，本文使用的所有術(shù)語(yǔ)具有與本公開(kāi)內(nèi)容的領(lǐng)域技術(shù)人員 所知的相同的意義。當(dāng)所述術(shù)語(yǔ)在本說(shuō)明書和權(quán)利要求中被使用以描述所要求保護(hù)的主題 時(shí)，提供以下定義以便對(duì)于所述術(shù)語(yǔ)提供清晰的定義。
[0075]如本文所用，術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)性T細(xì)胞"或"Treg"是指能表達(dá)細(xì)胞表面標(biāo)記⑶4+和⑶25+ 的T細(xì)胞，其表達(dá)FoxP3蛋白，如由蛋白質(zhì)印跡和/或FoxP3mRNA轉(zhuǎn)錄物所測(cè)得的。
[0076]如本文所用，術(shù)語(yǔ)"抗原特異性的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞"或"抗原特異性的Tregs"指的是 Treg細(xì)胞，所述Treg細(xì)胞在抗原的存在下被誘導(dǎo)，并且其表達(dá)細(xì)胞表面標(biāo)記⑶4+和⑶25+， 其表達(dá)FoxP3蛋白，如通過(guò)蛋白質(zhì)印跡和/或FoxP3的mRNA轉(zhuǎn)錄物所測(cè)量的。
[0077]如本文所用的，在肽或多肽序列的上下文中，術(shù)語(yǔ)"衍生自"或"它的衍生物"是指， 肽或多肽并不限于所描述的具體序列，而且還包括在該序列中的變異，其可包括氨基酸添 加，缺失，替換，或修飾，所述氨基酸添加，缺失，替換，或修飾的程度是，所列出的序列中的 變異保持調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的能力。
[0078]如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"肽"或"多肽"是氨基酸連鎖序列（linked sequence)，并 且可以是天然的，重組的，合成的，或天然的，合成的和重組的修飾或組合。
[0079]如本文所用，表達(dá)"有效量"或"治療有效量"是指本公開(kāi)內(nèi)容的化合物有效實(shí)現(xiàn)期 望的治療結(jié)果，例如，如，預(yù)防，改善，或預(yù)防自身免疫性疾病或炎性病癥的量。本公開(kāi)的化 合物可以作為藥物組合物而被施用，所述組合物包含治療有效量的化合物與可藥用的載體 一起的。在本公開(kāi)的上下文中，"治療有效量"應(yīng)理解為，化合物抑制所識(shí)別的HA聚合物的合 成，表達(dá)和/或活性的量，這是要達(dá)到所期望的效果所必需的，在這種特定情況下，所述效果 是治療自身免疫性疾病或障礙，特別是多發(fā)性硬化。一般地，待施用的根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容的化 合物的治療有效量將取決于，除其他因素外，待治療的個(gè)人，個(gè)體患有的疾病的嚴(yán)重程度， 所選擇的劑型，等。出于這個(gè)原因，在本公開(kāi)內(nèi)容中提到的劑量必須被認(rèn)為僅是對(duì)本領(lǐng)域技 術(shù)人員的指導(dǎo)方針，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員必須根據(jù)前面提到的變量調(diào)整劑量。然而，根據(jù)本 公開(kāi)內(nèi)容的化合物可以每天給藥一次或多次，例如，每日1，2,3或4次，采用典型的總?cè)沼?量，其包括0.1微克至1〇,〇〇〇毫克/天，典型地包括100至1500毫克/天。
[0080] 主體可以是人類或非人類動(dòng)物，脊椎動(dòng)物，和典型地是動(dòng)物，其包括但不限于，牛， 豬，馬，雞，貓，狗等。更典型地，主體是哺乳動(dòng)物，且在特定實(shí)施方案中，主體是人。
[0081] 如本文中所使用的，"自身免疫疾病"是一種疾病或障礙，其源自并針對(duì)個(gè)體自身 組織。自身免疫性疾病或障礙的實(shí)例包括，但不限于，多發(fā)性硬化，關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，銀肩病關(guān)節(jié)炎），涉及T細(xì)胞和慢性炎癥應(yīng)答的浸潤(rùn)的病癥，自身 免疫性心肌炎，天皰瘡，I型糖尿?。ㄒ脖环Q為自身免疫性糖尿病或胰島素依賴型糖尿病 (IDDM))，自身免疫性肺疾病，等。
