本發(fā)明屬于天然藥物制備領(lǐng)域，涉及一種來(lái)源于海南腺萼木的具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)的降倍半萜類化合物，具體涉及一種降倍半萜類化合物及其制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、惡性腫瘤目前仍然是嚴(yán)重威脅人類生命和健康的第二號(hào)殺手，僅位居心血管疾病之后?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤的治療主要包括手術(shù)治療、化療和放療，還有近些年發(fā)展起來(lái)的生物治療。但惡性腫瘤是全身性疾病，往往在做出臨床診斷時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移，而手術(shù)只能解決局部的腫瘤負(fù)荷，術(shù)后仍需要施以輔助性的化療。然而，目前用于化療的藥物主要為抗腫瘤類藥物，其通過(guò)直接作用于dna、rna或微管蛋白等與正常人體細(xì)胞的共有組分來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡，導(dǎo)致該類藥物選擇性差，毒副作用大。隨著現(xiàn)代生命科學(xué)的進(jìn)步，腫瘤發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制不斷被認(rèn)知，利用這些生物醫(yī)學(xué)研究的成果，繼續(xù)尋找作用機(jī)制新穎、選擇性強(qiáng)、毒副作用小、具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤活性物質(zhì)是抗腫瘤新藥研究的重要任務(wù)。

2、分子靶向抗腫瘤藥物能夠針對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖過(guò)程中的特異性靶點(diǎn)選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞而不損傷正常組織，給腫瘤治療領(lǐng)域帶來(lái)了革命性的進(jìn)展。與傳統(tǒng)細(xì)胞毒藥物不同，這類藥物主要針對(duì)正常細(xì)胞不表達(dá)或很少表達(dá)而在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖過(guò)程中存在的某些特異性分子或靶點(diǎn)，故可以特異性地作用于腫瘤細(xì)胞而不損傷正常的組織和細(xì)胞。分子靶向抗腫瘤藥物的出現(xiàn)給選擇性好、毒副作用小的抗腫瘤新藥的研制帶來(lái)了希望。在各種分子靶點(diǎn)中，蛋白酪氨酸激酶(protein?tyrosine?kinase，ptk)是目前研究較多且效果明顯的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)之一，已成為抗腫瘤靶向治療藥物的研究重點(diǎn)及熱點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。目前臨床上使用的小分子靶向抗腫瘤藥物主要為酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，包括單靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑和多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑。酪氨酸激酶通過(guò)一個(gè)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)絡(luò)通路控制細(xì)胞增殖，生存，細(xì)胞凋亡，血管生成，侵襲和轉(zhuǎn)移，腫瘤組織最初可能對(duì)單靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑有反應(yīng)，但可以通過(guò)自分泌或旁分泌、產(chǎn)生配體、受體突變、激活下游信號(hào)通路和啟用替代信號(hào)等途徑等多種機(jī)制獲得拮抗能力，腫瘤存在這些逃逸機(jī)制是多靶點(diǎn)治療必要性的基礎(chǔ)。臨床實(shí)踐同樣表明，單靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，如厄洛替尼和吉非替尼，盡管選擇性強(qiáng)、毒副作用小，但在使用過(guò)程中易產(chǎn)生耐藥性，無(wú)法徹底殺滅腫瘤細(xì)胞，而聯(lián)合用藥又會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，影響各自的藥動(dòng)學(xué)特性。多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑具有減少藥物使用種類，可從多方面發(fā)揮效用，對(duì)抗耐藥性，避免產(chǎn)生藥物相互作用，減少不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。許多多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物因其選擇性高、療效好、毒性小的臨床特點(diǎn)，已逐漸成為某些腫瘤治療的一線用藥。

3、茜草科rubiaceae腺萼木屬mycetia植物全世界約有30余種，集中分布于亞洲的熱帶地區(qū)。分布于我國(guó)的腺萼木屬植物有15種、1變種以及3變型，分布于西南部至東南部[中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志.第71(1)卷.科學(xué)出版社.北京:1999,pp?313-325.]。由于腺萼木屬植物分布的地域性和特有性，關(guān)于腺萼木屬植物中化學(xué)成分及其藥理活性的研究報(bào)道極為罕見，截至目前，僅有兩篇有關(guān)于該屬植物m.longifolia(采集于孟加拉國(guó))和m.cauliflora(采集于韓國(guó))粗提取物抗炎活性及其初步作用機(jī)制的初步研究報(bào)道，未見任何關(guān)于該屬植物中化學(xué)成分的研究報(bào)道[jain,p.；hossain,m.a.；fatema,k.；mazumder,k.u.；hossain,m.s.；hossain,h.；alam,m.a.；reza,h.m.antinociceptive?andanti-inflammatory?activities?ofmycetia?longifolia(wall.)o.kuntze.j.herbsspices?med.plants?2015,21,321–331.；jeong,s.g.；kim,s.；kim,h.g.；kim,e.；yang,w.s.；oh,j.；sung,g.h.；hossain,m.a.；lee,j.；kim,j.h.；cho,j.y.mycetia?caulifloramethanol?extract?exerts?anti-inflammatory?activity?by?directly?targeting?pdk1inthe?nf-κb?pathway.j.ethnopharmacol.2019,231,1–9.]。分布于海南的腺萼木屬植物一共有3種，分別為海南腺萼木m.hainanensis、毛腺萼木m.hirta和華腺萼木m.sinensis[中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志.第71(1)卷.科學(xué)出版社.北京:1999,pp?313-325.]。其中，海南腺萼木為海南特有植物，迄今為止尚未見任何有關(guān)于海南腺萼木中化學(xué)成分及其藥理活性的研究報(bào)道。

