專利名稱：一種匙羹藤提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種匙羹藤提取物，該提取物具有降糖、降脂和抗血小板凝聚的活性作用，本發(fā)明還涉及該提取物的制備方法和它的用途，尤其是它在制備治療糖尿病藥物方面的用途。此外，本發(fā)明又涉及了含有該提取物作活性成分的藥物組合物。
匙羹藤為蘿摩科植物Gymnema sylvestre R.Br.，由于它在印度民間用于抗腫毒、蛇傷、解瘧、利尿和降血糖等，所以人們對它所含的成分進行了許多研究和報導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)其中所含的匙羹藤酸具有降糖活性。發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗研究，進一步發(fā)現(xiàn)匙羹藤提取物的功效優(yōu)于單一的匙羹藤酸，因為在匙羹藤提取物中含有特定含量的六種新三萜皂甙化合物，到目前為止，尚沒有發(fā)現(xiàn)含有這六種新三萜皂甙的匙羹藤提取物的文獻報導(dǎo)。
本發(fā)明的目的是提供一種匙羹藤提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供該提取物的制備方法。
本發(fā)明的又一目的是提供含有該提取物作活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明涉及的匙羹藤提取物是這樣得到的將匙羹藤葉粗粉用60-95％的乙醇回流提取1-4次，每次提取溶劑用量為6ml/g，提取時間1-3小時，合并乙醇提取液，加壓回收至無醇味，用環(huán)己烷萃取所得到的濃縮液1-3次，每次使用溶劑量為500ml，然后再用500ml的正丁醇萃取1-3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收，得到干浸膏狀物，即為本發(fā)明匙羹藤提取物。其中乙醇的優(yōu)選濃度為75％。優(yōu)選提取次數(shù)為3次，優(yōu)選提取時間為2小時。環(huán)己烷的優(yōu)選萃取次數(shù)為3次，正丁醇的優(yōu)選萃取次數(shù)為3次。
發(fā)明人經(jīng)過深入研究，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明涉及的匙羹藤提取物主要由總?cè)圃磉?、黃酮甙、花色素、多糖等成分組成，其中總?cè)圃磉暗暮繛?0-99％。在該總?cè)圃磉爸泻?5-40％的六種新三萜皂甙化合物，本說明書中用GA-1到GA-6來表示，它們分別具有式I或式II的結(jié)構(gòu)
當R1＝H并且R2＝
時，為GA-3；當R1＝
，并且R2＝H時，為GA-4；
并且R2＝
時，
為GA-6。
這六種新三萜皂甙化合物在本發(fā)明提取物中的含量分別為1.25-2.10％的GA-1、0.89-1.50％的GA-2、2.40-3.80％的GA-3、2.10-3.40％的GA-4、2.74-4.60％的GA-5、3.24-5.40％的GA-6。優(yōu)選含量分別為1.60％的GA-1、1.20％的GA-2、3.10％的GA-3、2.70％的GA-4、3.60％的GA-5和4.30％的GA-6。當本發(fā)明提取物中含有上述優(yōu)選含量的六種新三萜皂甙化合物時，本發(fā)明提取物的療效最佳。
本發(fā)明匙羹藤提取物具有降糖、降脂和抗血小板凝聚的活性作用。胃腸給藥時，該提取物的LD50為4880mg/kg，胃腸外給藥時，該提取物的LD50為107.0mg/kg。因此可用它作活性成分制備具有降糖、降脂和抗血小板凝聚作用的藥物組合物。
本發(fā)明匙羹藤提取物可以作為活性成分與藥學(xué)上可接受的賦型劑一起用于制備藥物組合物，該藥物組合物可以采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成各種劑型，如膠囊、丸劑、片劑、口服液、顆粒劑、酊劑等腸道給藥的劑型和注射液等胃腸外給藥劑型。根據(jù)劑型的不同，該藥物組合物使用的賦型劑也不同，常用賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑、防腐劑等。其中稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素、微粉硅膠等，濕潤劑為水和50-85％不同濃度的乙醇。含有本發(fā)明匙羹藤提取物的藥物組合物的優(yōu)選劑型是口服制劑，最好為膠囊。給藥劑量為100-400mg/人/次，每天3次。
