發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及表達(dá)多種嵌合抗原受體(car)的細(xì)胞。細(xì)胞靶向多種急性髓樣白血病(aml)特征性的抗原。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、急性髓樣白血病

2、急性髓樣白血病(aml)是一種異質(zhì)性疾病，其特征在于骨髓和血液中髓樣前體的不受控制的克隆增殖，導(dǎo)致白血病母細(xì)胞的積累和正常造血的嚴(yán)重受損。aml是成人中最常見的急性白血病，在所有白血病中死亡率最高。在2015年，在美國估計(jì)有20830人被診斷患有aml，并且預(yù)計(jì)有10460例死于aml。在過去十年中，aml的長期生存率仍然較小。

3、當(dāng)前的誘導(dǎo)化學(xué)療法可以在幾乎70％的年輕成人患者中產(chǎn)生初始完全緩解。但是，有43％的患者最終會(huì)復(fù)發(fā)，而18％的患者在前線誘導(dǎo)治療中從未達(dá)到完全緩解。首次復(fù)發(fā)后aml患者的5年總生存率在7％至12％的范圍內(nèi)。同種異體造血干細(xì)胞移植(allohsct)提供了治愈患有復(fù)發(fā)或難治性aml的患者的最佳機(jī)會(huì)。這是第二次緩解后的優(yōu)選治療途徑，其可以在40％至50％的患者中實(shí)現(xiàn)5年無病生存。

4、使用當(dāng)前的治療策略，在先前實(shí)現(xiàn)了持續(xù)長于6個(gè)月的完全緩解的復(fù)發(fā)患者中只有大約一半達(dá)到了第二次完全緩解率，并且在患有原發(fā)性難治性疾病的患者和初始完全緩解持續(xù)少于6個(gè)月的患者中只有20％或更少達(dá)到了第二次完全緩解率。另外，常規(guī)挽救性化學(xué)療法的相當(dāng)大的并發(fā)癥可能使患者的表現(xiàn)狀態(tài)和器官功能惡化，并降低成功進(jìn)行allohsct的機(jī)會(huì)。

5、因此，需要改善的治療方法來治療aml。

6、嵌合抗原受體

7、嵌合抗原受體(car)將單克隆抗體的特異性移植到t細(xì)胞的效應(yīng)子功能上。針對(duì)cd19的car?t細(xì)胞療法在b細(xì)胞惡性腫瘤中高度有效，盡管cd19陰性逃逸是相當(dāng)一部分患者復(fù)發(fā)的原因。

8、針對(duì)aml的car?t細(xì)胞療法正在早期臨床測試中。盡管有幾項(xiàng)臨床前研究表明各種靶向aml抗原的car?t細(xì)胞具有細(xì)胞毒性潛力，但到轉(zhuǎn)化到臨床仍然很慢。這突顯了開發(fā)針對(duì)aml患者的car相關(guān)治療策略的固有挑戰(zhàn)。迄今為止，已經(jīng)通過早期臨床試驗(yàn)用car?t細(xì)胞免疫療法治療了少數(shù)患有復(fù)發(fā)/難治性aml的患者，如表1所示。

9、表1：car?t細(xì)胞免疫療法用于患有復(fù)發(fā)/難治性aml的患者的當(dāng)前i期臨床試驗(yàn)

10、

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、在第一方面，本發(fā)明提供了表達(dá)car的細(xì)胞，其靶向與急性髓樣白血病(aml)有關(guān)的多種抗原。該細(xì)胞靶向以下抗原的三種或四種：cd33、cll-1、cd123和flt3。

2、例如，細(xì)胞可以包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123?car。

3、細(xì)胞可以包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗flt3car。

4、細(xì)胞可以包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123car；和抗flt3car。

5、一個(gè)或多個(gè)，或所有car可以包含結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

6、細(xì)胞可以包含一個(gè)或多個(gè)串聯(lián)嵌合抗原受體(tancar)。該tancar或每個(gè)tancar可以包含結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

7、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cd33?car可以包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

8、(i)cdr1-grtfsmhs(seq?id?no.1)；cdr2-vtwsgdtf(seq?id?no.2)；cdr3-kddpyrpaydy(seq?id?no.3)；

