專利名稱：提取大豆中異黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提取大豆中異黃酮的方法，特別是對(duì)異黃酮含量高的優(yōu)質(zhì)大豆，經(jīng)溶劑萃取、減壓濃縮、水解、柱層析分離等多種生物化學(xué)手段，可獲得高純度異黃酮產(chǎn)品。
近年來，美國科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)一種特有的防癌物質(zhì)——三羥基異黃酮(異黃酮水解產(chǎn)物)的結(jié)晶體在惡性腫瘤的孕育中可有效地阻滯血管增生的生理過程，斷絕養(yǎng)料來源，從而延緩或阻止腫瘤病變的發(fā)展。美國的營(yíng)養(yǎng)和食品學(xué)會(huì)調(diào)查了美國人和日本人的食譜發(fā)現(xiàn)，食用豆類食品是日本人癌癥發(fā)病率低的主要原因，尤其是乳腺癌和前列腺癌的發(fā)病率，美國人比日本人高4倍。
大豆中異黃酮是大豆生長(zhǎng)過程形成的一類次生代謝產(chǎn)物。至今已發(fā)現(xiàn)主要由12種化合物組成，即9種葡萄糖甙和3種相應(yīng)的配糖體。我國大豆種質(zhì)檢測(cè)結(jié)果表明，大豆中異黃酮總含量為0.04-0.5％，差異相當(dāng)大。異黃酮有許多重要的生理活性，如抗腫瘤、抗雌激素、抗病原菌、抗氧化、抗溶血等活性，尤其是它的抗癌作用，近年來國外研究報(bào)道甚多。據(jù)最近的醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)分析和檢索系統(tǒng)查詢，國外的研究者多將異黃酮作為抗腫瘤藥物進(jìn)行大量的動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)。他們認(rèn)為大豆是異黃酮染料木素(Genistein)的重要食物來源。染料木素具有弱雌激素活性，在動(dòng)物模型中其高濃度可表現(xiàn)出抗雌激素作用。染料木素亦是蛋白酪氨酸激酶的特定抑制劑，它也能抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶和其它有關(guān)信號(hào)傳遞的關(guān)鍵酶。在離體條件下，染料木素能抑制多種癌細(xì)胞生長(zhǎng)，其IC50值的范圍為5-40μM(1-10mg/ml)。在26次實(shí)驗(yàn)性致癌的動(dòng)物研究中，有17次(占65％)有正效果。[1 Messina MJet al.,Nutr Cancer,1994,21(2):113-31.2 Xu X,et al.,J Nutr,1995 sep,125(9):2307-15.3 Barnes S et al.,Adv Exp Biol,1996,401:87-100.]特別是異黃酮染料木素可有效防止亞硝基化合物(MNU)所誘導(dǎo)的哺乳動(dòng)物的乳腺和前列腺癌的發(fā)生，并認(rèn)為作為飲料食用可對(duì)癌癥病人的化療后起到保護(hù)劑的作用，有效地調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的繁殖和提高抗氧化酶活性。
有些學(xué)者還就大豆中的異黃酮在人體中的吸收、循環(huán)和轉(zhuǎn)化過程以及其在血液中的濃度進(jìn)行深入的研究。雖然從大豆食品中所攝取的染料木素水平不足以象對(duì)癌癥的化學(xué)療法那樣抑制成熟的乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但此水平已足以調(diào)節(jié)乳腺上皮細(xì)胞的增生，因而起到化學(xué)預(yù)防的效果。
