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      蛋白質(zhì)TaTAR2;1在調(diào)控植物生物量和根系發(fā)育中的應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:11229254閱讀:541來源:國知局
      蛋白質(zhì)TaTAR2;1在調(diào)控植物生物量和根系發(fā)育中的應(yīng)用的制造方法與工藝
      本發(fā)明涉及生物
      技術(shù)領(lǐng)域
      ,具體涉及蛋白質(zhì)tatar2;1在調(diào)控植物生物量和根系發(fā)育中的應(yīng)用。
      背景技術(shù)
      :氮素是植物必需的最重要的大量元素之一,是植物體內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、磷脂、葉綠素等重要化合物的主要組成成分,在物質(zhì)代謝和能量轉(zhuǎn)化中起重要作用。植物對氮素的缺乏可導(dǎo)致植物生長緩慢,產(chǎn)量下降,使糧食作物籽粒蛋白質(zhì)含量下降,從而降低品質(zhì)。氮肥的使用,是幾十年來作物產(chǎn)量大幅提高的重要原因,但是自90年代以來,我國氮肥使用率繼續(xù)大幅提高的同時(shí),糧食總產(chǎn)和單產(chǎn)增長卻放緩甚至停滯不前。與歐洲等國家相比,中國、印度、埃及等國家的氮肥利用效率呈逐年遞減的趨勢。近年對高產(chǎn)作物品種的研究也發(fā)現(xiàn),盡管一些新的作物品種具有很好的產(chǎn)量,氮肥利用率卻不高,高產(chǎn)不高效成為高產(chǎn)育種的一個(gè)重要問題,同時(shí)大幅度提高我國糧食單產(chǎn)和養(yǎng)分利用效率是我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵。同時(shí)多達(dá)45–50%的氮肥未被農(nóng)作物吸收利用而損失進(jìn)入環(huán)境,導(dǎo)致資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。發(fā)達(dá)的根系是植物高效吸收水分以及營養(yǎng)元素的重要生理基礎(chǔ)之一,例如在小麥中,氮高效小麥品種科農(nóng)9204和小偃54在表層和底層土壤中的根長比小麥品種京411的發(fā)達(dá),吸氮效率也高;小麥-黑麥1bl/1rs易位系在小麥育種中得到廣泛利用,這與黑麥1rs可顯著增加小麥表層和深層根系生物量、促進(jìn)氮等養(yǎng)分吸收有關(guān)。鑒于根系在高效吸收水肥方面的重要性,科學(xué)家認(rèn)為遺傳改良農(nóng)作物根系形態(tài)構(gòu)型是實(shí)現(xiàn)第二次綠色革命、進(jìn)一步提高產(chǎn)量的關(guān)鍵。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是如何調(diào)控植物生物量和/或植物根系發(fā)育。為解決上述問題,本發(fā)明首先提供了蛋白質(zhì)tatar2;1在調(diào)控植物生物量和/或調(diào)控植物根系發(fā)育中的應(yīng)用;所述蛋白質(zhì)tatar2;1為a1)或a2)或a3):a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì);a2)在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的n端或/和c端連接標(biāo)簽得到的融合蛋白質(zhì);a3)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與調(diào)控植物生物量和/或植物根系發(fā)育相關(guān)的蛋白質(zhì)。其中,序列表中序列2可由431個(gè)氨基酸殘基組成。為了使a1)中的蛋白質(zhì)便于純化,可在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1、標(biāo)簽的序列標(biāo)簽殘基序列poly-arg5-6(通常為5個(gè))rrrrrpoly-his2-10(通常為6個(gè))hhhhhhflag8dykddddkstrep-tagii8wshpqfekc-myc10eqkliseedl上述a3)中的蛋白質(zhì)tatar2;1,所述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。上述a3)中的蛋白質(zhì)tatar2;1可人工合成,也可先合成其編碼基因,再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述a3)中的蛋白質(zhì)tatar2;1的編碼基因可通過將序列表中序列1所示的dna序列中缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的密碼子,和/或進(jìn)行一個(gè)或幾個(gè)堿基對的錯(cuò)義突變,和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子在調(diào)控植物生物量和/或調(diào)控植物根系發(fā)育中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。其中,所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子可以是dna,如cdna、基因組dna或重組dna;所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子也可以是rna,如mrna或hnrna等。所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3):b1)核苷酸序列是序列表中序列1所示的dna分子;b2)與b1)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性,且編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的dna分子;b3)在嚴(yán)格條件下與(b1)或(b2)限定的核苷酸序列雜交,且編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的dna分子。