°C，通空氣量1.0L/min，加入0.05%的有機硅消泡劑。結(jié)果顯示如圖1所示。
[0031]由圖1可知，采用普通靜置培養(yǎng)的小球藻，在第12天，仍小球藻處在指數(shù)生長期；采用通氣自養(yǎng)培養(yǎng)的小球藻，第10天通氣自養(yǎng)培養(yǎng)的小球藻進入穩(wěn)定期，隨后培養(yǎng)結(jié)束；采用外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)的小球藻，培養(yǎng)開始后第2天通氣自養(yǎng)培養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)的小球藻進入指數(shù)生長期，第6天通氣異養(yǎng)培養(yǎng)的小球藻進入穩(wěn)定期，隨后培養(yǎng)結(jié)束。
[0032]實施例2
[0033]外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期前期過濾補液培養(yǎng)。
[0034]在100mL的培養(yǎng)瓶中，在普通BGll培養(yǎng)基下外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:
[0035]小球藻接種密度為0.1693g/L ;異養(yǎng)培養(yǎng)基的組成包括:葡萄糖20g/L，NaNO3L 5g/L，K2HPO30.3g/L，K2HPO30.2g/L，MgSO4.7H20 0.lg/L, CaCl2.2H20 0.05g/L，C6H8O70.0lg/L, FeC6H50.NH4OH 0.0lg/L, EDTANa20.05g/L，A5 微量元素液 lmL/L，其余為水，其中 A5 溶液配方為 Η3Β032.86g/L、MnCl2.4Η20 1.86g/L、ZnS04.7Η20 0.22g/L,Na2MoO4.2Η200.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L 以及 Co (NO3) 2.6H20 0.05g/L ;培養(yǎng)溫度 25—28°C，通空氣量1.0L/min，加入0.05%的有機硅消泡劑；
[0036]在第2天開始，每天過濾出1/2的小球藻，再補充等量營養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，其中，所述補充營養(yǎng)物的組成包括:葡萄糖 4-5g，NaNO30.3g，K2HPO30.05g，K2HPO30.0lg, MgSO4.7H200.02g，CaCl2.2H20 0.0lg, C6H8O70.0Olg, FeC6H50.NH4OH 0.0Olg, EDTANa20.0lg, A5 微量元素液0.5mL。在繼續(xù)培養(yǎng)過程中，每3天注入300mg/L的抗生素青霉素鈉鹽lmL，每15天為一個生產(chǎn)周期。結(jié)果顯示如圖2所示。
[0037]外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期中期過濾補液培養(yǎng)。
[0038]本實驗與“外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期前期過濾補液培養(yǎng)”的實驗基本相同，不同之處在于，在第3天?第4天，每天過濾出1/2的小球藻，再補充等量營養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。結(jié)果顯示如圖2所示。
[0039]外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期后期過濾補液培養(yǎng)。
[0040]本實驗與“外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期前期過濾補液培養(yǎng)”的實驗基本相同，不同之處在于，在第5天開始，每天過濾出1/2的小球藻，再補充等量營養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。結(jié)果顯不如圖2所不。
[0041]由圖2可知，外加碳源葡萄糖通氣異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)期前期過濾補液培養(yǎng)，培養(yǎng)液中小球藻的生物量穩(wěn)定在1.9-2.lg/L之間；在指數(shù)期中期過濾補液培養(yǎng)，培養(yǎng)液中小球藻的生物量在取樣補料的前兩天略有下降，而后穩(wěn)定在4.6g/L左右；在指數(shù)期后期過濾補液培養(yǎng)，培養(yǎng)液中小球藻的生物量在取樣補料的前兩天有較大幅度的下降，而后穩(wěn)定在3.8-4.lg/L 左右。
[0042]本發(fā)明提供的小球藻的培養(yǎng)方法在異養(yǎng)培養(yǎng)過程中，通過絹布過濾取出部分藻細胞，然后補充一定體積的培養(yǎng)液，使藻細胞在異養(yǎng)培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。采用該方法，大大提高了小球藻的培養(yǎng)產(chǎn)率，保證了藻細胞的活力，同時提高了碳源的利用率，有利于規(guī)模化異養(yǎng)生產(chǎn)；此外，通過過濾取樣，保留了培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分，節(jié)約生產(chǎn)成本，避免了浪費和環(huán)境污染，培養(yǎng)條件容易優(yōu)化控制。
