一種細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)器，特別涉及一種在非密閉環(huán)境下用于收集細(xì)胞揮發(fā)性生物標(biāo)記物的細(xì)胞培養(yǎng)器。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，腫瘤的診斷多需組織病理、穿刺活檢等有創(chuàng)檢查，但這些檢查時(shí)程較長(zhǎng)，尤其是創(chuàng)傷性操作給患者帶來(lái)不便和痛苦。為此，亟待開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單、有效、經(jīng)濟(jì)、方便、無(wú)創(chuàng)的診斷技術(shù)用于疾病的早期篩查和臨床診斷。近年來(lái)，人們?cè)诙喾N方面對(duì)實(shí)體瘤產(chǎn)生的揮發(fā)性有機(jī)化合物進(jìn)行了研究，包括腫瘤患者的血液、尿液、呼出氣、腫瘤組織以及腫瘤細(xì)胞，試圖通過(guò)尋找揮發(fā)性標(biāo)記物來(lái)作為疾病早期篩查和診斷的新方法。人體是一個(gè)包含多種臟器的復(fù)雜個(gè)體，有多種酶類(lèi)及代謝系統(tǒng)參與機(jī)體的新陳代謝，及疾病的病理生理過(guò)程；且因受飲食等因素影響，研究人體體液及呼出氣的揮發(fā)性標(biāo)記物相對(duì)較復(fù)雜。為此，在細(xì)胞水平上分析疾病的揮發(fā)性標(biāo)記物將有助于進(jìn)一步探究疾病產(chǎn)生的可能代謝機(jī)制。
[0003]目前，已有文獻(xiàn)公開(kāi)了一種用于檢測(cè)細(xì)胞揮發(fā)性有機(jī)化合物的細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)裝置，應(yīng)用玻璃培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)，但該裝置為密閉性的，此種密閉環(huán)境不利于細(xì)胞進(jìn)行氣體交換，不能為細(xì)胞提供適宜的培養(yǎng)環(huán)境，易造成細(xì)胞的乏氧狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡影響細(xì)胞的正常代謝，此種環(huán)境下細(xì)胞揮發(fā)出的有機(jī)化合物很可能不是待檢測(cè)細(xì)胞正常條件下代謝產(chǎn)出的物質(zhì)，不利于腫瘤標(biāo)記物的確切分析，且其并未對(duì)此種培養(yǎng)環(huán)境下細(xì)胞的活性及狀態(tài)進(jìn)行分析，故實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)可靠性有待進(jìn)一步考證。
[0004]另有文獻(xiàn)也公開(kāi)了一種細(xì)胞培養(yǎng)裝置，用于檢測(cè)細(xì)胞的揮發(fā)性有機(jī)化合物，但該裝置構(gòu)造復(fù)雜，其需與含有95% C02和5% 02的氣體罐直接相連，且需催化劑、碳?xì)浠衔锊都?、熱分布式質(zhì)量流量控制器、無(wú)菌濾器、水浴加熱電路、磁鐵、電子控制閥、稀釋管路等多種配件，故操作相對(duì)繁瑣，費(fèi)用也相對(duì)較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于:提供一種細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該培養(yǎng)器為簡(jiǎn)易的、非密閉性的裝置，不僅保證了燒杯內(nèi)外細(xì)胞的氣體交換，而且對(duì)細(xì)胞活性影響較小，使收集到的細(xì)胞揮發(fā)物更有研究意義，因此更有利于探究疾病的代謝機(jī)制，利于腫瘤等疾病的初步篩查和早期診斷。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其包括:
[0007]—培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿內(nèi)部盛裝有待檢測(cè)液體；
[0008]—長(zhǎng)彎管和一短彎管，該長(zhǎng)彎管和短彎管的內(nèi)端均置于該培養(yǎng)皿中；
[0009]—燒杯，該燒杯倒扣于該培養(yǎng)皿的液體中且包圍該長(zhǎng)彎管和短彎管的內(nèi)端，其中，該長(zhǎng)彎管的內(nèi)端位于該燒杯的頂部且高于該液體表面，該短彎管的內(nèi)端位于該燒杯的底部且低于該液體表面；
[0010]—結(jié)晶皿，該結(jié)晶皿罩扣在該燒杯上，該長(zhǎng)彎管和短彎管的外端均彎曲伸出于該結(jié)晶皿的外部。
[0011]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該結(jié)晶皿容器底部的開(kāi)口低于該培養(yǎng)皿上部的開(kāi)
□ O
[0012]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該燒杯倒扣后的燒杯內(nèi)的液面與該培養(yǎng)皿中的液面保持平齊。
[0013]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該待檢測(cè)液體為待檢測(cè)細(xì)胞及培養(yǎng)基。
[0014]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該長(zhǎng)彎管的外端通過(guò)一硅膠管連接一收集器，該收集器與該硅膠管連接處設(shè)有一旋鈕，用于氣體收集和維持燒杯內(nèi)外的壓力平衡。