[0082] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"患有自身免疫性糖尿病的哺乳動(dòng)物主體"是指患有自身免疫 性疾病的主體，所述自身免疫性疾病導(dǎo)致高血糖水平，這可能會(huì)導(dǎo)致心臟，眼睛，腎臟，神經(jīng) 和牙齦和牙齒的嚴(yán)重問(wèn)題。自身免疫性糖尿病的癥狀包括，例如，非?？诳剩”泐l繁，感覺(jué) 很肚餓或疲倦，沒(méi)有嘗試的減肥，具有愈合慢的潰瘍，干燥，皮膚瘙癢，在腳部失去感覺(jué)，或 在腳部有麻刺感，和/或視力模糊。
[0083] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"患有多發(fā)性硬化的哺乳動(dòng)物主體"是指患有自身免疫性疾病 的主體，自身免疫性疾病導(dǎo)致對(duì)腦和脊髓或脫髓鞘中神經(jīng)細(xì)胞的絕緣外皮（insulating cover)的損傷。MS的癥狀包括，在一個(gè)或多個(gè)肢體的麻木或乏力，中央視覺(jué)的部分或完全喪 失，通常是在一只眼睛中，在眼球運(yùn)動(dòng)時(shí)常伴有疼痛(視神經(jīng)炎），復(fù)視或視力模糊，身體部 分的麻刺感或疼痛，隨某些頭部動(dòng)作發(fā)生的電擊感覺(jué)，震顫，動(dòng)作不協(xié)調(diào)或步態(tài)不穩(wěn)，言語(yǔ) 不清，乏力，頭暈，和/或熱敏感，等等。
[0084] 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"治療"或"治療"是指施用根據(jù)本發(fā)明的化合物以有效地預(yù)防， 抑制，或消除與MS相關(guān)的至少一種癥狀。預(yù)防與MS相關(guān)聯(lián)的至少一種癥狀涉及在與臨床疾 病相關(guān)的癥狀發(fā)作之前對(duì)主體施用治療。抑制與MS相關(guān)的至少一種癥狀涉及在疾病臨床表 現(xiàn)后對(duì)主體施用治療。
[0085]如上所述，HA是二糖的聚合物，其包括葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖，通過(guò)交替β-l， 4和β-1，3糖苷鍵連接。4-MU用作UGT的競(jìng)爭(zhēng)性底物，UGT是參與HA以及膽汁的合成的酶 (Kakizaki，I，等人，生物化學(xué)雜志(J · Biol. Chem) 279，33281-33289 (2004))。在整個(gè)歐洲和 亞洲4-MU被用于預(yù)防膽結(jié)石。它已在兒童和成年人中被用于超過(guò)30年，并具有優(yōu)異的安全 性。在美國(guó)，它可在沒(méi)有的處方的情況下作為膳食補(bǔ)充劑而被獲得，膳食補(bǔ)充劑主要被銷售 以用于患黃疸的人群。
[0086]圖1A和1B分別描述HA合成的和4-MU干擾的機(jī)制。具體地，圖1A示出的HA合成的正 常方式。已知化合物4-MU結(jié)合葡糖醛酸，以及圖1B示出了4-MU如何結(jié)合葡糖醛酸而不是 UDP。由于4-MU結(jié)合關(guān)鍵的HA前體，產(chǎn)生HA的酶，HA-合酶(HAS)，不能合成HA。
[0087]如下所述，被意外地發(fā)現(xiàn)的是，4-MU具有逆轉(zhuǎn)自身免疫性炎癥的令人驚奇的性質(zhì)。 這一發(fā)現(xiàn)是在自身免疫性糖尿病和MS小鼠模型中被獲得的。4-MU也是HA合成的抑制劑，并 且數(shù)據(jù)表明，這個(gè)屬性，而不是它對(duì)膽道代謝的影響，負(fù)責(zé)4-MU的抗發(fā)炎的特性。這種作用 機(jī)制是與HA作為炎癥介質(zhì)的中心作用一致。
