本發(fā)明屬于化學(xué)合成藥物及其合成方法，涉及到咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽類化學(xué)藥物及其合成方法以及抗癌技術(shù)領(lǐng)域

背景技術(shù)：

當(dāng)今社會(huì)，高致死率的惡性腫瘤已成為威脅人類生命健康的頭號(hào)殺手，因此世界各國(guó)高度重視癌癥預(yù)防與治療。目前臨床上普遍采用化學(xué)治療、手術(shù)治療以及放射線治療等手段治療腫瘤。1969年，美國(guó)化學(xué)家rosenberg首次發(fā)現(xiàn)順鉑(cisplatin)具有抗腫瘤活性，隨后1979年，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(fda)批準(zhǔn)了順鉑作為第一個(gè)治療癌癥的無機(jī)藥物應(yīng)用于臨床。此后其他鉑配合物作為抗腫瘤藥物相繼上市和應(yīng)用于臨床。但是鉑類配合物也存在許多缺點(diǎn)：藥物水溶性差；且僅能注射給藥，緩解期短，并伴有嚴(yán)重的腎毒性、耳毒性、神經(jīng)毒性及胃腸道毒性，長(zhǎng)期用藥治療腫瘤易產(chǎn)生耐藥性。因而促使科研工作者突破傳統(tǒng)鉑類配合物結(jié)構(gòu)理念，研究開發(fā)新型的抗癌腫瘤藥物受到廣泛關(guān)注。

多金屬氧酸鹽藥物是一類新型的無機(jī)類藥物。由于多金屬氧酸鹽本身的結(jié)構(gòu)種類繁多，而且元素周期表中半數(shù)以上元素的原子都可以作為其雜原子，再加上雜原子在多酸中的位置與比例可以呈多樣性變化，從而使得多酸品種豐富、變化萬千。多金屬氧酸鹽的極性、氧化還原電勢(shì)、表面電荷分布、形狀及酸度等一系列理化性質(zhì)是其具有藥學(xué)活性的基礎(chǔ)。近年來，多金屬氧酸鹽最重要的熱門前沿研究課題之一是其抗癌生物活性在新藥開發(fā)及應(yīng)用領(lǐng)域的研究，并且已取得重要進(jìn)展。早在1971年，raynaud研究發(fā)現(xiàn)，keggin結(jié)構(gòu)雜多酸鹽[siw12o40]^4‐能夠抑制莫羅尼氏鼠科等和肉瘤病毒(momsv)在胚胎鼠纖維原細(xì)胞中的轉(zhuǎn)移。1996年，劉術(shù)俠等報(bào)道了(nh4)4.5h3.5[ptmo6o24]·nh2o和(nh4)3h6[rmo6o24]·nh2o(r＝rh，fe，co)1:6型anderson結(jié)構(gòu)鑰系雜多酸對(duì)人鼻咽癌kb細(xì)胞的抑制作用。研究表明，anderson結(jié)構(gòu)鑰系雜多酸鹽空間體積較小，活性較高(ic50<4mg/l)。2004年，王恩波課題組報(bào)道了硼鎢酸嘧啶鹽(pbt)(氟脲嘧啶‐keggin結(jié)構(gòu)雜多鎢酸鹽)的抗癌活性。近年來，許多研究者根據(jù)雜多化合物的特點(diǎn)設(shè)計(jì)合成了一些雜多化合物與生物小分子如氨基酸，嘧啶及二肽等結(jié)合生成無機(jī)‐有機(jī)雜化的具有一定生物學(xué)活性的新型化合物。

