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      Cyp4v2基因突變體及其應(yīng)用

      文檔序號:8425849閱讀:2252來源:國知局
      Cyp4v2基因突變體及其應(yīng)用
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及CYP4V2基因突變體及其應(yīng)用。具體地,本發(fā)明涉及分離的編碼CYP4V2 突變體的核酸,分離的多肽,篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品的方法,篩選易 感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品的系統(tǒng),用于篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的 生物樣品的試劑盒,構(gòu)建體以及重組細(xì)胞。
      【背景技術(shù)】
      [0002] Bietti,s結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性(Bietti,scrystallineCorneoretinal dystrophy,簡稱B⑶)是罕見的遺傳性致盲疾病,在全世界的發(fā)病率約為1/24000,其高發(fā) 人群是中國人,在我國的發(fā)病率約為1/4000。B⑶患者通常20- 30歲發(fā)病,40- 50歲致 盲,目前已經(jīng)成為威脅全球青年和中年人群視覺功能、視覺質(zhì)量的主要眼部疾病,最終嚴(yán)重 影響患者的生活質(zhì)量,給家庭和社會(huì)帶來了巨大的負(fù)擔(dān)。BCD是由于視網(wǎng)膜感光細(xì)胞(包括 視錐細(xì)胞和視桿細(xì)胞)和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞變性,伴隨進(jìn)行性脈絡(luò)膜血管萎縮、硬化而導(dǎo) 致的致盲性遺傳性眼病。B⑶的遺傳方式主要是常染色體隱性遺傳(autosomarecessive BCD,簡稱為ARBCD)。
      [0003]目前原發(fā)性BCD的基因?qū)W方面的研究較少,其致病相關(guān)機(jī)制仍不明確。因而,目前 對原發(fā)性BCD尤其是其致病基因的研究仍有待深入。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此,本發(fā)明的一個(gè)目的 在于提出一種能夠有效篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性(BCD)的生物樣品的方法。
      [0005] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作完成的:發(fā)明人通過外顯子組測序、Sanger測 序驗(yàn)證、蛋白結(jié)構(gòu)分析的方法確定了原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的一個(gè)新的致病突變-- CYP4V2 基因的c.791delT突變。
      [0006] 進(jìn)而,根據(jù)本發(fā)明的第一方面,本發(fā)明提出了一種分離的編碼CYP4V2突變體的核 酸。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,所述核酸與SEQIDN0 :1相比,具有c. 791delT突變,即相對于 野生型CYP4V2基因,本發(fā)明的CYP4V2基因突變體的cDNA第791位堿基缺失T。根據(jù)本發(fā) 明的實(shí)施例,發(fā)明人確定了CYP4V2基因的突變體,該突變體與原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的 發(fā)病密切相關(guān),從而通過檢測該突變體在生物樣品中是否存在,可以有效地檢測生物樣品 是否易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性。
      [0007] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面,本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,所 述分離的多肽具有如SEQIDN0 :23所示的氨基酸序列,具體地,相對于野生型CYP4V2,本 發(fā)明的分離的多肽(即CYP4V2突變體)第264氨基酸由苯丙氨酸突變?yōu)榱涟彼?,并造?64 位以后的氨基酸發(fā)生移碼突變,產(chǎn)生一段含有261個(gè)氨基酸的異常肽段。通過檢測生物樣 品中是否表達(dá)該多肽,可以有效地檢測生物樣品是否易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性。
      [0008] 根據(jù)本發(fā)明的第三方面,本發(fā)明提出了一種篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的 生物樣品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,該方法包括以下步驟:從所述生物樣品提取核酸 樣本;確定所述核酸樣本的核酸序列;所述核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO:1相比,具有 c. 791delT突變是所述生物樣品易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的指示。通過根據(jù)本發(fā)明實(shí) 施例的篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品的方法,可以有效地篩選易感原發(fā)性 結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品。
      [0009] 根據(jù)本發(fā)明的第四方面,本發(fā)明提出了一種篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的 生物樣品的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,該系統(tǒng)包括:核酸提取裝置,所述核酸提取裝置用 于從所述生物樣品提取核酸樣本;核酸序列確定裝置,所述核酸序列確定裝置與所述核酸 提取裝置相連,用于對所述核酸樣本進(jìn)行分析,以便確定所述核酸樣本的核酸序列;判斷裝 置,所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連,以便基于所述核酸樣本的核酸序列與SEQ IDN0:1相比,是否具有c.791delT突變,判斷所述生物樣品是否易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng) 膜變性。利用該系統(tǒng),能夠有效地實(shí)施前述篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品 的方法,從而可以有效地篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品。
      [0010] 根據(jù)本發(fā)明的第五方面,本發(fā)明提出了一種用于篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變 性的生物樣品的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,該試劑盒含有:適于檢測CYP4V2基因突變 體的試劑,其中與SEQIDN0:1相比,該CYP4V2基因突變體具有c. 791delT突變。利用根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的試劑盒,能夠有效地篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品。
      [0011] 根據(jù)本發(fā)明的第六方面,本發(fā)明還提出了一種構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,該構(gòu) 建體包含前面所述的分離的編碼CYP4V2突變體的核酸。由此,利用本發(fā)明的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受 體細(xì)胞獲得的重組細(xì)胞,能夠有效地用于篩選治療原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的藥物。