其中,序列表中序列1由1296個(gè)核苷酸組成,編碼序列表中序列2所示的氨基酸序列。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法,例如定向進(jìn)化和點(diǎn)突變的方法,對本發(fā)明的蛋白質(zhì)tatar2;1的核苷酸序列進(jìn)行突變。那些經(jīng)過人工修飾的,具有與本發(fā)明分離得到的蛋白質(zhì)tatar2;1的核苷酸序列具有75%或者更高同一性的核苷酸,只要編碼蛋白質(zhì)tatar2;1且具有蛋白質(zhì)tatar2;1的功能,均是衍生于本發(fā)明的核苷酸序列并且等同于本發(fā)明的序列。這里使用的術(shù)語“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性?!巴恍浴卑ㄅc本發(fā)明的編碼序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的核苷酸序列具有75%或更高,或85%或更高,或90%或更高,或95%或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行評價(jià)。使用計(jì)算機(jī)軟件,兩個(gè)或多個(gè)序列之間的同一性可以用百分比(%)表示,其可以用來評價(jià)相關(guān)序列之間的同一性。以上任一所述應(yīng)用中,所述調(diào)控植物生物量可為增加植物生物量。以上任一所述應(yīng)用中,所述調(diào)控植物根系發(fā)育可為促進(jìn)植物根系發(fā)育。以上任一所述應(yīng)用中,所述增加植物生物量可為地上部生物量增加和/或根系生物量增加。以上任一所述應(yīng)用中,所述促進(jìn)植物根系發(fā)育可為可見側(cè)根數(shù)增多和/或總側(cè)根長增加和/或主根長增加。以上任一所述地上部生物量可為每株植株的地上部分鮮重。以上任一所述根系生物量可為每株植物的根系鮮重。以上任一所述應(yīng)用中,所述植物可為如下c1)至c4)中的任一種:c1)雙子葉植物;c2)單子葉植物;c3)十字花科植物;c4)擬南芥。為解決上述問題,本發(fā)明還提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。本發(fā)明所提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法,包括將編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子導(dǎo)入受體植物中,得到轉(zhuǎn)基因植物的步驟;所述轉(zhuǎn)基因植物與所述受體植物相比地上部生物量增加和/或根系生物量增加和/或可見側(cè)根數(shù)增多和/或總側(cè)根長增加和/或主根長增加。其中,所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子可以是dna,如cdna、基因組dna或重組dna;所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子也可以是rna,如mrna或hnrna等。上述方法中,所述編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3):b1)核苷酸序列是序列表中序列1所示的dna分子;b2)與b1)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性,且編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的dna分子;b3)在嚴(yán)格條件下與(b1)或(b2)限定的核苷酸序列雜交,且編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的dna分子。上述方法中,所述地上部生物量可為單株地上部分鮮重。所述根系生物量可為單株根系鮮重。上述方法中,所述植物可為如下c1)至c4)中的任一種:c1)雙子葉植物;c2)單子葉植物;c3)十字花科植物;c4)擬南芥。所述擬南芥具體可為columbia-0生態(tài)型擬南芥。上述方法中,所述“將編碼所述蛋白質(zhì)tatar2;1的核酸分子導(dǎo)入受體植物中”可通過向受體植物中導(dǎo)入重組載體實(shí)現(xiàn);所述重組載體可為將所述蛋白質(zhì)tatar2;1的編碼基因插入出發(fā)質(zhì)粒得到的重組質(zhì)粒。所述重組載體具體可為重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1。所述重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1具體可為在載體pcambia2300的多克隆位點(diǎn)插入序列表中序列1所示的dna分子得到的重組質(zhì)粒。所述重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1具體可為將載體pcambia2300的xbaⅰ和salⅰ識(shí)別序列間的片段(載體pcambia2300被限制性核酸內(nèi)切酶xbaⅰ和salⅰ切成一個(gè)大片段和一個(gè)小片段,該dna為該小片段)替換為序列表中序列1所示的dna分子得到的重組質(zhì)粒。實(shí)驗(yàn)證明,本發(fā)明所提供的蛋白質(zhì)tatar2;1能增加植物生物量和/或促進(jìn)植物根系發(fā)育:與野生型植物相比,轉(zhuǎn)tatar2;1基因植物的可見側(cè)根數(shù)、總側(cè)根長、主根長、地上部生物量和根系生物量均顯著增加。因此,可以利用蛋白質(zhì)tatar2;1調(diào)控植物生物量和/或調(diào)控植物根系發(fā)育,本發(fā)明對植物生物量和/或植物根系發(fā)育的新材料的選育具有重要應(yīng)用價(jià)值。