關(guān)于大豆中的異黃酮的研究，國內(nèi)外近幾年已有一些專利申請(qǐng)，主要集中在異黃酮的抗氧化作用(可以用于癌癥化療)，抗骨質(zhì)疏松和富含糖苷配基異黃酮植物蛋白乳清、乳清蛋白及其制備方法等領(lǐng)域。唯有歐洲專利(專利公開號(hào)EP101639)中涉及異黃酮的提取工藝，但該提取工藝不足之處有2、因用堿液不適用全脂大豆粉的提取；2、沉淀蛋白質(zhì)時(shí)帶走部分異黃酮，回收率偏低；3、柱層析時(shí)用甲醇洗脫，殘留甲醇對(duì)人體健康有害；4、產(chǎn)品中一半以上是丙二?；慄S酮，本發(fā)明人檢索的國內(nèi)外有關(guān)研究報(bào)道，尚未發(fā)現(xiàn)其藥用價(jià)值。
本發(fā)明人于1995年12月對(duì)大豆中的異黃酮提取工藝進(jìn)行研究，通過三年來多次實(shí)驗(yàn)研究，提出的新工藝，可獲得含量95-97％的大豆素、染料木素、大豆甙和染料木甙四種結(jié)晶體(可用做HPLC檢測(cè)標(biāo)樣)；含量大于95％的大豆甙、染料木甙混合物、含量大于95％的大豆素和染料木素混合物(可用做醫(yī)藥原料)及含量30％的大豆甙、染料木甙混合物、含量30％的大豆素、染料木素混合物(可用于食品)等一系列產(chǎn)品。
本發(fā)明第一個(gè)目的在于利用脫脂大豆粉提取異黃酮甙總量為95％以上或異黃酮甙元總量為95％以上的產(chǎn)品用于醫(yī)藥工業(yè)原料。
本發(fā)明第二個(gè)目的在于利用全脂大豆粉或脫脂大豆粉提取異黃酮甙總量為30％或異黃酮甙元總量為30％的產(chǎn)品，用于食品和保健食品工業(yè)原料。
本發(fā)明第三個(gè)目的在于利用脫脂大豆粉提取含量95％以上的大豆素、染料木素和異黃酮甙(即大豆甙和染料木甙混合物)三種產(chǎn)品用于醫(yī)藥工業(yè)原料。
根據(jù)上述發(fā)明目的，提取大豆中異黃酮的產(chǎn)品及其方法主要內(nèi)容有本發(fā)明采用食品級(jí)酒精為萃取劑，其優(yōu)點(diǎn)是提取率高且產(chǎn)品不易變性，適用于全脂豆粉和脫脂豆粉的提取，殘?jiān)捎米鰟?dòng)物飼料。
本發(fā)明采用丙酮為萃取劑，其優(yōu)點(diǎn)是提取率高，雜質(zhì)含量少，適用于脫脂大豆粉的提取。此法僅用于醫(yī)藥用純品單體的提取。
本發(fā)明所采用的第一步水解法，其目的是將異黃酮中的丙二?；慄S酮轉(zhuǎn)化為異黃酮甙，減少柱層析時(shí)丙二?；慄S酮的流失。
本發(fā)明所采用的第二步水解法，其目的是將異黃酮甙全部轉(zhuǎn)化為異黃酮甙元，提高產(chǎn)品的藥用價(jià)值。據(jù)國外有關(guān)抗腫瘤研究報(bào)道，大部分實(shí)驗(yàn)材料為異黃酮甙元。
本發(fā)明中柱層析所采用的聚酰胺吸附劑比硅膠，纖維素粉、活性炭等其它吸附具有操作簡(jiǎn)使，再生容易，吸附容量高等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于異黃酮類及其衍生物與水溶性物質(zhì)的分離。
本發(fā)明所采用的液相色譜檢測(cè)方法具有快速、簡(jiǎn)便、分離效率高等優(yōu)點(diǎn)，在流動(dòng)相的配比、柱溫的設(shè)定和色譜柱的選擇諸方面都做了較大的改進(jìn)。
大豆中異黃酮的提取技術(shù)(一)提取1、原材料供試原材料分為兩種，一種是全脂大豆粉；另一種是脫脂大豆粉。脫脂方法是將1000克全脂大豆粉置5000ml索氏脂肪提取器中用5000ml正己烷于75℃水浴中加熱回流8小時(shí)后取出豆粉，揮去殘留正己烷即獲得脫脂豆粉。
