本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類含有乙炔基的苯甲酰胺類化合物，或此類化合物藥學(xué)上可接受的鹽，單獨(dú)或任選地與一種或多種其他藥學(xué)活性化合物聯(lián)合用于治療對于抑制蛋白激酶活性有響應(yīng)的疾病，尤其是白血病。

背景技術(shù)：

蛋白激酶是一類磷酸轉(zhuǎn)移酶，其作用是將ATP的γ磷酸基轉(zhuǎn)移到底物特定的氨基酸殘基上，使蛋白質(zhì)磷酸化。這些磷酸化充當(dāng)可調(diào)節(jié)或調(diào)控目標(biāo)蛋白質(zhì)的生物功能的分子開/關(guān)的轉(zhuǎn)換器，最終回應(yīng)于多種細(xì)胞外和其它刺激物而被觸發(fā)。這些刺激物包括環(huán)境和化學(xué)應(yīng)激信號(例如休克、熱休克、紫外線照射、細(xì)菌內(nèi)毒素和H₂O₂)、細(xì)胞因子(例如包細(xì)胞借宿-1和腫瘤壞死影子α和生長因子)。細(xì)胞外刺激物可能會影響細(xì)胞生長、遷移、分化、激素分泌、轉(zhuǎn)錄因子活化、肌肉收縮、葡萄糖代謝、蛋白質(zhì)合成控制等一種或一種以上的細(xì)胞反應(yīng)。

蛋白激酶活性的失常，可以引起許多相關(guān)的疾病。這些疾病包括癌癥、自體免疫性疾病、炎癥、代謝性疾病、神經(jīng)性疾病、心血管疾病合阿茲海默氏癥(Alzheimer’s disease)等。在很多情況下，可以通過體外和體內(nèi)利用蛋白激酶抑制劑來治療這類疾病。

ABL(Abelson leukemia virus)酪氨酸激酶存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，在細(xì)胞分化、分裂、細(xì)胞黏附和應(yīng)激反應(yīng)過程中起重要作用，基因轉(zhuǎn)位導(dǎo)致B細(xì)胞受體(B cell receptor,BCR)和ABL基因頭尾融合形成融合基因BCR-ABL。BCR-ABL激酶有多個功能結(jié)構(gòu)域，包括SH2、SH3結(jié)構(gòu)域、核定位結(jié)構(gòu)域和3個DNA結(jié)構(gòu)域，其激活有助于白血病的發(fā)生。酪氨酸激酶活性對于BCR-ABL的功能是必需的，BCR-ABL激活的某些信號途徑與造血生長因子激活的途徑相似，如Ras、PI3K、JAK/STAT等。BCR-ABL的過度激活改變造血細(xì)胞的黏附性、誘導(dǎo)細(xì)胞骨架功能異常，通過多種途徑干擾細(xì)胞周期和細(xì)胞黏附，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

20世紀(jì)90年代初發(fā)現(xiàn)的Imatinib能夠特異性的抑制BCR-ABL酪氨酸蛋白激酶的活性。它在微摩爾濃度下即能有效抑制ABL、血小板生長因子受體(PDGFR)、Kit受體和ARG酪氨酸激酶的自磷酸化，成為了臨床上治療白血病的一線重要藥物，但病人長期使用后發(fā)現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)耐藥性的分子基礎(chǔ)是BCR-ABL的激酶結(jié)構(gòu)區(qū)域出現(xiàn)對Imatinib抗性的變體，突變體包括Y253H、E255V、E255K、F359V、T315I、G250E、F317L、E355G、H396P、M351T、M253H、L248V、Q252H、Y253H和Y253C等。

鑒于蛋白激酶抑制劑數(shù)量之大和增殖性及其他蛋白激酶相關(guān)的疾病種類之多，而且現(xiàn)有藥物出現(xiàn)了耐藥性等問題，我們需要開發(fā)新的種類的化合物，以用作蛋白激酶抑制劑，用于治療這些蛋白激酶相關(guān)的疾病。因此，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種新的含有乙炔基的苯甲酰胺類衍生物，用于預(yù)防或治療與蛋白激酶活性異?；蚴Э叵嚓P(guān)的疾病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種含有下面通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中

