一種嶺南山竹子多糖及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種嶺南山竹子多糖及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明從嶺南山竹子制備得到了嶺南山竹子多糖，該嶺南山竹子多糖具有較好的抗氧化活性和抗腫瘤活性，因此可以應(yīng)用到制備抗氧化活性藥物或抗腫瘤藥物，具有潛在應(yīng)用價值。
【專利說明】一種嶺南山竹子多糖及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本屬于嶺南山竹子多糖【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種嶺南山竹子多糖及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】:
[0002]多糖(Polysaccharide)是由20個以上的單糖通過糖苷鍵連接形成的含醒基或酮基的多羥基聚合物及其衍生物，廣泛分布于動物、植物及微生物的細(xì)胞壁中。多糖具有廣泛的生物學(xué)功能，它不僅可以作為體內(nèi)的供能物質(zhì)及某些物質(zhì)的基本組分，還參與細(xì)胞間的識別、機體免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞間物質(zhì)的運輸、細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、腫瘤細(xì)胞的凋亡等過程。由于多糖廣泛的免疫活性、對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用，及其毒副作用小的特點，因而是很有希望的抗腫瘤藥物。近年來，對多糖抗腫瘤、抗氧化活性的研究得到了越來越多的關(guān)注。富含多糖的物質(zhì)作為抗腫瘤藥物或輔助藥物，如靈芝、人參、香菇、銀耳、云芝、蘆薈、仙人掌等在我國傳統(tǒng)中藥中早已有廣泛的應(yīng)用。迄今為止，在我國已投放市場的多糖藥物主要有:香菇多糖注射液、豬苓多糖注射液、云芝多糖膠囊、黃芪多糖、云芝肝泰、灰樹花膠囊等。但是，相對于我國豐富的傳統(tǒng)中藥資源，現(xiàn)有的研究仍顯不足。
[0003]嶺南山竹子(Garcinia oblong ifolia Champ.),別名:黃牙果、嶺南倒搶子,生于平地、丘陵、溝谷密林或疏林中。分布于廣東、廣西、海南、越南。作為傳統(tǒng)用藥，常用于消炎鎮(zhèn)痛、收斂生肌、消化不良、潰瘍病輕度出血、口腔炎、牙周炎；外用治燒燙傷、濕疹。葉子的浸液可治傷口腐爛?，F(xiàn)代研究表明山竹子提取物有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、殺蟲、抑菌等作用。
·[0004]目前，嶺南山竹子化學(xué)成分的研究多在于從樹皮或樹葉中提取分離化合物，但尚未有從嶺南山竹子樹皮中提取和分尚多糖的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0005]本發(fā)明的第一個目的是提供一種具有抗氧化和抗腫瘤活性的嶺南山竹子多糖及其制備方法。
[0006]本發(fā)明的嶺南山竹子多糖是通過以下方法制備的:
[0007]a、將嶺南山竹子(Garcinia oblongifolia Champ.)樹皮切斷,清洗除去雜物，自然風(fēng)干后粉碎；
[0008]b、將粉碎后的嶺南山竹子樹皮用乙醇水溶液浸提，過濾，取濾渣，加入到水中煎煮，然后再過濾，取濾液，濾液濃縮至半流體狀，過濾，濾液加入到乙醇中，邊加邊攪拌，待沉淀完全后，固液分離，棄上清，所得沉淀進行干燥，得到干燥后的粗多糖；
[0009]C、將干燥后的粗多糖加入到水中，使其完全溶解，然后加入過氧化氫將溶液由深紅色脫色至灰色，反應(yīng)后，將反應(yīng)液取出，加入乙醇并攪拌，待沉淀完全后，固液分離，棄上清，固體沉淀進行干燥，即得到純化后的嶺南山竹子多糖。
[0010]優(yōu)選，將純化后的嶺南山竹子多糖溶解于質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)2%的氫氧化鈉溶液，然后依次用截留分子量為500KDa、IOOkDa和IOkDa的超濾膜超濾，收集各部分的殘留液，依次得到三個成份，即精制嶺南山竹子多糖PU P2和P3。
[0011 ] 所述的乙醇水溶液優(yōu)選為體積分?jǐn)?shù)95 %的乙醇水溶液。
