本申請(qǐng)是2013年6月28日提交的發(fā)明名稱為“用作ampk的活化劑的噻吩并吡啶酮衍生物”的中國(guó)專利申請(qǐng)201380034638.0的分案申請(qǐng)。
本發(fā)明涉及作為ampk(amp活化蛋白激酶)的直接活化劑的化合物及其在治療由ampk的活化所調(diào)節(jié)的病癥中的用途。例如，本發(fā)明的化合物用于治療糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變。
發(fā)明背景及介紹
ampk已知為細(xì)胞能量?jī)?nèi)穩(wěn)態(tài)的傳感器和調(diào)節(jié)劑。由于升高的amp水平導(dǎo)致的這種激酶的變構(gòu)活化發(fā)生在細(xì)胞能量耗竭狀態(tài)時(shí)。所引起的靶標(biāo)酶的絲氨酸/蘇氨酸磷酸化使得細(xì)胞代謝適應(yīng)低能量狀態(tài)。ampk活化誘導(dǎo)的變化的凈效果是atp消耗過(guò)程的抑制和atp產(chǎn)生途徑的活化，因而再生atp存儲(chǔ)。ampk底物的實(shí)例包括乙酰輔酶a羧化酶(acc)和hmg-coa還原酶。磷酸化以及由此導(dǎo)致的acc抑制同時(shí)降低脂肪酸合成(atp消耗)并增加脂肪酸氧化(atp產(chǎn)生)。磷酸化以及導(dǎo)致的hmg-coa還原酶抑制導(dǎo)致膽固醇合成的降低。ampk的其他底物包括激素敏感性脂肪酶、甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶、丙二酰-coa脫羧酶。
ampk還涉及肝代謝的調(diào)節(jié)。肝產(chǎn)生的升高葡萄糖產(chǎn)生是2型糖尿病(t2d)中空腹高血糖的主要原因。肝中的糖異生由多種酶調(diào)節(jié)，例如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(pepck)和葡萄糖-6-磷酸酶(g6pase)。ampk的活化抑制肝癌細(xì)胞中這些基因的轉(zhuǎn)錄。
ampk活化還下調(diào)作用于一些其他基因表達(dá)的糖異生。這些效果可能是由于其下調(diào)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子如srebp-1c、chrebp或hnf-4α或者直接磷酸化轉(zhuǎn)錄共活化劑如p300或torc2的能力所導(dǎo)致的。
ampk還被視為收縮誘導(dǎo)的骨骼肌葡萄糖攝取的引人注目的候選對(duì)象，因?yàn)槠浠罨殡S著amp升高和磷酸肌酸能量貯存減少。此外，aicar誘導(dǎo)的ampk活化增加葡萄糖攝取，伴隨著葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(glut4)與質(zhì)膜的融合。骨骼肌中α2激酶死亡亞基的過(guò)表達(dá)消除aicar，但是部分削弱收縮刺激的葡萄糖攝取。這些發(fā)現(xiàn)表明，其他途徑介導(dǎo)收縮誘導(dǎo)的葡萄糖攝取，而顯然ampk介導(dǎo)aicar對(duì)葡萄糖攝取的作用。
盡管對(duì)活化ampk的上游刺激物進(jìn)行了廣泛研究，但是缺乏對(duì)ampk介導(dǎo)的葡萄糖攝取的下游底物的研究。最近的報(bào)告揭示，160kda的akt底物(as160)是akt(參與胰島素刺激的葡萄糖攝取)下游的重要底物。除了胰島素以外，收縮和aicar引起的ampk活化與嚙齒動(dòng)物骨骼肌中as160磷酸化增加有關(guān)。在來(lái)自ampka2敲除、g3敲除以及a2-激酶死亡小鼠的骨骼肌中，響應(yīng)aicar治療的as160磷酸化受到削弱或廢除。這確證了這些小鼠的骨骼肌中aicar刺激的葡萄糖攝取削弱的這一發(fā)現(xiàn)。因此，as160看起來(lái)是骨骼肌中ampk介導(dǎo)葡萄糖攝取的下游靶標(biāo)。
結(jié)合起來(lái)看，所有這些代謝作用提供了ampk抑制肝糖異生和脂質(zhì)產(chǎn)生同時(shí)經(jīng)由脂質(zhì)氧化增加降低肝脂質(zhì)沉積，因此改善t2d中的葡萄糖和脂質(zhì)特征的證據(jù)。
最近已經(jīng)清楚，ampk不但參與細(xì)胞能量代謝還參與整個(gè)身體的能量代謝。據(jù)證明，脂肪細(xì)胞來(lái)源的激素瘦素導(dǎo)致ampk的刺激，并因此導(dǎo)致骨骼肌中脂肪酸氧化增加。已經(jīng)證明，脂連蛋白(另一種導(dǎo)致碳水化合物和脂質(zhì)代謝改善的脂肪細(xì)胞來(lái)源的激素)刺激肝和骨骼肌中的ampk。在這些情況下，ampk的活化看起來(lái)不依賴于細(xì)胞amp水平的增加，而是由于一個(gè)或多個(gè)仍然有待鑒定的上游激酶導(dǎo)致的。
基于有關(guān)上文提到的ampk活化的因果關(guān)系的認(rèn)識(shí)，期望巨大的有益作用來(lái)自ampk的體內(nèi)活化。在肝中，糖異生酶的表達(dá)降低會(huì)減少肝葡萄糖輸出，并改善總的葡萄糖穩(wěn)態(tài)，且脂質(zhì)代謝中關(guān)鍵酶的直接抑制和/或表達(dá)減少會(huì)增加葡萄糖攝取和脂肪酸氧化，結(jié)果導(dǎo)致葡萄糖穩(wěn)態(tài)改善，并由于肌細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積的減少而導(dǎo)致胰島素作用改善。最后，能量消耗的增加會(huì)導(dǎo)致體重降低。預(yù)計(jì)在代謝綜合征中這些作用的組合會(huì)顯著減少罹患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在嚙齒動(dòng)物中的幾項(xiàng)研究支持這一假說(shuō)。直到最近，大多數(shù)體內(nèi)研究已依賴于ampk活化劑aicar，其是zmp的細(xì)胞滲透前體。zmp是一種amp的結(jié)構(gòu)類似物，其發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)amp模擬物的作用，并且當(dāng)蓄集到足夠高的水平時(shí)能刺激ampk活性。然而，zmp在其他酶的調(diào)節(jié)中也發(fā)揮amp模擬物的作用，因此不是特異性ampk活化劑。幾項(xiàng)體內(nèi)研究已經(jīng)證明了急性和慢性aicar給藥在嚙齒動(dòng)物肥胖癥和2型糖尿病模型中的有益作用。例如，在肥胖癥zucker(fa/fa)大鼠中7周aicar給藥導(dǎo)致血漿甘油三酯和游離脂肪酸減少、hdl膽固醇增加、和葡萄糖代謝正?；?，如口服葡萄糖耐量試驗(yàn)所評(píng)估的(minokoshiy.etal.“l(fā)eptinstimulatesfatty-acidoxidationbyactivatingamp-activatedproteinkinase”,nature,415,339,-2002))。在ob/ob和db/db小鼠中，8天aicar給藥使血液葡萄糖減少35％(halsetha.e.etal.“acuteandchronictreatmentofob/obanddb/dbmicewithaicardecreasesbloodglucoseconcentrations”,biochem.biophys.res.comm.,294,798(2002))。除了aicar以外，已發(fā)現(xiàn)糖尿病藥物二甲雙胍可以在體內(nèi)以高濃度活化ampk，但是必須要確定其抗糖尿病作用在多大程度上取決于這種活化。如用瘦素和脂連蛋白一樣，二甲雙胍的刺激作用是間接的，經(jīng)由上游激酶的活化。最近，小分子ampk活化劑已有描述。該直接ampk活化劑稱為a-769662，其為噻吩并吡啶酮家族的成員并體內(nèi)誘導(dǎo)血漿葡萄糖和甘油三酯的降低。
除了藥理干預(yù)外，最近幾年已經(jīng)開發(fā)了幾個(gè)轉(zhuǎn)基因小鼠模型，并且初始結(jié)果日漸可用。轉(zhuǎn)基因小鼠骨骼肌中顯性陰性ampk的表達(dá)已經(jīng)證明，aicar對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的刺激的影響依賴于ampk活化，因此可能不是由非特異性zmp作用引起的。在其他組織中的相似研究會(huì)有助于進(jìn)一步確定ampk活化的因果關(guān)系。預(yù)計(jì)ampk的藥理活化會(huì)有益于代謝綜合征，改善葡萄糖和脂質(zhì)代謝并減少體重。為了確定患者患有代謝綜合征，必須滿足下列5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中的3個(gè)：
1)升高的血壓(高于130/85mmhg)，
2)高于110mg/dl的空腹血糖，
3)高于40”(男性)或35”(女性)腰圍的腹部肥胖，以及
由以下所限定的血脂變化
4)高于150mg/dl的甘油三酯增加，或
5)低于40mg/dl(男性)或50mg/dl(女性)的hdl膽固醇降低。
因此，可以通過(guò)在符合患有代謝綜合征的條件的患者中活化ampk來(lái)實(shí)現(xiàn)的組合作用會(huì)增加這一目的的益處。
已經(jīng)證明，ampk的刺激可刺激解偶聯(lián)蛋白3(ucp3)骨骼肌的表達(dá)，并因此可能成為預(yù)防活性氧損害的方式。已經(jīng)證明內(nèi)皮no合酶(enos)通過(guò)ampk介導(dǎo)的磷酸化被活化，因此，ampk活化可用于改善局部循環(huán)系統(tǒng)。