9、(ii)cdr1-grtfssyv(seq?id?no.4)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aamelrggsynyassrqydy(seq?id?no.6)；

10、(iii)cdr1-eiafsnfn(seq?id?no.7)；cdr2-isshgdtny(seq?idno.8)；cdr3-nandpflsvsdf(seq?id?no.9)；

11、(iv)cdr1-gsifsina(seq?id?no.10)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aaisgwgrsirvgeryeydy(seq?id?no.11)；

12、(v)cdr1-grtsssst(seq?id?no.12)；cdr2-itlsggst(seq?id?no.13)；cdr3-aarrwsnnrggydragydy(seq?id?no.14)；或

13、(vi)cdr1-grtfssya(seq?id?no.15)；cdr2-itwsggst(seq?idno.16)；cdr3-amllrgglydytdyilyny(seq?id?no.17)。

14、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cd33?car可以包含如seq?id?no.18、19、20、21、22或23所示的序列中的一個(gè)。

15、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cll-1car可以包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

16、(i)cdr1-gftfgnhd(seq?id?no.48)；cdr2-idsggnvi(seq?idno.49)；cdr3-atdldsgaeslesvy(seq?id?no.50)；

17、(ii)cdr1-gfafgsad(seq?id?no.51)；cdr2-idsggntq(seq?idno.52)；cdr3-tdldpttdslenvy(seq?id?no.53)；

18、(iii)cdr1-grtfsayf(seq?id?no.54)；cdr2-inwngdss(seq?idno.55)；cdr3-aadthgavglgserlydy(seq?id?no.56)；

19、(iv)cdr1-gigvsstg(seq?id?no.57)；cdr2-idrdgtt(seq?id?no.58)；cdr3-tvvgdyy(seq?id?no.59)；

20、(v)cdr1-gfifgnyd(seq?id?no.60)；cdr2-issggndi(seq?id?no.61)；cdr3-aadldpgtdsldnih(seq?id?no.62)；或

21、(vi)cdr1-gftldyya(seq?id?no.63)；cdr2-isssdgst(seq?idno.64)；cdr3-aeavyyagvcvamyds(seq?id?no.65)。

22、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cll-1car可以包含如seq?id?no.66、67、68、69、70或71所示的序列中的一個(gè)。

23、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cd123?car可以包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

24、(i)cdr1-grsintya(seq?id?no.24)；cdr2-inynsryt(seq?id?no.25)；cdr3-aatsyyptdydvasrvatwps(seq?id?no.26)；

25、(ii)cdr1-gislna(seq?id?no.27)；cdr2-ikiggvs(seq?id?no.28)；cdr3-ntyppylngmdy(seq?id?no.29)；

26、(iii)cdr1-grsfntda(seq?id?no.30)；cdr2-iswdgtrt(seq?idno.31)；cdr3-aaepqkawpigtsaagfrs(seq?id?no.32)；

27、(iv)cdr1-gssisv(seq?id?no.33)；cdr2-iswsdgnt(seq?id?no.34)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.35)；

28、(v)cdr1-gssfsinv(seq?id?no.36)；cdr2-iswsdgst(seq?id?no.37)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.38)；或

29、(vi)cdr1-gsifrina(seq?id?no.39)；cdr2-vnwiggtt(seq?idno.40)；cdr3-satdkggssry(seq?id?no.41)。

30、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗cd123?car可以包含如seq?id?no.42、43、44、45、46或47所示的序列中的一個(gè)。

31、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗flt3?car可以包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

32、(i)cdr1-gifktny(seq?id?no.72)；cdr2-ftndgst(seq?id?no.73)；cdr3-yglgh(seq?id?no.74)；

33、(ii)cdr1-gtissiry(seq?id?no.75)；cdr2-itssgnt(seq?id?no.76)；cdr3-ytmgy(seq?id?no.77)；

34、(iii)cdr1-gifstny(seq?id?no.78)；cdr2-ftndggt(seq?id?no.79)；cdr3-cglgh(seq?id?no.80)；

35、(iv)cdr1-gsissiry(seq?id?no.81)；cdr2-itssgst(seq?id?no.82)；cdr3-ytmgy(seq?id?no.83)；或