連接基團(tuán)L是-NHC(O)-或-C(O)NH-；

環(huán)A代表一個5、6或7元含氮或含氧的雜環(huán)烷基；

R¹選自氫，C₁-C₄的烷基，環(huán)烷基，烷氧基，羥基，氨基，被烷基取代的氨基，烷羰基；

R²，R³獨(dú)立地選自氫，C₁-C₄的烷基，或連接在一起與相鄰的苯環(huán)形成五元環(huán)；

R⁴是氫，氟或三氟甲基；

R⁵是含氮、硫或氧的雜環(huán)，或與嘧啶形成稠環(huán)化合物。

在本發(fā)明所述的化合物(Ⅰ)或藥學(xué)上可接受的鹽，其中

環(huán)A優(yōu)選自吡咯烷，哌嗪，高哌嗪，嗎啉；

R¹優(yōu)選自氫，甲基，異丙基，羥乙基，二甲基氨基；

R²，R³優(yōu)選自氫，或連接在一起與相鄰的苯環(huán)形成五元環(huán)；

R⁴是氫，氟或三氟甲基；

R⁵優(yōu)選自吡啶基，吡咯基，噻吩基；或與相連的嘧啶形成嘌呤基，硫代嘌呤基。

本發(fā)明所述式(Ⅰ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述的化合物更優(yōu)選自：

本發(fā)明所述式(Ⅰ)化合物在藥學(xué)上可接受的鹽，或含至少一個堿性成鹽基團(tuán)，與其成鹽的酸可以是藥學(xué)上常用的無機(jī)酸或有機(jī)酸，包括無機(jī)酸：鹽酸、硫酸、磷酸；有機(jī)羧酸：乙酸、丙酸、三氟乙酸、乙醇酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、草酸、各種天然的或合成的氨基酸、苯甲酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、扁桃酸、肉桂酸、煙酸、異煙酸；有機(jī)磺酸：甲磺酸、三 氟甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、2-萘磺酸。當(dāng)存在多個堿性基團(tuán)時，可以生成多酸加成鹽。

本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的鹽還包括溶劑化物或水合物的形式。一般來說，溶劑化物或水合物的形式與非溶劑化的或非水合的形式等同，一并涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明中的有些化合物有可能存在多晶體或無定形的形式?？偟膩碚f，所有的物理形式具有同等的用途，并且涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

本發(fā)明涵蓋呈混合物形式或者呈純形式的本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)體。本發(fā)明化合物的定義包含所有可能的立體異構(gòu)體及其混合物。其非常具體地包含外消旋形式和分離的具有特定活性的光學(xué)異構(gòu)體。外消旋形式可通過物理方法來進(jìn)行拆分，所述物理方法諸如對非對映異構(gòu)體衍生物進(jìn)行分級結(jié)晶、分離或者通過手性柱色譜進(jìn)行分離。可通過常規(guī)方法例如光學(xué)活性酸形式成鹽接著結(jié)晶而從外消旋體得到單獨(dú)的光學(xué)異構(gòu)體。

本發(fā)明還包括所述化合物的前藥。前藥是由母體藥物衍生而來的一種化合物，其一旦進(jìn)入體內(nèi)，前藥就被代謝轉(zhuǎn)變?yōu)槟阁w藥物。前藥可通過對母體藥物的一個或多個官能團(tuán)進(jìn)行取代而制備，其取代基團(tuán)可在體內(nèi)被酶催化而釋放出母體化合物來。前藥的制備和使用可在T.Higuchi and V.Stella,“Pro-drugs as Novel Delivery System”,Vol.14 of the A.C.S.Symposium Serier和Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中找到。

此外，本發(fā)明還提供了一種合成化合物(Ⅰ)的方法。

本發(fā)明所述的化合物(Ⅰ)可通過化合物a和化合物b連接得到，合成方法如下：

在該合成方法中，所用溶劑一般為DMF、DMSO、N-甲基吡咯烷酮等大極性非質(zhì)子溶劑，并且加入含有鈀的催化劑，如氯化鈀、醋酸鈀、三苯基磷基鈀等， 并加入適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)堿，如三乙胺，二異丙基乙胺、DMAP等。反應(yīng)一般在較高的溫度(如大于100℃)下進(jìn)行，反應(yīng)結(jié)束后可用柱色譜等手段分離提純反應(yīng)物。