ampk具有調(diào)節(jié)mtor途徑的作用。mtor是絲氨酸/蘇氨酸激酶，并且是蛋白合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白。為了抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和保護(hù)細(xì)胞免于葡萄糖饑餓所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，ampk使thr-1227和ser-1345處的tsc2磷酸化，從而增加tsc1和tsc-2復(fù)合物的活性以抑制m-tor。此外，ampk通過(guò)對(duì)thr-2446的磷酸化抑制mtor作用。因此，ampk間接和直接地抑制mtor的活性，以限制蛋白合成。ampk也可以是許多具有pi3k-akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的組成型活化的癌癥的治療靶標(biāo)。通過(guò)aicar治療各種癌癥細(xì)胞系在體外和體內(nèi)研究中都使細(xì)胞增殖減輕。兩個(gè)報(bào)告將二甲雙胍治療與糖尿病患者的較低癌癥風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來(lái)。
已經(jīng)證明，aicar對(duì)ampk的活化減少生脂酶fas和acc的表達(dá)，導(dǎo)致抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖。許多癌細(xì)胞都表現(xiàn)出與高水平的fas關(guān)聯(lián)的重新合成脂肪酸的速率顯著增加。fas的抑制抑制癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。因此，ampk活化和fas活性抑制是癌癥藥理治療的清楚靶標(biāo)。
在一些公開中已有描述，aicar作為ampk活化劑發(fā)揮抗炎作用。已經(jīng)觀察到，aicar使促炎細(xì)胞因子和介質(zhì)的產(chǎn)生減少。通過(guò)限制白血病侵潤(rùn)穿過(guò)血腦屏障(bbb)，aicar在大鼠模型中和在體外使eae進(jìn)展減慢，并且最近表明，ampk活化劑發(fā)揮抗炎劑的作用并且可以在克拉伯病/twitcher病(遺傳神經(jīng)病癥)中保持治療潛力。
現(xiàn)有技術(shù)
us5,602,144公開了用于治療腦缺血或精神分裂癥的式
us7,119,205公開了作為ampk活化劑用于治療糖尿病、肥胖的式
wo2007/019914公開了作為ampk活化劑用于治療糖尿病、肥胖的式
wo2009/124636公開了作為ampk活化劑用于治療糖尿病、肥胖的式
wo2009/135580公開了作為ampk活化劑用于治療糖尿病、肥胖的式
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明公開了式(1)的化合物：
其中
r1表示氫原子或鹵素原子；
r2表示未被取代或者被一個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4、5、6或7個(gè))選自以下的基團(tuán)取代的茚滿基或四氫化萘基(tetralinyl)：鹵素原子、烷基、羥基、烷氧基、氨基、單-或二-烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺、氰基、烷基磺?；腿谆?/p>
r3表示未被取代或者被一個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4或5個(gè))選自以下的原子或基團(tuán)取代的芳基或雜芳基：鹵素原子、烷基、羥基、烷氧基、芳烷氧基、氨基、單-或二-烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基。
式(i)的化合物還包括其幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、差向異構(gòu)體、對(duì)映體、立體異構(gòu)體、非對(duì)映體、外消旋物、藥學(xué)可接受的鹽、前藥、溶劑合物及它們所有比例的混合物。
式(1)的化合物為直接ampk活化劑。
式(1)的化合物可用于治療ampk活化對(duì)個(gè)體健康具有積極效應(yīng)的疾病。適合用式(1)的化合物治療的疾病可為糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變。
除非明確另外指出，根據(jù)本發(fā)明和本文所用的以下術(shù)語(yǔ)具有以下含義。
術(shù)語(yǔ)“烷基”指具有1-5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的飽和鏈，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基或叔丁基。優(yōu)選地，烷基為具有1-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的飽和鏈，例如甲基、乙基、正丙基或異丙基。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指c6-c18芳族基團(tuán)，例如苯基或萘基，其任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的原子或基團(tuán)取代：鹵素原子、烷基、羥基(oh)、烷氧基、氨基(nh2)、單-或二-烷基氨基、羧基(cooh)、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺(conh2)、氰基(cn)、烷基磺?；腿谆?cf3)。更特別地，芳基可以未被取代，或者被以下基團(tuán)取代：氟、氯、溴原子、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、甲酰胺、二甲基氨基羰基、甲基氨基羰基、氰基、甲基磺?；蛉谆?/p>
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”(或“烷氧基基團(tuán)”)指上文定義的烷基，其通過(guò)氧原子連接至分子的剩余部分。更特別地，烷氧基可包括甲氧基和乙氧基。
術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”指上文定義的烷基，其通過(guò)氮原子連接至分子的剩余部分。烷基氨基可包括二甲基氨基和二乙基氨基。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基羰基”指上文定義的烷氧基，其通過(guò)羰基連接至分子的剩余部分。
術(shù)語(yǔ)“烷基氨基羰基”指上文定義的烷基氨基，其通過(guò)羰基連接至分子的剩余部分。
術(shù)語(yǔ)“烷基磺?；敝干衔亩x的烷基，其通過(guò)so2基團(tuán)連接至分子的剩余部分。烷基磺?；砂谆酋；鸵一酋；?/p>
術(shù)語(yǔ)“鹵素原子”指選自氟、氯、溴和碘原子的原子。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指c5-c18芳族基團(tuán)，其包含一個(gè)或多個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子。雜芳基可包括吡啶、吡嗪、嘧啶、噻吩、呋喃、異噁唑、異噻唑、吡唑、咪唑。此類基團(tuán)可以被選自以下的原子或基團(tuán)取代：鹵素原子、烷基、羥基(oh)、烷氧基、氨基(nh2)、單-或二-烷基氨基、羧基(cooh)、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺(conh2)、氰基(cn)、烷基磺?；腿谆?cf3)。更特別地，雜芳基可以未被取代，或者被以下基團(tuán)取代：氟、氯、溴原子、羥基、甲氧基、乙氧基、氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲基、乙基、正丙基、正丁基、異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、甲酰胺、二甲基氨基羰基、甲基氨基羰基、氰基、甲基磺?；蛉谆?。
本發(fā)明的化合物的“溶劑合物”表示由于其相互的吸引力而使得惰性溶劑分子加和(adduction)到化合物上。溶劑合物例如為單-或二水合物或者醇化物。
本發(fā)明的一個(gè)特定目的是式(1)的化合物，其中r1表示鹵素原子，特別是氯原子。
本發(fā)明的另一特定目的是式(1)的化合物，其中r2表示未被取代或者被一個(gè)或多個(gè)(例如，2、3、4、5、6或7個(gè))選自以下的基團(tuán)取代的四氫化萘基：鹵素原子、烷基、羥基、烷氧基、氨基、單-或二-烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺、氰基、烷基磺酰基和三氟甲基。
本發(fā)明的另一特定目的是式(1)的化合物，其中r2表示未被取代或者被一個(gè)或多個(gè)(例如，2、3、4、5或6個(gè))選自以下的基團(tuán)取代的茚滿基：鹵素原子、烷基、羥基、烷氧基、氨基、單-或二-烷基氨基、羧基、烷氧基羰基、單-或二-烷基氨基羰基、甲酰胺、氰基、烷基磺?；腿谆?/p>
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明為式(1)的化合物，其中r2表示被1或2個(gè)取代基取代的茚滿基或四氫化萘基。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明為式(1)的化合物，其中r2表示未被取代或者被羥基取代的茚滿基或四氫化萘基。
根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物為式(1)的化合物，其中r3表示芳基。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明為式(1)的化合物，其中r3表示芳基或雜芳基、優(yōu)選苯基或吡啶基，其未被取代或者被一個(gè)或多個(gè)(例如，2、3或4個(gè))選自以下的原子或基團(tuán)取代：鹵素原子、烷基、烷氧基和氰基。