以下通過實施例和試驗例來詳細地說明本發(fā)明。
實施例1稱取匙羹藤干葉粗粉1000g，用600ml的60％的乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收至無醇味，得到濃縮液，把所得到的濃縮液用500ml的環(huán)己烷萃取3次，然后再用500ml的正丁醇萃取3次，合并3次正丁醇萃取液，減壓回收得到64.0g干浸膏，即本發(fā)明匙羹藤提取物。
實施例2稱取匙羹藤葉粗粉1000g，用6.0L 75％的乙醇回流提取3次，每次2小時，合并乙醇提取液，把該乙醇提取液減壓回收至無醇味，把濃縮液用500ml的環(huán)己烷萃取，再用500ml的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收，得到干浸膏狀物72.0g。
實施例3稱取匙羹藤葉粗粉1000g，用6L 95％的乙醇回流提取3次，每次2小時，合并乙醇提取液，把該乙醇提取液減壓回收至無醇味，把濃縮液用500ml的環(huán)己烷萃取，再用500ml的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收，得到干浸膏狀物61.0g。
實施例4把本發(fā)明匙羹藤提取物100mg和微粉硅膠200mg充分混合均勻，過篩，加入適量的硬脂酸鎂，混勻，用干法造粒機制粒，過篩，篩取40-80目之間的顆粒，裝入膠囊，每粒裝0.3g。
實施例5按照實施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用200mg的本發(fā)明匙羹藤提取物、100mg微粉硅膠和適量的硬脂酸鎂。
實施例6按照實施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用250mg的本發(fā)明匙羹藤提取物、50mg微粉硅膠和適量硬脂酸鎂。
實施例7按照實施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用450mg的本發(fā)明匙羹藤提取物、50mg微粉硅膠和適量硬脂酸鎂。
試驗例1本發(fā)明匙羹藤提取物對蔗糖致大鼠血糖升高的影響雌性SD大鼠，禁食24h后，隨機分為實驗組，一次口服給予本發(fā)明匙羹藤提取物50，100，200mg/kg，陽性對照組分別給予降糖靈100mg/kg，正常組及對照組及空白對照組口服給予等容量蒸餾水，給藥體積為10ml/kg，30min后，除正常組外，各組口服給予蔗糖溶液1g/kg(5ml/kg)，并分別于其后30，60，120min，由大鼠眼眶采血100μl，測定血清葡糖含量。
結(jié)果，大鼠口服蔗糖后30，60min內(nèi)，血糖值明顯上升，本發(fā)明匙羹藤提取物100mg/kg在30min，本發(fā)明匙羹藤提取物200mg/kg和降糖靈100mgg/kg在30，60min均使大鼠升高的血糖值顯著下降，且兩者作用強度相近，見表1。表1本發(fā)明匙羹藤提取物對蔗糖致大鼠血糖升高的影響(X±SD，n＝10)
ΔΔp＜0.01，與正常組比較；*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組比較。試驗例2本發(fā)明匙羹藤提取物對高脂血癥大鼠血清甘油三酯、膽固醇含量的影響雄性SD大鼠，體重130-170g，正常組給予普通飼料，其它各組給予高脂飼料(1％膽固醇、10％豬油、0.3％膽酸、0.2％甲硫基咪唑和88.5％普通飼料，自制成塊狀飼料)。連續(xù)14天，大鼠禁食12h后，按試劑盒法測定大鼠血清甘油三酯及膽固醇含量，然后，按血脂值進行隨機分組。實驗組口服給予50、100、200mg/kg，陽性對照組分別口服安妥明100mg/kg，對照組給予蒸餾水，給藥體積為10ml/kg，連續(xù)10天，各組在給藥前5天仍飼以高脂飼料，后5天飼以普通飼料，末次給藥前禁食11h，給藥后1h采血測血清中甘油三酯及膽固醇含量。
結(jié)果，大鼠給予高脂飼料10天后，血清甘油三酯及膽固醇含量明顯升高，本發(fā)明匙羹藤提取物50、100、200mg/kg及安妥明100mg/kg均使高脂血癥大鼠血清甘油三酯及膽固醇水平明顯下降，本發(fā)明匙羹藤提取物200mg/kg的降血脂作用與安妥明100mg/kg相近，見表2。表2本發(fā)明匙羹藤提取物對高脂血癥大鼠血脂含量的影響(X±SD，n＝9-10)
