一種血液檢驗(yàn)中細(xì)菌反接鑒定的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)病害微生物鑒別技術(shù)領(lǐng)域,具體是提供一種簡(jiǎn)單且準(zhǔn)確的血液檢驗(yàn)中細(xì)菌反接鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人體正常的血液是沒(méi)有細(xì)菌的。當(dāng)人體受到細(xì)菌感染后,根據(jù)受細(xì)菌感染程度的不同,可以簡(jiǎn)單地把血液受細(xì)菌感染引起的病癥分為菌血癥、敗血癥、膿毒血癥等。在抵抗力降低的情況下細(xì)菌感染人體一般先引起某一部分的炎癥,如癤、癰、肺炎、腦炎等。醫(yī)學(xué)上把因細(xì)菌由局部炎癥部位進(jìn)入血循環(huán)的病癥稱為菌血癥。這時(shí)往往會(huì)有少量細(xì)菌侵入血液,如果人的全身情況很好,這少量的細(xì)菌會(huì)被身體里產(chǎn)生的各種抗體、吞噬細(xì)胞和血液里的白細(xì)胞消滅。而如果侵入血管的病菌很多,毒性很強(qiáng),或者由于人體過(guò)勞、營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重創(chuàng)傷或有其他疾病等原因而抵抗力極其低下時(shí),細(xì)菌會(huì)大量繁殖并產(chǎn)生有毒有害物質(zhì),隨血流播散到全身。這時(shí)患者表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)、頭痛等嚴(yán)重中毒癥狀,體溫常高達(dá)40°C以上。同時(shí),細(xì)菌可侵入各個(gè)臟器引起臟器的發(fā)炎、化膿。如果播散到皮膚,可出現(xiàn)各種皮疹。醫(yī)學(xué)上把細(xì)菌進(jìn)入血液后在血液中生長(zhǎng)繁殖引起的病癥稱為敗血癥。如果是化膿性細(xì)菌進(jìn)入血液后,不但在血液中繁殖,引起一些臟器形成膿腫甚至是器官功能障礙、組織灌注不良或低血壓,這種病癥則稱之為膿毒血癥。膿毒癥病死率較高,大約有9%的膿毒癥患者會(huì)發(fā)生膿毒性休克和多器管功能不全,重癥監(jiān)護(hù)室中一半以上的死亡是由膿毒性休克和多器官功能不全引起的。研究表明,出現(xiàn)臟器器官衰竭、休克、多重感染、嚴(yán)重的潛在疾病的患者預(yù)后較差。以上菌血癥、敗血癥、膿毒血癥這三種病癥的一個(gè)共同點(diǎn)是患者血液中都有細(xì)菌。如果用患者血液做培養(yǎng),即可以檢出致病菌。因此,血液細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定的結(jié)果對(duì)疾病的診斷與治療具有重要意義。
[0003]一般來(lái)說(shuō),血液細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本是由檢驗(yàn)人員采集的,采集的標(biāo)本經(jīng)過(guò)孵育、移種,進(jìn)行初步判斷,然后再根據(jù)各種病原菌的生物學(xué)特性鑒定發(fā)出報(bào)告。但在實(shí)際臨床檢驗(yàn)中,采集的血樣直接孵育培養(yǎng),常常會(huì)出現(xiàn)某些特定的致病菌未能檢出的情況。尤其是近年來(lái),血液感染發(fā)生呈上升趨勢(shì),許多設(shè)備條件較好的醫(yī)院基本均采用自動(dòng)血液細(xì)菌培養(yǎng)的設(shè)備進(jìn)行血液細(xì)菌培養(yǎng),普遍地存在血培養(yǎng)的陽(yáng)性率不夠高,培養(yǎng)周期長(zhǎng),易出現(xiàn)污染導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果等問(wèn)題,這對(duì)臨床治療中選擇用藥、及時(shí)有效地控制感染和最后病人治療效果都具有非常巨大的影響。
[0004]因此提供一種簡(jiǎn)單且準(zhǔn)確的血液檢驗(yàn)中細(xì)菌反接鑒定的方法具有非常重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]針對(duì)現(xiàn)有生產(chǎn)存在的技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)單、安全可靠、成本低廉的泡菜生花病害菌的分選挑取方法。
[0006]本發(fā)明方法根據(jù)科赫法則,采用傳統(tǒng)微生物鑒定方法與臨床血液檢驗(yàn)方法進(jìn)行結(jié)合。具體技術(shù)方案為一種血液檢驗(yàn)中細(xì)菌反接鑒定的方法,其特征在于包括步驟:
[0007]I)取樣培養(yǎng):以無(wú)菌操作從血樣中取樣進(jìn)行病原菌孵育,置于搖床中培養(yǎng)10?24h ;