2、提取液的選擇提取黃酮類及其衍生物方法主要有溶劑萃取法，堿提取酸沉淀法等。本發(fā)明采用有機(jī)溶劑萃取法，它的優(yōu)點(diǎn)是提取率高且產(chǎn)品不易變性。所選用的有機(jī)溶劑為食品級(jí)酒精和丙酮兩種，前者利用酒精和水的合適配比，適于全脂豆粉和脫脂豆粉的提取，殘?jiān)勺鳛閯?dòng)物飼料；后者用于脫脂大豆提取，殘?jiān)灰俗鳛閯?dòng)物飼料，但萃取液中雜質(zhì)較少，宜用于醫(yī)藥用純品單體的提取。
3、提取液成份第一種提取液食品級(jí)酒精(含量95％)與水的配比為74∶26，(即70％酒精)加0.3％乙酸維持微酸性體系。該提取液既能充分溶解大豆中的異黃酮并使異黃酮在溶液中保持穩(wěn)定，又盡可能少地溶解大豆蛋白減少干擾物質(zhì)。第二種提取液為丙酮和0.1M乙酸混合物。
4、相比實(shí)驗(yàn)證明最適合的相比為1∶6(W/V)。表1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，占提取液體積83.3％的濾液中，異黃酮浸出總量占79.0％，事實(shí)上已有94.8％的異黃酮已溶出，只要加少量新提取液沖洗濾渣，無需再第二次提取。
5、萃取時(shí)間與提取物成份在室溫、攪拌和相比為1∶6(W/V)諸條件下，異黃酮的提取率隨時(shí)間增長(zhǎng)而增加，2小時(shí)以后已達(dá)到最大值(見表2)。實(shí)驗(yàn)證明提取時(shí)間因攪拌強(qiáng)度不同，以2-2.5小時(shí)為宜。
檢測(cè)結(jié)果表明以豆粉為原料時(shí)，提取物中異黃酮甙[大豆甙(daidzin)、黃豆甙(glycitin)和染料木甙(genistin)占16.28％，丙二?；慄S酮甙(丙二?；蠖惯啊⒈；S豆甙和丙二?；玖夏具?占83.72％。未發(fā)現(xiàn)異黃酮甙元及乙?；慄S酮甙。使用工業(yè)豆粕為原料時(shí)，因榨油工藝所控制的溫度不同，提取物中異黃酮組份有所變化，異黃酮甙含量可增至40-50％，而丙二?；慄S酮甙呈下降趨勢(shì)。亦未檢測(cè)出異黃酮甙元和乙酰基異黃酮甙。
(二)濃縮通常使用減壓濃縮，溫度可控制在60-65℃，在酒精濃度逐漸降低情況下，溫度可上升至75℃以使酒精充分蒸發(fā)。待濃縮至相當(dāng)于原體積的20％時(shí)即可停止。實(shí)驗(yàn)證明，在減壓濃縮過程中，溫度可控范圍大，異黃酮組分雖隨溫度上升有所變化，即丙二?；慄S酮甙含量減少，異黃酮甙含量增加，但異黃酮總含量不變。
(三)第一次水解根據(jù)所獲得的產(chǎn)品組分不同，本發(fā)明采用二步水解法。第一次水解在柱層析前進(jìn)行，第二次水解在柱層析后進(jìn)行。
減壓濃度后的溶液(水相)在水浴上水解，溫度控制在802℃，水解15小時(shí)即可。水解前丙二?；慄S酮甙占80％，異黃酮甙占20％，而水解后丙二?；慄S酮甙僅占0.4％，水解產(chǎn)物為異黃酮甙(見表3)。
實(shí)驗(yàn)證明，由于第一次水解將丙二酰基異黃酮甙轉(zhuǎn)化為異黃酮甙，柱層析分離時(shí)，可減少丙二?；慄S酮甙的流失，提高產(chǎn)品回收率。(見表4、表5)。
實(shí)驗(yàn)還證明，由于第一次水解產(chǎn)物經(jīng)柱層析后去除大量水溶性雜質(zhì)(主要成分為醣類及水溶性蛋白質(zhì)等)，第二次水解時(shí)不易引起炭化而且溶液顏色較淺，有利于產(chǎn)品的純化和精制。
本發(fā)明之所以特別強(qiáng)調(diào)水解方法，其原因是大豆中丙二?；慄S酮甙可占60-80％。