      [0012] 根據(jù)本發(fā)明的第七方面,本發(fā)明還提出了一種重組細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,該 重組細(xì)胞是通過前面所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞而獲得的。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例,利 用本發(fā)明的重組細(xì)胞,能夠有效地篩選治療原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的藥物。
      [0013] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出,部分將從下面的描述中變 得明顯,或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
      【附圖說明】
      [0014] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對實(shí)施例的描述中將變 得明顯和容易理解,其中 :
      [0015] 圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品 的系統(tǒng)及其組成部分的示意圖,其中,
      [0016] 圖II為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的生物樣品的系 統(tǒng)的示意圖,
      [0017] 圖III為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸提取裝置的示意圖,
      [0018] 圖1III為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸序列確定裝置的示意圖;
      [0019] 圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的B⑶患者家系的家系圖;
      [0020] 圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例,圖2所示B⑶患者家系中先證者的眼底像;
      [0021] 圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例,圖2所示B⑶患者家系中先證者、家系內(nèi)正 常人和家系外正常對照的CYP4V2基因c. 791delT突變位點(diǎn)的代表性Sanger測序驗(yàn)證峰 圖,其中,
      [0022] 圖4I為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的先證者的CYP4V2基因c. 791delT突變位點(diǎn)的代表 性Sanger測序驗(yàn)證峰圖,
      [0023] 圖4II為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的家系內(nèi)正常人的CYP4V2基因c. 791delT突變位點(diǎn) 的代表性Sanger測序驗(yàn)證峰圖,
      [0024] 圖4III為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的家系外正常對照的CYP4V2基因c. 791delT突變位 點(diǎn)的代表性Sanger測序驗(yàn)證峰圖;
      [0025] 圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例,多個(gè)物種CYP4V2蛋白的序列對比結(jié)果。
      【具體實(shí)施方式】
      [0026] 下面參考具體實(shí)施例,對本發(fā)明進(jìn)行說明,需要說明的是,這些實(shí)施例僅是說明性 的,而不能理解為對本發(fā)明的限制。
      [0027]CYP4V2基因突變體
      [0028] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面,本發(fā)明提出了一種分離的編碼CYP4V2突變體的核酸。根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,所述核酸與SEQIDN0 :1相比,具有c. 791delT突變。在本文中所使 用的表達(dá)方式"編碼CYP4V2突變體的核酸",是指與編碼CYP4V2突變體的基因相對應(yīng)的核 酸物質(zhì),即核酸的類型不受特別限制,可以是任何包含與CYP4V2突變體的編碼基因相對應(yīng) 的脫氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物,包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根據(jù)本發(fā) 明的一個(gè)具體示例,前面所述的編碼CYP4V2突變體的核酸為DNA。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例,發(fā) 明人確定了CYP4V2基因的突變體,該突變體與原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的發(fā)病密切相關(guān), 從而通過檢測該突變體在生物樣品中是否存在,可以有效地檢測生物樣品是否易感原發(fā)性 結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性,也可以通過檢測該突變體在生物體中是否存在,可以有效地預(yù)測生物 體是否易感原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性。
      [0029] 對于本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中,提及核酸,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,實(shí)際包 括互補(bǔ)雙鏈的任意一條,或者兩條。為了方便,在本說明書和權(quán)利要求書中,雖然多數(shù)情況 下只給出了一條鏈,但實(shí)際上也公開了與之互補(bǔ)的另一條鏈。例如,提及SEQIDN0 :1,實(shí)際 包括其互補(bǔ)序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以理解,利用一條鏈可以檢測另一條鏈,反之亦然。
      [0030] 該編碼CYP4V2突變體的核酸,是本申請的發(fā)明人通過外顯子組測序、Sanger測序 驗(yàn)證以及蛋白結(jié)構(gòu)分析的方法確定的原發(fā)性結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性的致病基因CYP4V2的新的 致病突變。該致病突變位點(diǎn)在現(xiàn)有技術(shù)中并未被提到。
      [0031] 其中,野生型CYP4V2基因的CDNA具有如下所示的核苷酸序列:
      [0032]ATGGCGGGGCTCTGGCTGGGGCTCGTGTGGCAGAAGCTGCTGCTGTGGGGCGCGGCGAGTGCCCTTTCC CTGGCCGGCGCCAGTCTGGTCCTGAGCCTGCTGCAGAGGGTGGCGAGCTACGCGCGGAAATGGCAGCAGATGCGGCC CATCCCCACGGTGGCCCGCGCCTACCCACTGGTGGGCCACGCGCTGCTGATGAAGCCGGACGGGCGAGAATTTTTTC AGCAGATCATTGAGTACACAGAGGAATACCGCCACATGCCGCTGCTGAAGCTCTGGGTCGGGCCAGTGCCCATGGTG GCCCTTTATAATGCAGAAAATGTGGAGGTAATTTTAACTAGTTCAAAGCAAATTGACAAATCCTCTATGTACAAGTT TTTAGAACCATGGCTTGGCCTAGGACTTCTTACAAGTACTGGAAACAAATGGCGCTCCAGGAGAAAGATGTTAACAC
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