本發(fā)明涉及生物，尤其是涉及一種促巨噬細(xì)胞m2樣極化的嵌合抗原受體、核酸分子及抗原依賴的m2樣極化的巨噬細(xì)胞。

背景技術(shù)：

1、嵌合抗原受體(chimeric?antigen?receptor,car)t細(xì)胞治療是一種已經(jīng)應(yīng)用于臨床上的突破性的細(xì)胞療法。cars是一類人工合成的受體，能夠在結(jié)合特定抗原的同時(shí)激活t細(xì)胞實(shí)現(xiàn)靶細(xì)胞的殺傷。car在結(jié)構(gòu)上通常包含一個(gè)抗體衍生的單鏈可變區(qū)(scfv)用于識別靶細(xì)胞特定抗原，其胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域來源于t細(xì)胞受體相關(guān)信號分子(如cd3ζ)和共刺激受體(如cd28和4-1bb)用于激活t細(xì)胞。經(jīng)cars修飾的t細(xì)胞(car-t細(xì)胞)已經(jīng)在治療難治性晚期b細(xì)胞惡性腫瘤方面取得了顯著的效果，表明利用cars指導(dǎo)的免疫細(xì)胞在腫瘤免疫治療方面具有巨大的潛力。然而car-t療法存在毒副作用，如細(xì)胞因子釋放綜合征、神經(jīng)毒性以及b細(xì)胞發(fā)育不全。

2、巨噬細(xì)胞是先天固有免疫的重要組成部分，在炎癥和宿主防御中發(fā)揮核心作用。在響應(yīng)各種環(huán)境因素(例如，微生物產(chǎn)物，受損細(xì)胞，活化的淋巴細(xì)胞)或在不同的病理生理?xiàng)l件下，巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為不同的功能表型。其中，經(jīng)il-4和il-13等因子活化得到m2型巨噬細(xì)胞，主要具有抑制免疫反應(yīng)、促進(jìn)血管發(fā)生、組織修復(fù)和促進(jìn)腫瘤生長的潛能，更多地分泌il-10、tgf-β、vegf等因子，以arg1,cd163和cd206相對高表達(dá)。巨噬細(xì)胞的極化失衡與異?；罨亲陨砻庖呒膊“l(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)之一，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)的發(fā)作與m1/m2巨噬細(xì)胞比值的增加有關(guān)，sle患者炎癥單核細(xì)胞的頻率也會升高，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分化的血清細(xì)胞因子(如csf-1和mcp-1)的濃度與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。此外，巨噬細(xì)胞死細(xì)胞清除功能的缺陷也會促進(jìn)狼瘡患者的炎癥和自身抗體的產(chǎn)生，從而加重疾病癥狀。在小鼠模型中的研究表明，過繼移植m2樣巨噬細(xì)胞，或者使用藥物提高體內(nèi)m2樣巨噬細(xì)胞使m1/m2比值正?；瘜钳彽闹委熓怯幸娴摹＿@些都揭示了m2樣巨噬細(xì)胞使其向m2樣極化在治療自身免疫疾病中的前景。此外m2樣巨噬細(xì)胞也能參與到抑制炎性反應(yīng)，促進(jìn)組織損傷修復(fù)和改善纖維化等場景。

3、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的在于提供一種嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體能夠使巨噬細(xì)胞除了能吞噬b細(xì)胞外，還能夠向m2樣極化，抑制免疫或炎癥反應(yīng)。

2、本發(fā)明的第二目的在于提供一種核酸分子。

3、本發(fā)明的第三目的在于提供一種巨噬細(xì)胞。

4、本發(fā)明的第四目的在于提供上述巨噬細(xì)胞在制備治療自身免疫疾病的藥物中的應(yīng)用。

5、為了實(shí)現(xiàn)以上目的，特采用以下技術(shù)方案：

6、第一方面，本發(fā)明提供了一種嵌合抗原受體，包括胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；

7、所述胞外結(jié)構(gòu)域?yàn)榭筩d19的scfv；

8、所述抗cd19的scfv的氨基酸序列如seq?id?no.1或seq?id?no.2所示；

9、所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域?yàn)閕l4ra；

10、所述il4ra的氨基酸序列如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示。

11、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述嵌合抗原受體還包括信號肽；

12、所述信號肽的氨基酸序列如seq?id?no.5或seq?id?no.6所示。

13、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述胞外結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域通過鉸鏈區(qū)連接，所述鉸鏈區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7或seq?id?no.8所示。

14、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如seq?id?no.9或seq?idno.10所示。

15、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述嵌合抗原受體還包括熒光標(biāo)簽；

16、所述熒光標(biāo)簽包括gfp。

17、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述熒光標(biāo)簽通過連接肽與胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域鏈接；

18、所述連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.11所示。

19、作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如seq?id?no.13或seq?idno.14所示。

20、第二方面，本發(fā)明提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼所述的嵌合抗原受體。

21、第三方面，本發(fā)明提供了一種巨噬細(xì)胞，所述巨噬細(xì)胞表達(dá)所述的嵌合抗原受體。

22、第四方面，本發(fā)明提供了上述巨噬細(xì)胞在抑制免疫和炎性反應(yīng)以及促進(jìn)組織修復(fù)方面的潛在應(yīng)用。

23、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

24、本發(fā)明提供一種新的嵌合抗原受體，將car分子的胞內(nèi)域替換為巨噬細(xì)胞m2極化相關(guān)的胞內(nèi)域il4ra，能夠使巨噬細(xì)胞除了能吞噬清除致病性b細(xì)胞外，還能夠向m2樣極化，從而抑制免疫和炎癥反應(yīng)或促進(jìn)組織器官修復(fù)。

25、本發(fā)明提供的巨噬細(xì)胞能夠特異性識別b細(xì)胞，與b細(xì)胞接觸后，能夠?qū)⑵渫淌桑瑴p少自身抗體的水平，與此同時(shí)，巨噬細(xì)胞又會呈現(xiàn)m2樣狀態(tài)，分泌細(xì)胞因子，抑制過度激活的免疫反應(yīng)，促進(jìn)組織修復(fù)。該巨噬細(xì)胞能夠用于自身免疫疾病的治療。

技術(shù)特征：

1.一種嵌合抗原受體，其特征在于，包括胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括信號肽；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述胞外結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域通過鉸鏈區(qū)連接，所述鉸鏈區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7或seq?id?no.8所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如seq?id?no.9或seq?id?no.10所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括熒光標(biāo)簽；

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述熒光標(biāo)簽通過連接肽與胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域鏈接；

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如seq?id?no.13或seq?id?no.14所示。

8.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的嵌合抗原受體。

9.一種巨噬細(xì)胞，其特征在于，所述巨噬細(xì)胞表達(dá)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的嵌合抗原受體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種促巨噬細(xì)胞M2樣極化的嵌合抗原受體、核酸分子及抗原依賴的M2樣極化的巨噬細(xì)胞，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的嵌合抗原受體，包括胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；胞外結(jié)構(gòu)域?yàn)榭笴D19的scFV；抗CD19的scFV的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示；胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域?yàn)镮L4Ra；IL4Ra的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示。該嵌合抗原受體，將CAR分子的胞內(nèi)域替換為巨噬細(xì)胞M2極化相關(guān)的包內(nèi)域IL4Ra，能夠使巨噬細(xì)胞除了能吞噬清除致病性B細(xì)胞外，還能夠向M2樣極化，發(fā)揮抗炎，免疫抑制，組織修復(fù)和改善纖維化等作用。

技術(shù)研發(fā)人員：張進(jìn),魯恒星
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10