(四)柱層析分離1、層析柱規(guī)格內(nèi)徑3.0 50cm璃璃柱。
2、吸附劑；分離黃酮類化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉活性炭等。本發(fā)明所用吸附劑為國產(chǎn)聚酰胺吸附劑。其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、再生容易和吸附容量大。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道，聚酰胺通過分子中的酰胺羰基與黃酮類化合物分子上的酚羥基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附作用。洗脫時(shí)流出先后按母核上酚羥基數(shù)目順序?yàn)榇蠖顾?含一個(gè)酚羥基)染料木素(含兩個(gè)酚羥基)。
3、柱層析分離操作步驟按常規(guī)方法裝柱后，用水淋洗至無雜質(zhì)并去除氣泡。緩緩倒入水解液，以每分鐘5-10ml的速度通過吸附劑，水解液流出后加水淋洗柱子直至流出液無顏色為止。最后用約兩倍柱體積的70％酒精洗脫柱子上吸附的異黃酮甙。接收液減壓濃縮至干即獲得異黃酮甙粗品，經(jīng)檢測(cè)該產(chǎn)品異黃酮甙總量為18-30％，可作為食品，保健食品原料。柱層析過程中，大豆中的異黃酮回收率可達(dá)95-98％。
(五)第二次水解將上述柱層析所獲得的70％酒精洗脫液，加入適量20％硫酸溶液(三份70％酒精洗脫液加一份20％硫酸溶液)使水解液酒精濃度大于50％，硫酸濃度不超過5％。在80℃ 2℃水浴上水解20小時(shí)，水解過程中異黃酮組分的變化見表6。
水解液冷卻后用10％氫氧化鈉或碳酸鈉中和，靜置一小時(shí)過濾，濾液減壓濃縮至溶液中無酒精為止。在減壓濃縮過程中，隨溶液中酒精濃度的降低異黃酮甙元細(xì)結(jié)晶逐漸析出。懸液靜置過夜，過濾，用水洗滌沉淀以去除殘留的硫酸鈉，60℃烘干后即獲得異黃酮甙元含量為30-50％粗品。
(六)純化本發(fā)明提供三種純化方法可供選擇
1、丙酮萃取法將異黃酮甙元粗品在50-60℃水浴中攪拌回流一小時(shí)，趁熱過濾，棄去殘?jiān)?，濾液減壓濃縮至干即得較純的異黃酮甙元產(chǎn)品。
2、堿溶酸沉淀法用1％碳酸鈉溶液溶解異黃酮甙元粗品，過濾棄去殘?jiān)瑸V液用5％硫酸溶液中和呈微酸性，析出沉淀靜置過夜后過濾，沉淀物用水洗滌至無硫酸鈉后烘干即得較純的異黃酮甙元產(chǎn)品。
3、70％食品級(jí)酒精萃取法將異黃酮甙元粗品在60℃水浴中攪拌回流一小時(shí)，趁熱過濾，棄去殘?jiān)瑸V液減壓濃縮至干即得較純的異黃酮甙元產(chǎn)品。
本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)表明以上三種方法可根據(jù)異黃酮甙元粗品中雜質(zhì)含量不同單獨(dú)使用或三種方法結(jié)合使用。產(chǎn)品中異黃酮甙元含量可達(dá)到80-90％。
(七)精制欲使異黃酮甙元產(chǎn)品含量超過95％，必須進(jìn)行精制。精制方法是將純化后的異黃酮甙元產(chǎn)品，用60％丙酮或60％食品級(jí)酒精，在50-60℃水浴中攪拌回流一小時(shí)，趁熱過濾。濾液冷卻后置4℃冰箱中陳化結(jié)晶20小時(shí)以上，析出的結(jié)晶經(jīng)過濾、洗滌、60℃烘干，以上操作一般重復(fù)進(jìn)行多次，方能獲得異黃酮甙元含量為85-95％的純品。最后用分步結(jié)晶法，先得到大豆素結(jié)晶，后得到染料木素結(jié)晶。二者含量均能達(dá)到95以上。