36、(v)cdr1-gifstnh(seq?id?no.84)；cdr2-ftndgst(seq?id?no.85)；cdr3-yglgh(seq?id?no.86)。

37、具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗flt3?car可以包含如seq?idno.87、88、89、90或91所示的序列中的一個(gè)。

38、在第二方面，本發(fā)明提供了編碼多種car的核酸構(gòu)建體。核酸構(gòu)建體可以編碼針對(duì)以下抗原的三種或所有四種的car：cd33、cll-1、cd123和flt3。例如，核酸構(gòu)建體可以編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1car；和抗cd123?car。

39、核酸構(gòu)建體可以編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗flt3?car。

40、核酸構(gòu)建體可以編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123?car；和抗flt3?car。

41、在第三方面，本發(fā)明提供了用于制備根據(jù)本發(fā)明的第一方面的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)本發(fā)明的第二方面的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

42、在第四方面，本發(fā)明提供了載體，其包含根據(jù)本發(fā)明的第二方面的核酸構(gòu)建體。

43、在第五方面，提供了載體的試劑盒，其包含多個(gè)載體，每個(gè)載體編碼針對(duì)靶抗原的car。試劑盒可以包含編碼針對(duì)以下靶抗原的三種或所有四種的car的載體：cd33、cll-1、cd123和flt3。例如，試劑盒可以包含：

44、(i)第一載體，其包含編碼結(jié)合cd33的嵌合抗原受體(car)的核酸序列；

45、(ii)第二載體，其包含編碼結(jié)合cll1的car的核酸序列；和

46、(iii)第三載體，其包含編碼結(jié)合cd123的car的核酸序列。

47、試劑盒可以包含：

48、(i)第一載體，其包含編碼結(jié)合cd33的嵌合抗原受體(car)的核酸序列；

49、(ii)第二載體，其包含編碼結(jié)合cll1的car的核酸序列；和

50、(iii)第三載體，其包含編碼結(jié)合flt3的car的核酸序列。

51、試劑盒可以包含：

52、(i)第一載體，其包含編碼結(jié)合cd33的嵌合抗原受體(car)的核酸序列；

53、(ii)第二載體，其包含編碼結(jié)合cll1的car的核酸序列；

54、(iii)第三載體，其包含編碼結(jié)合cd123的car的核酸序列；和

55、(iii)第四載體，其包含編碼結(jié)合flt3的car的核酸序列。

56、在第六方面，提供了藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)本發(fā)明的第一方面的細(xì)胞，以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

57、在第七方面，提供了用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)本發(fā)明的第六方面的藥物組合物的步驟。

58、癌癥可以為急性髓樣白血病(aml)。

59、方法還可以涉及隨后向受試者施用同種異體移植物的步驟。

60、在第八方面，提供了根據(jù)本發(fā)明的第六方面的藥物組合物，其用于治療癌癥。

61、在第九方面，提供了根據(jù)本發(fā)明的第一方面的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。

62、aml母細(xì)胞表型比急性淋巴母細(xì)胞性白血病(all)母細(xì)胞的表型更加異質(zhì)性。髓細(xì)胞生成是由干細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的，其是隨機(jī)地并響應(yīng)于補(bǔ)充其區(qū)室(compartment)或分化的提示。類似于正常的髓樣干細(xì)胞，aml干細(xì)胞繁殖或分化，從而導(dǎo)致以一系列處于不同分化狀態(tài)的細(xì)胞進(jìn)行的骨髓替換。aml干細(xì)胞可以沿髓細(xì)胞生成的范圍發(fā)生，并因此具有不同的表面抗原概況。此外，在給定的患者中，個(gè)體發(fā)生中不同點(diǎn)可能存在干細(xì)胞nexi或不同干細(xì)胞的層次結(jié)構(gòu)，所有這些均導(dǎo)致疾病負(fù)擔(dān)(圖1)。

63、為了治療最大數(shù)量的患者，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過嵌合抗原受體的aml靶向需要根據(jù)髓樣譜系同時(shí)靶向多種抗原。