本發(fā)明的另一特定目的是式(1)的化合物，其中所述式(1)的化合物為鹽的形式，優(yōu)選鈉鹽或鉀鹽。特別地，式(1)的化合物為單-、二、或三-鈉鹽或鉀鹽的形式。
上述特定實(shí)施方案的任意組合(任意合適的時(shí)候)對(duì)應(yīng)本發(fā)明化合物的優(yōu)選實(shí)施方案。
本發(fā)明還涉及上文所述的式(1)的化合物及其衍生物的結(jié)晶形式和多晶型形式。
本發(fā)明不僅涉及這些化合物的外消旋混合物，還涉及其各種立體異構(gòu)體和/或非對(duì)映體以及這些物質(zhì)的所有比例的混合物。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“前藥”指當(dāng)給藥至生物系統(tǒng)時(shí)由于一種或多種自發(fā)的化學(xué)反應(yīng)、一種或多種酶催化化學(xué)反應(yīng)和/或一種或多種代謝化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生“藥物”物質(zhì)(生物學(xué)活性化合物)的任意化合物。其還包括本發(fā)明的化合物的生物可降解的聚合物衍生物，例如如int.j.pharm.115,61-67(1995)所述。
一些優(yōu)選的式(1)的化合物如下：
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羥基-3-茚滿-5-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-(3-甲氧基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-(4-甲氧基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
3-(2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-6-氧代-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-基)芐腈
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-(3-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羥基-3-(4-羥基茚滿-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(3-氟苯基)-4-羥基-3-(4-羥基茚滿-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-(3-吡啶基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-(4-羥基茚滿-5-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(2-氟苯基)-4-羥基-3-(4-羥基茚滿-5-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
3-(2-氯-4-羥基-6-氧代-3-四氫化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-基)芐腈
2-氯-4-羥基-5-(3-吡啶基)-3-四氫化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-3-(5-氧四氫化萘-6-基)-5-苯基噻吩并[2,3-b]吡啶-4,6-二醇三鈉(trisodium2-chloro-3-(5-oxidotetralin-6-yl)-5-phenyl-thieno[2,3-b]pyridine-4,6-diolate)
2-氯-4-羥基-5-苯基-3-四氫化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(4-氟苯基)-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-3-(5-氧四氫化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-4-醇二鈉
2-氯-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-5-(3-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-5-(4-甲基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-5-(3-氟苯基)-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
2-氯-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-4-醇鈉
2-氯-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-4-醇鉀
式(1)的化合物的制備
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的許多方法制備，包括但不限于下文所述的那些方法，或者通過(guò)應(yīng)用有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)改進(jìn)這些方法而制備。與本發(fā)明相關(guān)而公開的所有方法以任意規(guī)模進(jìn)行，包括毫克、克、若干克(multigram)、千克、若干千克(multikilogram)或商業(yè)工業(yè)規(guī)模。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的化合物可包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱取代的碳原子，并且可以旋光形式或外消旋形式分離。因此，除非特別指明特定立體化學(xué)或異構(gòu)形式，意圖包括某一結(jié)構(gòu)的所有手性形式、非對(duì)映形式、外消旋形式以及所有幾何異構(gòu)形式。本領(lǐng)域中熟知如何制備此類旋光形式。例如，立體異構(gòu)體的混合物可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離，包括但不限于外消旋形式拆分、正向、反向和手性色譜、優(yōu)先成鹽(preferentialsaltformation)、重結(jié)晶等，或者通過(guò)從活性原料手性合成，或者通過(guò)目標(biāo)中心的控制性手性合成(deliberatechiralsynthesis)。
在下文所述的反應(yīng)中，可能需要保護(hù)終產(chǎn)物中期望的反應(yīng)性官能團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基，以避免它們不期望地參與反應(yīng)。可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐使用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)，例如參見t.w.greene和p.g.m.wuts的protectivegroupsinorganicchemistry,johnwileyandsons,1991；j.f.w.mcomie的protectivegroupsinorganicchemistry,plenumpress,1973。
一些反應(yīng)可以在堿的存在下進(jìn)行。對(duì)于該反應(yīng)中所用的堿的性質(zhì)沒有特別的限制，并且可以等同地使用該類型的反應(yīng)中常規(guī)使用的任意堿，只要其對(duì)分子的其他部分沒有不利影響。合適的堿的實(shí)例包括：氫氧化鈉、碳酸鉀、叔丁醇鉀(potassiumtertiobutylate)、叔戊醇鈉(sodiumtertioamylate)、三乙胺、六甲基二硅氮烷鉀(hexamethyldisilazide)、堿金屬氫化物(如氫化鈉和氫化鉀)、烷基鋰化合物(如甲基鋰和丁基鋰)以及堿金屬醇鹽(如甲醇鈉和乙醇鈉)。
通常，反應(yīng)在合適的溶劑中進(jìn)行?？梢允褂酶鞣N溶劑，只要其對(duì)反應(yīng)或涉及的試劑沒有不利影響。合適的溶劑的實(shí)例包括：烴類，其可以是芳族、脂族或環(huán)脂族烴，如己烷、環(huán)己烷、苯、甲苯和二甲苯；酰胺類，如二甲基甲酰胺；醇類，如乙醇和甲醇；以及醚類，如乙醚、二噁烷和四氫呋喃。
反應(yīng)可以在大范圍的溫度下進(jìn)行。通常，我們發(fā)現(xiàn)適宜在0℃-150℃(更優(yōu)選約室溫至100℃)的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)所需的時(shí)間可以變化較大，這取決于許多因素，特別是反應(yīng)溫度和試劑的性質(zhì)。然而，只要反應(yīng)在上文所示的優(yōu)選條件下進(jìn)行，3小時(shí)至20小時(shí)的時(shí)間段通常是足夠的。
由此制備的化合物可以通過(guò)常規(guī)方式從反應(yīng)混合物回收。例如，可以通過(guò)從反應(yīng)混合物蒸干溶劑來(lái)回收化合物，或者若需要，可以在從反應(yīng)混合物蒸干溶劑后，將殘留物倒入水中，然后用與水不混溶的有機(jī)溶劑萃取，并從萃取物蒸干溶劑。另外，如需要，可以將產(chǎn)物通過(guò)各種熟知的技術(shù)進(jìn)一步純化，例如重結(jié)晶、再沉淀或各種色譜技術(shù)，特別是柱色譜或制備薄層色譜。