(八)檢測(cè)本發(fā)明均采用液相色譜法(HPLC)檢測(cè)原料及不同組分的產(chǎn)品。
1、色譜儀裝置島津LC-6A泵，CTO-6A恒溫柱箱、SPD-6AV紫外-可見光檢測(cè)器、SIL-6A自動(dòng)進(jìn)樣器、SCL-6A中央控制系統(tǒng)和C-R6A積分儀。
2、化學(xué)品(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品大豆甙(daidzin)染料木甙(genistin)大豆素(daidzein)和染料木素(genistein)均來自美國Sigma公司。
(2)甲醇優(yōu)質(zhì)純、北京產(chǎn)(3)乙酸分析純、北京產(chǎn)(4)水Millipore-Q超純水3、色譜條件(1)色譜柱HICHROM Spherisorb S5ODSφ4.9 125mm
(2)流動(dòng)相甲醇∶水∶乙酸為25∶70∶5適用于異黃酮甙的檢測(cè)；甲醇∶水∶乙酸為30∶65∶5適用于異黃酮甙元的檢測(cè)。
(3)流速1ml/min(4)柱溫60℃(5)檢測(cè)器SPD-6AV(6)波長(zhǎng)254nm本發(fā)明提供三張附1為本發(fā)明實(shí)施例1的工藝流程圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的工藝流程圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的工藝流程圖。
實(shí)施例1工藝流程參照附

圖1。
本發(fā)明用大豆粉(全脂大豆粉)1000克，用濾布袋裝好后放入5000ml索氏脂肪提取器中，在75℃水浴上用5000ml正己烷回流8小時(shí)后取出濾布袋，揮去殘留的正己烷即為脫脂大豆粉。
稱取1000克脫脂大豆粉，裝入10000ml燒瓶中，加1000ml 70％酒精0.3％乙酸混合提取液，室溫下攪拌提取2小時(shí)后過濾，濾渣用少量新提取液清洗三次。濾液在65℃減壓濃縮至1000ml后置80℃水浴中水解15小時(shí)(第一步水解)，將丙二酰基異黃酮甙全部水解成異黃酮甙。水解液冷卻后以5-10ml/min的流速通過φ3.0 50cm聚酰胺層析柱，水解液流完后(注意不要放空，應(yīng)留0.5cm液層)用水淋洗柱子至流出液為無色透明液體時(shí)停止淋洗。用500ml(約兩倍柱體積)70％酒精洗脫層檢柱。將接收的500ml洗脫液加160ml 20％硫酸溶液置80℃水浴上酸水解20小時(shí)(第二步水解)，將異黃酮甙全部水解成異黃酮甙元。取下水解液冷卻后緩慢加10％氫氧化鈉溶液中和。溶液靜置一小時(shí)后過濾。再將該濾液于65℃減壓濃縮至無酒精為止。懸濁液靜置過夜、過濾、用水洗滌沉淀以去除殘留的硫酸鈉，60℃烘干后獲得異黃酮甙元粗品。
產(chǎn)品的純化、精制方法如上所述。用本實(shí)施例可獲得95％異黃酮甙元1.25克。
實(shí)施例1的工藝特點(diǎn)足1、利用70％食品級(jí)酒精0.3％乙酸萃取劑，既可應(yīng)用于脫脂大豆粉的提取又可應(yīng)用于全脂大豆的提取。提取后的殘?jiān)捎米鰟?dòng)物飼料。
2、提取液中，可溶性固形物占原料重量的15％，其中可溶性糖占9％，異黃酮甙占1.7％，蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)占4.3％，有利于下一步柱層析分離。
3、第一步水解時(shí)將全部丙二?；慄S酮轉(zhuǎn)化為異黃酮甙，柱層析時(shí)減少丙二?；慄S酮的流失。
4、采用吸附容量為2g/100ml對(duì)異黃酮類有特異吸附的聚酰胺吸附劑，以減少層析柱的體積。