附圖說明圖1為pcambia2300/tatar2;1的部分元件示意圖圖2為oe4-1和oe6-2中tatar2;1基因相對表達(dá)量。圖3為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的生長情況。圖4為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的可見側(cè)根數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖5為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的總側(cè)根長統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖6為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的主根長統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖7為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的地上部鮮重統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖8為野生型擬南芥(col-0)、oe4-1和oe6-2在高氮(hn)和低氮(ln)條件下的根系鮮重統(tǒng)計(jì)結(jié)果。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述,給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明,而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法,如無特殊說明,均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn),均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果取平均值。下述實(shí)施例中的高氮培養(yǎng)基的各組分見表2,低氮培養(yǎng)基的各組分見表3。表2.高氮培養(yǎng)基的組分表3.低氮培養(yǎng)基的組分根癌農(nóng)桿菌gv3101為普如汀生物技術(shù)(北京)有限公司產(chǎn)品,產(chǎn)品目錄號為biovector-375。野生型擬南芥(arabidopsisthaliana)(columbia-0生態(tài)型)購自arabidopsisbiologicalresourcecenter(abrc,網(wǎng)址為:http://www.abrc.com/),材料編號為cs6673。公眾可從中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所獲得,以重復(fù)本申請實(shí)驗(yàn)。擬南芥(arabidopsisthaliana)(columbia-0生態(tài)型)在下文中簡稱野生型擬南芥或col-0。小麥“科農(nóng)199”(簡稱科農(nóng)199)記載于如下文獻(xiàn)中:李俊明,張相岐,張愛民.高產(chǎn)廣適小麥新品種——科農(nóng)199.《麥類作物學(xué)報(bào)》,2007.公眾可從中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所獲得,以重復(fù)本申請實(shí)驗(yàn)。載體pcambia2300為北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品,貨號為mcv036-n;載體peasytm-blunt為北京全式金生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,產(chǎn)品目錄號為cb501-02。實(shí)施例1、轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥的獲得及表型鑒定一、重組載體和重組農(nóng)桿菌的構(gòu)建1、tatar2;1基因的獲得(1)采用trizol法提取科農(nóng)199的幼嫩葉片的總rna,將該總rna用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cdna。2、人工合成引物f1:5’-tctagaatgccactatggcgagtcttc-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶xbaⅰ識(shí)別序列)和r1:5’-gtcgacccatttgccattcgaaactgct-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶salⅰ識(shí)別序列)。3、以步驟1獲得的cdna為模板,以步驟2合成的f1和r1為引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增,得到約1500bp的雙鏈dna分子。反應(yīng)程序:98℃2min,(98℃30s,58℃30s,68℃45s)×35循環(huán),72℃10min。4、將步驟3中得到的雙鏈dna分子連接至載體peasytm-blunt,得到重組質(zhì)粒peasytm-blunt-tatar2;1。5、完成步驟4后,用限制性內(nèi)切酶xbaⅰ和salⅰ雙酶切重組質(zhì)粒peasytm-blunt-tatar2;1,回收約1500bp的片段。6、用限制性內(nèi)切酶xbaⅰ和salⅰ雙酶切載體pcambia2300,回收約8700bp的載體骨架。7、將步驟5得到的片段與步驟6得到的載體骨架連接,得到重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1(部分元件的示意圖見圖1)。根據(jù)測序結(jié)果,對重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下:將載體pcambia2300的xbaⅰ和salⅰ識(shí)別序列間的片段(載體pcambia2300被限制性核酸內(nèi)切酶xbaⅰ和salⅰ切成一個(gè)大片段和一個(gè)小片段,該dna為該小片段)替換為序列表中序列1所示的dna分子。