64、本發(fā)明的或門(or?gate)提供了相對(duì)于以上表1中所示的用于患有復(fù)發(fā)/難治性aml的患者的car?t細(xì)胞免疫療法的當(dāng)前i期臨床試驗(yàn)的優(yōu)勢。靶向單一抗原可以無法消除與疾病相關(guān)的干細(xì)胞區(qū)室。但是，同時(shí)靶向多種髓樣抗原意味著該治療在aml中是通用的。使用靶向多種抗原的car-t細(xì)胞的免疫療法根除疾病干細(xì)胞區(qū)室，而與干細(xì)胞區(qū)室的數(shù)量和位置無關(guān)。靶向多種抗原還降低了抗原下調(diào)導(dǎo)致的逃逸的可能性。

65、其它方面

66、本發(fā)明還提供了包含表達(dá)car的細(xì)胞的細(xì)胞組合物，其表達(dá)多種car。

67、細(xì)胞的組合物可以表達(dá)：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123car。

68、細(xì)胞的組合物可以表達(dá)：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗flt3?car。

69、細(xì)胞的組合物可以表達(dá)：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123car；和抗flt3?car。

70、該組合物的細(xì)胞可以各自表達(dá)一種car類型。例如，該組合物可以包含以下之一的混合物：

71、表達(dá)cd33?car的細(xì)胞、表達(dá)cll-1car的細(xì)胞和表達(dá)cd123?car的細(xì)胞；

72、表達(dá)cd33?car的細(xì)胞、表達(dá)cll-1car的細(xì)胞和表達(dá)flt3?car的細(xì)胞；或

73、表達(dá)cd33?car的細(xì)胞、表達(dá)cll-1car的細(xì)胞、表達(dá)cd123?car的細(xì)胞和表達(dá)flt3car的細(xì)胞。

74、或者，組合物的至少一些細(xì)胞可以表達(dá)超過一種car，例如，組合物可以包含以下的組合：

75、表達(dá)cd33?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)cd123?car的細(xì)胞；

76、表達(dá)cd33?car/cd123?car或門的細(xì)胞和表達(dá)cll-1car的細(xì)胞；

77、表達(dá)cd123?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)cd33?car的細(xì)胞；

78、表達(dá)cd33?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)flt3?car的細(xì)胞；

79、表達(dá)cd33?car/flt3?car或門的細(xì)胞和表達(dá)cll-1car的細(xì)胞；

80、表達(dá)flt3?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)cd33?car的細(xì)胞；

81、表達(dá)cd33?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)cd123?car/flt3?car或門的細(xì)胞；

82、表達(dá)cd123?car/cll-1car或門的細(xì)胞和表達(dá)cd33?car/flt3?car或門的細(xì)胞；或

83、表達(dá)cd33?car/cd123?car或門的細(xì)胞和表達(dá)cll-1car/flt3?car或門的細(xì)胞。

84、組合物的至少一些細(xì)胞可以表達(dá)tancar，如下所述。例如，組合物可以包含以下的組合：

85、表達(dá)cd33/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)cd123?car的細(xì)胞；

86、表達(dá)cd33/cd123?tancar的細(xì)胞和表達(dá)cll-1car的細(xì)胞；

87、表達(dá)cd123/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)cd33?car的細(xì)胞；

88、表達(dá)cd33/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)flt3?car的細(xì)胞；

89、表達(dá)cd33/flt3?tancar的細(xì)胞和表達(dá)cll-1car的細(xì)胞；

90、表達(dá)flt3/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)cd33?car的細(xì)胞；

91、表達(dá)cd33/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)cd123/flt3?tancar的細(xì)胞；

92、表達(dá)cd123/cll-1tancar的細(xì)胞和表達(dá)cd33/flt3?tancar的細(xì)胞；或

93、表達(dá)cd33/cd123?tancar的細(xì)胞和表達(dá)cll-1/flt3?tancar的細(xì)胞。

94、下文描述的核酸序列、核酸構(gòu)建體、載體和載體的試劑盒以及方法可以用于制備本發(fā)明該方面的細(xì)胞組合物的細(xì)胞。

95、如下所述，細(xì)胞組合物可以用于治療疾病的方法中。

96、在以下編號(hào)的段落中概括了本發(fā)明的其它的方面：

97、a1.結(jié)構(gòu)域抗體(dab)，其結(jié)合cd33并包含以下互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：