目前雜多酸鹽體外抗癌作用以keggin結(jié)構(gòu)最多，anderson結(jié)構(gòu)和dawson結(jié)構(gòu)及非經(jīng)典結(jié)構(gòu)的研究較少，keggin結(jié)構(gòu)對(duì)多種癌細(xì)胞有較好的抑制作用，毒性較低；體外研究文獻(xiàn)主要采用mtt(或mts)法對(duì)多金屬氧酸鹽的不同癌細(xì)胞抑制活性進(jìn)行篩選；體內(nèi)研究主要集中于keggin結(jié)構(gòu)及非經(jīng)典結(jié)構(gòu)雜多酸鹽，研究?jī)?nèi)容主要是對(duì)鼠急性毒性、實(shí)體腫瘤抑制率(瘤重)、體重、存活時(shí)間及小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行研究；多金屬氧酸鹽抗癌生物活性機(jī)制研究主要包括氧化還原機(jī)制和細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)機(jī)制。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外多金屬氧酸鹽抗癌生物活性研究尚存在諸多問題，包括化合物合成成本較高，毒副作用較大，產(chǎn)量較低，作用機(jī)制尚不夠明確，多為推理性研究，缺乏實(shí)際證據(jù)等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具有無機(jī)‐有機(jī)雜化的咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽，該鹽具有活性高、毒性低、價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)肝癌(7721，hepge2)，肺癌(a549，h1299)腫瘤有較好的細(xì)胞毒性。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)解決方案是：一種具有抗癌活性的咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽，其化學(xué)式為na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o，其晶體結(jié)構(gòu)如下：

晶體數(shù)據(jù)如下：

上述咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽的制備方法，包括如下步驟：

將銻鎢酸溶于水中加熱至75～110℃，調(diào)節(jié)ph＝9±0.2，再分別加入鎳鹽和咪唑溶液，在反應(yīng)體系的ph值為3～6的條件下，回流，經(jīng)自組裝反應(yīng)后取結(jié)晶物，即為所述的多金屬鎢酸鹽。

進(jìn)一步的，所述銻鎢酸、咪唑、鎳鹽的物質(zhì)量之比比為(1.0～2.0)：(3.5～5.5)：(4.5～6.5)。

進(jìn)一步的，所述反應(yīng)體系的ph值優(yōu)選4～6。

進(jìn)一步的，所述鎳鹽為氯化鎳或高氯酸鎳。

進(jìn)一步的，自組裝反應(yīng)時(shí)間為2.5～4.5h。

上述咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明通過自組裝得到的咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性，特別是對(duì)肝癌、肺癌腫瘤細(xì)胞有較高的細(xì)胞毒性。

附圖說明

圖1為化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的x射線衍射圖。

圖2為化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的紅外光譜圖。

圖3為化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的熱重圖。

圖4為不同濃度化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的作用下smmc-7721、hepg2(人肝癌細(xì)胞)、a549、h1299(肺癌細(xì)胞)的存活率曲線圖。

圖5為不同濃度化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o、銻鎢酸、咪唑的作用下a549(肺癌細(xì)胞)的存活率曲線圖。

圖6為本發(fā)明所述多金屬鎢酸鹽的晶體結(jié)構(gòu)圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明具有如下創(chuàng)新點(diǎn)：

(1)本發(fā)明通過選擇合適的有生物活性的有機(jī)小分子、過渡金屬以及合理結(jié)構(gòu)的雜多酸，運(yùn)用化學(xué)鍵合或靜電作用將它們相互結(jié)合起來，從而實(shí)現(xiàn)在分子水平上構(gòu)筑結(jié)構(gòu)新穎的雜多酸‐有機(jī)配體化合物。

(2)本發(fā)明通過系統(tǒng)研究雜多酸‐有機(jī)配體化合物的組裝機(jī)理和組裝條件，以實(shí)現(xiàn)雜多酸‐有機(jī)配體組裝體的結(jié)構(gòu)調(diào)控與可控制備。

(3)本發(fā)明采用多樣化的檢測(cè)方法進(jìn)行雜多酸鹽-有機(jī)配體化合物抗腫瘤活性的研究，利用雜多酸自身的極性、氧化還原電勢(shì)、表面電荷分布、形狀及酸度等一系列理化性質(zhì)，有利于對(duì)生物大分子(連接生物基團(tuán))靶向性識(shí)別，同時(shí)d區(qū)或p區(qū)元素的離子代替d⁰過渡金屬陽離子，或者可以在雜多酸上共價(jià)連接與人體生理環(huán)境相匹配的有機(jī)基團(tuán)、生物基團(tuán)，有機(jī)基團(tuán)與雜多酸鹽結(jié)構(gòu)的連接(即生成多金屬氧酸鹽有機(jī)小分子衍生物)可以調(diào)控多金屬氧酸鹽分子的生物學(xué)性能，增強(qiáng)識(shí)別能力。