重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1表達(dá)序列表中序列2所示的tatar2;1蛋白。重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1中還含有一個(gè)由35s啟動(dòng)子啟動(dòng)nptii基因表達(dá)的表達(dá)盒(見圖1),因此可利用硫酸卡那霉素(kanamycinsulfate)篩選轉(zhuǎn)化植株。將重組質(zhì)粒pcambia2300-tatar2;1導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌gv3101,得到重組農(nóng)桿菌,命名為gv3101/pcambia2300-tatar2;1。將載體pcambia2300導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌gv3101,得到重組農(nóng)桿菌,命名為gv3101/pcambia2300。二、擬南芥轉(zhuǎn)tatar2;1基因植株的再生和篩選1、采用擬南芥花序浸花轉(zhuǎn)化法(記載于如下文獻(xiàn)中clough,s.j.,andbent,a.f..floraldip:asimplifiedmethodforagrobacterium-mediatedtransformationofarabidopsisthaliana.plantj.(1998)16,735-743.),將步驟一制備的gv3101/pcambia2300-tatar2;1轉(zhuǎn)至野生型擬南芥中,獲得t1代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子。2、將步驟1獲得的t1代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子播種于含有40mg/l硫酸卡那霉素的1/2ms培養(yǎng)基上,能夠正常生長的擬南芥(抗性苗)即為t1代轉(zhuǎn)tatar2;1基因陽性苗,t1代轉(zhuǎn)tatar2;1基因陽性苗收到的種子即為t2代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子。3、將步驟2篩選出的不同株系的t2代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子播種于含有40mg/l硫酸卡那霉素的1/2ms培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選,如果某株系中能夠正常生長的擬南芥(抗性苗)的數(shù)目與不能夠正常生長的擬南芥(非抗性苗)的數(shù)目比例為3:1,則該株系為tatar2;1基因插入一個(gè)拷貝的株系,該株系中的抗性苗收到的種子即為t3代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子。4、將步驟3篩選出的t3代轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥種子再次播種于含有40mg/l硫酸卡那霉素的1/2ms培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選,均為抗性苗的即為t3代純合轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥。將其中2個(gè)t3代純合轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥株系分別命名為oe4-1和oe6-2,并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。按照上述方法,將gv3101/pcambia2300-tatar2;1替換為gv3101/pcambia2300,其他步驟均相同,得到t3代純合轉(zhuǎn)空載體擬南芥的植株,簡稱轉(zhuǎn)空載體擬南芥。三、real-timepcr檢測tatar2;1基因的相對表達(dá)量實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次,每次重復(fù)的步驟如下:1、樣本的獲得取oe4-1的t3代植株的幼嫩葉片,放入液氮保存,得到樣本1。取oe6-2的t3代植株的幼嫩葉片,放入液氮保存,得到樣本2。取轉(zhuǎn)空載體擬南芥的t3代植株的幼嫩葉片,放入液氮保存,得到樣本3。取野生型擬南芥植株的幼嫩葉片,放入液氮保存,得到樣本4。2、real-timepcr檢測tatar2;1基因的相對表達(dá)量利用rneasyplantminikit提取試劑盒(qiagen公司產(chǎn)品)提取樣本1的總rna,將該總rna用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cdna,然后將該cdna稀釋10倍作為模板,根據(jù)premixextaqtmii(perfectrealtime)試劑盒(takara公司產(chǎn)品)說明書的步驟,real-timepcr檢測樣本1中tatar2;1基因的相對表達(dá)量(以actin基因作為內(nèi)參基因)。real-timepcr使用的儀器為eprealplex(eppendorf公司產(chǎn)品,德國)。將樣本1中actin基因的表達(dá)量作為1,樣本1中tatar2;1基因的相對表達(dá)量見圖2。鑒定tatar2;1基因的引物為5’-tgtgtctgtcgcattgaatgtc-3’和5’-atgttgctgatcaggagagatgac-3’。內(nèi)參引物為5’-cctcgtctcgaccttgctggg-3’和5’-gagaacaagcaggaggacggc-3’。