除用作生化試劑，提取核苷酸等原料外，在醫(yī)藥保健，農(nóng)業(yè)作物以及食品美容等方面均產(chǎn)生相當顯著的作用，因此一直都列為國內(nèi)外重大科研項目，吸引研究者們不辭辛勞地耕耘。
二十世紀初，研究人員只能從蛙魚和鯡魚的精巢中，采用化學方法在實驗室里進行微量提取，稍后又發(fā)現(xiàn)了可從小牛的胸腺中提取;目前國內(nèi)外相繼發(fā)明了從海產(chǎn)魚精巢中提取DNA的技術，這些技術大多借助化學方法完成，然而化學方法的弊端則不言而喻。
蘇聯(lián)專利SU652187和日本專利J55015449相繼披露了從魚的性腺組織體內(nèi)提取DNA的技術，前者用的是生化提取法，后者用的是化學提取法。然而前者用的生化提取法是采用胰蛋白酶或鏈霉蛋白酶進行處理，成本高，來源少，且工序復雜，只能在實驗室中少量提取，未形成大規(guī)模生產(chǎn)，況且用生物化學方法從淡水鯉魚精巢中提取DNA，訖今國內(nèi)外尚無報導。
本發(fā)明的目的在于
1、擴大DNA的生產(chǎn)規(guī)模，廣泛取材，從各類魚的性腺組織如魚精巢提取之，進而避化學提取法之弊端，揚生化提取法之優(yōu)點，減少環(huán)境污染。
2、簡化工藝，縮短生產(chǎn)時間，提高提取率。
本發(fā)明的技術方案如下取魚精巢(淡水海水魚均可)作原料，因精巢中的精原細胞含有大量DNA，精巢本身又含有脫氧核糖核酸酶(DNase)，加工過程中加入檸檬酸鈉，抑制DNase的活性，使精巢中的DNA不被其本身的DNase所水解。采用酶水解蛋白質，使之與DNA脫離，在30℃左右加入PH9的NaHCO3緩沖液，最后用食用酒精沉淀DNA，使DNA成纖維狀沉淀，經(jīng)過濾，干燥，得到白色或微黃色纖維狀DNA工業(yè)產(chǎn)品。
以下結合上述技術方案詳述本發(fā)明本發(fā)明采用檸檬酸鈉(Sodium-Citrate)和氯化鈉(Sodium Clrororide)的混合液(以下簡稱SSC)，碳酸氫鈉(NaHCO3)和純度為95%的食用工業(yè)酒精為反應試劑。所述SSC溶液中的檸檬酸鈉為食用級，取150g溶于10000ml水中攪拌均勻，使之溶解，再加60g食鹽(NaCl)加入檸檬酸鈉溶液，攪拌使之溶解。取100g食用級碳酸氫鈉(NaHCO3)加入10000ml水中，使之溶解，即成PH9的NaHCO3緩沖液。
本發(fā)明工藝流程具體為7個步驟。
1、將精巢中的夾雜物(如脂肪、血塊、肝、魚鰾、結締組織等)去除干凈，并用清水洗滌，瀝干水分后，稱重。
2、將稱重的精巢倒入組織搗碎機加一倍重量的SSC溶液，搗碎使成勻漿。
3、將勻漿倒入離心試管中，在天平上平衡，再在3000轉/1分鐘的冷凍離心機中離心8-11分鐘，傾去上清液，留下沉淀。
4、以上操作重復三次，目的在于除去水溶性和鹽溶性雜質，留下沉淀。
5、將沉淀取出，加相當原料重量1/20的PH9碳酸氫鈉溶液，加入混合胰酶0.08-0.1%，攪拌均勻，於37℃下保溫5-10分鐘，夏天室溫即可，繼續(xù)攪拌均勻，水解完畢后倒入95%的酒精使DNA沉淀。
6、反復用酒精沉淀脫水三次后濾干酒精，即得成品。
7、將白色或微黃色纖維狀成品置60℃左右的鼓風干燥箱中干燥。
與已有技術比較，本發(fā)明優(yōu)點體現(xiàn)在以下幾個方面1、生產(chǎn)工藝簡單，從投料到出成品只需2-2.5小時，耗料少，收率大，平均提取率在10%以上，而已往技術要花2-3天，提取率僅4-5%。
2、無環(huán)境污染，生產(chǎn)條件溫和，所用試劑均為食用級，對人體無副毒作用，而以往用的去蛋白劑是十二烷基磺酸鈉或有機溶劑，耗費大且污染環(huán)境，生產(chǎn)出的產(chǎn)品不能用于食品添加劑。
3、取材容易，來源廣泛，除從海水魚精巢提取，還可從淡水魚精巢提取。
權利要求
1.本發(fā)明脫氧核糖核酸(DNA)提取工藝經(jīng)(勻漿、沉淀、攪拌)等工序，其特征在于本發(fā)明是將魚的精巢去雜，洗凈瀝干后加入檸檬酸鈉和氯化鈉的混合液，搗碎、勻漿，然后倒入離心試管，於天平上平衡，再在3000轉/1分鐘的冷凍離心機中離心8-11分鐘，傾去上清液，留下沉淀，上述工序重復三次，然后取出沉淀，加入為原料重量1/20的碳酸氫鈉(NaHCO3)溶液和0.08-0.1%的胰混合酶，攪拌均勻，於35℃-37.5℃保溫5-10分鐘，攪拌均勻，水解完畢，倒入95%酒精沉淀，濾干酒精經(jīng)干燥即得成品。
2.據(jù)權利要求1所述的脫氧核糖核酸(DNA)提取工藝，其特征在于碳酸氫鈉(NaHCO3)溶液酸堿度為PH9。
3.據(jù)權利要求1所述的脫氧核糖核酸(DNA)提取工藝，其特征在于用95%的酒精反復沉淀白色纖維狀成品三次。
4.據(jù)權利要求1所述的脫氧核糖核酸(DNA)提取工藝，其特征在于所述檸檬酸鈉和碳酸氫鈉、酒精均為食用級。
全文摘要
本發(fā)明涉及脫氧核糖核酸(DNA)提取工藝，它提出了一種從魚的性腺體如魚的精巢中提取DNA的生產(chǎn)工藝。該工藝系采用由檸檬酸鈉和氯化鈉配制的混合液，食鹽以及碳酸氫鈉為生產(chǎn)試劑，先后加入魚精巢，經(jīng)攪拌、離心、留下沉淀，再用混合胰酶和食用酒精處理直至，獲得白色或微黃色纖維狀成品。本發(fā)明工藝簡單，節(jié)時省料，提取率高，無環(huán)境污染，對人體無毒副作用，應用面廣。
文檔編號C07H1/08GK1112124SQ9411099
公開日1995年11月22日 申請日期1994年5月16日 優(yōu)先權日1994年5月16日
發(fā)明者劉潤芝 申請人:劉潤芝