用于將癌癥分類為易感于tmepai定向療法以及治療所述癌癥的方法
【專利說明】用于將癌癥分類為易感于TMEPAI定向療法以及治療所述 癌癥的方法
[0001] 本申請要求于2013年2月28日提交的美國臨時(shí)申請序列號(hào)61/770, 723的優(yōu)先 權(quán)權(quán)益，其整個(gè)內(nèi)容通過引用并入本文。
[0002] 發(fā)明背景 1.
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明的領(lǐng)域總體上屬于醫(yī)學(xué)、病理學(xué)和腫瘤學(xué)。更具體地，其涉及使用雄激素誘 導(dǎo)的前列腺跨膜蛋白（transmembraneprostateandrogeninduced，TMEPAI)定向療法治 療乳腺癌，例如三陰性乳腺癌（triple-negativebreastcancer)。 2.
【背景技術(shù)】
[0004] 盡管三陰性乳腺癌（triple-negativebreastcancer，TNBC)代表了總?cè)橄侔┎?例中相對小的百分比（15-25% )，但是它卻是年輕女性和少數(shù)民族中具有較短復(fù)發(fā)時(shí)間和 較少治療選擇的不成比例的更高數(shù)目乳腺癌死亡的原因。TNBC是雌激素受體（ER)、孕酮受 體（PR)和人表皮生長因子受體2(HER2)陰性的，并且以頻繁的導(dǎo)管參與、高等級(jí)和高生長 速率為特征。盡管在ER陽性和HER2陽性乳腺癌的治療中有了進(jìn)步，但是由于缺少關(guān)鍵性 地決定其生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)注的靶標(biāo)，ER陰性TNBC治療中的進(jìn)展較少。
[0005] 迄今為止，在文獻(xiàn)和專利中，焦點(diǎn)是將抑制TGF- 0 /Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作為治療方法 (參見，B〇naf〇ux&Lee，2009)。相比之下，本發(fā)明人之前的研究探究了TNBC的生長、侵襲和 轉(zhuǎn)移對于TGF-P的依賴性。他們假設(shè)由TGF-P造成的繞過復(fù)制性衰老中隱含的基因可能 是涉及將TGF-P從腫瘤阻抑物轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤促進(jìn)物（TGF-P矛盾）的"缺失的環(huán)節(jié)"。由于癌 癥中Chr20ql3的擴(kuò)增通常與無限增殖化和逃脫細(xì)胞衰老有關(guān)，他們關(guān)注了位于Chr20ql3 上的TGF-0可誘導(dǎo)基因TMEPAI(雄激素誘導(dǎo)的前列腺跨膜蛋白）。引人注目地，TMEPAI在 97例乳腺癌中的47例（48. 5%)中表現(xiàn)出基因擴(kuò)增，包括45/85(53%)的侵襲性導(dǎo)管癌和 2/11(18% )的侵襲性小葉癌。大多數(shù)具有TMEPAI拷貝數(shù)增加的腫瘤（72. 3% )是組織學(xué) 等級(jí)3(34/47)。在31例TNBC中，其中18例（58. 1% )中TMEPAI擴(kuò)增。本發(fā)明人之前的 工作表明，擴(kuò)增的TMEPAI促進(jìn)了TNBC生長和侵襲，并且TMEPAI基因敲減糾正了原型TNBC 的攻擊行為（1)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了抑制癌細(xì)胞的方法，與正常對照細(xì)胞相比所述癌細(xì)胞過 表達(dá)雄激素誘導(dǎo)的前列腺跨膜蛋白（TMEPAI)，所述方法包括使所述癌細(xì)胞與抑制TMEPAI 表達(dá)或活性的藥劑接觸。所述癌細(xì)胞可以選自腦癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、頭頸癌 細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì) 胞、睪丸癌細(xì)胞或皮膚癌細(xì)胞。所述癌細(xì)胞可以是乳腺癌細(xì)胞，例如三陰性乳腺癌細(xì)胞。所 述藥劑可以是siRNA或反義分子、胞內(nèi)抗體或小分子（例如三砲化合物（triterpenoid))。 所述方法還包括使所述細(xì)胞與第二抗癌劑或療法接觸。所述癌細(xì)胞可以是轉(zhuǎn)移的、復(fù)發(fā)的 或多重抗藥性（multi-drugresistant)的癌細(xì)胞。所述藥劑可被包埋在納米顆粒中或包 被在納米顆粒上。