[0012]所述的步驟b和步驟c的干燥優(yōu)選是在60°C下干燥。
[0013]本發(fā)明的第二個目的是提供精制嶺南山竹子多糖PU P2或P3在制備抗氧化藥物或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0014]所述的抗腫瘤藥物優(yōu)選為抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小細(xì)胞肺癌或白血病的藥物。
[0015]本發(fā)明從嶺南山竹子制備得到了嶺南山竹子多糖，該嶺南山竹子多糖具有較好的抗氧化活性和抗腫瘤活性，因此可以應(yīng)用到制備抗氧化活性藥物或抗腫瘤藥物，具有潛在應(yīng)用價值。
【具體實施方式】:
[0016]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0017]實施例1:
[0018]A.原料及處理:將原料嶺南山竹子(Garcinia oblongifolia Champ.)樹皮切段，清洗除去雜物，自然風(fēng)干后粉碎。
[0019]B.嶺南山竹子粗多糖的制備:將粉碎后的嶺南山竹子樹皮放入提取缸內(nèi)，用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液浸泡2次，每次48小時，過濾濾去乙醇，濾渣再加入7-10倍純水中，煎煮2-3次，每次2-3小時，過濾，合并濾液，濾液濃縮至半流體狀,過濾,濾液加入2倍體積乙醇中，邊加邊攪拌。待沉淀完全后，離心，棄上清。所得沉淀在60°C烘箱中干燥，由此得到嶺南山竹子粗多糖。
[0020]C.嶺南山竹子多糖的純化:稱取干燥后的嶺南山竹子粗多糖，置于500ml圓底燒瓶中，加蒸餾水適量，置于60°C恒溫水浴鍋中，攪拌使其完全溶解，逐滴加入適量過氧化氫進行脫色，將粗多糖溶液由深紅色脫色至灰色(即粗多糖溶液顏色由深變淺)，反應(yīng)后，將反應(yīng)液取出，加入等體積乙醇，邊加邊攪拌。待沉淀完全后，離心，棄上清，沉淀置60°C烘箱干燥，即得純化的嶺南山竹子多糖。
[0021]D.多糖的分級分離:稱取經(jīng)脫色純化的嶺南山竹子多糖，加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)
2.0%氫氧化鈉溶液中，攪拌使其完全溶解，靜置，然后依次使用截留分子量為500kDa、IOOkDa和IOkDa的超濾膜分級分離，分別收集各部分殘留液，先置-20°C冰箱預(yù)凍，再置真空冷凍干燥機干燥24小時，獲得三個組分，即精制嶺南山竹子多糖Pl (對應(yīng)500KDa的超濾膜)，P2 (對應(yīng)IOOKDa的超濾膜)和P3 (對應(yīng)IOKDa的超濾膜)。
[0022]超濾條件:超濾是一個連續(xù)的動態(tài)過濾過程，須在一定的壓力差推動下方可進行。本實驗采用外源氮氣瓶加壓，壓力大小為0.3Mpa。首先以質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)2.0%氫氧化鈉溶液反復(fù)過濾樣品，直至 濾出液經(jīng)苯酚-硫酸顯色法檢測基本無色后，再加蒸餾水反復(fù)過濾以除去其中的離子，濾出液經(jīng)電導(dǎo)率儀檢測，電導(dǎo)率小于IOii s / cm即可。分別收集各部分殘留液，先置_20°C冰箱預(yù)凍，再置真空冷凍干燥機干燥24小時，即得到各部分的精制嶺南山竹子多糖。
[0023]E.多糖理化性質(zhì)分析:分別稱取精制嶺南山竹子多糖P1，P2和P370mg，精密稱定，以質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)2.0%氫氧化鈉溶液溶解，配制成IOmg / ml的多糖溶液，在室溫(20°C )和鈉光D線589nm的條件下測其旋光度，讀取三次，取平均值。
[0024]根據(jù)比旋光度[a]的計算公式[a ] = 100.a / (1.c) (c:g/100ml, I:dm),求的各樣品的比旋光度。
[0025]測定結(jié)果為比旋光度Pl: [ a ]2°d=+36.25
[0026]P2: [ a ]2CID=+11.61
[0027]P3: [ a ]20D=-8.13
[0028]F.多糖抗氧化活性的測定:采用FRAP法測定精制嶺南山竹子多糖P1，P2和P3的抗氧化活性。
[0029]FRAP(ferric reducing antioxidant power)法