化合物a一般可通過以下方法獲得：

化合物c經(jīng)過重氮化、上三甲基硅基乙炔、脫去三甲基硅基保護(hù)基三步反應(yīng)得到化合物a。其中重氮化是通過NaNO₂/HBr或者亞硝酸叔丁酯/HBr反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的。重氮化的產(chǎn)物d與三甲基硅基乙炔在極性非質(zhì)子溶劑中反應(yīng)生成化合物e，反應(yīng)中加入含鈀化合物作為催化劑，有機(jī)胺作為堿。然后化合物e脫去TMS保護(hù)基，該反應(yīng)可以在適量的四丁基氟化銨的條件下輕易完成。

此外，化合物b可以通過下面的方法合成：

反應(yīng)式中，若R⁶為氨基，R⁷為羧基；若R⁶為羧基，則R⁷為氨基。該反應(yīng)是氨基和羧酸生成酰胺的反應(yīng)，可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法完成，包括羧基生成酰氯后與氨基反應(yīng)、或通過活性酯中間體直接合成酰胺。

化合物g包括下面兩種結(jié)構(gòu)：

其合成方法分別描述如下：

本發(fā)明還涉及包含有效量的式(Ⅰ)化合物和藥理上可接受的載體的藥物組合物，該組合物適用于局部的、腸內(nèi)的或腸外的給藥，可以是無機(jī)的或有機(jī)的，固態(tài)的或液態(tài)的。對于口服，尤其用片劑或膠囊。這種片劑或膠囊包含活性成分和稀釋劑(如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨醇、纖維素、丙三醇)，潤滑劑(如滑石、硬脂酸鹽)，聚乙二醇。片劑還可包含粘合劑，淀粉，明膠，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，必要時還可包含粉碎劑(如淀粉、瓊脂、藻酸及其鹽)，泡騰混合物，或吸附劑，染料，調(diào)味劑，增甜劑。這些組合物還可以腸胃外給藥的形式或以針劑的形式被適用。此類劑型優(yōu)選等滲水溶液或乳液，如在僅由活性成分和一種載體(如甘露醇)組成的凍干組合物的情況下，此類溶液可以在使用前制備。這些藥物組合物可以是無菌的，或包含賦形劑的，或加溶劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽。

本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)蛋白激酶活性的方法，其中包括將所述蛋白激酶與式(Ⅰ)化合物接觸。其中所述蛋白激酶選自其中所述蛋白激酶選自Abl，Bcr-Abl。

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包含有效治療量的能夠預(yù)防或治療蛋白激酶相關(guān)疾病狀態(tài)的式(Ⅰ)化合物，和藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。

本發(fā)明還提供了式(Ⅰ)化合物在制備用于治療疾病或失調(diào)的藥物中的應(yīng)用，其中所述的疾病或失調(diào)是與蛋白激酶活性相關(guān)的或與細(xì)胞增殖異常相關(guān)的，如癌癥，炎癥，自身免疫性疾病，代謝性疾病，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和心血管疾病。

具體實(shí)施方式

下面將詳細(xì)描述本發(fā)明的示例性實(shí)施方案。然而，這些實(shí)施方案僅為說明目的，并不旨在限制本發(fā)明的范圍。

以下是可在本說明書中使用的術(shù)語的定義。除非另有說明，本專利就基團(tuán) 或術(shù)語而言提供的初始定義適用于在說明書通篇中的所述基團(tuán)或者術(shù)語，不論是單獨(dú)使用還是作為另一基團(tuán)的部分使用。

術(shù)語“烷基”是指直鏈的或支鏈的未取代的烴基，其具有1-20個碳原子，優(yōu)選的是1-6個碳原子，尤其是指甲基、乙基、丙基(包括正丙基和異丙基)、丁基(包括正丁基、異丁基、叔丁基)等。

術(shù)語“炔基”是指具有一個多個碳碳三鍵的烴基，如乙炔基、丙炔基等。

術(shù)語“鹵素”或者“鹵代”是指氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)、碘(碘代)。