式(1)的化合物可以由式(2)的化合物和堿(例如但不限于六甲基二硅氮烷鉀或氫化鈉)獲得
其中r1、r2和r3具有上文所述的含義，
其中r4為甲基或乙基。
式(2)的化合物可以由式(3)的化合物與式(4)的化合物之間的反應(yīng)獲得：
其中r1、r2、r3和r4具有上文所述的含義，
其中x為oh或鹵素原子(例如cl或br)。
當(dāng)x為oh時(shí)，需要碳二亞胺偶聯(lián)劑，例如但不限于hbtu(詳細(xì)描述參見以下鏈接：http://chemicalland21.com/lifescience/phar/hbtu.htm)。
式(3)的化合物可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)期刊heterocyclechemistry,第36卷,第333頁(yè),1999中所述的gewald反應(yīng)容易地制備。
藥學(xué)可接受的鹽和其他形式
本發(fā)明的化合物可以它們最終的非鹽形式使用。在另一方面，本發(fā)明還涵蓋使用這些化合物的藥學(xué)可接受的鹽的形式，其可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法衍生自各種有機(jī)和無(wú)機(jī)酸和堿。式(1)的化合物的藥學(xué)可接受的鹽通常通過(guò)常規(guī)方法制備。如果式(1)的化合物包含羧基，則其合適的鹽之一可以通過(guò)使該化合物與合適的堿反應(yīng)以獲得相應(yīng)的堿加成鹽而形成。這樣的堿例如堿金屬氫氧化物，包括氫氧化鉀、氫氧化鈉和氫氧化鋰；堿土金屬氫氧化物，例如氫氧化鋇和氫氧化鈣；堿金屬醇鹽，例如乙醇鉀和丙醇鈉；以及各種有機(jī)堿，例如哌啶、二乙醇胺和n-甲基葡糖胺。本發(fā)明同樣涵蓋式(1)的化合物的鋁鹽。在一些式(1)的化合物的情況下，酸加成鹽可以通過(guò)用藥學(xué)可接受的有機(jī)和無(wú)機(jī)酸(例如氫鹵酸，如鹽酸、氫溴酸或氫碘酸)、其他無(wú)機(jī)酸及其相應(yīng)的鹽(例如硫酸鹽、硝酸鹽或磷酸鹽等)和烷基磺酸鹽及單芳基磺酸鹽(例如乙磺酸鹽、甲苯磺酸鹽和苯磺酸鹽)以及其他有機(jī)酸及其相應(yīng)的鹽(例如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等)處理這些化合物而形成。因此，式(1)的化合物的藥學(xué)可接受的酸加成鹽包括但不限于以下鹽：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、精氨酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽(besylate)、硫酸氫鹽、亞硫酸氫鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、辛酸鹽、氯化物、氯苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、磷酸二氫鹽、二硝基苯甲酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、半乳糖二酸鹽(galacterate，來(lái)自粘酸)、半乳糖醛酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、半琥珀酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、異丁酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、偏磷酸鹽、甲磺酸鹽、甲基苯甲酸鹽、磷酸一氫鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、油酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過(guò)硫酸鹽、苯乙酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、鄰苯二甲酸鹽。
而且，本發(fā)明的化合物的堿鹽包括但不限于鋁、銨、鈣、銅、鐵(iii)、鐵(ii)、鋰、鎂、錳(iii)、錳(ii)、鉀、鈉和鋅鹽。在上述鹽中，優(yōu)選銨鹽；堿金屬鹽鈉和鉀鹽；以及堿土金屬鹽鈣鹽和鎂鹽。源自藥學(xué)可接受有機(jī)無(wú)毒堿的式(1)的化合物的鹽包括但不限于以下的鹽：伯胺、仲胺和叔胺；取代的胺，還包括天然存在的取代的胺；環(huán)狀胺；以及堿性離子交換樹脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、氯普魯卡因、膽堿、n,n'-二芐基乙二胺(芐星青霉素)、二環(huán)己基胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、氨基葡萄糖(glucosamine)、組氨酸、海巴明(hydrabamine)、異丙胺、利多卡因、賴氨酸、葡甲胺、n-甲基-d-葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羥甲基)甲胺(氨丁三醇)。
包含堿性含氮基團(tuán)的本發(fā)明的化合物可以例如利用諸如以下的物質(zhì)季銨化：(c1-c4)烷基鹵化物，如甲基、乙基、異丙基和叔丁基氯、溴和碘；二(c1-c4)烷基硫酸酯，如二甲基、二乙基和二戊基硫酸酯；(c10-c18)烷基鹵化物，如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆蔻基和十八烷基氯、溴和碘；以及芳基(c1-c4)烷基鹵化物，如芐基氯和苯乙基溴。本發(fā)明的水溶性和油溶性化合物均可以利用這樣的鹽制備。
優(yōu)選的上述藥物鹽包括但不限于乙酸鹽、三氟乙酸鹽、苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、半琥珀酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、羥乙基磺酸鹽、扁桃酸鹽、葡甲胺、硝酸鹽、油酸鹽、膦酸鹽、新戊酸鹽、磷酸鈉、硬脂酸鹽、硫酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、硫代蘋果酸鹽、甲苯磺酸鹽和氨丁三醇。
式(1)的堿性化合物的酸加成鹽可以通過(guò)以常規(guī)方式使游離堿形式與足量的期望的酸接觸使得形成鹽來(lái)制備。游離堿可以通過(guò)以常規(guī)方式使鹽形式與堿接觸并分離游離堿而再生。游離堿形式與其對(duì)應(yīng)的鹽形式在某些物理性質(zhì)方面有所不同，例如在極性溶劑中的溶解性，但是對(duì)于本發(fā)明的目的，鹽對(duì)應(yīng)其各自的游離堿形式。
如所述的，式(1)的化合物的藥學(xué)可接受的堿加成鹽與金屬或胺如堿金屬和堿土金屬或者有機(jī)胺形成。優(yōu)選的金屬有鈉、鉀、鎂和鈣。優(yōu)選的有機(jī)胺有n,n’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、n-甲基-d-葡糖胺和普魯卡因。
本發(fā)明的酸性化合物的堿加成鹽通過(guò)以常規(guī)方式使游離酸形式與足量的期望的堿接觸使得形成鹽來(lái)制備。游離酸可以通過(guò)以常規(guī)方式使鹽形式與酸接觸并分離游離酸來(lái)再生。游離酸形式與其對(duì)應(yīng)的鹽形式在某些物理性質(zhì)方面有所不同，例如在極性溶劑中的溶解性，但是對(duì)于本發(fā)明的目的，鹽對(duì)應(yīng)其各自的游離酸形式。
如果本發(fā)明的化合物包含多于一個(gè)能夠形成該類型的藥學(xué)可接受的鹽的基團(tuán)，本發(fā)明還涵蓋多價(jià)鹽(multiplesalt)。典型的多價(jià)鹽形式包括但不限于例如酒石酸氫鹽、雙乙酸鹽、富馬酸氫鹽、二葡甲胺(dimeglumine)、二磷酸鹽、二鈉鹽和三鹽酸鹽。
對(duì)于上文所述，可以看出，本發(fā)明中的表述“藥學(xué)可接受的鹽”表示包含其鹽之一的形式的式(1)的化合物的活性成分，特別是在與所述活性成分的游離形式或以前所用的活性成分的任意其他鹽形式相比，該鹽形式賦予所述活性成分改善的藥代動(dòng)力學(xué)特性的情況下?；钚猿煞值乃帉W(xué)可接受的鹽形式也可以首次提供具有以前不具有的期望的藥代動(dòng)力學(xué)特性的該活性成分，并且對(duì)于其在體內(nèi)的療效而言，甚至可以對(duì)該活性成分的藥效學(xué)具有積極的影響。
本發(fā)明的式(1)的化合物可能由于其分子結(jié)構(gòu)而是手性的，因此可以各種對(duì)映體形式存在。因此，它們可以外消旋或旋光形式存在。
由于本發(fā)明的化合物的外消旋物或立體異構(gòu)體的藥學(xué)活性可以不同，因此可以期望使用對(duì)映體。在這些情況下，終產(chǎn)物或者甚至中間體可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學(xué)或物理方式分離為對(duì)映體化合物，或者甚至可以在合成中直接使用。
在外消旋胺的情況下，非對(duì)映體通過(guò)與旋光性拆分劑反應(yīng)從混合物形成。合適的拆分劑的實(shí)例有旋光性酸，例如酒石酸、二乙?；剖帷⒍郊柞；剖帷⒈馓宜?、蘋果酸、乳酸、合適地n-保護(hù)的氨基酸(例如，n-苯甲?；彼峄騨-苯磺?；彼?、或者各種旋光性樟腦磺酸的r和s形式。借助于旋光性拆分劑(例如，二硝基苯甲?；交拾彼?、三乙酸纖維素或碳水化合物的其他衍生物或者固定在硅膠上的手性衍生化的甲基丙烯酸聚合物)進(jìn)行色譜對(duì)映體拆分也是有利的。用于此目的的合適的洗脫劑為含水或含醇溶劑混合物，例如己烷/異丙醇/乙腈(例如以82:15:3的比例)。
對(duì)于外消旋物的手性拆分，可以使用以下酸和胺：