98、(i)cdr1-grtfsmhs(seq?id?no.1)；cdr2-vtwsgdtf(seq?id?no.2)；cdr3-kddpyrpaydy(seq?id?no.3)；

99、(ii)cdr1-grtfssyv(seq?id?no.4)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aamelrggsynyassrqydy(seq?id?no.6)；

100、(iii)cdr1-eiafsnfn(seq?id?no.7)；cdr2-isshgdtny(seq?idno.8)；cdr3-nandpflsvsdf(seq?id?no.9)；

101、(iv)cdr1-gsifsina(seq?id?no.10)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aaisgwgrsirvgeryeydy(seq?id?no.11)；

102、(v)cdr1-grtsssst(seq?id?no.12)；cdr2-itlsggst(seq?id?no.13)；cdr3-aarrwsnnrggydragydy(seq?id?no.14)；或

103、(vi)cdr1-grtfssya(seq?id?no.15)；cdr2-itwsggst(seq?idno.16)；cdr3-amllrgglydytdyilyny(seq?id?no.17)。

104、a2.根據(jù)段落a1的dab，其包含如seq?id?no.18、19、20、21、22或23所示的序列中的一個(gè)。

105、a3.嵌合抗原受體(car)，其具有包含根據(jù)段落a1或a2的dab的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

106、a4.核酸序列，其編碼根據(jù)段落a1或a2的dab或根據(jù)段落a3的car。

107、a5.載體，其包含根據(jù)段落a4的核酸序列。

108、a6.細(xì)胞，其表達(dá)根據(jù)段落a3的car。

109、a7.用于制備根據(jù)段落a6的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)段落a5的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

110、a8.藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)段落a6的細(xì)胞。

111、a9.用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)段落a8的藥物組合物的步驟。

112、a10.根據(jù)段落a9的方法，其中所述癌癥為急性髓樣白血病(aml)。

113、a11.根據(jù)段落a8的藥物組合物，其用于治療癌癥。

114、a12.根據(jù)段落a6的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。

115、b1.結(jié)構(gòu)域抗體(dab)，其結(jié)合cd123并包含以下互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：

116、(i)cdr1-grsintya(seq?id?no.24)；cdr2-inynsryt(seq?id?no.25)；cdr3-aatsyyptdydvasrvatwps(seq?id?no.26)；

117、(ii)cdr1-gislna(seq?id?no.27)；cdr2-ikiggvs(seq?id?no.28)；cdr3-ntyppylngmdy(seq?id?no.29)；

118、(iii)cdr1-grsfntda(seq?id?no.30)；cdr2-iswdgtrt(seq?idno.31)；cdr3-aaepqkawpigtsaagfrs(seq?id?no.32)；

119、(iv)cdr1-gssisv(seq?id?no.33)；cdr2-iswsdgnt(seq?id?no.34)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.35)；

120、(v)cdr1-gssfsinv(seq?id?no.36)；cdr2-iswsdgst(seq?id?no.37)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.38)；或

121、(vi)cdr1-gsifrina(seq?id?no.39)；cdr2-vnwiggtt(seq?idno.40)；cdr3-satdkggssry(seq?id?no.41)。

122、b2.根據(jù)段落b1的dab，其包含如seq?id?no:42、43、44、45、46或47所示的序列中的一個(gè)。

123、b3.嵌合抗原受體(car)，其具有包含根據(jù)段落b1或b2的dab的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

124、b4.核酸序列，其編碼根據(jù)段落b1或b2的dab或根據(jù)段落b3的car。

125、b5.載體，其包含根據(jù)段落b4的核酸序列。

126、b6.細(xì)胞，其表達(dá)根據(jù)段落b3的car。

127、b7.用于制備根據(jù)段落b6的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)段落b5的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

128、b8.藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)段落b6的細(xì)胞。

129、b9.用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)段落b8的藥物組合物的步驟。

130、b10.根據(jù)段落b9的方法，其中所述癌癥為急性髓樣白血病(aml)。

131、b11.根據(jù)段落b8的藥物組合物，其用于治療癌癥。

132、b12.根據(jù)段落b6的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。

133、本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)域抗體(dab)，其結(jié)合flt3并包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