術(shù)語“雜環(huán)芳基”是指任選取代的芳香族環(huán)狀基團(tuán)，其中至少含有一個碳原子被其它雜原子取代，雜原子包括氮、氧、硫。該氮和硫雜原子也可任選被氧化，氮雜原子也可任選被季銨化。該雜環(huán)基團(tuán)可在任何雜原子或碳原子處連接。優(yōu)選的雜環(huán)芳基包括但不限于，吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、三嗪、呋喃、噻吩、咪唑、三唑、四唑、噻唑、異噻唑、吡咯、吡唑、噁唑、異噁唑、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻吩、吲哚、喹啉、異喹啉、嘌呤、咔唑、苯并咪唑、吡咯并吡啶、吡咯并嘧啶等。

術(shù)語“環(huán)烷基”是指非芳香族的碳環(huán)，包括單環(huán)、稠環(huán)或螺環(huán)。環(huán)烷基還包括具有一個或多個芳香環(huán)稠合(即有一個共同的鍵)的環(huán)，有一個或多個芳香環(huán)稠合的環(huán)烷基可以通過芳香環(huán)或非芳香環(huán)部分與其他基團(tuán)相連接。

術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指非芳香雜環(huán)，其中一個或多個成環(huán)原子是雜原子，如氧、氮、硫原子。雜環(huán)烷基可以包括單環(huán)或多環(huán)(如有2、3、4個稠合環(huán))、螺環(huán)。優(yōu)選的雜環(huán)烷基包括氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、四氫呋喃、四氫噻吩、吡咯烷、噁唑烷、噻唑烷、異噻唑烷、咪唑烷、吡唑烷、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、哌啶等。雜環(huán)烷基還包括具有一個或多個芳香環(huán)稠合的雜環(huán)，例如2,3-二氫苯并呋喃、1,3-苯并二氧戊環(huán)、苯并-1,4-二噁烷、苯二甲酰胺等。具有一個或多個芳香環(huán)稠合的雜環(huán)烷基可以通過芳香環(huán)或非芳香環(huán)部分與其它基團(tuán)連接。

術(shù)語“酰胺基”是指基團(tuán)-C(＝O)NH-。

術(shù)語“氰基”是指基團(tuán)-CN。

術(shù)語“烷氨基”是指被一個烷基取代的氨基。

術(shù)語“二烷基胺”是指基團(tuán)被二個相同或不同的烷基取代的氨基。

術(shù)語“羧基”是指基團(tuán)-COOH。

術(shù)語“烷碳基”是指基團(tuán)-C(＝O)R，其中R是指烷基

“可選的”意味著隨后描述的事件或情況可以發(fā)生或者不發(fā)生，所述描述擺闊其中所述事件或情況發(fā)生的例子和其中它不發(fā)生的例子。

本文所用的“藥學(xué)可接受的載體”包括任何核全部的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌藥劑、等滲和吸收延遲劑等。這樣的介質(zhì)和藥劑用于藥學(xué)活性物質(zhì)在本領(lǐng)域是眾所周知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑與火星成分不相容，其在治療組合物中的應(yīng)用時可預(yù)期的。補(bǔ)充的活性成分也可并入組合物中。

實(shí)施例1

4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((4-(哌啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯甲酰胺

i)2-三氟甲基芐醇

在三口燒瓶中，加入2-三氟甲基苯甲醛500g，無水乙醇1500ml，四丁基溴化銨50g，攪拌溶解，并保持溫度在0℃，分批加入硼氫化鈉150g，每次加入30g。加完后攪拌30min，再升溫至40℃，反應(yīng)2h，TLC跟蹤，反應(yīng)完成。減壓濃縮，加入500ml水，攪拌30min，加入1500ml乙醚萃取，水洗，無水硫酸鎂干燥后，過濾，濃縮，得到2-三氟甲基芐醇450g，收率89％。MS(M+1)＝177.04。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，CDCl₃)：7.50-7.33(m，4H，苯環(huán))，5.87(s，1H，-OH)，4.20(s，2H，-CH₂-)。