[0007] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了治療患有癌癥的對象的方法，其中與正常細(xì)胞相比 所述癌癥的細(xì)胞過表達(dá)雄激素誘導(dǎo)的前列腺跨膜蛋白（TMEPAI)，所述方法包括向?qū)ο笫┯?抑制TMEPAI表達(dá)或活性的藥劑。所述癌細(xì)胞可以選自腦癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、 頭頸癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、宮頸 癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞或皮膚癌細(xì)胞。所述癌細(xì)胞可以是乳腺癌細(xì)胞，例如三陰性乳腺癌細(xì) 胞。所述藥劑可以是siRNA或反義分子、胞內(nèi)抗體或小分子（例如三砲化合物）。所述癌細(xì) 胞可以是轉(zhuǎn)移的、復(fù)發(fā)的或多重抗藥性的癌細(xì)胞。所述藥劑可被包埋在納米顆粒中或包被 在納米顆粒上。
[0008] 所述方法還可以包括使所述細(xì)胞與第二抗癌劑或療法接觸?？梢栽谒鏊巹┲?前、在所述藥劑之后或與所述藥劑同時(shí)遞送所述第二抗癌劑。所述方法還可以包括測量來 自所述對象癌細(xì)胞中的TMEPAI水平?？梢造o脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下或經(jīng)口施用所述藥劑，或者 所述藥劑可以瘤內(nèi)、局部或區(qū)域性施用到腫瘤部位，或者全身性施用所述藥劑。所述藥劑可 以施用多于一次。所述對象可以是人類對象。治療可導(dǎo)致以下的一種或更多種：降低腫瘤 負(fù)荷、減慢腫瘤生長、延長存活時(shí)間、使不可切除的腫瘤可被切除或提高生活質(zhì)量。所述方 法還包括獲得來自所述對象的癌細(xì)胞中TMEPAI表達(dá)的彳目息，例如，通過獲得癌細(xì)胞或組織 活檢物并且評(píng)估TMEPAImRNA水平，或者通過獲得癌細(xì)胞或組織活檢物并且評(píng)估TMEPAI蛋 白水平來實(shí)現(xiàn)?？稍谟盟鏊巹┲委熤盎蛴盟鏊巹┲委熤蠡蛟谶@二者情況下獲得所 述信息。
[0009] 還提供了用于將患者分類為受益于TMEPAI抑制療法的方法，其包括a)從癌癥患 者獲得樣品，其中所述樣品包含癌細(xì)胞；以及b)評(píng)估所述患者中的TMEPAI水平，其中來自 所述樣品的癌細(xì)胞中TMEPAI水平的提高指示所述患者將受益于TMEPAI抑制療法。所述癌 細(xì)胞可選自腦癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、頭頸癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃 癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞或皮膚癌細(xì)胞。所述 乳腺癌細(xì)胞可以是三陰性乳腺癌細(xì)胞。所述方法還可以包括用a)抑制TMEPAI表達(dá)或活性 的藥劑和/或b)基于TGF-P的療法治療所述患者。
[0010] 此外，提供了用于監(jiān)測患者中的癌癥療法的方法，其包括a)從經(jīng)歷了癌癥療法的 癌癥患者獲得樣品，其中所述樣品包含癌細(xì)胞；b)評(píng)估所述癌細(xì)胞中的TMEPAI水平；以及 c)與治療前或較早評(píng)估的TMEPAI水平相比來比較所述癌細(xì)胞中的水平，其中來自所述樣 品的癌細(xì)胞中TMEPAI水平的降低指示所述患者受益于所述癌癥療法。所述癌細(xì)胞可選自 腦癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、頭頸癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、肝癌 細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞或皮膚癌細(xì)胞。所述乳腺癌細(xì)胞可 以是三陰性乳腺癌細(xì)胞。所述療法可以是a)抑制TMEPAI表達(dá)或活性的藥劑，和/或b)基 于TGF-0的療法。
