一種具有提升性功能的牡蠣肽及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種具有提升性功能的牡頗膚及其制備方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 男性性功能障礙是一個(gè)常見(jiàn)病，發(fā)病率約占成年男性的10%。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏 的加快，來(lái)自工作、家庭、經(jīng)濟(jì)等方面的壓力增大，男性發(fā)生性功能障礙的概率越高。
[0003] 牡頗，又稱噓、頗黃、海頗子，是一種雙殼類軟體動(dòng)物，屬軟體動(dòng)物口，瓣觸綱，牡頗 科。牡頗是全球的第一大養(yǎng)殖貝類，主要分布在溫帶和熱帶的各大洋沿岸，同時(shí)也是我國(guó)四 大養(yǎng)殖貝類之一。《本草拾遺》記載牡頗肉具有"煮食，主虛損，......于姜醋中生食之，主丹 毒，酒后煩熱，止渴"的功效。但由于牡頗的生產(chǎn)季節(jié)強(qiáng)，且有較強(qiáng)的魚(yú)腥味，限制其應(yīng)用領(lǐng) 域；目前牡頗主要W鮮吃或作為海產(chǎn)干貨出售。因此，W牡頗為原料，結(jié)合生物酶解技術(shù)制 備蛋白膚產(chǎn)品，拓展其應(yīng)用領(lǐng)域并提高其附加值，具有較大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義。但是在 目前的W酶解技術(shù)制備牡頗膚的過(guò)程中，酶的使用量偏多造成了生產(chǎn)成本高。同時(shí)，不同的 酶解技術(shù)所獲得的牡頗膚也不太相同，運(yùn)表現(xiàn)在運(yùn)些多膚的功效作用及其強(qiáng)弱上，而通過(guò) 不同的酶解技術(shù)獲得高功效的活性多膚一直是技術(shù)人員研究的重點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種具有提升性功能的牡頗膚及其制備方法和 應(yīng)用，使得所述制備方法能夠減少酶的使用量，并且所制備的牡頗膚具有效果更優(yōu)的提高 性功能和抗氧化的功效，可應(yīng)用于相關(guān)保健品、食品W及藥品的制備中。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] 一種具有提升性功能的牡頗膚的制備方法，包括：
[0007]步驟1、將牡頗肉、巧鹽和水研磨得到牡頗肉漿液；
[0008] 步驟2、牡頗肉漿液酶解，酶解后離屯、取上清，獲得牡頗酶解粗液；
[0009] 步驟3、將牡頗酶解粗液脫色除雜，獲得牡頗膚精制液；
[0010] 步驟4、牡頗膚精制液濃縮、噴霧干燥獲得所述牡頗膚。
[0011] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有酶解技術(shù)中使用酶制劑用量偏多W及目標(biāo)功效不強(qiáng)、蛋白回收率 不高的缺陷，在對(duì)牡頗肉進(jìn)行酶解提取多膚前，先采用巧鹽對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理，W外加巧離子 激活牡頗肉內(nèi)源性酶，釋放的牡頗肉內(nèi)源性酶可高效專一水解牡頗蛋白，進(jìn)而減少商業(yè)蛋 白酶的用量，降低生產(chǎn)成本。同時(shí)協(xié)同后面的酶解步驟，不僅提高了蛋白回收率，還使得所 獲得的牡頗多膚具有更佳的功效作用。
[0012] 其中，作為優(yōu)選，所述巧鹽為食品級(jí)氯化巧、乳酸巧、碳酸巧、憐酸氨巧或巧樣酸 巧。
[0013] 作為優(yōu)選，所述巧鹽為牡頗肉質(zhì)量的0. 1-0. 3%的巧鹽。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施例中，所述巧鹽可W為0. 1 %的氯化巧、0. 3%的乳酸巧 或0.2%的巧樣酸巧。
[0015]作為優(yōu)選，步驟1中所述水為牡頗肉質(zhì)量的0.5-1.0倍的軟化水。在本發(fā)明的一 些具體實(shí)施例中，所述水可W為牡頗肉質(zhì)量的0.5倍的軟化水、牡頗肉質(zhì)量的0.8倍的軟化 水或牡頗肉質(zhì)量的1.0倍的軟化水。
[0016] 在使用巧鹽預(yù)處理牡頗后，進(jìn)行酶解時(shí)均可減少酶制劑的使用量，故常規(guī)的酶解 均可，但是作為本發(fā)明優(yōu)選，步驟2為：
[0017] 將牡頗肉漿液先用中性蛋白酶或堿性蛋白酶酶解，然后再用風(fēng)味蛋白酶酶解，酶 解后滅酶、離屯、，上清液即牡頗酶解粗液。
[0018] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟2為：
[0019] 將牡頗肉漿液至于35~45°C下保溫?cái)埌?-2小時(shí)，然后加入中性蛋白酶或堿性蛋 白酶，調(diào)節(jié)抑升溫至50~60°C繼續(xù)水解5-8小時(shí)后，調(diào)節(jié)抑至5. 0-5. 5,加入風(fēng)味蛋白酶 在50~60°C下繼續(xù)酶解，2-3小時(shí)后滅酶，離屯、，上清液即牡頗酶解粗液。
[0020] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述中性蛋白酶為木瓜蛋白酶、渡蘿蛋白酶、動(dòng)物蛋白水解酶、復(fù) 合蛋白酶Protamex中的一種或多種；所述中性蛋白酶或堿性蛋白酶的加入量為牡頗肉 漿液質(zhì)量的0. 3~0.8%〇 ;所述堿性蛋白酶為Alcalase堿性蛋白酶、FoodProA化aline Protease堿性蛋白酶、膜蛋白酶中的一種或多種；所述風(fēng)味蛋白酶的加入量為牡頗肉漿液 質(zhì)量的0. 5~1.0%〇。 陽(yáng)02U其中，對(duì)于使用中性蛋白酶酶解時(shí)，抑值調(diào)整到6. 0-7. 0 ;對(duì)于使用堿性蛋白酶酶 解時(shí)，抑值調(diào)整到7. 5-8. 5。