ii)4-硝基-2-三氟甲基芐醇

在四口燒瓶中加入濃硫酸1L，降溫至-20℃，攪拌，緩慢滴加濃硝酸1L。攪拌0.5h后，緩慢滴加2-三氟甲基芐醇450g，反應(yīng)溫度保持在-10℃—0℃，2h內(nèi)滴完，繼續(xù)攪拌1h，反應(yīng)完成。將反應(yīng)后的液體倒入劇烈攪拌的冰水混合物中，然后再攪拌2h，有固體析出，靜置過夜后倒出上層酸液，固體用1000ml乙醚溶解，分液，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌至中性，無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到固體4-硝基-2-三氟甲基芐醇236g，收率42％。MS(M+1)＝222.14。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，CDCl₃)：8.44(s，1H，苯環(huán))，8.20(d，1H，苯環(huán))，7.47(d，1H， 苯環(huán))，5.87(s，1H，-OH)，4.61(s，2H，-CH₂-)。

iii)4-硝基-2-三氟甲基溴化芐

在三口燒瓶中加入4-硝基-2-三氟甲基芐醇75g，甲苯750ml，攪拌，冰浴降溫，緩慢滴加PBr₃32.3ml，滴完后，繼續(xù)攪拌2h，TLC跟蹤。反應(yīng)完成后，滴加飽和碳酸氫鈉溶液，直至無氣體放出，然后分液，將上層有機(jī)相再用飽和NaCl溶液洗滌3次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到4-硝基-2-三氟甲基溴化芐50g，收率52％。MS(M+1)＝285.03。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，CDCl₃)：8.44(s，1H，苯環(huán))，8.20(d，1H，苯環(huán))，7.47(d，1H，苯環(huán))，4.56(s，2H，-CH₂-)。

iv)1-甲基-4-(4-硝基-2-(三氟甲基)芐基)哌嗪

將上一步反應(yīng)得到的產(chǎn)物溶于500ml氯仿，加入二異丙基乙胺80ml，攪拌，滴加N-甲基哌嗪50g，滴完后升溫至60℃，反應(yīng)過夜。反應(yīng)完成后，濃縮至干，得到粘稠的油狀液體。加入500ml乙酸乙酯溶解，水洗3次，無水硫酸鎂干燥，再濃縮，得到粗產(chǎn)物35g。

v)4-((4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基)-3-(三氟甲基)苯胺

將上一步得到的粗產(chǎn)物溶于300ml異丙醇中，加入雷尼鎳20g，通入H₂氣體，加熱回流3h，TLC跟蹤，反應(yīng)完成后，降溫，過濾，減壓濃縮除去溶劑，得到粘稠液體，柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝9，收集所需餾分，濃縮后得到目標(biāo)產(chǎn)物4-((4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基)-3-(三氟甲基)苯胺26g。MS(M+1)＝274.30。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：7.21(s，1H，苯環(huán))，7.06(d，1H，苯環(huán))，6.48(d，1H，苯環(huán))，5.28(s，2H，氨基)，3.54(s，2H，-CH₂-)，2.48(m，4H，哌嗪環(huán))，2.34(m，4H，哌嗪環(huán))，2.14(s，3H，-CH₃)。

vi)3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺

在燒瓶中加入二氯亞砜250ml、3-碘-4-甲基苯甲酸25g，攪拌，加熱回流6h，減壓濃縮干之后，再加入干燥的二氯乙烷，減壓除去溶劑。依次加入氯仿250ml，二異丙基乙胺20ml，4-((4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基)-3-(三氟甲基)苯胺26g，升溫至60℃，反應(yīng)5h，TLC跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，除去溶劑。加入乙酸乙酯200ml溶解，水洗3次，干燥，濃縮，得到的固體用柱色譜分離，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇＝9，收集所需的餾分，濃縮后得到固體41g。

