富含二十碳五烯酸擬微球藻油脂超聲波輔助溶劑提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明設(shè)及食品加工中油脂加工領(lǐng)域，特別地，本發(fā)明設(shè)及一種微生物功能性油 脂提取方法。
【背景技術(shù)】
[0003] 擬微球藻sp.)是一種黃綠色單細(xì)胞超微型藻，其富含蛋白質(zhì)、 多種氨基酸、礦物質(zhì)等，脂含量占自身干重的38%左右，營養(yǎng)價值高，已成功進(jìn)行大規(guī)模培 育。目前針對擬微球藻的研究集中在W下幾個方面：擬微球藻中二十碳五締酸的提取及富 集；生長環(huán)境對擬微球藻生長和油脂積累的影響的研究等。擬微球藻的一個重要特點是其 脂肪酸組成中EPA含量較高，是工業(yè)化提取EPA的理想原料。擬微球藻的市場應(yīng)用多W動 物飼料為主。而W擬微球藻為原料，生產(chǎn)富含EPA的食用型油脂鮮見報道。
[0004] 二十碳五締酸（Eicosapentaenoicacid，EPA)屬于n-3多不飽和脂肪酸，是大腦、 神經(jīng)和視覺細(xì)胞中重要的脂肪酸成分，對人體生理功能的正常發(fā)揮及多種疾病的防治有著 重要作有著重要作用，如預(yù)防屯、血管疾病，抗癌、抗炎、抑制過敏反應(yīng)和增強免疫力等。長期 W來，EPA和同屬于n-3多不飽和脂肪酸的二十二碳五締酸（Docos址exaenoicacid,DHA) 主要來源于寒冷地區(qū)（南極和北極）深海魚中提取的深海魚油。但漁業(yè)資源可能減少，而人 類對EPA和DHA需求量的增加，通過人工養(yǎng)殖微藻并提取n-3多不飽和脂肪酸已成為國際 上新的n-3多不飽和脂肪酸來源。
[0005] 微藻油油脂提取的工藝并不復(fù)雜，根據(jù)油脂的相似相容原理選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行 提取。通常所選擇的溶劑毒性較大，例如乙二醇二甲酸、甲醇、乙酸、丙=醇等有機溶劑。運 對工業(yè)化生產(chǎn)食用型藻油或是EPA產(chǎn)品是不利的，如：一種從布朗葡萄藻濕藻體中提取藻 油的方法（申請?zhí)?01110029756. 5)，微藻油脂的提取方法（申請?zhí)?01010607927. 3)，一種 微藻油脂提取方法（申請?zhí)?01210511744. 0)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個目的在于提供一種富含二十碳五締酸擬微球藻油脂超聲波輔助溶 劑提取方法。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過W下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
[0008] -種富含二十碳五締酸擬微球藻油脂超聲波輔助溶劑提取方法，包括W下步驟： (1) 將破壁擬微球藻粉和提取溶劑混合； (2) 在水浴條件下超聲浸提； (3) 超聲結(jié)束后將料液分離； (4) 分離后的固體部分進(jìn)行重新浸提或不進(jìn)行重新浸提； (5 )分離后的液體部分進(jìn)行溶劑回收即可得到藻油。
[0009] 所述步驟（1)中的提取溶劑為體積比90%乙醇，料液比為1:15 (g/mL)。
[0010] 所述步驟（2)中水浴的溫度為50°C，超聲時間為30min。
[0011] 所述步驟（3)所述的料液分離采用離屯、或者抽濾。
[0012] 所述步驟（3)離屯、轉(zhuǎn)速為3000;r/min。
[0013] 所述步驟（4)中所述重新浸提的次數(shù)為兩次，總提取次數(shù)為=次。
[0014] 所述步驟（5)中所述溶劑回收采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方法，并且回收的乙醇可W重復(fù)利 用。
[0015] 所述步驟（5)中藻油的提取率> 37%。
[0016] 進(jìn)一步，所述步驟（5)取得到的藻油進(jìn)行氣相色譜檢測，測定其中主要脂肪酸組 成，記錄主要的檢測數(shù)據(jù)。
[0017] 所述步驟（5 )中藻油中含有的主要脂肪酸有肉豆違酸、棟桐酸、棟桐油酸、油酸、亞 油酸、花生四締酸、二十碳五締酸（EPA)，其中EPA占總脂肪酸的質(zhì)量百分比例> 39%。
