一種金龜子綠僵菌菌株在制備殺蔬菜害蟲的藥劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種金龜子綠僵菌菌株的新應(yīng)用，具體涉及一種殺蔬菜害蟲黃曲條跳 甲、小菜蛾金龜子綠僵菌制劑及其應(yīng)用，屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃曲條跳甲，屬鞘翅目、葉甲科害蟲，簡稱跳甲，為葉菜類蔬菜重要害蟲。小菜蛾， 俗稱小青蟲，也主要為害葉菜類蔬菜。這兩者害蟲往往在蔬菜地同時或交替發(fā)生，給蔬菜生 產(chǎn)每年帶來巨大損失。目前，主要施用化學(xué)農(nóng)藥控制黃曲條跳甲和小菜蛾，這嚴(yán)重影響人體 健康，破壞生態(tài)環(huán)境。故采用安全的微生物制劑替代化學(xué)農(nóng)藥成為黃曲條跳甲和小菜蛾控 制的重要發(fā)展方向。
[0003] 昆蟲病原真菌是最重要的殺蟲微生物類群，真菌殺蟲劑作為重要的替代農(nóng)藥，近 年來受到廣泛關(guān)注。綠僵菌是最早用于防治害蟲的昆蟲病原真菌之一，能 感染全世界約有200多種昆蟲，利用它來防治害蟲的研究與實踐已愈百年。目前已分離到 一些能侵染黃曲條跳甲或小菜蛾的殺蟲真菌菌株，部分菌株的制劑被登記防治小菜蛾，但 是沒能得到廣泛應(yīng)用，主要是因為菌株殺蟲范圍窄，不能同時防治蔬菜其他害蟲。金龜子 綠僵菌CQMa421是一株從自然感染的稻縱卷葉螟僵蟲上分離篩選出的一株生產(chǎn)性狀好、對 稻縱卷葉螟具有高毒力殺蟲真菌，已在中國專利CN102212483中公開，該菌株于2011年02 月25日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏編號：CGMCC NO. 4609。該菌株及其制劑對黃曲條跳甲和小菜蛾的毒力與防治效果未見報道。
[0004] 可濕性粉劑是一種最基本的農(nóng)藥劑型，可制成懸濁液，進(jìn)行噴霧。殺蟲真菌可濕性 粉劑是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性劑和填充料，通過過篩制成。由于真菌孢子 活性受潤濕劑的影響，制劑中往往減少表面活性劑的用量，導(dǎo)致濕潤分散效果差，同時產(chǎn)品 貯存期仍較短，很少超過12個月。因濕潤分散特性、貯存穩(wěn)定性的問題和田間防效受紫外 照射影響大，殺蟲真菌可濕性粉劑雖有登記注冊，一直沒有大量應(yīng)用。因此，篩選廣譜菌株、 馴化高毒力菌株和研制濕潤分散特性良好的真菌殺蟲劑可濕性粉劑，延長其貯存穩(wěn)定性， 從而促進(jìn)真菌殺蟲劑在防治黃曲條跳甲和小菜蛾中的應(yīng)用，有利于減少水稻生產(chǎn)中化學(xué)農(nóng) 藥的用量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種金龜子綠僵菌菌株在殺黃曲條跳甲或小菜蛾中 的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明第二目的在于提供一種金龜子綠僵菌制劑，該制劑耐紫外照射、保存期長、 防效好。
[0007] 本發(fā)明第三目的在于提供一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力，而不影響其產(chǎn)孢、耐熱特 性的方法。
[0008] 本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的： 金龜子綠僵菌CQMa421菌株在制備防治黃曲條跳甲或小菜蛾的藥劑中的應(yīng)用，該菌株 能侵染黃曲條跳甲和小菜蛾，致死率可分別達(dá)到60. 9%和70. 8%。
[0009] 不同的綠僵菌菌株具有特定的寄主，如公開報道：金龜子綠僵菌FI-1045菌株能 侵染甘鹿路贈（Anoplophora glabripennis)，金龜子綠僵菌A ESALQ818菌株能侵染埃及 斑蚊（Aedes aegypti)，金龜子綠僵菌EAMb 09/01-Su菌株能侵染地中海果實蠅，金龜子 綠僵菌TORL526菌株能侵染蘿卜蚜（Lipaphis erysimi)，金龜子綠僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉風(fēng)（Aleurodicus dispersus Russell),金龜子綠僵菌ICIPE-30菌株能侵染網(wǎng)比亞按 蚊（anopheles gambiae)，金龜子綠僵菌ESC 1菌株能侵染白蟻，金龜子綠僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根蛆（sugarbeet root maggot),金龜子綠僵菌M105菌株能侵染幢蟲，金龜子 綠僵菌廣譜菌株F-52能侵染路贈（Anoplophora glabripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠹 (Xylosandrus germanus)，金龜子綠僵菌廣譜菌株549能侵染煙草天蛾（Manduca sexta)、 埃及斑蚊（Aedes aegypti)，羅伯茨綠僵菌廣譜菌株ARSEF 23能侵染蝗蟲、鱗翅目幼蟲、甲 蟲等。
[0010] 優(yōu)選地，上述防治黃曲條跳甲或小菜蛾的藥劑由綠僵菌CQMa421干孢子粉 44-60%、硅藻土 30-40%、納米氫氧化鋁0. 5-1%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%和 0P-10 3-5%組成，均以重量百分比。
[0011] 一種金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由硅藻土30-40%、納米氫氧化鋁 0. 5-1%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌CQMa421干孢子粉 44-60%組成，均以重量百分比。