將此固體再用丙酮250ml溶解，加入一水合檸檬酸25g，攪拌溶解，加熱到50℃，反應(yīng)4h，過濾，將得到的固體用200ml乙醇溶解，滴加5％的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值到8左右，過濾，干燥，得到白色固體28g，收率57％。MS(M+1)＝518.33。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：10.32(s，1H，酰胺)，8.28-7.21(m，6H，苯環(huán))，3.54(s，2H，-CH₂-)，2.48(m，4H，哌嗪環(huán))，2.34(m，4H，哌嗪環(huán))，2.24(s，3H，-CH₃)，2.14(s，3H，-CH₃)。

vii)2-乙炔基-4-(吡啶-3-基)嘧啶

2-溴-4-(吡啶-3-基)嘧啶12g，溶于120mlDMF中，加入三甲基硅基乙炔20ml，碘化亞銅1g，氯化鈀0.5g，DIPEA 20ml，在密閉壓力容器中加熱到120℃，反應(yīng)3h后，冷卻并將反應(yīng)液倒入燒杯中，加入乙酸乙酯200ml，水洗3次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到2-三甲基硅基乙炔基-4-(吡啶-3-基)嘧啶8.5g，收率：66％。

將上一步反應(yīng)產(chǎn)物溶于70mlTHF中，加入四丁基氟化銨6.6g，常溫反應(yīng)3h，TLC跟蹤，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液濃縮至干。加乙酸乙酯100ml溶解，水洗2次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到固體2-乙炔基-4-(吡啶-3-基)嘧啶5.2g，收率87％。MS(M+1)＝182.20。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：9.24-8.42(m，5H，雜環(huán))，7.57(s，1H，雜環(huán))，4.08(s，1H，炔基)。

viii)4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((4-(哌啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯甲酰胺

將2-乙炔基-4-(吡啶-3-基)嘧啶3g和3-碘-4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺8.5g溶于100mlDMF中，加入DIPEA10ml和二氯化鈀0.1g，攪拌，加熱至100℃，反應(yīng)3h，TLC跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，濃縮，柱色譜分離。洗脫劑為二氯甲烷/甲醇(9/1)，收集所需餾分后，濃縮，得到淺黃色固體即為標(biāo)題所述化合物，產(chǎn)量5.4g，收率58％。MS(M+1)＝571.62。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：10.23(s，1H，酰胺)，9.24-8.42(m，5H，雜環(huán))，8.28-7.21(m，7H，苯環(huán))，3.34(s，2H，-CH₂-)，2.48(m，4H，哌嗪環(huán))，2.40(s，3H，-CH₃)，2.34(m，4H，哌嗪環(huán))，2.14(s，3H，-CH₃)。

實(shí)施例2

4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((4-(哌啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯甲酰胺甲磺酸鹽的制備

將實(shí)施例1所得到的化合物5.4g溶于250ml丙酮，加入一水合檸檬酸3g，攪拌溶解，加熱回流1h，有固體析出，冷卻，過濾。將過濾得到的固體溶于500ml水中，滴加1％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值到9左右，過濾，再將得到的固體 重復(fù)以上操作一次。

將提純后的產(chǎn)物再溶于丙酮，加入適量的甲磺酸，攪拌，加熱回流1h，有固體析出，冷卻，過濾，干燥，即得。

實(shí)施例3

鹽酸鹽的制備

將提純過的4-甲基-N-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-((4-(哌啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯甲酰胺溶于乙醇中，加入10％的鹽酸溶液，攪拌，加熱到60℃，反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾除去乙醇，加入丙酮，攪拌30min，有固體析出，過濾，干燥，即得。

實(shí)施例4-18

制備化合物

按照實(shí)施例1所述的相似的方法制備以下化合物：

實(shí)施例19

N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H-茚-5-甲酰胺

i)5-溴-7-三氟甲基-2,3-二氫茚酮的合成

4-溴-2-三氟甲基苯甲酸134.5g溶于750ml二氯亞砜中，攪拌，加熱回流4h。減壓蒸去溶劑二氯亞砜后，用減壓精餾裝置將產(chǎn)物蒸出133℃/10mmHg，得到4-溴-2-三氟甲基苯甲酰氯133.9g，收率90％。

4-溴-2-三氟甲基苯甲酰氯28.8g溶于100ml二氯乙烷中，在室溫下滴加入三氯化鋁13.3g的二氯乙烷懸浮液中。然后將懸浮液放置在暗處，并用冰浴冷卻，通入乙烯氣體3h，直到酰氯反應(yīng)完全。反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)液冷卻到0℃，然后用4M的鹽酸溶液30ml淬滅。分液，水相用二氯乙烷萃取。合并有機(jī)相，分別用水，飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，干燥，過濾，濃縮，得到粗產(chǎn)品，直接用于下步反應(yīng)。

