一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基及其應用
【專利說明】
[0001]
技術領域
本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基及其應用。
[0002]
【背景技術】
微生物培養(yǎng)(microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關鍵在于無菌操作，如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能徹底滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003]腸球菌(Enterococcus)屬腸球菌屬，是人類和動物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認為腸球菌是對人類無害的共棲菌，但近年研究已證實了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004]溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為37°C，在20-42°C能生長，最適pH為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005]糞腸球菌，根據(jù)最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應用C多糖抗原，根據(jù)蘭氏(Lancefield)血清學分類,可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌(S.faecalis)、屎鏈球菌(S.faecium)和堅忍鏈球菌(S.durans)，后者有牛鏈球菌(S.bovis)和馬腸鏈球菌(S.equinus)。
[0006]其營養(yǎng)要求低，在普通營養(yǎng)瓊脂上也可生長。能在10°C或45°C pH 9.6或含6.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長，并能耐65°C 30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發(fā)酵山梨醇，不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡單的培養(yǎng)基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結果顯示，腸球菌與鏈球菌屬同源程度低，故有學者建議另立腸球菌屬，與人類有關者為糞腸球菌(E.faecalis)和屎腸球菌(E.faecium)。
[0007]培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基)，較長時間的貯存，必須放在3?6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。
[0008]培養(yǎng)基根據(jù)化學分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基；根據(jù)物理分類為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基；根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基及其應用。
[0010]本發(fā)明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進行篩選，對培養(yǎng)基的PH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進行了比較，研究出了本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011]本發(fā)明所采用的技術方案為:
一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括8.0g/L蛋白胨、3.0g/L牛肉浸粉、2g/L牛膽汁物、38/1酵母浸粉、1.(^/1 L-苯丙氨酸、2g/L氯化鈉酵母浸粉、1.0g/L磷酸氫二鈉、0.27g/L氯化鈣、1.0g/L碳酸氫鈉、0.05g/L氯化鈉、0.88g/L吐溫80、15.0 g/L瓊脂，pH值為7.2-7.4。
[0012]本發(fā)明還公開了所述的苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基的應用，用于苯丙氨酸脫氨酶試驗。
[0013]L 一苯丙氨酸作為一種底物經(jīng)脫氨作用生成苯丙酮酸，它與指示劑三氯化鐵中的鐵離子螯合顯示綠色；酵母浸粉提供維生素和輔酶因子；磷酸氫二鈉是緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
[0014]稱取本品22g，加熱溶解于100ml蒸餾水中，分裝試管，121°C高壓滅菌10分鐘，制成斜面，備用。
[0015]挑取待試菌新鮮培養(yǎng)物，接種于本斜面培養(yǎng)基兩管，于36±1°C培養(yǎng)4h和18_24h，加氯化鐵水溶液4-5滴(0.5M氯化鐵溶液)，使復蓋于培養(yǎng)基物表面。在l_5min內(nèi)呈現(xiàn)綠色為陽性。
[0016]本發(fā)明的有益效果:
1、培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；
2、菌生長迅速，變異率低；
3、便于觀察，分析。
[0017]【具體實施方式】實施例1:
一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括8.0g/L蛋白胨、3.0g/L牛肉浸粉、2g/L牛膽汁物、38/1酵母浸粉、1.(^/1 L-苯丙氨酸、2g/L氯化鈉酵母浸粉、1.0g/L磷酸氫二鈉、0.27g/L氯化鈣、1.0g/L碳酸氫鈉、0.05g/L氯化鈉、0.88g/L吐溫80、15.0 g/L瓊脂，pH值為7.2-7.4。
[0018]L 一苯丙氨酸作為一種底物經(jīng)脫氨作用生成苯丙酮酸，它與指示劑三氯化鐵中的鐵離子螯合顯示綠色；酵母浸粉提供維生素和輔酶因子；磷酸氫二鈉是緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
[0019]稱取本品22g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝試管，121°C高壓滅菌10分鐘，制成斜面，備用。
[0020]挑取待試菌新鮮培養(yǎng)物，接種于本斜面培養(yǎng)基兩管，于36土 1°C培養(yǎng)4h和18_24h，加氯化鐵水溶液4-5滴(0.5M氯化鐵溶液)，使復蓋于培養(yǎng)基物表面。在l_5min內(nèi)呈現(xiàn)綠色為陽性。
【主權項】
1.一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括8.0g/L蛋白胨、3.0g/L牛肉浸粉、2g/L牛膽汁物、38/1酵母浸粉、1.(^/1 L-苯丙氨酸、2g/L氯化鈉酵母浸粉、1.0g/L磷酸氫二鈉、0.27g/L氯化鈣、1.0g/L碳酸氫鈉、0.05g/L氯化鈉、0.88g/L吐溫80、15.0 g/L 瓊脂，pH 值為 7.2-7.4。
2.一種根據(jù)權利要求1所述的苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基的應用，其特征在于用于苯丙氨酸脫氨酶試驗。
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領域，特別涉及一種苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基及其應用，所述培養(yǎng)基的組分包括8.0g/L蛋白胨、3.0g/L牛肉浸粉、2g/L牛膽汁物、3g/L酵母浸粉、1.0g/LL-苯丙氨酸、2g/L氯化鈉酵母浸粉、1.0g/L磷酸氫二鈉、0.27g/L氯化鈣、1.0g/L碳酸氫鈉、0.05g/L氯化鈉、0.88g/L吐溫80、15.0g/L瓊脂，pH值為7.2-7.4。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【IPC分類】C12Q1-527
【公開號】CN104651478
【申請?zhí)枴緾N201310599836
【發(fā)明人】劉漢斌
【申請人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月25日