ΔΔp＜0.01，與正常組比較；**P＜0.01，與對照組比較試驗例3本發(fā)明匙羹藤提取物對體外家兔血小板聚集的影響家兔心臟穿刺取血，3.8％枸櫞酸鉀抗凝(1∶9)，1000rpm離心5min，取上層作為富血小板血漿(PRP)，再以4000rpm離心10min，上清液為貧血小板血漿(PPP)。將PPP 200μl移入比濁管，再加入不同濃度的本發(fā)明匙羹藤提取物生理鹽水溶液10μl，終濃度分別為250，500，1000μg/ml，陽性對照管加入阿斯匹林生理鹽水10μl，終濃度為250μg/ml，空白對照管加入生理鹽水10μl，37℃溫育2min后，放入測定孔，攪拌加入ADP鈉鹽生理鹽水溶液10μl，終濃度為1.0×10-5M，在PAM-1血小板聚集儀上觀察3min內(nèi)的最大聚集率。
結(jié)果，本發(fā)明匙羹藤提取物500，1000μg/ml，阿斯匹林250μg/ml顯著抑制家兔血小板聚集。見表3。表3本發(fā)明匙羹藤提取物對體外家兔血小板聚集的影響(X±SD，n＝8)<
p＜0.01，與對照組比較。
權(quán)利要求
1.一種匙羹藤提取物的制備方法，它包括下列步驟將匙羹藤葉粗粉用60-95％的乙醇回流提取1-4次，每次提取溶劑用量為6ml/g，提取時間1-3小時，合并乙醇提取液，加壓回收至無醇味，用環(huán)己烷萃取所得到的濃縮液1-3次，每次使用溶劑量為500ml，然后再用500ml的正丁醇萃取1-3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收，得到干浸膏狀物即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征為使用75％的乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征為提取次數(shù)為3次，提取時間為2小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一個所述的方法，其特征為環(huán)己烷萃取次數(shù)為3次，正丁醇的萃取次數(shù)為3次。
5.權(quán)利要求1-4中任一方法制備的匙羹藤提取物，其特征為它主要由總?cè)圃磉啊ⅫS酮甙、花色素、多糖等成分組成，其中總?cè)圃磉暗暮繛?0-99％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的匙羹藤提取物，其特征為所述的總?cè)圃磉爸泻?5-40％的六種新三萜皂甙化合物，其中用GA-1到GA-6表示的六種新三萜皂甙化合物分別具有式I或式II的結(jié)構(gòu)
當R1＝H時，為GA-1；當R1＝
時，為GA-2；
當R1＝H并且R2＝
時，為GA-3；當R1＝
并且R2＝H時，為GA-4；當R1＝
，并且R2＝
時，為
時，為GA-6。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的匙羹藤提取物，其特征為這六種新三萜皂甙化合物在提取物中的含量分別為1.25-2.10％的GA-1、0.89-1.50％的GA-2、2.40-3.80％的GA-3、2.10-3.40％的GA-4、2.74-4.60％的GA-5、3.24-5.40％的GA-6。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的匙羹藤提取物，其中六種新三萜皂甙化合物在提取物中的含量分別為1.60％的GA-1、1.20％的GA-2、3.10％的GA-3、2.70％的GA-4、3.60％的GA-5和4.30％的GA-6。
9.權(quán)利要求5-8中任一所述的匙羹藤提取物在制備降糖、降脂和抗血小板凝聚的藥物方面的用途。
10.一種含有權(quán)利要求5-8中任一所述的匙羹藤提取物作活性成分的藥物組合物。
11.一種含有權(quán)利要求5-8中任一所述的匙羹藤提取物作活性成分的膠囊。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種匙羹藤提取物,該提取物主要由總?cè)圃磉?、黃酮甙、花色素、多糖等成分組成,其中總?cè)圃磉暗暮繛?0—99%,在該總?cè)圃磉爸杏?5—40%的六種新三萜皂甙化合物。該提取物具有降糖、降脂和抗血小板凝聚的活性作用,本發(fā)明還涉及該提取物的制備方法和它的用途,尤其是它在制備治療糖尿病藥物方面的用途。此外本發(fā)明還涉及含有該提取物的藥物組合物。
文檔編號C07J63/00GK1268515SQ99103588
公開日2000年10月4日 申請日期1999年4月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月5日
發(fā)明者葉文才, 戴岳, 叢曉東, 朱興祥, 趙守訓(xùn) 申請人:山東綠葉制藥股份有限公司