三氯化鋁159.6g，氯化鈉42.1g混合后，加熱到130℃成漿狀。加入上一步反應(yīng)得到的4-溴-2-三氟甲基苯基氯丙基酮，攪拌并升溫到180℃，反應(yīng)6h。反應(yīng)液用冰和濃鹽酸120ml淬滅。然后用二氯乙烷萃取，有機(jī)相分別用水，飽和碳酸氫鈉，飽和食鹽水洗滌，干燥，過濾，減壓濃縮。柱色譜分離，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝4，得到固體5-溴-7-三氟甲基-2,3-二氫茚酮15.3g，收率55％。MS(M+1)＝278.0。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，CDCl₃)：7.61(s，1H)，7.44(s，1H)，3.06(m，2H)，2.54(m，2H)。

ii)1-(4-甲基哌嗪基)-7-三氟甲基-2,3-二氫化茚-5-甲酸的合成

5-溴-7-三氟甲基-2,3-二氫茚酮27.9g溶于250mlDMF中，加入氰化亞銅13.5g，攪拌，加熱到回流，反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻到室溫，將反應(yīng)液在攪 拌下倒入1000ml水中，用500ml乙酸乙酯萃取3次，收集有機(jī)相，水洗2次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。柱色譜分離，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝4，得到固體5-氰基-7-三氟甲基-2,3-二氫茚酮10.1g，收率45％。MS(M+1)＝225.0。

5-氰基-7-三氟甲基-2,3-二氫茚酮22.5g溶解在100ml甲醇中，溶解后，緩慢分批加入硼氫化鈉4.6g。室溫攪拌4h，過濾，濃縮。將殘?jiān)苡谝宜嵋阴ィ尤胩妓釟溻c飽和溶液洗滌2次，飽和鹽水洗2次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得到5-氰基-7-三氟甲基-1-羥基-2,3-二氫化茚21.1g，收率93％。MS(M+1)＝227.0。

5-氰基-7-三氟甲基-1-羥基-2,3-二氫化茚22.1g，溶解于50ml二氯甲烷中，在冰浴冷卻下滴加亞磺酰氯10.2ml，20min內(nèi)滴完。撤去冰浴，將反應(yīng)液回流5h，冷卻，濃縮。將反應(yīng)液殘?jiān)苡谝宜嵋阴ィ尤胩妓釟溻c飽和溶液洗滌2次，飽和鹽水洗2次，無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮后得到5-氰基-7-三氟甲基-1-氯-2,3-二氫化茚。

將上述得到的5-氰基-7-三氟甲基-1-氯-2,3-二氫化茚溶解在100ml氯仿中，加入1-甲基哌嗪9.3g，碳酸鉀20g，攪拌加熱，在60℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液過濾，水洗，干燥，濃縮。用硅膠柱色譜分離純化，以二氯甲烷/甲醇為洗脫劑，得到5-氰基-7-三氟甲基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2,3二氫-1H-茚16.7g，收率58％。MS(M+1)＝309.1。

5-氰基-7-三氟甲基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2,3二氫-1H-茚(15.5g，0.05mol)加入到0.1M氫氧化鈉溶液(100ml)中，加熱到100℃，攪拌過夜。冷卻后，加入0.1M的鹽酸溶液將反應(yīng)液的pH值調(diào)節(jié)到8.0，有白色固體析出，過濾。將濾得的固體用甲醇重結(jié)晶，得到1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-三氟甲基-2,3二氫化茚-5-甲酸10g，收率61％。MS(M+1)＝328.2。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：8.44(s，1H，苯環(huán))，8.20(d，1H，苯環(huán))，7.47(d，1H，苯環(huán))，4.56(s，2H，-CH₂-)。