作為示例，可以使用以下手性酸：(+)-d-二-o-苯甲?；剖?、(-)-l-二-o-苯甲酰基酒石酸、(-)-l-二-o,o'-對(duì)甲苯甲?；?l-酒石酸、(+)-d-二-o,o'-對(duì)甲苯甲酰基-l-酒石酸、(r)-(+)-蘋果酸、(s)-(-)-蘋果酸、(+)-樟腦酸、(-)-樟腦酸、r-(-)1,1'-聯(lián)萘-2,2'-二基膦酸氫鹽(r-(-)1,1'-binaphtalen-2,2'-diylhydrogenophosphonic)、(+)-莰烷酸、(-)-莰烷酸、(s)-(+)-2-苯基丙酸、(r)-(+)-2-苯基丙酸、d-(-)-扁桃酸、l-(+)-扁桃酸、d-酒石酸、l-酒石酸，或者它們的任意混合物。
作為示例，可以使用以下手性胺：奎寧、馬錢子堿、(s)-1-(芐氧基甲基)丙胺(iii)、(-)-麻黃堿、(4s,5r)-(+)-1,2,2,3,4-四甲基-5-苯基-1,3-噁唑烷、(r)-1-苯基-2-對(duì)甲苯基乙胺、(s)-苯基甘氨醇((s)-phenylglycinol)、(-)-n-甲基麻黃堿、(+)-(2s,3r)-4-二甲基氨基-3-甲基-1,2-二苯基-2-丁醇、(s)-苯基甘氨醇、(s)-α-甲基芐胺，或者它們的任意混合物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物，其用于治療個(gè)體的方法，特別是治療糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥或高膽固醇血癥的方法。
本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)“癌癥”包括具有實(shí)體瘤或液體瘤(liquidtumor)的癌癥。特別地，其表示膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、白血病、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌，特別是肝癌、胰腺癌、頭頸癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤和黑素瘤。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含至少一種本發(fā)明的化合物以及藥學(xué)可接受的載劑(support)。
本發(fā)明的又一目的是用于治療由ampk的活化調(diào)節(jié)的疾病(更特別是糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變)的方法，所述方法包括向有此需要的個(gè)體給藥有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物在制備特別是用于治療以下疾病的藥物組合物中的用途：糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)任何常規(guī)方法制備。本發(fā)明的化合物可以與至少一種固體、液體和/或半液體賦形劑或輔劑一起轉(zhuǎn)化為合適的劑型，并且視需要與一種或多種其他活性成分組合。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的載劑”指從藥理學(xué)/毒理學(xué)觀點(diǎn)而言并且從制備藥物化學(xué)家的關(guān)于組合物、制劑、穩(wěn)定性、個(gè)體接受性和生物利用度的物理/化學(xué)觀點(diǎn)而言，對(duì)于個(gè)體可接受的載體、輔劑或賦形劑。
術(shù)語(yǔ)“載體”、“輔劑”或“賦形劑”指自身不是治療劑的任意物質(zhì)，其被加入藥物組合物中用作載體、輔劑和/或稀釋劑以向個(gè)體遞送自治療劑，從而改善其處理或存儲(chǔ)性質(zhì)，或者允許或促進(jìn)將組合物的劑量單位形成分離的物品。本發(fā)明的藥物組合物(單獨(dú)或組合地)可以包含一種或多種選自分散劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等的物質(zhì)或媒介物。
術(shù)語(yǔ)“治療(treatment)”或“治療(treating)”指可以潛在地由ampk的活化調(diào)節(jié)的病癥(特別是糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變)的治療(therapy)、防止(prevention)和預(yù)防(prophylaxis)。
治療涉及向患有聲稱要治療、延緩或延遲進(jìn)展的病癥的個(gè)體給藥化合物或藥物組合物，從而改善患者的疾病狀況。還可以向有發(fā)生病癥(特別是糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變)的風(fēng)險(xiǎn)的健康個(gè)體給予治療。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”表示哺乳動(dòng)物，并且更特別地表示人。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療的個(gè)體可以合適地基于與疾病相關(guān)的幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇，例如之前的藥物治療、相關(guān)的病理、基因型、對(duì)風(fēng)險(xiǎn)因素的暴露、病毒感染以及可以通過(guò)免疫學(xué)、生物化學(xué)、酶學(xué)、化學(xué)或核酸檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)的任意其他相關(guān)生物標(biāo)記。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述個(gè)體是超重患者(特別是超重的前驅(qū)糖尿病患者)或者患有致粥樣硬化血脂異常的肥胖患者。實(shí)際上，這些患者具有發(fā)生可以潛在地被ampk的活化調(diào)節(jié)的疾病(特別是糖尿病、代謝綜合征、肥胖、肝臟疾病、脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝纖維化、血脂異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、炎癥、癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病變)的風(fēng)險(xiǎn)。
藥物組合物可以劑量單位的形式給藥，每劑量單位包含預(yù)定量的活性成分。這樣的單位可以包含例如0.5mg至1g、優(yōu)選1mg至700mg、特別優(yōu)選5mg至100mg本發(fā)明的化合物，這取決于要治療的疾病狀況、給藥方法以及患者的年齡、體重和疾病狀況?；蛘咚幬锝M合物可以多個(gè)劑量單位的形式給藥，每劑量單位包含預(yù)定量的活性成分。如上文所述，優(yōu)選的劑量單位制劑是那些包含日劑量或部分劑量(part-dose)或者其相應(yīng)部分的活性成分的制劑。而且，這種類型的藥物組合物可以利用藥學(xué)領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行制備。
本發(fā)明的化合物與藥學(xué)可接受的載劑之間的比例可為大范圍。特別地，這一比例可為5/95(w/w)至95/5(w/w)，優(yōu)選10/90(w/w)至90/10(w/w)，特別是10/90(w/w)至50/50(w/w)。
藥物組合物可適于經(jīng)由任何期望的合適方法給藥，例如通過(guò)口服(包括含服或舌下)、直腸、鼻、局部(包括含服、舌下或經(jīng)皮)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))方法。此類組合物可以利用藥學(xué)領(lǐng)域已知的所有方法制備，例如使所述活性成分與一種或多種賦形劑或一種或多種輔劑組合。
適于口服給藥的藥物組合物可以作為單獨(dú)的單位給藥，例如膠囊劑或片劑；散劑或顆粒劑；在水性或非水性液體中的溶液劑或混懸劑；可食用泡沫劑或泡沫食品；或者乳劑，例如水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。
因此，例如，在以片劑或膠囊劑形式口服給藥的情況下，活性成分可以與口服、無(wú)毒性的且藥學(xué)可接受的惰性賦形劑如乙醇、甘油、水等組合。散劑可通過(guò)以下方式制備：將化合物粉碎成合適的精細(xì)大小，并將其與以相似方式粉碎的藥物賦形劑例如可食用碳水化合物如淀粉或甘露醇混合。同樣也可以存在調(diào)味劑、防腐劑、分散劑以及染料。
膠囊劑通過(guò)如上文所述制備粉狀混合物并將其填充于成型的明膠殼中來(lái)制備。在填充操作前，可以將助流劑和潤(rùn)滑劑，如高分散硅酸、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體形式的聚乙二醇添加到粉狀混合物中。同樣，可以添加崩解劑或增溶劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，以便改善服用膠囊劑后藥物的利用度。