(4)本發(fā)明根據(jù)金屬離子鎳及配體咪唑本身所固有的藥物生物活性，將其作為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而合成新藥的依據(jù)，將細(xì)胞水平與分子水平相結(jié)合最終明確雜多酸鹽-有機(jī)配體化合物的抗腫瘤機(jī)理，為最終實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物的應(yīng)用提供直接的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

實(shí)施例一：咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽的合成方法根據(jù)方案一：將銻鎢酸溶于水中加熱至80℃，加naoh調(diào)節(jié)ph到8.9，再加nicl2·h2o，加咪唑溶液，銻鎢酸、咪唑、鎳鹽的物質(zhì)量的摩爾比為1.5：4.9：5.8。再用hcl酸化調(diào)節(jié)ph到4.7，回流8h，過濾，靜置幾天后長(zhǎng)出橘色晶體[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o，其結(jié)構(gòu)見圖6。產(chǎn)率達(dá)到57％。

實(shí)施例二：咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽的表征

化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的x射線衍射圖見圖1；化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的紅外光譜圖見圖2；化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的熱重圖見圖3。

實(shí)施例三：藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

體外實(shí)驗(yàn):mtt法檢測(cè)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用

1、實(shí)驗(yàn)材料

腫瘤細(xì)胞smmc-7721、hepg2(人肝癌細(xì)胞)

a549、h1299(肺癌細(xì)胞)

培養(yǎng)液含10％小牛血清dmem培養(yǎng)液；

2、實(shí)驗(yàn)步驟

常規(guī)復(fù)蘇細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，調(diào)細(xì)胞濃度至5×10⁵個(gè)/ml，每孔加入細(xì)胞3×10³個(gè)懸液200μl于96孔板，37℃，5％co2培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組設(shè)6個(gè)濃度，每個(gè)濃度五個(gè)復(fù)孔，每孔加入藥液10μl，同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照、陰性對(duì)照。37℃5％c02培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48h，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4h每孔加入20μl5mg/mlmtt繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，以dmso溶解mtt沉淀，震蕩混勻后在酶標(biāo)儀490nm處測(cè)od值。根據(jù)所測(cè)od值按下列公式計(jì)算抑制率。同一樣品不同濃度所得的不同抑制率經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理求得半數(shù)抑制濃度ic50抑制率＝((1一實(shí)驗(yàn)組od值/對(duì)照組od值)×100％；

分別做了0μm,25μm,50μm,100μm,200μm,400μm[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o對(duì)以上幾種腫瘤細(xì)胞的抑制活性。通過ic50的值[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o對(duì)hepg2的ic50為42.97±0.024μm，對(duì)smmc-7721的ic50為48.286±0.032μm，對(duì)a549的ic50為29.24±0.041μm,對(duì)h1299的ic50為57±0.026μm，經(jīng)過篩選[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o抑制腫瘤活性最好的細(xì)胞株肺癌細(xì)胞a549，繼續(xù)設(shè)置對(duì)比組用來合成[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的原料銻鎢酸、咪唑、對(duì)肺癌細(xì)胞a549的抑制活性。不同濃度化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的作用下smmc-7721、hepg2(人肝癌細(xì)胞)、a549(肺癌細(xì)胞)、h1299(胃癌細(xì)胞)的ic50的值。

不同濃度化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o的作用下smmc-7721、hepg2(人肝癌細(xì)胞)、a549(肺癌細(xì)胞)、h1299(胃癌細(xì)胞)的存活率見圖4；；不同濃度化合物[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o、銻鎢酸、咪唑的作用下a549(肺癌細(xì)胞)的存活率見圖5。根據(jù)圖5可以得出純銻鎢酸、純咪唑?qū)549(肺癌細(xì)胞)的抑制活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如[na0.7ni5.7(c3h4n2)}3(sbw9o33)2]·28h2o，因此通過自組裝得到的咪唑共價(jià)配位的sandwich型多金屬鎢酸鹽表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性。