初始pH=6,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)8d，聚丙締酷胺的降解率達到36%。
[0042] 實例3
[0043] (1)種子的制備：從冰箱保存的球紅假單胞菌試管中挑取一環(huán)接入到富集培養(yǎng)基 中，菌株經(jīng)活化和擴大培養(yǎng)后，再按體積百分比2 %接入到富集培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初 始抑=6,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)36h，可得用于馴化的降解菌；
[0044] (2)降解菌的馴化:取上述步驟一制得的種子按體積百分比2%接入到含50ml富集 培養(yǎng)基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6,攬拌速度 為13化/min時培養(yǎng)72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng) 5d;取第一階段馴化的菌液按體積百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培養(yǎng)基的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng)7d;
[0045] (3)單菌落的分離:取上述步驟二馴化后的菌株培養(yǎng)液，稀釋后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基上，在溫度為30°C時培養(yǎng)72h，將長出的單菌落在固體培養(yǎng)基 上劃線純化兩次；
[0046] (4)菌懸液的配制：取上述步驟Ξ純化后的菌落，接種到富集培養(yǎng)基中，在溫度為 30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)48h，再取培養(yǎng)液于3000轉(zhuǎn)離屯、lOmin，倒出上 清液，用無菌生理鹽水沖洗底部的細菌，采用血球計數(shù)器計數(shù)，最后配制成lOVml的菌懸 液，4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br>[0047] (5)將上述步驟四保存的菌懸液，按體積百分比5%接入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度 為40°C，初始pH=7,攬拌速度為14化/min時培養(yǎng)6d，聚丙締酷胺的降解率達到30%。
[004引 實例4
[0049] (1)種子的制備：從冰箱保存的球紅假單胞菌試管中挑取一環(huán)接入到富集培養(yǎng)基 中，菌株經(jīng)活化和擴大培養(yǎng)后，再按體積百分比2 %接入到富集培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初 始抑=6,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)36h，可得用于馴化的降解菌；
[0050] (2)降解菌的馴化:取上述步驟一制得的種子按體積百分比2%接入到含50ml富集 培養(yǎng)基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6,攬拌速度 為13化/min時培養(yǎng)72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng) 5d;取第一階段馴化的菌液按體積百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培養(yǎng)基的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng)7d;
[0051] (3)單菌落的分離:取上述步驟二馴化后的菌株培養(yǎng)液，稀釋后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基上，在溫度為30°C時培養(yǎng)72h，將長出的單菌落在固體培養(yǎng)基 上劃線純化兩次；
[0052] (4)菌懸液的配制：取上述步驟Ξ純化后的菌落，接種到富集培養(yǎng)基中，在溫度為 30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)48h，再取培養(yǎng)液于3000轉(zhuǎn)離屯、lOmin，倒出上 清液，用無菌生理鹽水沖洗底部的細菌，采用血球計數(shù)器計數(shù)，最后配制成lOVml的菌懸 液，4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br>[0053] (5)將上述步驟四保存的菌懸液，按體積百分比4%接入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度 為35°C，初始pH=7,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)7d，聚丙締酷胺的降解率達到33%。
[0054] 實例5
[0055] (1)種子的制備：從冰箱保存的球紅假單胞菌試管中挑取一環(huán)接入到富集培養(yǎng)基 中，菌株經(jīng)活化和擴大培養(yǎng)后，再按體積百分比2 %接入到富集培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初 始抑=6,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)36h，可得用于馴化的降解菌；
[0056] (2)降解菌的馴化:取上述步驟一制得的種子按體積百分比2%接入到含50ml富集 培養(yǎng)基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6,攬拌速度 為13化/min時培養(yǎng)72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng) 5d;取第一階段馴化的菌液按體積百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培養(yǎng)基的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng)7d;
[0057] (3)單菌落的分離:取上述步驟二馴化后的菌株培養(yǎng)液，稀釋后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基上，在溫度為30°C時培養(yǎng)72h，將長出的單菌落在固體培養(yǎng)基 上劃線純化兩次；
[0058] (4)菌懸液的配制：取上述步驟Ξ純化后的菌落，接種到富集培養(yǎng)基中，在溫度為 30°C，初始pH = 6，攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)48h，再取培養(yǎng)液于3000轉(zhuǎn)離屯、lOmin，倒出上 清液，用無菌生理鹽水沖洗底部的細菌，采用血球計數(shù)器計數(shù)，最后配制成lOVml的菌懸 液，4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br>[0059] (5)將上述步驟四保存的菌懸液，按體積百分比3%接入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度 為30°C，初始pH=6,攬拌速度為13化/min時培養(yǎng)8d，聚丙締酷胺的降解率達到34%。