另外，如果期望或需要，同樣可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑和崩解劑以及染料摻入混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制備的甜味劑、天然橡膠和合成橡膠例如阿拉伯樹膠、黃蓍膠或藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。這些劑型中所用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。片劑例如通過(guò)以下方式配制：制備粉狀混合物，將所述混合物制?；蚋蓧?、添加潤(rùn)滑劑和崩解劑，并壓制全部混合物以產(chǎn)生片劑。粉狀混合物通過(guò)以下方式制備：將以合適的方式粉碎的化合物與以下混合：上文所述的稀釋劑或堿，和任選存在的粘合劑(例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮)、溶出延緩劑(如石蠟)、吸收加速劑(如季鹽)和/或吸收劑(如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣)。粉狀混合物可以通過(guò)以下方式制粒：將其用粘合劑(如糖漿、淀粉糊、acadia膠漿劑或者纖維素或聚合物材料的溶液)濕潤(rùn)，并將其擠壓通過(guò)篩子。作為制粒的可選方案，可以將粉狀混合物通過(guò)壓片機(jī)，從而產(chǎn)生形狀不均勻的塊團(tuán)，打碎所述塊團(tuán)以形成顆粒。可以通過(guò)添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油使顆粒潤(rùn)滑，以便防止粘于片劑鑄模上。然后壓制潤(rùn)滑的混合物，以產(chǎn)生片劑。也可以將本發(fā)明的化合物與自由流動(dòng)的惰性賦形劑組合，然后直接壓制產(chǎn)生片劑，而無(wú)需進(jìn)行所述制?；蚋蓧翰襟E?？梢源嬖谟勺夏z密封層、糖或聚合物材料層和光澤的蠟層組成的透明或不透明的保護(hù)層?？上蜻@些包衣添加染料，以便能區(qū)分不同的劑量單位。
可以制備劑量單位形式的口服液體，如溶液劑、糖漿劑和酏劑，以便給定的量包含預(yù)定量的化合物。糖漿劑可以通過(guò)將活性成分溶于具有合適的調(diào)味劑的水溶液中來(lái)制備，而酏劑利用無(wú)毒的醇媒介物來(lái)制備?；鞈覄┛梢酝ㄟ^(guò)使化合物分散于無(wú)毒的媒介物中來(lái)制備。同樣，可以添加增溶劑和乳化劑(如乙氧基化異硬脂醇和山梨醇聚氧乙烯醚)，防腐劑，風(fēng)味添加劑，(如薄荷油或天然甜味劑或糖精，或其他人工甜味劑)等。
若期望，可以將用于口服給藥的劑量單位制劑封裝于微囊中。制劑也可以使釋放延長(zhǎng)或延遲的方式制備，如通過(guò)將微粒材料包被或包埋于聚合物、蠟等中。
本發(fā)明的化合物可以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的形式給藥，如小單室脂質(zhì)體、大單室脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可以由多種磷脂形成，如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿。
本發(fā)明的化合物也可以使用與所述化合物分子偶聯(lián)的作為個(gè)體載體的單克隆抗體遞送。所述化合物也可以偶聯(lián)于作為靶向藥物載體的可溶性聚合物。此類聚合物可以包括被棕櫚酰基取代的聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羥基乙基天冬酰胺苯酚或聚氧化乙烯聚賴氨酸。所述化合物還可以偶聯(lián)于適合實(shí)現(xiàn)藥物的控釋的一類生物可降解的聚合物，如聚乳酸、聚ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二羥基吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或兩性嵌段共聚物。
適于經(jīng)皮給藥的藥物組合物可以作為獨(dú)立的膏藥給藥，用于與受者表皮的長(zhǎng)時(shí)間緊密接觸。因此，例如，活性成分可以通過(guò)pharmaceuticalresearch3,318(1986)一般術(shù)語(yǔ)中所述的離子透入法由膏藥遞送。
適于局部給藥的藥物組合物可以配制成軟膏劑、乳膏劑、混懸劑、洗劑、散劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑(oil)。
為了治療眼或其他外部組織例如口和皮膚，組合物優(yōu)選作為局部軟膏劑或乳膏劑施用。在配制為提供軟膏劑的情況下，活性成分可以與石蠟或水混溶的乳膏基質(zhì)一起使用。或者，可將活性成分與水包油乳膏劑基質(zhì)或油包水基質(zhì)一起配制，以提供乳膏劑。
適于局部施用于眼部的藥物組合物包括滴眼劑，其中活性成分溶解于或懸浮于合適的載體中，特別是水性溶劑中。
適于在口中局部施用的藥物組合物包括錠劑、軟錠劑(pastille)以及漱口劑。
適于直腸給藥的藥物組合物可以栓劑或灌腸劑的形式給藥。
其中載體物質(zhì)是固體的適于鼻腔粘膜給藥的藥物組合物包含粒徑為例如20-500微米的粗粉末，其以鼻吸的方式給藥，即通過(guò)鼻道從所持的接近鼻子的含有所述粉末的容器中快速吸入。以具有作為載體物質(zhì)的液體的鼻腔噴霧劑或鼻滴劑形式給藥的合適的制劑包括水或油中的活性成分溶液。
適于通過(guò)吸入給藥的藥物制劑包括可以通過(guò)具有氣霧劑、噴霧器或吹入器的各種加壓分配器產(chǎn)生的精細(xì)的塵狀或霧狀微粒。
適于陰道給藥的藥物組合物可以作為陰道栓劑、填塞劑(tampon)、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑給藥。
適于胃腸外給藥的藥物組合物包括水性和非水性無(wú)菌注射液，其包含抗氧化劑、緩沖劑、細(xì)菌抑制劑和溶質(zhì)(通過(guò)其使得制劑與待治療的受者的血液等滲)；和水性和非水性無(wú)菌混懸劑，其可以包含懸浮介質(zhì)和增稠劑。制劑可以在諸如密封的安瓿和小瓶的單次劑量或多次劑量容器中給藥，并以冷凍干燥(凍干)的狀態(tài)儲(chǔ)存，以便在使用前只需直接添加無(wú)菌載體液體，如注射用水。
根據(jù)處方制備的注射溶液劑和混懸劑可以由無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。
不言而喻，除了上文提別提到的組分外，組合物也可以包含在本領(lǐng)域中對(duì)于特定類型的制劑來(lái)說(shuō)是通常的其他物質(zhì)；因此，例如適于口服給藥的制劑可以包含調(diào)味劑。
本發(fā)明化合物的治療有效量取決于很多因素，包括但不限于人或動(dòng)物的年齡和體重、需要治療的準(zhǔn)確病癥及其的嚴(yán)重性、制劑的性質(zhì)以及給藥方法，并且其最終由治療醫(yī)師或獸醫(yī)最終確定。但是本發(fā)明的化合物的有效量通常為每天0.1-100mg/kg受者(哺乳動(dòng)物)的體重，并且特別典型的是每天1-10mg/kg體重。因此，體重為70kg的成年哺乳動(dòng)物每天的實(shí)際量通常為70-700mg，其中該量可以作為每天的單次劑量給藥，或通常以每天一系列部分劑量(如2、3、4、5或6個(gè))給藥，以便總的日劑量相同。本發(fā)明化合物的鹽或溶劑合物或生理官能衍生物的有效量可以測(cè)定為本發(fā)明化合物本身的有效量的分?jǐn)?shù)。可以設(shè)想，相似的劑量適合治療本說(shuō)明書所提到的其他疾病狀況。
以示例而非限制的方式提供了下列實(shí)施例。所用的原料為已知產(chǎn)品或者根據(jù)已知方法制備的產(chǎn)品。除非另外指明，百分比都表示為重量百分比。
實(shí)施例
特別地，通過(guò)以下分析技術(shù)表征化合物：
·nmr譜利用brukeravancedpx300mhznmr波譜儀獲得；
·質(zhì)量(ms)通過(guò)偶聯(lián)至agilentseries1100質(zhì)量檢測(cè)儀的hplc確定。
實(shí)施例1：
2-氯-4-羥基-3-茚滿-5-基-5-(4-甲氧基苯基)-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
步驟1：將1-(茚滿-5-基)乙酮(10g,62.4mmol)溶于甲苯(200ml)，然后添加乙酸(3.57ml,62.4mmol)、乙酸銨(12.03g,156mmol)和2-氰基乙酸乙酯(160ml,1503mmol)。使反應(yīng)混合物沸騰10h。冷卻時(shí)，加入水并進(jìn)行乙酸乙酯萃取(3x200ml)。將有機(jī)相合并并用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物在硅膠(silica)(庚烷/乙酸乙酯60/40)上純化，并獲得13g(44％)的油。
lc/ms:純度54％,m-1＝254
步驟2：將步驟1化合物(10.4g,22mmol)溶于乙醇(100ml)。向反應(yīng)混合物添加嗎啉(2.3ml,26.4mmol)和硫(1.7g,6.6mmol)，并將其整體回流20h。冷卻時(shí)，將反應(yīng)混合物過(guò)濾并將固體用水漂洗。將水層用乙醚萃取，用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑獲得4.3g(68％)的棕色油。
nmr1h(dmso-d6):0,95(t,3h)；2,03(m,2h)；2,86(m,4h)；2,97(q,2h)；6,12(s,1h)；6,99(d,1h)；7,10(s,1h)；7,15(dd,1h)；7,36(bs,2h)
步驟3：將步驟2化合物(8.98g,31.2mmol)溶于ch2cl2(200ml)。緩慢添加n-氯琥珀酰亞胺(4.17g,31.2mmol)，并將反應(yīng)混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。添加水。將水層用乙酸乙酯萃取(3x100ml)，并將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠純化(庚烷/acoet95/5)，獲得5.9g(47％)的預(yù)期產(chǎn)物。
