一種長(zhǎng)春地辛的純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及長(zhǎng)春地辛的純化技術(shù)，特別是涉及一種長(zhǎng)春地辛的純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 長(zhǎng)春堿類化合物是從夾竹桃科植物長(zhǎng)春花（Catharanthus roseus)中提取的生 物堿，具有抗腫瘤活性，主要用于治療非小細(xì)胞肺癌，小細(xì)胞癌，乳腺癌，惡性淋巴瘤等惡性 腫瘤?，F(xiàn)已正式用于臨床的有長(zhǎng)春堿（vinblastine)、長(zhǎng)春新堿（vincristhle)、長(zhǎng)春地辛 (vindesine)及長(zhǎng)春瑞賓（vinorelbine)。其中長(zhǎng)春地辛是對(duì)長(zhǎng)春堿G環(huán)的3、4位修飾而 得到的典型4-去乙酰-C-3酰胺衍生物，可與細(xì)胞內(nèi)的循環(huán)糖蛋白一轉(zhuǎn)鐵蛋白形成共價(jià)鍵， 從而破環(huán)其與鐵的結(jié)合導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，結(jié)構(gòu)式如下。
[0003]
[0004] 國(guó)內(nèi)主要研宄長(zhǎng)春地辛化合物的劑型改造、藥物組合，對(duì)其分離純化方法的研宄 較少。中國(guó)專利CN101638413公開了一種長(zhǎng)春堿類生物堿的分離純化方法，在氧化鋁柱上 預(yù)處理樣品后，再用高效液相色譜進(jìn)行分離純化，最后重結(jié)晶精制樣品，覆蓋長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春 新堿、長(zhǎng)春地辛或長(zhǎng)春瑞濱等生物堿。該工藝屬小試工藝且步驟繁多，成本高，不適宜工業(yè) 生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)長(zhǎng)春地辛純化效率低、工藝復(fù)雜等難題，本發(fā)明的目的是提供一種高純度、操 作性強(qiáng)、適合工業(yè)化生產(chǎn)的長(zhǎng)春地辛的純化方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] (1)采用有機(jī)溶劑A溶脹后的硅膠為色譜柱填料制備色譜柱；
[0008] (2)將長(zhǎng)春地辛粗品有機(jī)溶劑A溶液加入上述色譜柱；
[0009] (3)采用梯度淋洗的方法對(duì)色譜柱進(jìn)行洗脫，依次用體積比逐漸減小的有機(jī)溶劑 A/有機(jī)溶劑B混合液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集主成份流出液，最后洗下殘留物；
[0010] (4)減壓濃縮回收洗脫劑，得到高純度長(zhǎng)春地辛90wt %以上，收率為40~80%。
[0011] 在上述制備方法中：
[0012] 步驟⑴中，所采用硅膠為100~400目，干硅膠用量為5. 9~6. Ikg ;
[0013] 步驟⑴中，所述有機(jī)溶劑A為二氯甲烷、正丁醇、甲基異丙酮、乙酸乙醋、氯仿、二 氧六環(huán)中的一種；
[0014] 步驟（2)中，長(zhǎng)春地辛上樣量為1~5wt%，進(jìn)料量為制備色譜柱體積的1~10%;
[0015] 步驟⑶中，所述有機(jī)溶劑B為丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亞砜中的一 種；
[0016] 步驟（3)中，采用恒壓恒流泵進(jìn)洗脫劑，洗脫劑依次為溶劑A :B = 99 :1~80 :1、 溶劑A :B = 60 :1~45 :1、溶劑A :B = 40 :1~20 :1，洗脫劑用量為柱體積的200~500 %， 洗脫流速為每分鐘洗脫柱體積的1~10% ;制備色譜柱運(yùn)行的壓力為〇. 1~〇. 7MPa ;
[0017] 步驟⑶中，洗脫液分段收集，收集分兩段，第一段收集溶劑A :B = 60 :1~45 :1 餾分，為含量較低的長(zhǎng)春地辛洗脫液；第二段收集溶劑A :B = 40 :1~20 :1餾分，主要為高 濃度長(zhǎng)春地辛洗脫液。
[0018] 步驟（3)中，采用溶劑A :B = 20 :1~5 :1洗脫殘留物。
[0019] 本發(fā)明以長(zhǎng)春地辛粗品為起始原料，通過硅膠制備色譜純化分離，實(shí)現(xiàn)高純度長(zhǎng) 春地辛的制備。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 1、產(chǎn)品純度高，該方法可使長(zhǎng)春地辛的純度達(dá)到90%以上，收率為40~80%。固 定相穩(wěn)定，可重復(fù)使用；
[0021] 2、本發(fā)明使用的洗脫劑易回收，可反復(fù)使用，生產(chǎn)成本低；
[0022] 3、工藝過程簡(jiǎn)單，設(shè)備一次性投入小，能耗低，可操作性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0023] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1采用的長(zhǎng)春地辛粗品原料的液相色譜分析圖譜。
[0024] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1得到的長(zhǎng)春地辛產(chǎn)品的液相色譜分析圖譜。
【具體實(shí)施方式】 [0025] 實(shí)施例1
[0026] 1)稱取5. 98kg 300目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻 地裝到制備色譜中，柱尺寸為?20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝 好的制備色譜柱；