[0011] 還提供了用于將患者分類為受益于TMEPAI抑制療法的方法，其包括a)從癌癥患 者獲得血液、血漿或血清樣品；以及b)評(píng)估所述血液、血漿或血清樣品中的TMEPAI水平，其 中所述血液、血漿或血清樣品中TMEPAI水平的提高指示所述患者將受益于TMEPAI抑制療 法。所述方法還可以包括用抑制TMEPAI表達(dá)或活性的藥劑和/或基于TGF-0的療法治療 對象。
[0012] 另一個(gè)實(shí)施方案包括用于監(jiān)測患者中的癌癥療法的方法，其包括a)從經(jīng)歷了 癌癥療法的癌癥患者獲得血液、血漿或血清樣品；b)評(píng)估所述血液、血漿或血清樣品中的 TMEPAI水平；以及c)與治療前或較早評(píng)估的TMEPAI水平相比來比較所述血液、血漿或血 清樣品中的水平，其中所述血液、血漿或血清樣品中TMEPAI水平的降低指示所述患者受益 于所述癌癥療法。所述方法還可以包括用抑制TMEPAI表達(dá)或活性的藥劑和/或基于TGF- 0 的療法治療對象。
[0013] 預(yù)期本文描述的任何方法或組合物均可關(guān)于本文描述的任何其他方法或組合物 來實(shí)施。
[0014] 當(dāng)在權(quán)利要求書中和/或說明書中結(jié)合術(shù)語"包括/包含"使用時(shí)，未用數(shù)量詞限 定的名詞可以意指"一個(gè)/種"，但是其也符合"一個(gè)/種或更多個(gè)/種"、"至少一個(gè)/種" 和"一個(gè)/種或多于一個(gè)/種"的含義。詞語"約"意指加上或減去指定數(shù)值的5%。
[0015] 通過以下詳細(xì)描述，本發(fā)明的其他目的、特征和優(yōu)點(diǎn)將變得明顯。但是，應(yīng)理解的 是，盡管指示了本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案，但是詳細(xì)描述和具體實(shí)施例僅以舉例說明的 方式給出，因?yàn)楦鶕?jù)該詳細(xì)描述，本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的多種改變和修改對于本領(lǐng)域技術(shù) 人員將變得明顯。
[0016] 附圖簡沐
[0017] 以下附圖形成了本說明書的一部分，并且其被包括在內(nèi)以進(jìn)一步證明本發(fā)明的某 些方面。通過結(jié)合詳述來參考一個(gè)或更多個(gè)這些附圖，將能夠更好地理解本發(fā)明。
[0018] 圖1A-B:正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中TMEPAImRNA和蛋白質(zhì)的相對表達(dá)。圖1A.正常人 乳腺上皮細(xì)胞（HMEC)和MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中，通過QPCR的TGF-0對TMEPAImRNA 表達(dá)的作用，其被TGF-0受體I激酶抑制劑SB431542(SB)抑制。圖1B.在不具有或具有 TGF-0刺激的情況下，HMEC和MDA-MB-231細(xì)胞中TMEPAI蛋白的相對表達(dá)。
[0019] 圖2 :多種乳腺癌細(xì)胞中TMEPAI、ER-a和HER2蛋白的相對表達(dá)。侵襲性和非侵 襲性乳腺癌細(xì)胞系中TMEPAI、雌激素受體-a(ER)、孕酮受體（PR)和Her2受體（Her2)的 Western印記分析。
[0020] 圖3A-B:乳腺腫瘤中TMEPAI蛋白的免疫組織化學(xué)（IHC)。圖3A.通過免疫組織化 學(xué)（IHC)分析多種乳腺腫瘤中的TMEPAI蛋白水平。圖3B.在17種不同的乳腺腫瘤中，通 過陣列比較基因組雜交（aCGH)比較基因擴(kuò)增，以及通過IHC比較蛋白質(zhì)表達(dá)。
[0021] 圖4A-H:TMEPAI下調(diào)經(jīng)典Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖4A.用12XCAGA-Luc和TMEPAI或?qū)?照表達(dá)構(gòu)建體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染三陰性BT-20、MDA-MB-231和HCC1937乳腺癌細(xì)胞。不用TGF-0處 理或用TGF-0 (2ng/ml)處理細(xì)胞16小時(shí)。將海腎熒光素酶（Renillaluciferase)活性歸 一化的螢火蟲熒光素酶活性的相對光單位（RLU)的倍數(shù)變化表示為來自三個(gè)轉(zhuǎn)染的平均 值土SD。星號(hào)表示在TGF-0的存在下pcDNA相對于pTMEPAI的p< 0. 