lc/ms:純度80％,m+1＝322
步驟4：向四氫呋喃(20ml)中的步驟3化合物(1.6g,4.3mmol)和碳酸鉀(893mg,6,5mmol)添加4-甲氧基苯基乙酰氯(0.66ml,4.3mmol)。將反應(yīng)混合物在20℃下攪拌18h。添加水并進(jìn)行乙醚萃取(3x100ml)。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(庚烷/乙醚80/20)純化，獲得886mg(43.9％)的預(yù)期產(chǎn)物。
lc/ms:純度98.1％,m-1＝468.0
步驟5：向雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(1.50g,7.5mmol，thf(20ml)中)添加步驟4化合物(884mg,1.9mmol)，并將反應(yīng)混合物在10℃下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物倒入hcl1n/冰的混合物中，并用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗固體倒入庚烷/乙醚的混合物中。純化后，獲得77mg(6％)的預(yù)期化合物。
lc:rt5.49min,純度93.1％
ms:m-1＝422
nmr1h(dmso-d6):2,02(m,2h)；2,87(m,4h)；3,74(s,3h)；6,88(dd,2h)；7,09(dd,1h)；7,12(dd,2h)；7,19-7,24(m,3h)；9,28(bs,1h)
實(shí)施例2:
2-氯-4-羥基-3-(4-羥基茚滿-5-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
步驟1：將2,3-二氫-1h-茚-4-醇(9.9g,73.8mmol)溶于乙酸酐(13.92ml,148mmol)，并且將反應(yīng)混合物回流3h。冷卻時(shí)，減壓除去溶劑，獲得12g(92％)的油。
nmr1h(dmso-d6):2,00(m,2h)；2,27(s,3h)；2,70(dd,2h)；2,91(dd,2h)；6,87(d,1h)；7,11-7,19(m,2h)
步驟2：將步驟1化合物(12g,68.1mmol)和氯化鋁(10g,74.9mmol)加入1,2-二氯苯(70ml)。將反應(yīng)混合物在100℃下加熱18小時(shí)。將混合物倒入冰/水/hcl3n，并用氯仿(3x200ml)萃取。將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(環(huán)己烷，然后是二氯甲烷)純化，獲得7.3g(61％)的無(wú)色油。
lc/ms:純度99％,m+1＝177
步驟3：步驟2化合物(7.3g,41.4mmol)、碘甲烷(5.18ml,83mmol)和碳酸銫(16.20g,49.7mmol)加入丙酮(40ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水，并進(jìn)行乙酸乙酯(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(二氯甲烷)純化，獲得7.3g(94％)的無(wú)色油。
nmr1h(dmso-d6):2,10(m,2h)；2,50(m,3h)；2,85(dd,2h)；2,95(dd,2h)；3,80(s,3h)；7,10(d,1h)；7,40(d,1h)
步驟4：將步驟3化合物(7.3g,38.4mmol)和2-氰基乙酸乙酯(6.14ml,57.6mmol)加入乙酸(60ml)。緩慢添加六甲基二硅氮烷并將反應(yīng)混合物在50℃下加熱過(guò)夜。冷卻時(shí)，加入水，并將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌兩次，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，獲得11.1g(98％)的棕色油。
lc/ms:純度97％,m-1＝270
步驟5：將步驟4化合物(10.9g,38.2mmol)、硫(3.06g,96mmol)和嗎啉(4.01ml,45.8mmol)加入乙醇(160ml)。將反應(yīng)混合物回流7h。冷卻時(shí)，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，并減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物用硅膠(庚烷/乙酸乙酯95/5)純化，獲得7.4g(61％)的棕色油。
lc/ms:純度99％,m+1＝318
步驟6：將步驟5化合物(7.32g,22.83mmol)溶于氯仿(70ml)，并添加n-氯琥珀酰亞胺(3.11g,22.83mmol)。-5℃下1h后，將反應(yīng)混合物用水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(庚烷/acoet90/10至85:15)純化，獲得7.22g(89％)的橙色固體。
lc/ms:純度99％,m-1＝350
步驟7：將步驟6化合物(500mg,1.41mmol)溶于四氫呋喃(10ml)。添加碳酸銫(917mg,2.81mmol)和苯基乙酰氯(0.23ml,1.69mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20h。加入水，并進(jìn)行乙酸乙酯(2x15ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，獲得629mg(93％)的黃色油。
lc/ms:純度98％,m-1＝468
步驟8：向雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(1102mg,5.25mmol)在四氫呋喃(5ml)中的溶液添加步驟7化合物(629mg,1.31mmol)在四氫呋喃(5ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在20℃下攪拌30分鐘。添加水(15ml)和乙酸(5ml)的混合物，并將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(3x15ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(庚烷/乙酸乙酯60/40)純化，獲得323mg(56％)的紅色固體。
lc/ms:純度95.5％,m+1＝424
步驟9：將甲硫氨酸(324mg,2.17mmol)溶于甲磺酸，并添加步驟8化合物(323mg,0.72mmol)。將反應(yīng)混合物在20℃下攪拌20h。將反應(yīng)混合物逐滴倒入冰水中。用乙酸乙酯(3x10ml)進(jìn)行萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(庚烷/乙酸乙酯50/50)純化，獲得137mg的固體。將其在水中沸騰，獲得53mg(18％)的淺棕色固體。
lc:rt＝4.73；純度99％
ms:m+1＝410.2
nmr1h(dmso-d6):1,99(m,2h)；2,80(m,4h)；6,72(dd,1h)；6,89(dd,1h)；7,18-7,34(m,5h)；8,59(bs,1h)；9,14(bs,1h)；11,54(bs,1h)
可以類似地獲得以下的化合物。
實(shí)施例12:
2-氯-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
步驟1：將5,6,7,8-四氫萘-1-醇(50.85g,340mmol)溶于乙酸酐(500ml)，并向反應(yīng)混合物添加三乙胺(56.8ml,408mmol)。將整體回流2h。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓除去溶劑。將粗的剩余液體溶于乙酸乙酯(500ml)，并將有機(jī)層用水和鹽水洗滌幾次。然后將有機(jī)層用na2so4干燥，減壓濃縮以獲得深色油(65.4g；91％收率)。
lc:4.94min
步驟2：將氯化鋁(45.1g,338mmol)溶于1,2-二氯苯(250ml)，然后加入1,2-二氯苯(250ml)中的步驟1化合物(65.4g,308mmol)。將反應(yīng)混合物在100℃下加熱17h。將反應(yīng)混合物用冰浴冷卻，并滴加hcl6n(80ml)。將混合物用硅藻土過(guò)濾。將有機(jī)溶液用水洗滌幾次，然后用硫酸鈉干燥并過(guò)濾。減壓除去溶劑以獲得深色油。將該油用硅膠(環(huán)己烷，然后是環(huán)己烷/二氯甲烷1/1)純化以獲得黃色固體(60g；91％收率)。
lc/ms:純度98％,m+1＝191
步驟3：將步驟2化合物(13.63g,70.2mmol)溶于丙酮(200ml)，并向反應(yīng)混合物添加碳酸銫(23.11g,70.9mmol)和碘甲烷(4.41ml,70.9mmol)。室溫下攪拌15h后，加入額外的碘甲烷(0.2eq)。2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用硅藻土墊過(guò)濾并減壓除去溶劑。將剩余的油用硅膠(環(huán)己烷/acoet95/5)純化，獲得黃色油(12,6g；84％收率)。
lc/ms:純度96％,m+1＝205
步驟4：將步驟3化合物(12.56g,59.0mmol)溶于甲苯(150ml)。向反應(yīng)混合物添加2-氰基乙酸乙酯(7.56ml,70.8mmol)、乙酸銨(7.74g,100mmol)和乙酸(2.70ml,47.2mmol)。將整體回流過(guò)夜。減壓除去溶劑，并將剩余的粗油溶于乙酸乙酯(300ml)。將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮以獲得油。將該油用硅膠(庚烷/乙酸乙酯95/5)純化以獲得綠色油(14.7g；76％收率)。
