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      一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法及其應(yīng)用

      文檔序號:40400643發(fā)布日期:2024-12-20 12:24閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,包括如下步驟:

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述黃素酶nica2基因片段的序列如seq?id?no.1所示,阿拉伯糖誘導(dǎo)型啟動子基因片段的序列如seq?id?no.2所示,載體質(zhì)粒pyydt基因片段的序列如seq?id?no.3所示,細(xì)胞色素c蛋白基因片段的序列如seq?id?no.4所示。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述f-1的序列如seq?id?no.5所示;所述r-1的序列如seq?id?no.6所示;所述f-2的序列如seq?id?no.7所示;所述r-2的序列如seq?id?no.8所示;所述ck-f-1的序列如seq?idno.9所示;所述ck-r-1的序列如seq?id?no.10所示;所述f-3的序列如seq?id?no.11所示;所述r-3的序列如seq?id?no.12所示;所述f-4的序列如seq?id?no.13所示;所述r-4的序列如seq?id?no.14所示;所述f-5的序列如seq?id?no.15所示;所述r-5的序列如seq?idno.16所示。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟二和步驟四中,轉(zhuǎn)化后篩選陽性克隆的具體步驟如下:將gibson連接獲得的pyydt-nica2質(zhì)粒和pyydt-nc質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入turbo大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,利用pcr擴增驗證陽性后提取質(zhì)粒,獲得pyydt-nica2質(zhì)粒和pyydt-nc質(zhì)粒。

      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述電轉(zhuǎn)入的具體步驟如下:

      6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述希瓦氏菌感受態(tài)細(xì)胞的制備如下:

      7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,希瓦氏菌的活化步驟如下:

      8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述振蕩培養(yǎng)的溫度設(shè)置為30℃,轉(zhuǎn)速設(shè)置為200?rpm,lb培養(yǎng)基配方為:10g/l胰蛋白胨、5g/l酵母提取物、10g/l?nacl。

      9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述基因表達驗證是將工程希瓦氏菌mr-1/pyydt-nica2和工程希瓦氏菌mr-1/pyydt-nc進行轉(zhuǎn)錄水平的分子驗證,將菌株在30℃下置于含有10μm阿拉伯糖溶液的lb液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時,收集培養(yǎng)后的細(xì)胞提取總rna,進行rt-qpcr反應(yīng)。

      10.一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的應(yīng)用,其特征在于,利用如權(quán)利要求1-9任一項所述的構(gòu)建方法得到的工程希瓦氏菌降解煙草廢水中的尼古丁。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明公開了一種降解尼古丁廢水的工程希瓦氏菌的構(gòu)建方法及其應(yīng)用,屬于廢水處理技術(shù)領(lǐng)域。利用基因合成技術(shù)獲取假單胞菌的黃素酶NicA2基因、細(xì)胞色素c蛋白基因和阿拉伯糖誘導(dǎo)型啟動子基因,通過Gibson連接技術(shù)將三種基因片段連接到載體質(zhì)粒pYYDT骨架上,構(gòu)建pYYDT?NC質(zhì)粒。pYYDT?NC質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入希瓦氏菌得到工程希瓦氏菌MR?1/pYYDT?NC,利用該菌株處理煙草廢水中的尼古丁,表現(xiàn)出高效氧化降解尼古丁的性能,該菌株在不同濃度尼古丁的廢水中的適應(yīng)性良好,降解煙草廢水中尼古丁的實際應(yīng)用效果顯著。

      技術(shù)研發(fā)人員:李會會,吳潔,何汝立
      受保護的技術(shù)使用者:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)先進技術(shù)研究院
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/19
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