001。圖4B.TMEPAI 敲減對MDA-MB-231細(xì)胞中Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，其通過12XCAGA-Luc報(bào)道蛋白活性來 測量并且表示為上述歸一化RLU。插圖示出穩(wěn)定表達(dá)兩種不同shRNA(ShRNAl和shRNA2) 的兩種不同克隆中TMEPAI的相對表達(dá)。星號(hào)表示在TGF-0的存在下CONshRNA相對于 TMEPAIshRNA的p< 0. 001。圖 4C.表達(dá)對照或TMEPAIshRNA的MDA-MB-231 細(xì)胞中磷酸 化的以及總Smad2和Smad3、Smad4、Smad7、TMEPAI和GADPH蛋白的Western印跡。在具有 或不具有2ng/ml的TGF-P情況下對細(xì)胞進(jìn)行孵育。圖4D.在TGF-P存在或不存在下， 表達(dá)對照shRNA(MDA-MB-231)或TMEPAIshRNA(231-TMKD)的HMEC和乳腺癌細(xì)胞系中歸 一化的12XCAGA驅(qū)動(dòng)的螢火蟲熒光素酶活性之相對光單位（RLU)的倍數(shù)變化。人TMEPAI 基因在HMEC和MDA-MB-231細(xì)胞中表達(dá)，小鼠TMEPAI在231-TMKD細(xì)胞中表達(dá)。星號(hào)表示 在TGF-0的存在下pcDNA相對于pTMEPAI的p< 0. 001。圖4E.在TGF-0的存在或不存 在下，表達(dá)對照pcDNA或pTMEPAI的HMEC中磷酸化的和總Smad2/3的Western印跡。圖 4F.不用TGF- 0處理或用TGF- 0處理的表達(dá)對照和TMEPAIshRNA的HCC1937細(xì)胞中歸一 化的12XCAGA-LUC報(bào)告蛋白活性的倍數(shù)變化。星號(hào)表示在TGF-P的存在下CONshRNA相 對于TMEPAIshRNA的p<0. 001。圖4G.在TGF-0不存在或存在下，表達(dá)對照和TMEPAI shRNA(分別為HCC1937和HCC1937_TMEPAI_KD)的HCC1937細(xì)胞的生長曲線。圖4H.表達(dá)對 照或TMEPAIshRNA的HCC1937 細(xì)胞中Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、Smad2、pSmad2、Smad3、pSmad3、 Smad4、Smad7和TMEPAI的相對表達(dá)。
[0022] 圖5A-C:TMEPAI上調(diào)乳腺癌細(xì)胞中的非經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖5A.通過Western印跡， 表達(dá)對照（CONshRNA)或TMEPAIshRNA的MDA-MB-231 細(xì)胞中PTEN、磷酸化Akt(pAkt)、總 Akt、p21、p27和GAPDH的相對表達(dá)。shRNA降低TMEPAI的表達(dá)，導(dǎo)致MDAMB-231乳腺癌細(xì) 胞中PTEN、p27和p21提高，以及pAkt降低。圖5B.表達(dá)對照或TMEPAIshRNA的HCC1937 細(xì)胞中PTEN、pAkt、總Akt、p21、p27和微管蛋白的相對表達(dá)。另外，在另一種三陰性乳腺 癌細(xì)胞系HCC1937中，TMEPAI水平的降低導(dǎo)致PTEN、p27和p21蛋白水平提高以及pAkt降 低。圖5C.通過Western印跡，表達(dá)對照（pcDNA)或TMEPAI(pTMEPAI)載體的HMEC中PTEN、 pAkt、總Akt、p21、p27和GAPDH的相對表達(dá)。正常乳腺上皮細(xì)胞中TMEPAI的被迫表達(dá)導(dǎo)致 PTEN、p27和P21降低以及pAkt提高。
[0023] 圖6 :高TMEPAI表達(dá)在ER陰性/淋巴結(jié)陽性乳腺癌患者中具有不利的預(yù)后意 義。在中位數(shù)截?cái)嘀迪?，通過初步分析具有根據(jù)TMEPAI表達(dá)分類的ER/PR陰性和淋巴結(jié) 陽性患者之基因表達(dá)數(shù)據(jù)和存活信息的公眾可獲得數(shù)據(jù)庫（GEO:AffymetrixHGU133A和 HGU133+2微陣列）來確定無復(fù)發(fā)的存活，表明TMEPAI表達(dá)的升高與具有2. 69風(fēng)險(xiǎn)比（HR) 和0. 002對數(shù)秩（log-rank)P值的較短存活相關(guān)。