[0043]本發(fā)明不局限于上述實施方式，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本說明書中未作詳細描述的內(nèi)容屬于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的現(xiàn)有技術(shù)。
【主權(quán)項】
1.一種小球藻的培養(yǎng)方法，其步驟包括:對小球藻進行異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)生長期中期，過濾出部分小球藻，再補充部分營養(yǎng)物和水，繼續(xù)培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:在指數(shù)生長中期，每天進行“過濾出部分小球藻，再補充部分營養(yǎng)物和水，繼續(xù)培養(yǎng)”的操作一次，直到培養(yǎng)周期結(jié)束。
3.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述異養(yǎng)培養(yǎng)液的組成包括:葡萄糖 20g/L，NaNO3 1.5g/L，K2HPO3 0.3g/L，K2HPO3 0.2g/L，MgS04.7H20 0.lg/L，CaCl2.2H20 0.05g/L，C6H8O7 0.01g/L，F(xiàn)eC6H50.NH4OH 0.01g/L，EDTANa2 0.05g/L，A5 微量元素液lmL/L，其余為水，其中A5微量元素液組成包括H3BO3 2.86g/L、MnCl2.4H20 1.86g/UZnSO4.7H20 0.22g/L、Na2MoO4.2H20 0.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L 以及 Co(NO3)2.6H200.05g/Lo
4.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述異養(yǎng)培養(yǎng)液pH值在7.2 ?8.00
5.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述補充營養(yǎng)物的組成包括每 100mL 培養(yǎng)液中添加葡萄糖 4-5g，NaNO3 0.3g，K2HPO3 0.05g，K2HPO3 0.0lg，MgSO4.7H200.02g，CaCl2.2H20 0.0lg, C6H8O7 0.0Olg, FeC6H50.NH4OH 0.0Olg, EDTANa2 0.0lg, A5 微量元素液0.5mL。
6.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述異養(yǎng)培養(yǎng)過程中小球藻的接種量為培養(yǎng)液10 %的體積占比。
7.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述異養(yǎng)培養(yǎng)過程中培養(yǎng)溫度25—28°C，通空氣量1.0L/min，加入0.05%的有機硅消泡劑。
8.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述指數(shù)生長期中期為自接種培養(yǎng)的第三天至第四天。
9.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:每次過濾出1/2的小球藻。
10.如權(quán)利要求1所述的小球藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:在繼續(xù)培養(yǎng)過程中，每3天注入300mg/L的抗生素青霉素鈉鹽lmL，每15天為一個生產(chǎn)周期。
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種小球藻的培養(yǎng)方法，其步驟包括：對小球藻進行異養(yǎng)培養(yǎng)，在指數(shù)生長期中期，過濾出部分小球藻，再補充部分營養(yǎng)物，繼續(xù)培養(yǎng)。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明有如下優(yōu)點：在異養(yǎng)培養(yǎng)過程中，通過分離出部分小球藻，并補充一定體積的培養(yǎng)液，從而保證了培養(yǎng)藻細胞的活力，大大提高了小球藻的培養(yǎng)產(chǎn)率，并提高了碳源的利用率，有利于規(guī)?；愷B(yǎng)生產(chǎn)。
【IPC分類】C12N1-12, C12R1-89
【公開號】CN104830691
【申請?zhí)枴緾N201510202667
【發(fā)明人】盧碧林, 付艷, 祁亮
【申請人】長江大學(xué)
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月27日