[0018] 本發(fā)明的有益效果是： (1) 本發(fā)明采用大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)易行的方法，高效地對富含EPA的微擬球藻油脂進(jìn)行 提?。?(2) 提取溶劑乙功醇為低毒性提取劑，可作為生產(chǎn)微藻食用油的安全溶劑； (3) 本發(fā)明提取出的藻油經(jīng)過氣相色譜儀檢測，EPA的含量占總脂肪酸的39%，可作為 工業(yè)生產(chǎn)EPA的原料。
【附圖說明】
[0019] 下面結(jié)合具體實施例和附圖，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，運些實施例僅用于說明 本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明范圍。
[0020] 圖1是本發(fā)明的一種提取工藝流程； 圖2是工藝優(yōu)化中不同種類溶劑對提取率的影響； 圖3是工藝優(yōu)化中不同濃度乙醇對提取率的影響； 圖4是工藝優(yōu)化中超聲浸提溫度對提取率的影響； 圖5是工藝優(yōu)化中超聲浸提時間對提取率的影響； 圖6是工藝優(yōu)化中料液比對提取率的影響； 圖7是工藝優(yōu)化中提取次數(shù)對提取率的影響； 圖8是藻油的氣相色譜圖。
【具體實施方式】
[0021] 本發(fā)明的一種提取工藝流程如圖1所示，稱取一定量的破壁微擬球藻粉，按1:15 (g/血)的料液比加入90%乙醇溶液，充分混勻，在水浴溫度為50 °C的超聲設(shè)備中超聲浸提 30min。超聲浸提結(jié)束后在3000r/min轉(zhuǎn)速下離屯、5分鐘或者進(jìn)行抽濾處理，離屯、（或抽 濾）后將上清液與沉淀分離。其中沉淀部分需回收進(jìn)行2次提取，總提取次數(shù)為3次，取上 清液部分進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇后即得到藻油。對提取的藻油W及原料藻粉進(jìn)行氣相色譜 檢測。檢測步驟如下： 1、肪酸采用=氣化棚法甲醋化：取2yL油脂加入=氣化棚甲醇溶液和正己燒各1. 5 血，充入氮氣，密封。在干式加熱器中100°C條件下加熱60min,冷卻至室溫。加入1血雙 蒸水，搖勻1min, 3000r/min條件下離屯、5分鐘，將上層己燒相移到一個干凈的試管中， 加入無水硫酸鋼除去水分，移取溶液至干凈試管，溶液用硅膠柱過濾。在氮氣環(huán)境中吹干該 過濾液，加入100yL己燒再溶解。
[0022] 2、氣相色譜分析：用GC-14C型氣相色譜儀測定脂肪酸，用N2010色譜數(shù)據(jù)工作站 采集圖譜，并處理分析所采集的譜圖數(shù)據(jù)。色譜峰采用混合的脂肪酸甲醋標(biāo)樣來進(jìn)行鑒定。 定量方式采用面積法，定量方法為歸一法。
[0023] 3、譜圖采集處理：采用與標(biāo)準(zhǔn)品保留時間對照的方法定性，即根據(jù)相對保留值定 性；采用面積法定量，即運用面積歸一法求各色譜峰面積，并計算樣品中的脂肪酸含量。
[0024]4、氣相色譜分析條件：調(diào)節(jié)空氣到50,調(diào)節(jié)氨氣到75,調(diào)節(jié)Col(柱溫)到140°C， 調(diào)節(jié)Det(檢測器溫度）到270 °C，調(diào)節(jié)Aux(進(jìn)樣口溫度）到270 °C。柱溫升溫程序：140 °C(1min)；6°C/minUTO°C(3min)；9°C/min^220°C(18min)；2°C/min^230°C (2min)。
[00巧]實施例一：EPA藻油提取工藝優(yōu)化單因素試驗1、溶劑對微藻油提取率的影響 在料液比為1:10、提取30min,浸提溫度45 °C的條件下，考察不同溶劑對微藻油提取 率的影響。結(jié)果（圖2)表明，W乙醇作為提取溶劑的提取率，明顯高于W正己燒和石油酸為 提取溶劑的提取率。同樣用乙醇作為提取劑，則用95%的乙醇的提取率高于75%的乙醇。
[0026] 2、乙醇濃度對微藻油提取率的影響 由于油脂的脂溶性特點，作為提取溶劑的乙醇濃度不宜過低，否則產(chǎn)物中水溶性產(chǎn)物 較多不利于油脂提取。因此試驗選取濃度在60%W上的乙醇為溶劑。W5%濃度為梯度，從 60%濃度到95%濃度共設(shè)定8個組，料液比1 : 10(g/mL)，提取時間為30min,超聲輔助浸 提溫度為45 °C。圖3顯示，當(dāng)乙醇濃度在60%至90%時，提取率呈逐步上升趨勢；當(dāng)乙醇 濃度為90%時提取率達(dá)到最大值，之后隨乙醇濃度的進(jìn)一步提高，提取率呈現(xiàn)下降趨勢。因 此