[0027] 2)將195g長(zhǎng)春地辛粗品（純度為76. 73% )用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為300ml ;
[0028] 3)采用恒壓恒流泵進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=90 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換用氯 仿：甲醇=40 :1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=30 :1溶劑洗脫4 個(gè)床層并收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=15 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物；
[0029] 4)減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春地辛107. 7g，液相色譜檢測(cè)純度為99. 05%，收率 為 71. 3%〇
[0030] 長(zhǎng)春地辛粗品原料的液相色譜分析圖譜如圖1所示，長(zhǎng)春地辛產(chǎn)品的液相色譜分 析圖譜如圖2所示。
[0031] 實(shí)施例2
[0032] 1)稱取6. IOkg 400目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻 地裝到制備色譜中，柱尺寸為?20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝 好的制備色譜柱；
[0033] 2)將205g長(zhǎng)春地辛粗品（純度為72. 19% )用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為320ml ;
[0034] 3)采用恒壓恒流泵進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=95 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換用氯 仿：甲醇=45 :1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=35 :1溶劑洗脫4 個(gè)床層并收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=15 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物；
[0035] 4)減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春地辛94. 5g，液相色譜檢測(cè)純度為97. 86%，收率為 62. 3%〇
[0036] 實(shí)施例3
[0037] 1)稱取6. OOkg 200目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻 地裝到制備色譜中，柱尺寸為?20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝 好的制備色譜柱；
[0038] 2)將165g長(zhǎng)春地辛粗品（純度為58. 97% )用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為280ml ;
[0039] 3)采用恒壓恒流泵進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=90 :1溶劑洗脫3個(gè)床層，換用氯 仿：甲醇=40 :1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=30 :1溶劑洗脫4 個(gè)床層并收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=10 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物；
[0040] 4)減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春地辛90g，液相色譜檢測(cè)純度為91. 73%，收率為 84. 8% 〇
[0041] 實(shí)施例4
[0042] 1)稱取5. 96kg 300目硅膠，添加二氯甲烷并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠 均勻地裝到制備色譜中，柱尺寸為?20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得 到裝好的制備色譜柱；
[0043] 2)將184g長(zhǎng)春地辛粗品（純度為53. 74% )用二氯甲烷溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為 300ml ；
[0044] 3)采用恒壓恒流泵進(jìn)洗脫劑，先用二氯甲烷：乙腈=80 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換 用二氯甲烷：乙腈=35 :1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用二氯甲烷：乙腈=25 : 1溶劑洗脫4個(gè)床層并收集洗脫液b，最后換用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脫液洗脫制備色 譜柱中殘留物；
[0045] 4)減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春地辛66g，液相色譜檢測(cè)純度為95. 39%，收率為 63. 7%〇
[0046] 實(shí)施例5
[0047] 1)稱取5. 97kg 400目硅膠，添加二氯甲烷并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠 均勻地裝到制備色譜中，柱尺寸為?20cmX52cm，固