[0024] 圖7A-D:通過微陣列分析的多種癌癥中TMEPAI的相對mRNA表達(dá)。圖7A.相對于 對照乳腺，乳腺導(dǎo)管原位癌示出TMEPAImRNA表達(dá)的~6倍提高。圖7B.相對于正常肺，肺 腺癌示出TMEPAImRNA的~2. 6倍提高。圖7C.胰腺導(dǎo)管癌示出TMEPAI表達(dá)的~3倍提 高。圖7D.相對于正常結(jié)腸，直腸乙狀結(jié)腸腺癌示出TMEPAI表達(dá)的~4倍提高。括號(hào)中的 數(shù)字表示樣品的數(shù)目。
[0025] 圖8A-D:TMEPAI表達(dá)的抑制降低了裸小鼠中人乳腺腫瘤的生長：圖8A.通過測量 腫瘤體積，TMEPAI敲減細(xì)胞的體內(nèi)乳腺腫瘤發(fā)生潛力降低（*P< 0. 05)。插圖示出了代 表性腫瘤。圖8B.與表達(dá)對照shRNA的細(xì)胞相比，TMEPAI敲減細(xì)胞形成的腫瘤中VEGF和 Ki67的表達(dá)降低。圖8C.對照和TMEPAI敲減細(xì)胞以及異種移植乳腺腫瘤中HIF-1a的相 對表達(dá)。使用經(jīng)氯化鈷處理的HeLa細(xì)胞作為HIF-la表達(dá)的陽性對照。圖8D.表達(dá)對照 shRNA和TMEPAIshRNA的細(xì)胞中pAkt、PTEN、p27kipl和HIF-1a以及TMEPAI的表達(dá)。
[0026] 圖9A-D:TMEPAI和Snail在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用。圖9A-B.在TGF-0的存在或 不存在下，表達(dá)對照（CON)或TMEPAIshRNA的MDA-MB-231細(xì)胞中Snail和TMEPAI蛋白 (圖9A)以及mRNA(圖9B)的相對表達(dá)。星號(hào)表示在TGF-I3的存在下對照shRNA相對于 TMEPAIshRNA的p< 0. 001。圖 9C.表達(dá)對照（CON)或TMEPAIshRNA的MDA-MB-231 細(xì)胞 的肺轉(zhuǎn)移。圖9D.來自用表達(dá)對照（CON)或TMEPAIshRNA的MDA-MB-231細(xì)胞注射之小鼠 的肺的組織學(xué)切片。
[0027] 圖10A-D:南蛇藤醇（celastrol)是通過增強(qiáng)生長阻抑性TGF-0信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的 TMEPAI表達(dá)和癌細(xì)胞生長的新的抑制劑。圖10A.即使在1微摩爾的濃度下，在MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞中南蛇藤醇抑制生長并且誘導(dǎo)死亡。圖10B.南蛇藤醇對于正常乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A的生長沒有作用。圖10C.南蛇藤醇通過抑制TMEPAI表達(dá)來抑制非Smad信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)（左圖）并增強(qiáng)Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（右圖）。圖10D.南蛇藤醇增加Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，如通過 12XCAGA-熒光素酶報(bào)道蛋白測定來測量。
[0028] 圖11A-D:南蛇藤醇體內(nèi)抑制人MDA-MB-231乳腺腫瘤的生長。圖11A.用2mg/kg 南蛇藤醇或僅用載劑每周3次，連續(xù)4周處理具有皮下MDA-MB-231腫瘤的無胸腺小鼠。圖 11B.南蛇藤醇處理后的腫瘤重量，P< 0.001。插圖示出了從載劑和南蛇藤醇處理的小鼠 中分離的腫瘤的相對尺寸。圖11C.南蛇藤醇處理的腫瘤經(jīng)過形成pSmad2和pSmad3以及 減少TMEPAI表達(dá)而表現(xiàn)出提高的TGF-P信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。圖11D.通過測量總體重來監(jiān)測施用 的南蛇藤醇的毒性。