5、第二步水解時(shí)將全部異黃酮甙轉(zhuǎn)化為異黃酮甙元，提高產(chǎn)品藥用價(jià)值。
6、本實(shí)施例所獲得的95％異黃酮甙元產(chǎn)品，可達(dá)到本發(fā)明的第一個(gè)目的。
實(shí)施例2工藝流程參照附圖2稱取1000克脫脂大豆粉，裝入10000ml燒瓶中，加6000ml 70％酒精0.3％乙酸混合提取液，室溫下攪拌提取2小時(shí)后過濾。濾渣用少量新提取液清洗三次，濾液在65℃減壓濃縮至1000ml后置80℃水浴中水解15小時(shí)(第一步水解)，將丙二酰基異黃酮甙全部水解成異黃酮甙。水解液冷卻后以5-10ml/min的流速通過φ3.0 50cm聚酰胺層析柱。水解液流完后用水淋洗柱子至流出液為無色透明液體時(shí)停止淋洗。用500ml(約兩倍柱體積)70％酒精洗脫層析柱。將接收的500ml洗脫液在65℃下減壓濃縮至干即獲得30％異黃酮甙產(chǎn)品6.5克(第一種產(chǎn)品)。
如將上述洗脫液加160ml 20％硫酸溶液置80℃水浴上水解20小時(shí)(第二步水解)，將異黃酮甙全部水解成異黃酮甙元。取下水解液冷卻后緩慢加10％氫氧化鈉中和。溶液靜置一小時(shí)過濾。再將該濾液于65℃減壓濃縮至無酒精為止。懸濁液靜置過夜后過濾。用水洗滌沉淀以去除殘留的硫酸鈉。60℃烘干后獲得30％異黃酮甙元4克(第二種產(chǎn)品)。
本實(shí)施例專為生產(chǎn)異黃酮甙或異黃酮甙元總量為30％的食品和保健食品工業(yè)原料而設(shè)計(jì)的。它具有實(shí)施例1中所列舉的所有特點(diǎn)。本發(fā)明實(shí)施例所獲得的30％異黃酮甙產(chǎn)品(第一種產(chǎn)品)和30％異黃酮甙元產(chǎn)品(第二種產(chǎn)品)即可達(dá)到本發(fā)明的第二個(gè)目的。
實(shí)施例3 工藝流程參照附圖3。
稱取1000克脫脂大豆粉，裝入10000ml燒瓶中，加5000ml丙酮0.1M乙酸混合提取液，室溫下攪拌提取2小時(shí)后過濾，濾渣用少量混合提取液清洗三次。濾液在40℃減壓濃縮至干，加500ml 50％酒精溶解固形物，在80℃水浴中水解15小時(shí)，水解產(chǎn)物為異黃酮甙。在65℃下減壓濃縮至無酒精為止。懸液以5ml/min流速通過φ3.0 50cm聚酰胺層析柱，俟懸濁液流完后用水淋洗柱子至流出液為無色透明液體時(shí)停止淋洗。用500ml(約兩倍柱體積)70％酒精洗脫層析柱。將接收的500ml洗脫液在65℃下減壓濃縮至干即獲得異黃酮甙粗品。產(chǎn)品的純化、精制如上所述，獲得含量為95％的異黃酮甙2克。再將異黃酮甙用上述所述的第二步水解法水解，即獲得含量為95％異黃酮甙元。最后用分步結(jié)晶法，分別獲得含量為95％以上的大豆素0.6克和染料木素0.5克。
實(shí)施例3的工藝特點(diǎn)是利用丙酮和0.1M乙酸為萃取劑，提取物中水溶性雜質(zhì)(主要為碳水化合物)和影響產(chǎn)品純化的磷脂類和皂甙類雜質(zhì)均明顯減少，有利于產(chǎn)品的純化和精制。其它特點(diǎn)與實(shí)施例1所列舉的特點(diǎn)相同。本實(shí)施例所獲得的含量為95％的大豆素、染料木素和異黃酮甙(即大豆甙和染料木甙混合物)三種產(chǎn)品，即達(dá)到本發(fā)明第三個(gè)目的。
表1 溶劑萃取次數(shù)與異黃酮提取率的關(guān)系
表2 萃取時(shí)間與異黃酮提取率的關(guān)系
表3 第一次水解時(shí)間與異黃酮組分的變化(單位ng/10μl)<
表4 未水解濃縮液*柱層析流出液異黃酮流失率
>*濃縮液總量500ml，異黃酮總量3800mg。
表5 未水解濃縮液柱層析洗滌液中異黃酮流失率