134、c1.結(jié)構(gòu)域抗體(dab)，其結(jié)合flt3并包含以下互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：

135、(i)cdr1-gifktny(seq?id?no.72)；cdr2-ftndgst(seq?id?no.73)；cdr3-yglgh(seq?id?no.74)；

136、(ii)cdr1-gtissiry(seq?id?no.75)；cdr2-itssgnt(seq?id?no.76)；cdr3-ytmgy(seq?id?no.77)；

137、(iii)cdr1-gifstny(seq?id?no.78)；cdr2-ftndggt(seq?id?no.79)；cdr3-cglgh(seq?id?no.80)；

138、(iv)cdr1-gsissiry(seq?id?no.81)；cdr2-itssgst(seq?id?no.82)；cdr3-ytmgy(seq?id?no.83)；或

139、(v)cdr1-gifstnh(seq?id?no.84)；cdr2-ftndgst(seq?id?no.85)；cdr3-yglgh(seq?id?no.86)。

140、c2.根據(jù)段落c1的dab，其包含如seq?id?no.87、88、89、90或91所示的序列中的一個(gè)。

141、c3.嵌合抗原受體(car)，其具有包含根據(jù)段落c1或c2的dab的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

142、c4.核酸序列，其編碼根據(jù)段落c1或c2的dab或根據(jù)段落c3的car。

143、c5.載體，其包含根據(jù)段落c4的核酸序列。

144、c6.細(xì)胞，其表達(dá)根據(jù)段落c3的car。

145、c7.用于制備根據(jù)段落c6的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)段落c5的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

146、c8.藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)段落c6的細(xì)胞。

147、c9.用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)段落c8的藥物組合物的步驟。

148、c10.根據(jù)段落c9的方法，其中所述癌癥為急性髓樣白血病(aml)。

149、c11.根據(jù)段落c8的藥物組合物，其用于治療癌癥。

150、c12.根據(jù)段落c6的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。

151、d1.結(jié)構(gòu)域抗體(dab)，其結(jié)合cll1并包含以下互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：

152、(i)cdr1-gftfgnhd(seq?id?no.48)；cdr2-idsggnvi(seq?idno.49)；cdr3-atdldsgaeslesvy(seq?id?no.50)；

153、(ii)cdr1-gfafgsad(seq?id?no.51)；cdr2-idsggntq(seq?idno.52)；cdr3-tdldpttdslenvy(seq?id?no.53)；

154、(iii)cdr1-grtfsayf(seq?id?no.54)；cdr2-inwngdss(seq?idno.55)；cdr3-aadthgavglgserlydy(seq?id?no.56)；

155、(iv)cdr1-gigvsstg(seq?id?no.57)；cdr2-idrdgtt(seq?id?no.58)；cdr3-tvvgdyy(seq?id?no.59)；

156、(v)cdr1-gfifgnyd(seq?id?no.60)；cdr2-issggndi(seq?id?no.61)；cdr3-aadldpgtdsldnih(seq?id?no.62)；或

157、(vi)cdr1-gftldyya(seq?id?no.63)；cdr2-isssdgst(seq?idno.64)；cdr3-aeavyyagvcvamyds(seq?id?no.65)。

158、d2.根據(jù)段落d1的dab，其包含如seq?id?no.66、67、68、69、70或71所示的序列中的一個(gè)。

159、d3.嵌合抗原受體(car)，其具有包含根據(jù)段落d1或d2的dab的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

160、d4.核酸序列，其編碼根據(jù)段落d1或d2的dab或根據(jù)段落d3的car。

161、d5.載體，其包含根據(jù)段落d4的核酸序列。

162、d6.細(xì)胞，其表達(dá)根據(jù)段落d3的car。

163、d7.用于制備根據(jù)段落d6的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)段落d5的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