lc/ms:純度91％,m+1＝300
步驟5：將步驟4化合物(14.69g,49.1mmol)、嗎啉(5.13ml,58.9mmol)、硫(3.78g,14.72mmol)在乙醇(200ml)中混合，并將整體在80℃下加熱過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用硅藻土墊過(guò)濾，并減壓除去溶劑，留下棕色固體。將該固體用硅膠(庚烷至庚烷/乙酸乙酯90/10至庚烷/乙酸乙酯80/20)純化。收集黃色固體(12.4g；74％收率)。
lc/ms:純度97％,m+1＝332
步驟6：在-5℃下，將步驟5化合物(4.4g,13.28mmol)溶于氯仿(100ml)，并向反應(yīng)混合物添加n-氯琥珀酰亞胺(1.81g,13.28mmol)。然后，將反應(yīng)混合物在5℃下攪拌2小時(shí)。然后，將反應(yīng)混合物用水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，獲得紫色油。將該油用硅膠(庚烷/乙酸乙酯95/5至85/15)純化?；厥粘壬?3.5g；70％收率)。
lc/ms:純度97.5％,m+1＝366
步驟7：將步驟6化合物(119g,325mmol)和碳酸銫(212g,650mmol)加入thf(1600ml)，以獲得紅色懸浮液。滴加苯基乙酰氯(53.0ml,390mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入冰/水，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。除去溶劑后，將剩余的粗油用硅膠(二氯甲烷)純化，獲得紫色油(153.1g；97％收率)。
lc/ms:純度99％,m+1＝484
步驟8：將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(6.76g,33.9mmol)懸浮于四氫呋喃(60ml)，并滴加步驟7化合物(4.1g,8.47mmol)在四氫呋喃(20ml)中的溶液。30分鐘后，將反應(yīng)混合物冷卻至-5℃，并滴加乙酸(15ml)。將反應(yīng)混合物用水(100ml)稀釋，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮至干燥。將剩余的粗油用硅膠(環(huán)己烷/乙酸乙酯70/30)干燥，獲得棕色固體(2.05g；55％收率)。
lc/ms:純度99％,m+1＝428
步驟9：將步驟8化合物(2.05g,4.63mmol)溶于甲磺酸(30ml)，并向反應(yīng)混合物添加甲硫氨酸(2.074g,13.90mmol)。過(guò)夜攪拌后，將反應(yīng)混合物倒入水/冰。用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，并將有機(jī)相用水、碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)溶液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并干燥。將粗的剩余固體用硅膠(環(huán)己烷/乙酸乙酯70/30)純化，獲得灰白色固體(1.67g；72％收率)。
lc:5.23min；純度99％
ms:m+1＝424
nmr1h(dmso-d6):1,77(m,4h)；2,63(m,2h)；2,74(m,2h)；6,63(d,1h)；6,90(d,1h)；7,24-7,41(m,5h)；8,24(bs,1h)；9,27(bs,1h)；11,62(bs,1h)
實(shí)施例13:
2-氯-4-羥基-5-(3-吡啶基)-3-四氫化萘-6-基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮
步驟1：向乙醇(115ml)添加1-(5,6,7,8-四氫萘-2-基)乙酮(20g,115mmol)、2-氰基乙酸乙酯(14.66ml,138mmol)、嗎啉(20.08ml,230mmol)和14.72g硫以獲得黃色懸浮液。將反應(yīng)混合物在90℃下回流20h。冷卻時(shí)，將反應(yīng)混合物過(guò)濾并減壓除去溶劑。將粗的棕色油溶于乙酸乙酯，用hcl1n、鹽水洗滌兩次，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用硅膠(二氯甲烷/環(huán)己烷40/60)純化，獲得9.6g(28％)的黃色油。
lc/ms:純度84％,m+1＝302
步驟2：將步驟1化合物(9.2g,30.5mmol)溶于氯仿(400ml)。在-5℃下冷卻，添加n-氯琥珀酰亞胺(4.08g)，并將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用硅膠(庚烷/乙酸乙酯80/20)純化，獲得2.9g(28％)的棕色油。
nmr1h(dmso-d6):0,75(t,3h)；1,75(m,4h)；2,50(m,4h)；3,80(q,2h)；6,70(s,1h)；6,80(d,1h)；7,00(d,1h)7,50(bs,1h)
步驟3：將3-(羧基甲基)氯化吡啶鎓(538mg,3.10mmol)和草酰二氯(0.788ml,9.31mmol)和一滴二甲基甲酰胺溶于二氯甲烷(3ml)。2小時(shí)后，除去溶劑，并添加二甲基甲酰胺(4ml)，然后添加碳酸鉀(1.28g,9.3mmol)和二甲基甲酰胺(8ml)中的步驟2化合物(1.04g,3.10mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，并倒入冰水。進(jìn)行乙酸乙酯萃取，并將有機(jī)層用鹽水洗滌兩次，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，回收棕色油(1.25g,89％)。
lc/ms:純度96％,m+1＝455
步驟4：將雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀(2.2g,11mmol)溶于四氫呋喃(5ml)，并添加步驟3化合物(1.25g,2.75mmol)在四氫呋喃(9ml)中的溶液。30分鐘后，添加水/乙酸的混合物(直至ph4)，并進(jìn)行乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌兩次，并用硫酸鈉干燥。除去溶劑后，獲得棕色固體(0.62g；55％)。
lc:4.15min,純度99％,
ms:m+1＝409
nmr1h(dmso-d6):1,76(m,4h)；2,74(m,4h)；7,06(m,3h)；7,34(dd,1h)；7,75(d,1h)8,38(d,1h)；8,51(s,1h)
實(shí)施例14:
2-氯-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-6-氧代-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-4-醇鈉
步驟1：將2-氯-4-羥基-3-(5-羥基四氫化萘-6-基)-5-苯基-7h-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-酮(4.0g,9.44mmol)溶于甲醇/四氫呋喃(25ml/25ml)的混合物。緩慢添加甲醇鈉溶液(30％，甲醇中)(1.75ml,9.44mmol)，然后添加水。減壓除去有機(jī)溶劑。將剩余的水溶液冷凍干燥，以獲得灰色固體(4.80g,100％，化合物與4個(gè)水分子結(jié)晶)。
lc:5.06min,純度99％,
ms:m+1＝424
nmr1h(dmso-d6):1,70(m,4h)；2,61(m,4h)；6,54(d,1h)；6,89(d,1h)；7,04(dd,1h)；7,18(dd,2h)；7,40(d,2h)
可以類似地獲得表(2)中的下列化合物。
生物學(xué)測(cè)定
-酶活性
以下生物學(xué)測(cè)試使得能測(cè)定式(i)的化合物對(duì)ampk蛋白的效力。
ampk酶活性利用delfia技術(shù)測(cè)定。在微量滴定板中，于合成肽底物(amaraasaaalarrr，“amara”肽)和活化劑的存在下，在系列稀釋物中進(jìn)行ampk酶活性測(cè)定。通過(guò)添加ampk引發(fā)反應(yīng)。利用抗磷酸絲氨酸抗體測(cè)量引入amaraa的磷酸的量，從而測(cè)定酶活性。
n°：分子的數(shù)目
活性：30μm的式(1)的化合物的對(duì)照(基礎(chǔ)活性)的％與200μm的amp(天然底物)的對(duì)照(基礎(chǔ)活性)的％的比例。
a<110％，110％<b<130％，c>130％
結(jié)果示于下表3。
表(3)：
-體內(nèi)活性：
以下生物學(xué)測(cè)試使得能夠測(cè)定式(i)的化合物在藥學(xué)動(dòng)物模型中對(duì)控制血糖過(guò)多的效力。
所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都根據(jù)歐洲動(dòng)物保健指南(ets123)進(jìn)行。
將來(lái)自cerj(53940legenestsaintisle,france)的ob/ob小鼠在8天內(nèi)用式(1)的化合物bid口服治療。在那時(shí)，收集血液樣品，并利用abx診斷試劑盒測(cè)定葡萄糖濃度。
結(jié)果表示為與動(dòng)物組對(duì)照相比血糖過(guò)多的變化的百分比。
式(1)的化合物清楚地證實(shí)了其在糖尿病動(dòng)物模型中控制血糖過(guò)多的效力。而且，式(1)的化合物清楚地證實(shí)了相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)化合物，其在糖尿病動(dòng)物模型中控制血糖過(guò)多的優(yōu)越性。