[0088]這里所描述的數(shù)據(jù)顯示，4-MU適用作一種新的，第一類抗炎藥物，其靶向HA合成。 此外，這些數(shù)據(jù)支持，將4-MU用于廢除自身免疫性，變應(yīng)性和特應(yīng)性疾病。因?yàn)?-MU沒(méi)有已 知的毒性，它在治療和預(yù)防自身免疫性疾病中具有巨大的潛力，所述自身免疫性疾病包括 但不限于自身免疫性糖尿病，多發(fā)性硬化，S j5grens病，自身免疫性甲狀腺炎，狼瘡，類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀肩病，結(jié)腸炎，哮喘，變態(tài)反應(yīng)，等。
[0089] 最近的報(bào)道(Bollyky，P.L.，等人（2012)，同上；Hull，R.L。，等人，同上）確定HA在 介導(dǎo)胰島炎和在進(jìn)展為自身免疫性糖尿病中的關(guān)鍵作用。在這些文獻(xiàn)中，表明的是，HA的大 量沉積表征具有自身免疫性糖尿病的小鼠，但不表征采用鏈脲霉素治療的小鼠（Bollyky等 人(2012)，同上），所述鏈脲霉素是對(duì)辟田胞或健康的，非糖尿病小鼠有毒性的治療(Hull等 人，同上）。已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)的是，人類糖尿病同樣與具有胰島炎的胰島中HA沉積物相關(guān)聯(lián)，但 是，這樣的沉積物不在非糖尿病患者中被發(fā)現(xiàn)。圖2A，2B，2C，和2D涉及來(lái)自自身免疫性糖尿 病人類尸體供體胰島的HA染色。圖2A顯示沒(méi)有自身免疫性糖尿病的人類供體的胰島的代表 性HA染色。圖2B表示來(lái)自自身免疫性糖尿病人供體的胰島的代表性HA染色。圖2C顯示來(lái)自 無(wú)自身免疫性糖尿病的人供體的胰島內(nèi)HA積累的代表性更高的放大倍率。圖2D顯示來(lái)自自 身免疫性糖尿病人供體的胰島內(nèi)HA積累的代表性更高的放大倍率。
[0090]為了識(shí)別HA在自身免疫性糖尿病中的作用，確定HA在胰島中的量和分布。此外，表 征了在T1D小鼠模型中伴隨自身免疫胰島破壞的HA變化。發(fā)明者確定了，HA積累在胰島，并 在自身免疫性糖尿病疾病進(jìn)展過(guò)程中為自身免疫發(fā)作提供允許的環(huán)境。
[0091 ]為了確定HA在胰島中積累，并在自身免疫性糖尿病疾病進(jìn)展過(guò)程中為自身免疫發(fā) 作提供允許的環(huán)境，使用自身免疫性糖尿病的DORmO雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型。DORmO小鼠可預(yù)見(jiàn) 地發(fā)展自身免疫性糖尿病，因?yàn)樗鼈兩鷣?lái)就在其產(chǎn)胰島素的辟田胞上具有靶抗原以及特異 性識(shí)別該抗原的免疫系統(tǒng)。DORmO小鼠是由RIP mOVA小鼠（攜帶雞卵卵白蛋白（hen egg ovalbumin) (OVA)特異性基因的菌株，雞卵卵白蛋白僅在辟田胞上表達(dá)，模擬自身抗原），和 D011.10小鼠（攜帶0VA特異性的T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因的菌株，模擬自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞)的雜 交產(chǎn)生的。DORmO小鼠自發(fā)發(fā)展四周齡開(kāi)始的自身免疫胰島炎，并且截止到20周齡，所有動(dòng) 物成為糖尿病動(dòng)物(高血糖>200mg/dl)(韋斯利，JD·，等，免疫學(xué)雜志185,4760-4768(2010) (Wesley，J.D.，等人，J. Immunol .185,4760-4768(2010)(見(jiàn)，例如，下文圖4) c^DORmO小鼠具 有自發(fā)自身免疫，其非常類似于在人類中發(fā)現(xiàn)的炎性細(xì)胞破壞。
[0092]來(lái)自人尸體供體的調(diào)查結(jié)果在DORmO小鼠中得以再現(xiàn)。在這個(gè)模型中，胰島炎被發(fā) 現(xiàn)伴有胰島素的預(yù)期下降，并伴有HA急劇增加。胰島內(nèi)的HA分布主要是圍繞侵入細(xì)胞和微 脈管系統(tǒng)。圖3示出了，自身免疫性糖尿病進(jìn)展過(guò)程中，在三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照和DORmO 小鼠胰島的胰島素和HA染色。最左列顯示了 10,16和36周齡對(duì)照小鼠胰島的代表性胰島素 染色。左數(shù)第二列顯示同齡DORmO小鼠胰島的代表性胰島素染色。從左側(cè)數(shù)第三列顯示了對(duì) 照小鼠胰島的代表性HA染色。最右列顯示也為10,16和36周齡的DORmO小鼠胰島的代表性HA 染色。