164、d8.藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)段落d6的細(xì)胞。

165、d9.用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)段落d8的藥物組合物的步驟。

166、d10.根據(jù)段落d9的方法，其中所述癌癥為急性髓樣白血病(aml)。

167、d11.根據(jù)段落d8的藥物組合物，其用于治療癌癥。

168、d12.根據(jù)段落d6的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。

169、本發(fā)明還涉及以下實(shí)施方案：

170、1.細(xì)胞，其包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123car。

171、2.細(xì)胞，其包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗flt3car。

172、3.根據(jù)實(shí)施方案1或2的細(xì)胞，其包含：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；抗cd123?car；和抗flt3?car。

173、4.根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中一個(gè)或多個(gè)car包含結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

174、5.根據(jù)實(shí)施方案1至3中任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中每個(gè)car包含結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

175、6.根據(jù)實(shí)施方案1至3中任一項(xiàng)的細(xì)胞，其包含一個(gè)或多個(gè)串聯(lián)嵌合抗原受體(tancar)。

176、7.根據(jù)實(shí)施方案6的細(xì)胞，其中所述tancar包含結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

177、8.根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中所述抗cd33?car具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

178、(i)cdr1-grtfsmhs(seq?id?no.1)；cdr2-vtwsgdtf(seq?id?no.2)；cdr3-kddpyrpaydy(seq?id?no.3)；

179、(ii)cdr1-grtfssyv(seq?id?no.4)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aamelrggsynyassrqydy(seq?id?no.6)；

180、(iii)cdr1-eiafsnfn(seq?id?no.7)；cdr2-isshgdtny(seq?idno.8)；cdr3-nandpflsvsdf(seq?id?no.9)；

181、(iv)cdr1-gsifsina(seq?id?no.10)；cdr2-iswsggst(seq?id?no.5)；cdr3-aaisgwgrsirvgeryeydy(seq?id?no.11)；

182、(v)cdr1-grtsssst(seq?id?no.12)；cdr2-itlsggst(seq?id?no.13)；cdr3-aarrwsnnrggydragydy(seq?id?no.14)；或

183、(vi)cdr1-grtfssya(seq?id?no.15)；cdr2-itwsggst(seq?idno.16)；cdr3-amllrgglydytdyilyny(seq?id?no.17)。

184、9.根據(jù)實(shí)施方案8的細(xì)胞，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no.18、19、20、21、22或23所示的序列中的一個(gè)。

185、10.根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的細(xì)胞，其中所述抗cll1?car具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

186、(i)cdr1-gftfgnhd(seq?id?no.48)；cdr2-idsggnvi(seq?idno.49)；cdr3-atdldsgaeslesvy(seq?id?no.50)；

187、(ii)cdr1-gfafgsad(seq?id?no.51)；cdr2-idsggntq(seq?idno.52)；cdr3-tdldpttdslenvy(seq?id?no.53)；

188、(iii)cdr1-grtfsayf(seq?id?no.54)；cdr2-inwngdss(seq?idno.55)；cdr3-aadthgavglgserlydy(seq?id?no.56)；

189、(iv)cdr1-gigvsstg(seq?id?no.57)；cdr2-idrdgtt(seq?id?no.58)；cdr3-tvvgdyy(seq?id?no.59)；

190、(v)cdr1-gfifgnyd(seq?id?no.60)；cdr2-issggndi(seq?id?no.61)；cdr3-aadldpgtdsldnih(seq?id?no.62)；或

191、(vi)cdr1-gftldyya(seq?id?no.63)；cdr2-isssdgst(seq?idno.64)；cdr3-aeavyyagvcvamyds(seq?id?no.65)。

192、11.根據(jù)實(shí)施方案10的細(xì)胞，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no.66、67、68、69、70或71所示的序列中的一個(gè)。

193、12.根據(jù)實(shí)施方案1的細(xì)胞，其中所述抗cd123?car具有包含以下互補(bǔ)決定區(qū)的結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域：

194、(i)cdr1-grsintya(seq?id?no.24)；cdr2-inynsryt(seq?id?no.25)；cdr3-aatsyyptdydvasrvatwps(seq?id?no.26)；

195、(ii)cdr1-gislna(seq?id?no.27)；cdr2-ikiggvs(seq?id?no.28)；cdr3-ntyppylngmdy(seq?id?no.29)；