[0008]2)反接培養(yǎng):取液面上層液作為樣品,涂抹反接于血清培養(yǎng)基上,倒置于36°C恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2?3d,觀察菌落生長(zhǎng)狀況;
[0009]3)初步藥敏:挑取病害菌,初步藥敏測(cè)試;
[0010]4)鑒定:根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行鑒定,視情況進(jìn)行二次藥敏測(cè)試。
[0011]本發(fā)明通過(guò)對(duì)疑似病害微生物進(jìn)行接種培養(yǎng)后再反接培養(yǎng),利用細(xì)菌培養(yǎng)后不同種類的微生物不同的生長(zhǎng)特性和菌落特征使其得以區(qū)分并選取病害疑似菌進(jìn)行藥敏測(cè)試,為臨床醫(yī)生針對(duì)某一特定感染提供依據(jù)。本發(fā)明方法具有實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單、成本低廉、易操作實(shí)施、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),能在一定程度上克服傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)的局限。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0013]實(shí)施例
[0014]試驗(yàn)原料和試劑
[0015]I)患者血樣;
[0016]2)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基:將血清均勻加熱至56°C并保持30min,貯存于4°C,之后與基本培養(yǎng)基混合,基本培養(yǎng)基占80%?90%,血清占10%?20%。按I %體積分?jǐn)?shù)加入雙抗忙存液(青霉素+鏈霉素);
[0017]3)藥敏測(cè)試:哌拉西林他唑巴坦鈉、慶大霉素、萬(wàn)古霉素、克林霉素、頭孢呋辛鈉、頭孢噻廂鈉。
[0018]試驗(yàn)步驟:
[0019]I)取樣培養(yǎng):以無(wú)菌操作從血樣中取樣進(jìn)行病原菌孵育,置于搖床中培養(yǎng)10?24h ;
[0020]2)反接培養(yǎng):取液面上層液作為樣品,涂抹反接于血清培養(yǎng)基上,倒置于36°C恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2d,觀察菌落生長(zhǎng)狀況;
[0021]3)初步藥敏:挑取病害菌,初步藥敏測(cè)試;
[0022]4)鑒定:根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行鑒定,視情況進(jìn)行二次藥敏測(cè)試。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種血液檢驗(yàn)中細(xì)菌反接鑒定的方法,其特征在于包括步驟:1)取樣培養(yǎng):以無(wú)菌操作從血樣中取樣進(jìn)行病原菌孵育,置于搖床中培養(yǎng)10?24h; 2)反接培養(yǎng):取液面上層液作為樣品,涂抹反接于血清培養(yǎng)基上,倒置于36°C恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2?3d,觀察菌落生長(zhǎng)狀況; 3)初步藥敏:挑取病害菌,初步藥敏測(cè)試; 4)鑒定:根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行鑒定,視情況進(jìn)行二次藥敏測(cè)試。
【專利摘要】本發(fā)明通過(guò)對(duì)疑似病害微生物進(jìn)行接種培養(yǎng)后再反接培養(yǎng),利用細(xì)菌培養(yǎng)后不同種類的微生物不同的生長(zhǎng)特性和菌落特征使其得以區(qū)分并選取病害疑似菌進(jìn)行藥敏測(cè)試,為臨床醫(yī)生針對(duì)某一特定感染提供依據(jù)。本發(fā)明方法具有實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單、成本低廉、易操作實(shí)施、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),能在一定程度上克服傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)的局限。
【IPC分類】C12N1-20, C12Q1-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104561225
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310471556
【發(fā)明人】晏健強(qiáng)
【申請(qǐng)人】晏健強(qiáng)
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月11日