[0030](I)配制 IOmM TPTZ (2, 4, 6-tripyridyl-s-triazine)(用 40mM 的 HCl 溶解)標(biāo)準(zhǔn)對照物，F(xiàn)eSO4的濃度為ImM (用時再稀釋成25~1000 u M各濃度梯度);
[0031](2)分別以I體積不同濃度的FeSO4與I體積的IOmM TPTZ和10體積的0.3M的
醋酸緩沖液混合，然后測定A595，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0032](3)取一定體積的FRAP試劑液，加入適量體積的待測樣品(精制嶺南山竹子多糖P1，P2或P3)，37°C下反應(yīng)5~30min以上(若有活性，則生成藍色的比色液)，測定吸光度A595,反應(yīng)體系:180 ill FRAP試劑液+20 U I待測樣品一A595,通過96孔板與酶標(biāo)儀測定，波長 595nm·
[0033](4)將待測樣品與FRAP試劑液反應(yīng)后的吸光度A595值，與FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品的FRAP值。FRAP值定義為在相同吸光度下每克樣品相當(dāng)于FeSO4的微摩爾數(shù)；FRAP值越大，表示樣品的還原力(將Fe3+還原成Fe2+的能力)越強，即抗氧化活性越高，反之越弱；
[0034](5)每個樣品的抗氧化活性測定至少重復(fù)4次，陽性對照為L-抗壞血酸(L-ascorbic acid)。
[0035]表1:精制嶺南山竹子多糖的抗氧化活性測定
【權(quán)利要求】
1.一種嶺南山竹子多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a、將嶺南山竹子(Garciniaoblongifolia Champ.)樹皮切斷,清洗除去雜物，自然風(fēng)干后粉碎； b、將粉碎后的嶺南山竹子樹皮用乙醇水溶液浸提，過濾，取濾渣，加入到水中煎煮，然后再過濾，取濾液，濾液濃縮至半流體狀，過濾，濾液加入到乙醇中，邊加邊攪拌，待沉淀完全后，固液分離，棄上清，所得沉淀進行干燥，得到干燥后的粗多糖； C、將干燥后的粗多糖加入到水中，使其完全溶解，然后加入過氧化氫將溶液由深紅色脫色至灰色，反應(yīng)后，將反應(yīng)液取出，加入乙醇并攪拌，待沉淀完全后，固液分離，棄上清，固體沉淀進行干燥，即得到純化后的嶺南山竹子多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，將純化后的嶺南山竹子多糖溶解于質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)2%的氫氧化鈉溶液，然后依次用截留分子量為500KDa、IOOkDa和IOkDa的超濾膜超濾，收集各部分的殘留液，依次得到三個成份，即精制嶺南山竹子多糖P1、P2和P3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟b和步驟c的干燥是在60°C下干燥。
5.一種按照權(quán)利要求1所述的制備方法制備得到的嶺南山竹子多糖。
6.一種按照權(quán)利要求2所述的制備方法制備得到的精制嶺南山竹子多糖P1、P2或P3。
7.權(quán)利要求6所述的 精制嶺南山竹子多糖P1、P2或P3在制備抗氧化藥物或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物為抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小細(xì)胞肺癌或白血病的藥物。
9.一種抗氧化藥物或抗腫瘤藥物，其特征在于，包含有效量的作為活性成份的權(quán)利要求6所述的精制嶺南山竹子多糖P1、P2或P3。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗氧化藥物或抗腫瘤藥物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物為抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小細(xì)胞肺癌或白血病的藥物。
【文檔編號】C08B37/00GK103588889SQ201310536026
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月25日
【發(fā)明者】鄭希龍, 李榕濤, 楊海建, 崔杰, 黃立標(biāo) 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所