[0022] 作為優(yōu)選，步驟3為：
[0023] 往牡頗酶解粗液中添加活性炭攬拌脫色，過(guò)濾，所得濾液為牡頗膚精制液。
[0024] 進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟3為：
[00巧]往牡頗酶解粗液中添加活性炭，45~55°C保溫?cái)埌?. 5~1. 0小時(shí)，過(guò)濾，所得濾 液為牡頗膚精制液。
[0026] 采用本發(fā)明方法制備的牡頗膚，消耗的中性蛋白酶或堿性蛋白酶未超過(guò)0.8%。，風(fēng) 味蛋白酶未超過(guò)1.0%。，而沒(méi)有采用巧鹽預(yù)處理的相同酶解工藝，消耗的中性蛋白酶或堿性 蛋白酶為1.0%。，風(fēng)味蛋白酶也為1.0%。，酶制劑使用量較高。同時(shí)，采用本發(fā)明酶制劑分兩 步進(jìn)行酶解，相比將其他酶制劑或和本發(fā)明相同酶制劑一步酶解的工藝，所獲得的牡頗膚 在提升小鼠性功能W及體外抗氧化功能上效果更優(yōu)。
[0027] 基于上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供了由本發(fā)明制備方法制備的牡頗膚，W及所述牡 頗膚在制備提高性功能和/或抗氧化保健品、食品W及藥品中的應(yīng)用。其中，所述藥品和保 健品為丸劑、膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑、口服液或膏劑。
[0028] 由W上技術(shù)方案可知，本發(fā)明在對(duì)牡頗肉進(jìn)行酶解前先用巧鹽進(jìn)行預(yù)處理，用W 激活釋放牡頗內(nèi)源性酶，減少后續(xù)酶解消耗的酶制劑，同時(shí)協(xié)同牡頗內(nèi)源性酶，采用特定的 酶制劑組合分兩步進(jìn)行酶解，制備出具有較強(qiáng)的抗氧化活性、可顯著提高性功能的牡頗膚。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 本發(fā)明公開(kāi)了一種具有提升性功能的牡頗膚的制備方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W借 鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域 技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述牡頗膚及其制備方 法和應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍 內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0030] 在具體實(shí)施例中設(shè)及到牡頗膚體外抗氧化活性（還原力、DPPHICJ的檢測(cè)方法 和牡頗膚對(duì)雄性成熟小鼠提升性功能實(shí)驗(yàn)方法參照如下步驟。
[003U 1、采用鐵氯化鐘還原體系，700nm處測(cè)定樣品的還原力。將制備的樣品W蛋白濃 度進(jìn)行梯度稀釋，取樣品液2ml于試管中，加0. 2mol/L憐酸鹽緩沖液（PBS，pH6. 6)2ml和 1% (m/V)六合鐵氯化鐘溶液2ml，混合均勻于50°C恒溫水浴鍋中保溫20min，加10%TCA 2ml，充分混勻。取上清液2ml于試管中，加蒸饋水2ml及0. 1 %的化CI3溶液0. 4ml，充分 混勻后靜置lOmin，在波長(zhǎng)為700nm處測(cè)定其吸光度。每個(gè)樣品按上述步驟操作，平行測(cè)定 S次（還原力ICso值指當(dāng)A700皿=0. 5時(shí)，樣品的蛋白濃度，單位為mg/ml)。
[0032] 2、選擇雄性成熟小鼠，體重18~22g，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、樣品組、對(duì)比樣品組， 每組12只，連續(xù)給藥28d。
[0033] 實(shí)驗(yàn)前4她，每只雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇（0. 02mg/只），使雌鼠動(dòng)情期相同， 試驗(yàn)于晚上7-11時(shí)進(jìn)行。末次給藥30min后，將雄性小鼠單獨(dú)放入籠中5min，使其適應(yīng)環(huán) 境，然后每籠加入1只雌鼠，觀察記錄下列指標(biāo)：
[0034] ①雌鼠投入至雄鼠第1次撲捉雌鼠的時(shí)間（捕捉潛伏期）；
[0035] ②20min內(nèi)雄鼠撲捉雌鼠或爬背的動(dòng)作次數(shù)（撲捉次數(shù)）；
[0036] ③20min內(nèi)雄鼠撲捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)祿陰莖的次數(shù)（射精次數(shù)）；
[0037] ④自爬背成功出現(xiàn)祿陰莖的時(shí)間（射精潛伏期）。
[0038] ⑥20min內(nèi)各組的撲捉百分率和射精百分率。
[0039] 捕捉百分率=捕捉動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù) 陽(yáng)040]射精百分率=射精動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)
[0041] 數(shù)據(jù)處理：采用SPSS19.O軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，每組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均W均值表 示，各組總體方差滿足方差齊性條件時(shí)，多組間比較采用單因素方差分析；當(dāng)各組總體方差 不滿足方差齊性條件時(shí)，