一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從 木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥木香為菊科植物木香AucklandialappaDecne.的干燥根，性辛、溫，味苦， 歸脾、胃、大腸、三焦、膽經(jīng)，有行氣止痛、溫中和胃、健脾消食之功效，用于胸腹脹痛、嘔吐、 腹瀉、痢疾、里急后重、食積不消等癥的治療。藥理研宄表明木香在抗心血管疾病、抗炎、抗 癌、抗?jié)?、抗病原微生物等方面表現(xiàn)出良好的藥理活性?；瘜W(xué)成分研宄表明倍半萜內(nèi)酯為 木香的主要有效成分，其中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量最高，是木香及其相關(guān)制劑 質(zhì)量控制的主要指標。據(jù)文獻報道，分離純化木香中倍半萜內(nèi)酯類成分的方法主要有反復(fù) 硅膠柱層析法及高速逆流色譜法，硅膠柱層析法的操作過程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯 仿、苯等毒性較強的有機溶劑；在高速逆流色譜法中溶劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指 導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法對于深化 木香的藥理研宄及完善質(zhì)量控制體系均具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提供一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法，高 效、快速、簡便。
[0004] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去 氫木香內(nèi)酯的方法，其特征在于：具體步驟如下：
[0005] (1)木香中倍半萜內(nèi)酯的提取：將木香藥材粉碎，用有機溶劑進行提取，過濾，提 取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物，有機溶劑的用量是木蝴蝶藥材用量的6~15倍；
[0006] (2)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對步驟（1)中粗提 物的組成進行分離分析，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比為65:35,流速為LOmL/ min；
[0007] (3)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對步驟1中粗提 物中的成分進行分離純化，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比為70:30,流速為20~ 30mL/min;根據(jù)色譜圖手動收集目標組分餾分，減壓濃縮除去溶劑；(4)化合物的純度檢測 及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶解，其純度用高效液相色譜法進 行檢測，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的純度都達到了 98%以上，經(jīng)核磁 共振波譜分析2種化合物分別是木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯。
[0008] 其進一步是：步驟（2)分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用分析型C18柱，檢測 波長為220nm，柱溫為室溫。
[0009] 步驟（3)中半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用半制備型C18柱。
[0010] 步驟（1)中有機溶劑為甲醇或乙醇或石油醚或乙酸乙酯；提取方法為冷浸或超聲 或加熱回流。乙醇的濃度為50%~100%。
[0011] 步驟（1)提取次數(shù)為2-5次，步驟（1)提取時間為0. 5-2小時。
[0012] 步驟（1)提取次數(shù)為3次，步驟（1)提取時間為1小時。
[0013] 步驟⑵分離純化用甲醇-水洗脫液進行洗脫，洗脫方式有62%甲醇-水等度洗 脫/65 %甲醇-水等度洗脫/68 %甲醇-水等度洗脫。
[0014]步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫或 65%甲醇-水等度洗脫或70%甲醇-水等度洗脫或75%甲醇-水等度洗脫。
[0015] 本發(fā)明有益效果是：高效、快速從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi) 酯2種化合物的純度都達到了 98%以上；工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害，綜合成本 低。
【附圖說明】
[0016]圖1是木香粗提物的分析型高效液相色譜圖；
[0017]圖2是木香粗提物的半制備型高效液相色譜圖；
[0018] 圖3是木香烴內(nèi)酯的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
[0019] 圖4是去氫木香內(nèi)酯的高效液相色譜圖及紫外光譜圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護范圍不被此限制。實 施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用試劑均購自天津市化學(xué)試劑三廠，所用水為 去離子水。
[0021] 從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法，其步驟為：
[0022] (1)木香中倍半萜內(nèi)酯的提?。簩⒛鞠闼幉姆鬯?，用8倍量95%乙醇加熱回流提取 3次，每次lh，過濾，將提取液合并，減壓濃縮得粗提物。
[0023] (2)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對粗提物的組成進 行分離分析，色譜柱為C18柱（250X4.6mmI.D.，5ym)，流動相為甲醇-水（65:35，V/V);流 速為I.OmL/min，檢測波長為220nm，柱溫為室溫。
[0024] (3)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對粗提物中的成 分進行分離純化，色譜柱為C18柱（250X25. 4mmI.D.，IOym)，流動相為甲醇-水（70:30， V/V)，流速為25.OmL/min，檢測波長為220nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動收集目標組分 餾分，減壓濃縮除去溶劑。
[0025] (4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的 純度都達到了 98 %以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi) 酯。
[0026]發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇作流動相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水 洗脫液的流速為20-30mL/min(優(yōu)選25mL/min)，優(yōu)選出了實現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有 關(guān)實驗結(jié)果如下：
[0027] 表一木香粗提物的半制備型高效液相色譜分離條件
[0028]
【主權(quán)項】
1. 一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法，其特征在于：具 體步驟如下： (1) 木香中倍半萜內(nèi)酯的提?。簩⒛鞠闼幉姆鬯?，用有機溶劑進行提取，過濾，提取液 經(jīng)減壓濃縮得粗提物，有機溶劑的用量是木蝴蝶藥材用量的6~15倍； (2) 木香中倍半萜內(nèi)酯的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對步驟（1)中粗提物的 組成進行分離分析，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比為65:35,流速為1.0 mL/min ; (3) 木香中倍半萜內(nèi)酯的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對步驟1中粗提物中的成分進 行分離純化，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比為70:30,流速為20~30mL/min ;根據(jù) 色譜圖手動收集目標組分餾分，減壓濃縮除去溶劑； (4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶解， 其純度用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的純度 都達到了 98 %以上，經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（2)分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用分析型C 18柱，檢測波長 為220nm，柱溫為室溫。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（3)中半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用半制備型C 18柱，檢 測波長為220nm，柱溫為室溫。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（1)中有機溶劑為甲醇或乙醇或石油醚或乙酸乙酯；提取方法為冷 浸或超聲或加熱回流。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：乙醇的濃度為50%~100%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（1)提取次數(shù)為2-5次，步驟（1)提取時間為0. 5-2小時。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（1)提取次數(shù)為3次，步驟（1)提取時間為1小時。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯 的方法，其特征在于：步驟（2)分離純化用甲醇-水洗脫液進行洗脫，洗脫方式有62%甲 醇-水等度洗脫/65 %甲醇-水等度洗脫/68 %甲醇-水等度洗脫。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 方法，其特征在于：步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯 度洗脫或65%甲醇-水等度洗脫或70%甲醇-水等度洗脫或75%甲醇-水等度洗脫。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從木香中提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的方法，涉及提取、分離純化木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以木香藥材為原料，經(jīng)過下述步驟：(1)木香中倍半萜內(nèi)酯的提??；(2)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離分析；(3)木香中倍半萜內(nèi)酯的分離純化；(4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定。用半制備型高效液相色譜進行分離純化，流動相為甲醇-水，得到2種高純度的成分，經(jīng)鑒定分別是木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯。本工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害，綜合成本低。
【IPC分類】C07D307-93
【公開號】CN104876900
【申請?zhí)枴緾N201510253201
【發(fā)明人】楊冬芝, 楊方秀, 陸益紅, 湯道權(quán), 樊夏雷
【申請人】徐州醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月18日