[0093]圖4示出了自身免疫性糖尿病的進(jìn)展期間對(duì)照和DORmO小鼠的血糖水平。白條表示 對(duì)照組小鼠和黑條表示DORmO小鼠。標(biāo)有"糖尿病的"的水平實(shí)線表示血糖量，在所述血糖量 小鼠在這個(gè)研究中被認(rèn)為是高血糖的。在2和20周齡之間監(jiān)控小鼠的血糖。
[0094] 綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明，HA的改變伴隨由T細(xì)胞導(dǎo)致的胰島組織的浸潤(rùn)和破壞， 并為自身免疫發(fā)作提供允許的環(huán)境。這些數(shù)據(jù)表明，HA定向療法可用于治療和預(yù)防自身免 疫性糖尿病。
[0095]當(dāng)小鼠具有正常的血糖水平時(shí)，在5周齡使用4-MU開(kāi)始第一DORmO治療組。建立四 (4)個(gè)不同的治療組，采用正常食物的對(duì)照小鼠，采用4-MU的對(duì)照小鼠，采用正常食物的 DORmO小鼠和采用4-MU的DORmO小鼠。也采用4-MU治療一組對(duì)照小鼠以查看4-MU是否改變那 些小鼠的血糖水平。
[0096]圖5示出了來(lái)自對(duì)照和DORmO小鼠的血糖數(shù)據(jù)，采用和不采用在5周齡開(kāi)始的4-MU 治療。標(biāo)有"糖尿病的"的水平實(shí)線表示血糖量，在所述血糖量小鼠被認(rèn)為是高血糖的。參考 圖5，DORmO-4-MU線似乎低于標(biāo)有"糖尿病的"的橫線。因此，采用4-MU的DORmO小鼠被證明不 成為糖尿病小鼠，因?yàn)樗麄兊难撬教幱趯?duì)照水平。另外，被觀察到的是，4-MU不改變的 對(duì)照動(dòng)物的血糖水平
[0097]這個(gè)驚人的發(fā)現(xiàn)后，在8周齡開(kāi)始啟動(dòng)另一個(gè)4-MU治療組，8周齡更接近DORmO小鼠 成為糖尿病小鼠并伴有類似于5周開(kāi)始治療的組的結(jié)果的年齡。圖6示出了來(lái)自對(duì)照和 DORmO小鼠的血糖數(shù)據(jù)，采用或不采用起始于8周齡的4-MU治療。標(biāo)有"糖尿病的"的水平實(shí) 線表示血糖量，在所述血糖量小鼠被認(rèn)為是高血糖的。采用4-MU治療的DORmO小鼠達(dá)23周 齡，仍然有正常的血糖水平。根據(jù)動(dòng)物方案，在患糖尿病后采用對(duì)照食物的DORmO小鼠被處 死。
[0098] 成立另一治療組，其中4-MU治療開(kāi)始在12周齡，在12周齡時(shí)DORmO小鼠已經(jīng)患有糖 尿病。圖7示出了示出了來(lái)自對(duì)照和DORmO小鼠的血糖數(shù)據(jù)，采用起始于12周齡的4-MU治療。 標(biāo)有"糖尿病的"的水平實(shí)線表示血糖量，在所述血糖量小鼠被認(rèn)為是高血糖的。僅在1周治 療后觀察到4-MU治療的DORmO小鼠的血糖水平減少，這說(shuō)明即使已經(jīng)確診的自身免疫性糖 尿病也可通過(guò)4-MU逆轉(zhuǎn)。
[0099] 通過(guò)在8周開(kāi)始治療組的幾個(gè)小鼠中4-MU治療后免疫染色，研究在胰島的HA積累。 圖8示出了對(duì)照和DORmO小鼠胰島的HA免疫染色，采用和不采用4-MU治療。在上列中的圖片 顯示對(duì)照動(dòng)物胰島的HA染色的代表性圖像，采用正常食物治療的在左列，或采用4-MU治療 的在右列。下列顯示針對(duì)HA染色的DORmO胰島的代表性圖像，其中采用對(duì)照食物治療的動(dòng)物 在左列，或采用4-MU治療的動(dòng)物在右列。與采用對(duì)照食物治療的DORmO小鼠形成對(duì)比，采用 4-MU治療的DORmO小鼠中發(fā)現(xiàn)HA-積累的顯著減少。圖9示出了在不同的治療組之間的胰島 的HA染色評(píng)價(jià)。*〈0.05