[0015]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該硅膠管長(zhǎng)3cm，該收集器為0.5L的氣體采集袋。
[0016]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該培養(yǎng)皿的規(guī)格為90mm，該燒杯的規(guī)格為250mL，該結(jié)晶皿的規(guī)格為125mm。
[0017]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該燒杯的直徑小于培養(yǎng)皿的直徑。
[0018]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該燒杯的高度高于該培養(yǎng)皿的高度。
[0019]所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，該結(jié)晶皿的直徑大于該培養(yǎng)皿的直徑。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用上述技術(shù)方案的本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中細(xì)胞培養(yǎng)的密閉環(huán)境及操作復(fù)雜、配件冗余等缺點(diǎn)，提供了一種簡(jiǎn)易的、非密閉性的、費(fèi)用低廉的裝置，保證了燒杯內(nèi)外細(xì)胞的氣體交換，為細(xì)胞提供了相對(duì)正常的培養(yǎng)環(huán)境，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡，結(jié)果顯示細(xì)胞于此裝置中培養(yǎng)24小時(shí)后活性可達(dá)92.18%
±1.26%o
【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1為本發(fā)明結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022]附圖標(biāo)記說(shuō)明:1_培養(yǎng)皿；2_待測(cè)液體；3_長(zhǎng)彎管；4_短彎管；5_燒杯；6_結(jié)晶皿；7_硅膠管；8_收集器；81_旋鈕。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。
[0024]如圖1所示，為本發(fā)明的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器的立體組裝示意圖，其包括:
[0025]—培養(yǎng)皿1，該培養(yǎng)皿I內(nèi)部盛裝有待檢測(cè)液體2 ;其中，在本發(fā)明的實(shí)施案例中，待檢測(cè)液體2包含待檢測(cè)細(xì)胞及培養(yǎng)基，也可因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)需要加入相應(yīng)的藥物，該培養(yǎng)皿I的規(guī)格為90mm，在該培養(yǎng)皿I內(nèi)放入一長(zhǎng)彎管3和一短彎管4，該長(zhǎng)彎管3和短彎管4的內(nèi)端均置于該培養(yǎng)皿I中。
[0026]再拿一規(guī)格為250ml的燒杯5倒扣于該培養(yǎng)皿I的液體2中，該燒杯5內(nèi)的液面與該培養(yǎng)皿I中的液面要確保平齊。其中，該燒杯5的直徑要小于該培養(yǎng)皿I的直徑，但同時(shí)該燒杯5要將該長(zhǎng)彎管3和短彎管4的內(nèi)端均包圍在內(nèi)，該長(zhǎng)彎管3的內(nèi)端在該燒杯5的底部環(huán)繞彎曲，并在彎曲后使其底部高于該液體2表面且一直伸長(zhǎng)至該燒杯5的頂部，長(zhǎng)彎管3用于收集燒杯內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生的氣體，該短彎管4的內(nèi)端位于該燒杯5的底部且低于該液體2表面，短彎管4用于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)吸取待測(cè)液體進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。
[0027]再將一規(guī)格為125_的結(jié)晶皿6扣在該燒杯5上，由于燒杯5的高度要高于該培養(yǎng)皿I的高度，且結(jié)晶皿6的直徑大于培養(yǎng)皿I的直徑，因此當(dāng)結(jié)晶皿6罩扣在燒杯5上時(shí)，容器結(jié)晶皿6底部的開(kāi)口與培養(yǎng)皿I的底部有一定的距離，因此，培養(yǎng)皿I和結(jié)晶皿6之間形成一圓環(huán)狀的空間，但該結(jié)晶皿6容器底部的開(kāi)口所在的水平面要低于該培養(yǎng)皿I上部的開(kāi)口所在的水平面，保證該培養(yǎng)皿I中的待測(cè)液體2不受外界空氣中其他物質(zhì)的污染，同時(shí)，該長(zhǎng)彎管3和短彎管4的外端則均彎曲伸出于該結(jié)晶皿6的外部。
[0028]該長(zhǎng)彎管3的外端通過(guò)一長(zhǎng)3cm的硅膠管7連接一收集器8，該收集器8與該硅膠管7連接處設(shè)有旋鈕81，用于氣體收集和維持燒杯內(nèi)外的壓力平衡。本發(fā)明的實(shí)施案例中，收集器8采用的是0.5L的氣體采集袋。