[0060] 本發(fā)明提供了一種煤泥水中殘留聚丙締酷胺的生物降解方法，本方法中馴化的球 紅假單胞菌能夠W唯一氮源利用聚丙締酷胺進行降解，最大降解率為36%;目前尚未見用 生物方法對煤泥水中殘留的聚丙締酷胺進行降解，本方法對煤泥水中殘留聚丙締酷胺的生 物降解具有創(chuàng)造意義，且該方法不會對環(huán)境造成二次污染。
[0061] W上所述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范 圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方 案作出的各種變形和改進，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:包含以下步驟。 步驟一、種子的制備。從冰箱保存的球紅假單胞菌試管中挑取一環(huán)接入到富集培養(yǎng)基 中，菌株經(jīng)活化和擴大培養(yǎng)后，再按體積百分比2 %接入到富集培養(yǎng)基中，在溫度為30°C，初 始pH=6,攪拌速度為130r/min時培養(yǎng)36h，可得用于馴化的降解菌； 步驟二、降解菌的馴化。取上述步驟一制得的種子按體積百分比1~5%接入到含40~ 80ml富集培養(yǎng)基和10~30ml含聚丙烯酰胺煤泥水的馴化培養(yǎng)基中，在溫度為25~40°C，初 始pH=5~7,攪拌速度為100~140r/min時培養(yǎng)54~72h，倒出10~30ml的上清液，然后加入 10~30ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng)4~7d;取第一階段馴化的菌液按體積百分比1~ 5%接入到含100~150ml含聚丙烯酰胺煤泥水和30~50ml富集培養(yǎng)基的馴化培養(yǎng)基中，在 溫度為25~40°C，初始pH=5~7,攪拌速度為100~140r/min時培養(yǎng)54~72h，倒出30~50ml 的上清液，然后加入30~50ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持續(xù)培養(yǎng)7~10d; 步驟三、單菌落的分離。取上述步驟二馴化后的菌株培養(yǎng)液，稀釋后涂布于含l〇〇mg/L 聚丙烯酰胺的基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基上，在溫度為30°C時培養(yǎng)72h，將長出的單菌落在固體培養(yǎng)基 上劃線純化兩次； 步驟四、菌懸液的配制。取上述步驟三純化后的菌落，接種到富集培養(yǎng)基中，在溫度為 30°C，初始pH = 6，攪拌速度為130r/min時培養(yǎng)48h，再取培養(yǎng)液于3000轉(zhuǎn)離心10min，倒出上 清液，用無菌生理鹽水沖洗底部的細菌，采用血球計數(shù)器計數(shù)，最后配制成l〇 9/ml的菌懸 液，4°C冰箱保存?zhèn)溆茫? 步驟五、將上述步驟四保存的菌懸液，按體積百分比1~5%接入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫 度為25~40°C，初始pH=5~7,攪拌速度為100~140r/min時培養(yǎng)5~8d，即可對聚丙烯酰胺 取得較好的降解效果。2. 如權(quán)利要求1所述的一種煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述富集培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基和基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基的配制方法如下： (1) 富集培養(yǎng)基的制備:將下述重量的原料混合而成即可制得富集培養(yǎng)基:NH4CL lg、 K2HPO4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏l(xiāng)g、MnCL2.4H20 0.3g、微量元素 5ml、瓊脂20g、1000ml 去離子水、PH=7; (2) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：將下述重量的原料混合而成即可制得基礎(chǔ)培養(yǎng)基:NH4CL lg、 K2HPO4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏l(xiāng)g、MnCL2.4H20 0.3g、微量元素 5ml、瓊脂20g、0. lg聚丙稀酰胺、1000ml去離子水、PH=7; (3) 基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基的制備：將下述重量的原料混合而成即可制得基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基： NH4CL lg、K2HP〇4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏l(xiāng)g、MnCL2*4H2〇 0.3g、 微量元素5ml、瓊脂20g、0. lg聚丙稀酰胺、1000ml去離子水、瓊脂20g、PH=7。3. 如權(quán)利要求1所述的一種煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述步驟二中的第一階段馴化培養(yǎng)基是由40~80ml富集培養(yǎng)基和10~30ml含聚丙烯酰胺煤 泥水混合而成，第二階段馴化培養(yǎng)基是由100~150ml含聚丙烯酰胺煤泥水和30~50ml富集 培養(yǎng)基混合而成。4. 如權(quán)利要求1所述的一種煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述煤泥水是選煤廠濃縮池經(jīng)絮凝劑聚丙烯酰胺處理后的上清液，含聚丙烯酰胺10~50mg/ L〇
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的生物降解方法，尤其是涉及一種利用馴化后的球紅假單胞菌降解煤泥水中殘留聚丙烯酰胺的方法，其特征在于：包括以下步驟。種子的制備、降解菌的馴化、單菌落的分離、菌懸液的配制、將菌懸液按1～5％的量接種到含聚丙烯酰胺的降解培養(yǎng)基中，在溫度為25～40℃，初始pH＝5～7，攪拌速度為100～140r/min時培養(yǎng)5～8d，即可取得較好的降解效果。采用上述方法馴化的球紅假單胞菌能以聚丙烯酰胺為唯一氮源進行降解，并取得很好的降解效果，同時不會對環(huán)境造成二次污染。
【IPC分類】C12N1/20, C02F103/10, C02F3/34, C12R1/01, C02F101/38, C12N1/36
【公開號】CN105505850
【申請?zhí)枴緾N201610035642
【發(fā)明人】張東晨, 閆佳, 戴雯, 冀敏敏, 常飛, 范曉露, 陳占
【申請人】安徽理工大學
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月19日