一種治療卵巢癌的二萜化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從香椿的干燥葉中分離得到的一種具有治療 卵巢癌作用的二萜類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 香棒Toonasinensis(A. Juss · )Roemor又名春芽樹、棒、棒樹，在《植物名實(shí)圖考》中 稱為紅椿，為楝科(Mel iaceae)香椿屬(Toona)落葉喬木，是我國(guó)特有的珍貴速生藥材書中， 素有"中國(guó)桃花心木"之稱，主要分布于我國(guó)的山東、安徽、河南、河北等省份，其中又以安徽 太和、河南焦作和山東西牟出產(chǎn)的香椿產(chǎn)品最為出名。
[0003] 香椿全株具有特殊氣味，并因富含多種生物活性物質(zhì)而具有很高的藥用價(jià)值，其 葉、樹皮和果實(shí)均可入藥，應(yīng)用歷史十分悠久，始載于《唐本草》。香椿葉味苦、性溫，具有清 熱收斂、消炎解毒、去燥濕等功效，主治腸炎、痢疾等疾病;此外，香椿葉富含維生素 C、氨基 酸、優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和磷、鐵等微量元素，是我國(guó)著名的傳統(tǒng)時(shí)令蔬菜，已有兩千多年的食用歷 史，曾與荔枝一同作為貢品進(jìn)獻(xiàn)宮廷御用，是蔬菜中不可多得的珍品，深受廣大消費(fèi)者的青 睞，在國(guó)外被稱為"綠色保健菜"，現(xiàn)多出口至日本及東南亞國(guó)家。香椿皮味苦澀、性涼，具有 除熱、燥濕、潤(rùn)腸止血、殺蟲的功效，臨床常用于治療痢疾、腸炎、泌尿道感染、便血、白帶、風(fēng) 濕腰腿痛等。香椿子味辛苦、性溫，具祛風(fēng)、散寒、止痛之功效，臨床用于治療風(fēng)寒外感、心胃 氣痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、疝氣及冷骨風(fēng)等。
[0004] 目前，香椿中分離鑒定出的化合物主要可分為黃酮類、酚類及其衍生物、萜類(三 萜、倍半萜、二萜）、苯丙素類、含硫化合物等?，F(xiàn)代研究表明，香椿中的化學(xué)成分有抗腫瘤、 抗氧化、降血脂等多種生物活性；國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)香椿中的化學(xué)成分開展了一些較為深入的 研究，發(fā)現(xiàn)其所含化合物的種類豐富，是值得進(jìn)一步研究、開發(fā)前景良好的一種藥食同源植 物資源。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從香椿的干燥葉中分離得到的一種具有治療卵巢癌作 用的二萜類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將香椿的干燥葉粉碎，用80 ~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫10個(gè)柱體 積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸 膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80 :1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和 10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010]進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85%。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療卵巢癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療卵巢癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021 ]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]制備方法：（a)將香椿的干燥葉（8kg)粉碎，用85 %乙醇熱回流提取(25L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(355g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用 75%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（136g); (c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8個(gè)柱體積）、55:1 (8個(gè)柱體積）、30:1 (6個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體積)和1:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4(31g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 20:1(8個(gè)柱體積）、15:1(10個(gè)柱體積)和10:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3 個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2(llg)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(228mg)。
[0024] 結(jié)構(gòu)確證:無色粉末；HR-ESMS顯示[M+Na] +為m/z 335 · 1604，結(jié)合核磁特征可得 分子式為〇2〇1124〇3，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)51^。111，〇]\^〇-(16,60〇]\0^):!1-1(6.65， s)，H-5(7.52，s)，H-7(3.89，d，J=12.0)，H-8(0.92，m)，H-8(1.93，m)，H-9(0.49，m)，H-ll (0.68，m)，Η-12(1·ll，m)，H-12(1.85，m)，H-13(1.78，m)，H-16(1.89，d，J=1.0)，H-17 (5.44，s)，H-17(5.47，s)，H-18(1.01，s)，H-19(0.86，s)，H-20(1.26，d，J = 6.9);核磁共振 碳譜數(shù)據(jù) Sc(ppm，DMS0-d6，150MHz):146.2(CHd-C)，148.7(C，2-C)，193.6(C，3-C)，130.1 (C，4-C)，147.3(CH，5-C)，143.9(C，6-C)，76.5(CH，7-C)，22.4(CH 2,8-C)，25.3(CH，9-C)， 16.1(C，10-C)，19.8(CH，11-C)，27.1(CH2，12-C)，36.3(CH，13-C)，91.8(C，14-C)，67.5(C， 15-C)，11.1(CH3，16-C)，114.8(CH2，17-C)，27.6(CH3，18-C)，15.1(CH3，19-C)，11.2(CH 3,20-(：);碳原子標(biāo)記參見圖1。111匪1?譜顯示兩個(gè)雙峰甲基信號(hào)[6!11.26((1，1 = 6.9他，!1-20)和 1.89((1，1=1.0抱，!1-16)]，兩個(gè)單峰甲基信號(hào)[5!10.86(8，!1-19)，1.01(8，!1-18)]，一個(gè)烯屬 亞甲基質(zhì)子信號(hào)[SH5.44(s，H-17)和5.47(8，!1-17)]，兩個(gè)烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)[6!16.65(8， !1-1)和7.52(8，!1-5)]，一個(gè)含氧次甲基質(zhì)子信號(hào)[5!13.89((1，1=12.0抱，!1-7)]。 13(：-匪1?譜