[0029]因此由以上內(nèi)容得知，本發(fā)明裝置中培養(yǎng)皿I上部開(kāi)口為未封閉狀態(tài)，同時(shí)，結(jié)晶皿6的直徑大于培養(yǎng)皿I的直徑，且容器結(jié)晶皿6底部的開(kāi)口與培養(yǎng)皿I的底部有一定的距離，因此，培養(yǎng)皿I和結(jié)晶皿6之間形成一圓環(huán)狀的空間，因此，培養(yǎng)皿I中的細(xì)胞在非密閉環(huán)境下可與燒杯5內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行氣體交換，產(chǎn)生的氣體置于燒杯5的頂部，長(zhǎng)彎管3通過(guò)收集器8收集氣體，采集后的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)一步進(jìn)行固相微萃取及氣相色譜/質(zhì)譜分析等其他代謝組學(xué)分析，短彎管4用于抽取細(xì)胞用以進(jìn)一步試驗(yàn)檢測(cè)。如細(xì)胞凋亡、PCR等。
[0030]同時(shí)，本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中細(xì)胞培養(yǎng)的密閉環(huán)境及操作復(fù)雜、配件冗余等缺點(diǎn)，提供了一種簡(jiǎn)易的、非密閉性的、費(fèi)用低廉的裝置，保證了燒杯5內(nèi)外細(xì)胞的氣體交換，對(duì)細(xì)胞活性影響較小，為細(xì)胞提供了相對(duì)正常的培養(yǎng)環(huán)境，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡，結(jié)果顯示細(xì)胞于此裝置中培養(yǎng)24小時(shí)后活性可達(dá)92.18% ±1.26% ;因此使細(xì)胞揮發(fā)出的有機(jī)化合物更加真實(shí)可信，因此更有利于探究疾病的代謝機(jī)制，利于疾病的初步篩查和早期診斷。
[0031]以上的說(shuō)明和實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，其包括: 一培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿內(nèi)部盛裝有待檢測(cè)液體； 一長(zhǎng)彎管和一短彎管，該長(zhǎng)彎管和短彎管的內(nèi)端均置于該培養(yǎng)皿中； 一燒杯，該燒杯倒扣于該培養(yǎng)皿的液體中且包圍該長(zhǎng)彎管和短彎管的內(nèi)端，其中，該長(zhǎng)彎管的內(nèi)端位于該燒杯的頂部且高于該液體表面，該短彎管的內(nèi)端位于該燒杯的底部且低于該液體表面； 一結(jié)晶皿，該結(jié)晶皿罩扣在該燒杯上，該長(zhǎng)彎管和短彎管的外端均彎曲伸出于該結(jié)晶皿的外部。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該結(jié)晶皿容器底部的開(kāi)口低于該培養(yǎng)皿上部的開(kāi)口。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該燒杯倒扣后的燒杯內(nèi)的液面與該培養(yǎng)皿中的液面保持平齊。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該待檢測(cè)液體為待檢測(cè)細(xì)胞及培養(yǎng)基。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該長(zhǎng)彎管的外端通過(guò)一硅膠管連接一收集器，該收集器與該硅膠管連接處設(shè)有旋鈕，用于氣體收集和維持燒杯內(nèi)外的壓力平衡。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該硅膠管長(zhǎng)3cm，該收集器為0.5L的氣體采集袋。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該培養(yǎng)皿的規(guī)格為90mm，該燒杯的規(guī)格為250mL，該結(jié)晶皿的規(guī)格為125mm。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該燒杯的直徑小于培養(yǎng)皿的直徑。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該燒杯的高度高于該培養(yǎng)皿的高度。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其特征在于，該結(jié)晶皿的直徑大于該培養(yǎng)皿的直徑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用于疾病生物標(biāo)記物研究的細(xì)胞揮發(fā)物收集培養(yǎng)器，其包括：一培養(yǎng)皿，該培養(yǎng)皿的內(nèi)部盛裝有待檢測(cè)液體；一長(zhǎng)彎管和一短彎管的內(nèi)端均置于該培養(yǎng)皿中；一燒杯倒扣于該培養(yǎng)皿的液體中，該長(zhǎng)彎管的內(nèi)端高于該液體表面且位于該燒杯的頂部，該短彎管的內(nèi)端低于該液體表面且位于該燒杯的底部；一結(jié)晶皿罩扣在該燒杯上，該長(zhǎng)彎管和短彎管的外端均伸出于該結(jié)晶皿的外部。該培養(yǎng)器為簡(jiǎn)易的、非密閉性的裝置，不僅保證了燒杯內(nèi)外細(xì)胞間的氣體交換，而且對(duì)細(xì)胞活性影響較小，使收集到的細(xì)胞揮發(fā)物更有研究意義，因此更有利于探究疾病的代謝機(jī)制，利于腫瘤等疾病的初步篩查和早期診斷。
【IPC分類(lèi)】C12M3/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105062889
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510459096
【發(fā)明人】李丹丹, 周晉, 張卓
【申請(qǐng)人】哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年7月30日