4、海南腺萼木m.hainanensis為夾竹桃科狗牙花屬植物，主要分布于海南省和云南省，為黎族民間常用植物藥，用于治療炎癥性疾病，主治關(guān)節(jié)炎和背痛等癥，藥用歷史悠久，療效顯著[中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志.第71(1)卷.科學(xué)出版社.北京:1999,pp?313-325.]。目前尚未見其有應(yīng)用在抗腫瘤方面的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供了一種從海南腺萼木枝葉中分離得到的具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)的降倍半萜類化合物mycehainanic?acid，該化合物具有顯著的抗腫瘤活性和與陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)?shù)牡鞍桌野彼峒っ傅囊种苹钚?，可以進(jìn)一步開發(fā)成以蛋白酪氨酸激酶為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：提供一種降倍半萜類化合物，化學(xué)名為mycehainanic?acid，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：

3、

4、本發(fā)明的另一目的是提供一種降倍半萜類化合物的制備方法，包括以下步驟：

5、a.將陰干的海南腺萼木枝葉粉碎后用85％乙醇溶液或甲醇提取六次，過(guò)濾，收集濾液，再減壓濃縮干燥，獲得醇提取物；

6、b.將醇提取物加水制成混懸液，依次用石油醚和乙酸乙酯進(jìn)行萃取，石油醚萃取液減壓濃縮，得石油醚萃取浸膏；

7、c.將石油醚萃取浸膏進(jìn)行柱色譜分離純化得到單體化合物mycehainanic?acid。

8、進(jìn)一步地，所述步驟c具體如下：①將石油醚萃取浸膏經(jīng)硅膠柱色譜分離，分別按體積比95:5、90:10、80:20、70:30和40:60進(jìn)行石油醚-丙酮梯度洗脫，收集體積比為70:30的石油醚-丙酮洗脫物；②取石油醚-丙酮(體積比70:30)洗脫物經(jīng)mci樹脂柱層析去除色素，用體積比為40:60、55:45和70:30的甲醇-水梯度洗脫，收集體積比為55:45的甲醇-水洗脫物；③取甲醇-水(體積比55:45)洗脫物進(jìn)行ods柱層析，用體積比為50:50、55:45和65:35的甲醇-水梯度洗脫，收集體積比為55:45的甲醇-水洗脫物濃縮；④取甲醇-水(體積比55:45)洗脫物用制備型高效液相色譜(hplc)分離，流動(dòng)相為甲醇-水，體積比48:52，得到單體化合物mycehainanic?acid。

9、本發(fā)明的再一目的在于提供降倍半萜類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，尤其是提供降倍半萜類化合物mycehainanic?acid在制備以蛋白酪氨酸激酶為靶標(biāo)的靶向抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。

10、進(jìn)一步地，所述腫瘤細(xì)胞株包括jeko-1(人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)、a549(人肺癌細(xì)胞)、smmc-7721(人肝癌細(xì)胞)、mcf-7(人乳腺癌細(xì)胞)和sw480(人結(jié)腸癌細(xì)胞)等五種腫瘤細(xì)胞株。

11、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下效果：

12、本發(fā)明通過(guò)對(duì)海南腺萼木枝葉中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究過(guò)程中，首次從其石油醚萃取部位中分離鑒定了一個(gè)具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)的降倍半萜類化合物mycehainanicacid。多種體外活性評(píng)價(jià)結(jié)果表明：該化合物具有顯著的抗腫瘤活性和與陽(yáng)性對(duì)照藥相當(dāng)?shù)牡鞍桌野彼峒っ傅囊种苹钚裕梢赃M(jìn)一步開發(fā)成以蛋白酪氨酸激酶為靶標(biāo)的抗腫瘤藥物，以充分發(fā)揮了其藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。