iii)N-(3-碘-4-甲基苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H-茚-5-甲酰胺

在冰浴中，將1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-三氟甲基-2,3二氫化茚-5-甲酸32.8g溶于200mlDMF中，加入1-羥基苯并三氮唑16.1g，隨后加入DCC 24.6g，攪拌1h，滴加3-碘-4-甲基苯胺28g的DMF(200ml)溶液，然后在25℃下攪拌24h。過濾除去不容物，濾液在真空下濃縮。殘留物用600ml乙醚溶解，過濾，然后分別用10％HCl溶液(2×100mL)、飽和NaHCO₃溶液(2×100mL)和飽和食鹽水溶液(2×50mL)洗滌，無水硫酸鎂干燥。濃縮后用柱色譜分離純化，以石油醚/EtOAc (1:1)為洗脫劑，得到目標(biāo)產(chǎn)物27.7g，收率51％。MS(M+1)＝544.4。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：10.21(s，1H，酰胺)，8.08-7.47(m，5H，苯環(huán))，4.04(m，1H)，3.21(m，2H)，2.48(m，4H，哌嗪環(huán))，2.33(m，4H，哌嗪環(huán))，2.25(m，2H)，2.21(s，3H，-CH₃)，2.14(s，3H，-CH₃)。

iv)N-(4-甲基-3-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)乙炔基)苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H-茚-5-甲酰胺的合成

將2-乙炔基-4-(吡啶-3-基)嘧啶3g和N-(3-碘-4-甲基苯基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-7-(三氟甲基)-2,3-二氫-1H-茚-5-甲酰胺9g溶于100mlDMF中，加入DIPEA10ml和二氯化鈀0.1g，攪拌，加熱至100℃，反應(yīng)3h，TLC跟蹤。反應(yīng)結(jié)束后，濃縮，柱色譜分離。洗脫劑為二氯甲烷/甲醇(9/1)，收集所需餾分后，濃縮，得到淺黃色固體即為標(biāo)題所述化合物，產(chǎn)量4.7g，收率48％。MS(M+1)＝571.62。¹HNMR數(shù)據(jù)(300MHz，DMSO-d₆)：10.23(s，1H，酰胺)，9.24(s，1H，吡啶環(huán))，9.01(d，1H，嘧啶環(huán))，8.70(d，1H，吡啶環(huán))，8.42(d，1H，吡啶環(huán))，8.07(d，1H，嘧啶環(huán))，7.89(m，2H，苯環(huán))，7.46(m，2H，苯環(huán))，7.23(m，1H，苯環(huán))，4.04(m，1H，-CH-)，3.21(m，2H)，2.71-2.58(m，8H，哌嗪環(huán))，2.40(s，3H，-CH₃)，2.31(m，2H)，2.14(s，3H，-CH₃)。

實(shí)施例20-28

制備化合物

按照實(shí)施例13相似的方法合成以下化合物：

實(shí)施例29

藥物制劑配方

本發(fā)明提供了幾種用于治療或預(yù)防與蛋白激酶相關(guān)的疾病的藥物組合物的配方，其藥物組合物有片劑、膠囊、注射劑、氣霧劑等。以下以“活性化合 物”表示本發(fā)明所示的化合物。

實(shí)施例30

體外活性測試

本發(fā)明的化合物對蛋白激酶活性的調(diào)節(jié)和細(xì)胞增殖的抑制作用進(jìn)行了測試，對BCR-ABL突變的K562(人白血病細(xì)胞)和HL-60(人早幼粒白血病細(xì)胞)進(jìn)行了測試，其方法如下：

取對數(shù)生長期的兩種細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，分為2組:空白對照組、2μmol/L活性成分組。細(xì)胞懸液終濃度為5×10⁴/mL。以200μL/孔種入96孔板。置于含10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，在37℃、5％CO₂孵箱中分別培養(yǎng)72h，每組每濃度設(shè)3個復(fù)孔，根據(jù)細(xì)胞生長情況及時添加培養(yǎng)液。細(xì)胞終止培養(yǎng)前4h加入5g/LMTT20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h后加150μL二甲基亞砜(DMSO)終止反應(yīng)，振蕩10min，取充分混勻的細(xì)胞懸液在血球計數(shù)板上計數(shù)細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞計數(shù)以n×10⁴/mL表示，并計算抑制率。

表1活性化合物對細(xì)胞活性抑制情況

從表1所示結(jié)果可以看出，本發(fā)明實(shí)施例所示化合物都具有抑制白血病細(xì)胞活性的能力，尤其對人早幼粒白血病細(xì)胞效果更佳。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實(shí)體或方法，若是與申請的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。