表6 第二次水解時(shí)間與異黃酮組分的變化(單位ng/μl)<
>
權(quán)利要求
1．提取大豆中異黃酮的方法，包括全脂大豆粉脫脂、溶劑提取、過濾、濾液水解、柱層析分離、減壓濃縮、純化精制的步驟，其特征在于所述水解采用二步水解法第一步水解是從大豆中提取異黃酮甙；第二步水解是從大豆中提取異黃酮甙元。
2．依照權(quán)利要求1所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于所述溶劑70％酒精。
3．依照權(quán)利要求1或2所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于用所述70％酒精提取后濾液經(jīng)濃縮進(jìn)行所述第一步水解，再經(jīng)所述柱層析分離，將洗脫液進(jìn)行所述第二步水解，經(jīng)中和、濃縮、純化，精制制取純度可達(dá)95％以上的異黃酮甙元。
4．依照權(quán)利要求1或2所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于用所述70％酒精提取后的濾液經(jīng)濃縮進(jìn)行所述第一步水解，再經(jīng)所述柱層析分離，將洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，制取純度可達(dá)18-30％的異黃酮甙。
5．依照權(quán)利要求4所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于將所述異黃酮甙進(jìn)行第二步水解，經(jīng)中和、減壓濃縮，制取純度可達(dá)18-30％的異黃酮甙元。
6．依照權(quán)利要求1所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于所述溶劑為丙酮。
7．依照權(quán)利要求1或6所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于將丙酮提取后的濾液進(jìn)行第一步水解，經(jīng)柱層析分離，將洗脫液濃縮、純化、精制，制取純度可達(dá)95％以上的異黃酮甙。
8．依照權(quán)利要求7所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于將所述異黃酮甙分步結(jié)晶，制取大豆甙和染料木甙。
9．依照權(quán)利要求8所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于將所述染料木甙進(jìn)行第二步水解制取其純度達(dá)95％以上的染料木素。
10．依照權(quán)利要求8所述的提取大豆中異黃酮的方法，其特征在于將所述大豆甙進(jìn)行第二步水解制取其純度達(dá)95％以上的大豆素。
全文摘要
本發(fā)明涉及提取大豆中異黃酮的方法,特別是對(duì)異黃酮含量高的優(yōu)質(zhì)大豆,經(jīng)溶劑萃取、減壓濃縮、柱層析分離等多種生物化學(xué)手段,獲得高純度的大豆異黃酮,該方法主要特征在于采用二步水解法,分別提取大豆異黃酮甙、異黃酮甙元、大豆素和染料木素等,用作保健食品和醫(yī)藥品的原料。
文檔編號(hào)C07D311/40GK1211573SQ9811986
公開日1999年3月24日 申請(qǐng)日期1998年9月22日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月22日
發(fā)明者馮國洲 申請(qǐng)人:北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所