[0012] 上述各組分均為本領(lǐng)域明確的組分，吐溫-80為聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、 簡稱聚山梨酯-80, 0P-10為烷基酚聚氧乙烯醚，綠僵菌CQMa421在中國專利CN102212483 中公開、該菌株于2011年02月25日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)保藏、保藏編號：CGMCC NO. 4609 ;納米氫氧化鋁為粒徑為納米級的氫氧化鋁。
[0013] 上述吐溫-80和0P-10優(yōu)選純度>95%的吐溫-80和0P-10 ;上述羧甲基纖維素鈉 (CMC)優(yōu)選純度大于95% ;上述娃藻土優(yōu)選為白色至淺褐色疏松粉末，純度大于85%，含水量 小于1% ;上述納米氫氧化鋁優(yōu)選為粒徑小于30nm。上述綠僵菌CQMa421干孢子粉為純孢子 粉，含孢量> 150億孢子/克，含水量< 5% ;以上均以質(zhì)量百分含量計。
[0014] 上述金龜子綠僵菌制劑中納米氫氧化鋁附著在真菌孢子疏水表面，有效阻隔了制 劑中高濃度（3-5wt%)吐溫-80和0P-10的不良影響，有效保證了孢子的生物活性。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由硅藻土 35-40%、 納米氫氧化鋁0.5-0. 8%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌 CQMa421干孢子粉45-55%組成，均以重量百分比。
[0016] 上述綠僵菌CQMa421干孢子粉優(yōu)選采用強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉，所 述強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：在28°C、濕度50-70%環(huán)境中，將 金龜子綠僵菌CQMa421接種于黃曲條跳甲成蟲飼養(yǎng)，選擇最先感病死亡的黃曲條跳甲，放 入28°C培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲表面生長出新鮮孢子；收集新鮮孢子，接種3-4 齡小菜蛾幼蟲，同上獲得昆蟲表面生長出的新鮮孢子。如上所述循環(huán)接種黃曲條跳甲和小 菜蛾16次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無菌條件下，用接種環(huán)挑取馴 化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨芐青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上劃線，將劃線好 的培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)放置于28°C恒溫箱中培養(yǎng)；3 -4日后挑選長出的典型而無雜菌的菌落，在菌 落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中央，28°C恒溫培養(yǎng) 10-15天得到強(qiáng)毒力的金龜子綠僵菌CQMa421母種，將CQMa421菌株母種接種在1/4SDA平 板上，28°C培養(yǎng)15天，收集成熟分生孢子制得綠僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龜子綠僵菌制劑的制備方法，是先將綠僵菌CQMa421干孢子粉和納米氫氧 化鋁在混合機(jī)中混勻，再依次加入硅藻土、羧甲基纖維素鈉、吐溫-80和0P-10,邊加入邊攪 拌，直至各組分完全混合均勻制得。
[0018] 一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力的方法，其特征在于：在28°C、濕度50-70%環(huán)境中，將 金龜子綠僵菌CQMa421接種于黃曲條跳甲成蟲飼養(yǎng)，選擇最先感病死亡的黃曲條跳甲，放 入28°C培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲表面生長出新鮮孢子；收集新鮮孢子，接種3-4 齡小菜蛾幼蟲，同上獲得昆蟲表面生長出的新鮮孢子。如上所述循環(huán)接種黃曲條跳甲和小 菜蛾16次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無菌條件下，用接種環(huán)挑取馴 化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨芐青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上劃線，將劃線好 的培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)放置于28°C恒溫箱中培養(yǎng)；3 -4日后挑選長出的典型而無雜菌的菌落，在菌 落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中央，28°C恒溫培養(yǎng) 10-15天得到強(qiáng)毒力的金龜子綠僵菌CQMa421母種。
[0019] 采用本發(fā)明增強(qiáng)毒力的方法馴化后的強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421菌株，對黃曲 條跳甲和小菜蛾致死率可分別提高39.