本申請(qǐng)屬于基因工程和生物發(fā)酵，涉及一種熊蜂生假絲酵母工程菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、由微生物合成的槐糖脂除了具有一般表面活性劑的降低表面張力、起泡和乳化等性質(zhì)外，還具備環(huán)境友好、100％可生物降解、溫和低刺激和具備一定的抗抑菌性等特性。因此，槐糖脂作為生物表面活性劑在日化洗滌、家居護(hù)理、美容護(hù)膚等行業(yè)具有非常大的潛在價(jià)值，近幾年來(lái)也受到越來(lái)越多的關(guān)注。

2、現(xiàn)階段，提高微生物合成槐糖脂能力的研究集中在對(duì)其直接代謝路徑中的關(guān)鍵基因的改造上，雖然改造后較野生菌株合成槐糖脂的能力顯著提高，但槐糖脂的生產(chǎn)成本仍然較高，需要繼續(xù)對(duì)影響其合成的旁支代謝路徑中的關(guān)鍵基因進(jìn)行研究。

3、有鑒于此，特提出本申請(qǐng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本申請(qǐng)一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例提供一種熊蜂生假絲酵母工程菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。包括如下技術(shù)方案：

2、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例提供一種熊蜂生假絲酵母工程菌，所述熊蜂生假絲酵母工程菌的adh1基因被敲除。

3、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述adh1基因編碼氨基酸序列如seq?id?no.2所示的ω-羥基脂肪酸氧化酶。

4、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述adh1基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

5、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述熊蜂生假絲酵母工程菌的底盤(pán)菌包括編號(hào)為atcc?22214的野生型菌。

6、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例還提供一種所述的熊蜂生假絲酵母工程菌的構(gòu)建方法，所述構(gòu)建方法包括提供待改造的熊蜂生假絲酵母以及敲除所述adh1基因的步驟。

7、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例又提供一種槐糖脂的生產(chǎn)方法，所述生產(chǎn)方法包括以熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)行發(fā)酵的步驟；其中，所述熊蜂生假絲酵母菌為所述的熊蜂生假絲酵母工程菌。

8、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，發(fā)酵的過(guò)程中，用檸檬酸調(diào)節(jié)發(fā)酵體系至ph值為2.2～3。

9、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，發(fā)酵所述熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)入對(duì)數(shù)期再用檸檬酸調(diào)節(jié)所述發(fā)酵體系至ph值為2.2～3。

10、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，發(fā)酵滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：

11、(1)發(fā)酵培養(yǎng)基包括0.2％～0.4％(w/v)酵母粉、7％～9％(w/v)亞油酸、9％～11％(w/v)葡萄糖、0.05％～0.15％(w/v)kh2po4、0.05％～0.15％(w/v)na2hpo4·12h2o、0.04％～0.06％(w/v)mgso4·7h2o和水；以及，

12、(2)于25℃～30℃、200rpm～250rpm下培養(yǎng)6天～8天。

13、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例又提供一種槐糖脂的生產(chǎn)方法，所述生產(chǎn)方法包括以熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)行發(fā)酵的步驟；其中，發(fā)酵過(guò)程中用檸檬酸調(diào)節(jié)發(fā)酵體系至ph值為2.2～3。

14、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，發(fā)酵所述熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)入對(duì)數(shù)期再用檸檬酸調(diào)節(jié)所述發(fā)酵體系至ph值為2.2～3。

15、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，發(fā)酵滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：

16、(1)發(fā)酵培養(yǎng)基包括0.2％～0.4％(w/v)酵母粉、7％～9％(w/v)亞油酸、9％～11％(w/v)葡萄糖、0.05％～0.15％(w/v)kh2po4、0.05％～0.15％(w/v)na2hpo4·12h2o、0.04％～0.06％(w/v)mgso4·7h2o和水；以及，

17、(2)于25℃～30℃、200rpm～250rpm下培養(yǎng)4天～8天。

18、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例又提供一種含槐糖脂的制品的生產(chǎn)方法，所述生產(chǎn)方法包括如下步驟：

19、采用所述的生產(chǎn)方法生產(chǎn)槐糖脂；以及，

20、制備含槐糖脂的制品；

21、可選地，所述含槐糖脂的制品為日化洗滌用品、家居護(hù)理用品或者美容護(hù)膚用品。

22、本申請(qǐng)的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例細(xì)節(jié)在下面的描述中提出，本申請(qǐng)的其他特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將從說(shuō)明書(shū)及其權(quán)利要求書(shū)變得明顯。

技術(shù)特征：

1.熊蜂生假絲酵母工程菌，其特征在于，所述熊蜂生假絲酵母工程菌的adh1基因被敲除。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熊蜂生假絲酵母工程菌，其特征在于，所述adh1基因編碼氨基酸序列如seq?id?no.2所示的ω-羥基脂肪酸氧化酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的熊蜂生假絲酵母工程菌，其特征在于，所述adh1基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的熊蜂生假絲酵母工程菌，其特征在于，所述熊蜂生假絲酵母工程菌的底盤(pán)菌包括編號(hào)為atcc?22214的野生型菌。

5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的熊蜂生假絲酵母工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括提供待改造的熊蜂生假絲酵母以及敲除所述adh1基因的步驟。

6.槐糖脂的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述生產(chǎn)方法包括以熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)行發(fā)酵的步驟；其中，所述熊蜂生假絲酵母菌為權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的熊蜂生假絲酵母工程菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的槐糖脂的生產(chǎn)方法，其特征在于，發(fā)酵的過(guò)程中，用檸檬酸調(diào)節(jié)發(fā)酵體系至ph值為2.2～3；

8.槐糖脂的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述生產(chǎn)方法包括以熊蜂生假絲酵母菌進(jìn)行發(fā)酵的步驟；其中，發(fā)酵過(guò)程中用檸檬酸調(diào)節(jié)發(fā)酵體系至ph值為2.2～3；

9.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述生產(chǎn)方法，其特征在于，發(fā)酵滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：

10.一種含槐糖脂的制品的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述生產(chǎn)方法包括如下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)屬于基因工程和生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種熊蜂生假絲酵母工程菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述熊蜂生假絲酵母工程菌的ADH1基因被敲除。該工程菌利用亞油酸的能力有所增強(qiáng)。采用該工程菌，能夠在發(fā)酵合成槐糖脂的過(guò)程中，提高產(chǎn)量的同時(shí)縮短發(fā)酵時(shí)間，降低其生產(chǎn)成本，為工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用帶來(lái)實(shí)際價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：張迷敏,陳偉哲,劉杰,張利萍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州立白企業(yè)集團(tuán)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10