按照上述步驟,將樣本1分別替換為樣本2、樣本3和樣本4,其它步驟均相同,得到樣本2、樣本3和樣本4中tatar2;1基因的相對表達(dá)量(圖2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,oe4-1的t3代植株中tatar2;1基因的相對表達(dá)量為1.718,oe6-2的t3代植株中tatar2;1基因的相對表達(dá)量為2.466,野生型擬南芥和轉(zhuǎn)空載體擬南芥的t3代植株中tatar2;1基因的相對表達(dá)量均為0??梢姡琽e4-1的t3代植株和oe6-2的t3代植株均為轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥植株。四、轉(zhuǎn)tatar2;1基因擬南芥的表型鑒定以野生型擬南芥種子、轉(zhuǎn)空載體擬南芥的t3代種子、oe4-1的t3代種子和oe6-2的t3代種子為實(shí)驗(yàn)材料,鑒定擬南芥的表型。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次取平均值,每個(gè)株系每次重復(fù)20株。每次重復(fù)步驟如下:1、將野生型擬南芥種子、轉(zhuǎn)空載體擬南芥的t3代種子、oe4-1的t3代種子或oe6-2的t3代種子先用1%次氯酸鈉室溫滅菌10min,無菌蒸餾水沖洗5遍,然后4℃避光放置4天(目的使種子發(fā)芽一致)。2、將完成步驟1的種子播種于1/2ms培養(yǎng)基,22℃豎直培養(yǎng)4天,挑選生長狀態(tài)一致的擬南芥幼苗轉(zhuǎn)移至低氮培養(yǎng)基(ln)或高氮培養(yǎng)基(hn)上,豎直培養(yǎng)6天,觀察植株的生長情況并統(tǒng)計(jì)可見側(cè)根數(shù)、總側(cè)根長、主根長、地上部鮮重和根系鮮重。野生型擬南芥、oe4-1的t3代植株和oe6-2的t3代植株在高氮培養(yǎng)基或低氮培養(yǎng)基下的生長情況見圖3。各植株的可見側(cè)根數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖4。結(jié)果表明,在低氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的可見側(cè)根數(shù)為9.0條,oe6-2的t3代植株的可見側(cè)根數(shù)為9.6條,野生型擬南芥的可見側(cè)根數(shù)為5.8條;在高氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的可見側(cè)根數(shù)為7.1條,oe6-2的t3代植株的可見側(cè)根數(shù)為7.0條,野生型擬南芥的可見側(cè)根數(shù)為4.4條。各植株的總側(cè)根長的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖5。結(jié)果表明,在低氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的總側(cè)根長為6.2cm,oe6-2的t3代植株的總側(cè)根長為6.9cm,野生型擬南芥的總側(cè)根長為3.0cm;在高氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的總側(cè)根長為4.0cm,oe6-2的t3代植株的總側(cè)根長為3.9cm,野生型擬南芥的總側(cè)根長為1.6cm。各植株的主根長的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖6。結(jié)果表明,在低氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的主根長為6.1cm,oe6-2的t3代植株的主根長為6.1cm,野生型擬南芥的主根長為5.3cm;在高氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的主根長為6.0cm,oe6-2的t3代植株的主根長為6.1cm,野生型擬南芥的主根長為5.2cm。各植株的地上部每株鮮重的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖7。結(jié)果表明,在低氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的單株擬南芥地上部的平均鮮重為1.79mg,oe6-2的t3代植株的單株擬南芥地上部的平均鮮重為1.98mg,單株野生型擬南芥地上部的平均鮮重為1.48mg;在高氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的單株擬南芥地上部的平均鮮重為4.90mg,oe6-2的t3代植株的單株擬南芥地上部的平均鮮重為5.14mg,單株野生型擬南芥地上部的平均鮮重為3.39mg。各植株的根系每株鮮重的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見圖8。結(jié)果表明,在低氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的單株擬南芥根系的平均鮮重為2.02mg,oe6-2的t3代植株的單株擬南芥根系的平均鮮重為2.05mg,單株野生型擬南芥根系的平均鮮重為1.46mg;在高氮培養(yǎng)基中,oe4-1的t3代植株的單株擬南芥根系的平均鮮重為1.50mg,oe6-2的t3代植株的單株擬南芥根系的平均鮮重為1.53mg,單株野生型擬南芥根系的平均鮮重為1.03mg。野生型擬南芥和轉(zhuǎn)空載體擬南芥的t3代植株在高氮培養(yǎng)基或低氮培養(yǎng)基下的可見側(cè)根數(shù)、總側(cè)根長、主根長、單株擬南芥地上部每株鮮重和根系每株鮮重?zé)o顯著差異。結(jié)果表明,與野生型擬南芥相比,在高氮培養(yǎng)基或低氮培養(yǎng)基中培養(yǎng)的oe4-1的t3代植株或oe6-2的t3代植株的可見側(cè)根數(shù)、總側(cè)根長、主根長、地上部生物量(單株擬南芥地上部的平均鮮重)和根系生物量(單株擬南芥根系的平均鮮重)均顯著增加??梢姡瑢atar2;1基因?qū)霐M南芥中,在高氮和低氮條件下均會(huì)增加生物量和促進(jìn)根系發(fā)育。當(dāng)前第1頁12
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