196、(iii)cdr1-grsfntda(seq?id?no.30)；cdr2-iswdgtrt(seq?idno.31)；cdr3-aaepqkawpigtsaagfrs(seq?id?no.32)；

197、(iv)cdr1-gssisv(seq?id?no.33)；cdr2-iswsdgnt(seq?id?no.34)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.35)；

198、(v)cdr1-gssfsinv(seq?id?no.36)；cdr2-iswsdgst(seq?id?no.37)；cdr3-aveprgwpkghry(seq?id?no.38)；或

199、(vi)cdr1-gsifrina(seq?id?no.39)；cdr2-vnwiggtt(seq?idno.40)；cdr3-satdkggssry(seq?id?no.41)。

200、13.根據(jù)實(shí)施方案12的細(xì)胞，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no.42、43、44、45、46或47所示的序列中的一個(gè)。

201、14.根據(jù)實(shí)施方案2的細(xì)胞，其中所述抗ftl3?car具有結(jié)構(gòu)域抗體(dab)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含以下互補(bǔ)決定區(qū)：

202、(i)cdr1-(seq?id?no.72)；cdr2-(seq?id?no.73)；cdr3-(seq?idno.74)；

203、(ii)cdr1-(seq?id?no.75)；cdr2-(seq?id?no.76)；cdr3-(seq?idno.77)；

204、(iii)cdr1-(seq?id?no.78)；cdr2-(seq?id?no.79)；cdr3-(seq?idno.80)；

205、(iv)cdr1-(seq?id?no.81)；cdr2-(seq?id?no.82)；cdr3-(seq?idno.83)；

206、(v)cdr1-(seq?id?no.84)；cdr2-(seq?id?no.85)；cdr3-(seq?idno.86)；或

207、(vi)cdr1-(seq?id?no.87)；cdr2-(seq?id?no.88)；cdr3-(seq?idno.89)。

208、15.根據(jù)實(shí)施方案14的細(xì)胞，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含如seq?id?no.90、91、92、93、94或95所示的序列中的一個(gè)。

209、16.核酸構(gòu)建體，其編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗cd123car。

210、17.核酸構(gòu)建體，其編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；和抗flt3?car。

211、18.根據(jù)實(shí)施方案16或17的核酸構(gòu)建體，其編碼：抗cd33嵌合抗原受體(car)；抗cll1?car；抗cd123?car；和抗flt3?car。

212、19.用于制備根據(jù)實(shí)施方案1的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)實(shí)施方案16的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

213、20.用于制備根據(jù)實(shí)施方案2的細(xì)胞的方法，其包括用根據(jù)實(shí)施方案17的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

214、21.載體，其包含根據(jù)實(shí)施方案16至18中任一項(xiàng)的核酸構(gòu)建體。

215、22.載體的試劑盒，其包含：

216、(i)第一載體，其包含編碼結(jié)合cd33的嵌合抗原受體(car)的核酸序列；

217、(ii)第二載體，其包含編碼結(jié)合cll1的car的核酸序列；和

218、(iii)第三載體，其包含編碼結(jié)合cd123的car的核酸序列。

219、23.載體的試劑盒，其包含：

220、(i)第一載體，其包含編碼結(jié)合cd33的嵌合抗原受體(car)的核酸序列；

221、(ii)第二載體，其包含編碼結(jié)合cll1的car的核酸序列；和

222、(iii)第三載體，其包含編碼結(jié)合flt3的car的核酸序列。

223、24.藥物組合物，其包含多個(gè)根據(jù)實(shí)施方案1至15中任一項(xiàng)的細(xì)胞，以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

224、25.用于治療癌癥的方法，其包括向受試者施用根據(jù)實(shí)施方案24的藥物組合物的步驟。

225、26.根據(jù)實(shí)施方案25的方法，其中所述癌癥為急性髓樣白血病(aml)。

226、27.根據(jù)實(shí)施方案26的方法，其還涉及隨后向所述受試者施用同種異體移植物的步驟。

227、28.根據(jù)實(shí)施方案24的藥物組合物，其用于治療癌癥。

228、29.根據(jù)實(shí)施方案1至15中任一項(xiàng)的細(xì)胞在制備用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。