[0029] 圖12A-D.裝載南蛇藤醇的卵磷脂（lecithin)納米顆粒體內(nèi)抑制腫瘤生長。（圖 12A)從具有人乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-231)之異種移植物的裸小鼠切除的腫瘤的代表性圖 片。在總計(jì)兩周的時(shí)間段中，通過在第一周每隔一天以及接下來的一周每兩天間隔腹膜內(nèi) 注射來施用（Veh-NP)2mg/kg無藥物脂質(zhì)體、0. 2mg/kg含南蛇藤醇的脂質(zhì)體（CLST-NP)或 僅2mg/Kg南蛇藤醇（CLST)。（圖12B)示出了腫瘤重量，*p< 0. 01，相對于載劑對照組。 (圖12C)處死動(dòng)物前測量的腫瘤體積。*p< 0. 01，相對于載劑對照組。（圖12D)用載劑 或藥物處理的動(dòng)物體重的相似性，表明在施用劑量下CLST-NP和CLST無毒。
[0030] 圖13A-B.TMEPAI存在于由乳腺癌細(xì)胞分泌到外部培養(yǎng)基中的外來體（exosome) 中。（圖13A)將細(xì)胞在具有或不具有TGF- 0的情況下培養(yǎng)24小時(shí)和48小時(shí)后，在無細(xì)胞 培養(yǎng)基中分離的外來體中TMEPAI蛋白的代表性Western印跡圖。（圖13B)在培養(yǎng)野生型 和TMEPAI缺陷型（TMEPAIKD)MDA-MB-231細(xì)胞后，在培養(yǎng)基中分離的外來體中存在的蛋白 質(zhì)的比較（通過Western印跡）。
[0031] 示例件實(shí)施方案的描沐
[0032]TGF-P在腫瘤進(jìn)展中具有矛盾的功能。鑒定這兩種功能之間的分子開關(guān)可對其 在乳腺癌進(jìn)展中如何作用提供新的機(jī)理性認(rèn)識(shí)以及提供新的治療靶標(biāo)。本發(fā)明人之前報(bào)道 了TMEPAI基因表達(dá)將轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-P)從腫瘤阻抑物轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤促進(jìn)物。充當(dāng) 了TGF-P兩種功能之間的分子開關(guān)的TMEPAI可用于鑒定將受益于基于TGF-P的抗癌療 法的患者，并且還可作為替代標(biāo)志物（surrogatemarker)以監(jiān)測用所述療法治療的患者的 進(jìn)展?，F(xiàn)在，本發(fā)明人表明，TMEPAI通過刺激TGF-P介導(dǎo)的非經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路同時(shí)阻抑 TGF-P介導(dǎo)的經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和迀移。三陰性乳腺癌細(xì)胞中TMEPAI 基因敲減重建了高Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）并且阻抑了非經(jīng)典信號(hào)傳導(dǎo)，因此恢復(fù) 了TGF-0的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。本發(fā)明人還鑒定了來自植物的三砲化合物（triterpinoid)具 有阻抑TMEPAI表達(dá)和刺激經(jīng)典Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。這種藥劑在乳腺癌細(xì)胞中抑制細(xì)胞 增殖以及誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。因此，通過恢復(fù)TGF-P介導(dǎo)的經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間的 正常平衡，TMEPAI的化學(xué)治療拮抗作用可以恢復(fù)TGF-P的抑制細(xì)胞功能。事實(shí)上，臨床前 研究確認(rèn)了表達(dá)TMEPAI的乳腺癌對于這種萜（terpinoid)引起的TMEPAI表達(dá)的藥理學(xué)抑 制易感。為了促進(jìn)藥物的生物利用度，可使用這種藥劑的納米顆粒制劑。
[0033] 下文將更詳細(xì)地描述本發(fā)明的這些和另一些方面。
[0034]I.TMEPAI
[0035] 已經(jīng)報(bào)道，雄激素誘導(dǎo)的前列腺跨膜蛋白（TMEPAI)(或稱為PMEPA1、STAG1、 ERG1. 2或N4wbp4)通過睪酮或其衍生物誘導(dǎo)并且與腫瘤發(fā)生有關(guān)。還示出TMEPAI的轉(zhuǎn)錄 本被TGF-0誘導(dǎo)。TMEPAI是含有兩個(gè)可與HECT型E3泛素連接酶相互作用之PY基序的 lb型跨膜蛋白。已經(jīng)報(bào)道TMEPAI