一種油菜花粉酶解肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及油菜花粉酶解肽提取技術(shù)，具體地說，涉及一種油菜花粉酶解肽的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]油菜，又叫油白菜，苦菜，拉丁文名:Brassica campestris L.十字花科、蕓薹屬植物，原產(chǎn)我國，其莖顏色深綠，幫如白菜，屬十字花科白菜變種，花朵為黃色。農(nóng)藝學(xué)上將植物中種子含油的多個物種統(tǒng)稱油菜。目前油菜主要栽培(品種)類型為:白菜型油菜(Brassica rapa (campestris) L.)，芥菜型油菜(Brassica juncea L.)，甘藍(lán)型油菜(Brassica napus L.)。油菜花粉含有豐富的功能性物質(zhì)(包括蛋白質(zhì)、維生素、微量元素、黃酮類化合物)，這些物質(zhì)協(xié)同作用于機(jī)體，調(diào)節(jié)機(jī)體的多種功能，平衡體內(nèi)營養(yǎng)，增強(qiáng)新陳代謝，防止毛細(xì)血管通透性的障礙?；ǚ圻€能促進(jìn)內(nèi)分泌腺的發(fā)育，有提高和調(diào)節(jié)內(nèi)分泌腺分泌功能，因此對由內(nèi)分泌功能紊亂引起的疾病起到了治療作用。油菜花粉益腎、固本、強(qiáng)腰，而且含黃酮醇較高，具有抗動脈粥樣硬化、治療靜脈曲張性潰瘍、降低膽固醇和抗輻射的作用。增強(qiáng)人體綜合免疫功能:花粉多糖能激活巨噬細(xì)胞的吞噬活動，提高人體抗病能力。防衰老、美容作用:蜂花粉屬營養(yǎng)性的美容化妝品，花粉中的VE、超氧化歧化酶(S0D)、砸等成分能滋潤營養(yǎng)肌膚，恢復(fù)皮膚的彈性和光潔?；ǚ壑械募〈伎墒拱装l(fā)變黑，脫發(fā)漸生，保持頭發(fā)烏黑亮麗。防治腦心血管疾病:花粉中的黃酮類化合物能有效清除血管壁上脂肪的沉積，從而起軟化血管和降血脂的作用。防治前列腺疾病:花粉是前列腺炎的克星，以油菜花粉、蕎麥花粉效果最佳。減肥:服用蜂花粉可以吸收足夠的營養(yǎng)，造成飽食感。同時，花粉中的卵磷脂可燃燒過剩的脂肪，達(dá)到減肥的目的。調(diào)節(jié)腸胃功能:花粉有許多殺菌成分，能殺滅大腸桿菌等，并能防治便秘。保肝護(hù)肝:花粉中的黃酮類化合物同樣可防止脂肪在肝上的沉積。調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)，促進(jìn)睡眠。輔助治療其他疾病:花粉對貧血、糖尿病、改善記憶力、更年期障礙等有較好效果。
[0003]《中國藥典》2005版中缺乏對油菜花粉酶解肽類成分的提取辦法的記載，而文獻(xiàn)報道提取油菜花粉酶解肽方法則豐要為醇提法和水提法。
[0004]《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2007油菜花粉谷蛋白酶解肽的制備及其抗腫瘤活性研究，《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2007油菜蜂花粉中活性肽的制備及其抗氧化性的研究論文中，優(yōu)選出60°C下，50%乙醇提取三次，每次2h的提取工藝。雖然其提取溫度比較低，但是提取時間長，一共需要提取6個小時，能耗大，提取效率低。
[0005]《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2007油菜花粉谷蛋白酶解肽的制備及其抗腫瘤活性研究，《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2007油菜蜂花粉中活性肽的制備及其抗氧化性的研究中，優(yōu)選出了一種醇提方法，是用5-10目藥材，加10倍量80%乙醇，回流提取3次，每次lh。同樣顯示出是提取次數(shù)多，時間長的缺點，一共需要提取3個小時。
[0006]綜合上述文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)所用方法提取基本完全，但同時存在消耗溶劑多，提取次數(shù)多，純度不高，活性不穩(wěn)定，污染嚴(yán)重的缺點，為了更能節(jié)省溶劑和能源的消耗，減少環(huán)境污染，節(jié)約原材料，有必要改進(jìn)油菜花粉酶解肽的提取及制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種節(jié)約原材料、提取效率高、純度高、消耗溶劑少、無污染的油菜花粉酶解肽的制備方法。
[0008]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種油菜花粉酶解肽的制備方法，包括如下步驟:將油菜花粉原料取洗干凈油菜花粉，采用超微粉碎法破壁，置于植物提取罐中，加入乙醇濃度為60%，藥材與溶劑的重量體積比為1:15，提取溫度65°C，提取時問120min，提取液經(jīng)過抽濾或離心，清液進(jìn)行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，加入乙醇進(jìn)行制備色譜分離，得到油菜花粉酶解肽。
[0009]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，所述醇溶液優(yōu)選為甲醇或乙醇溶液。
[0010]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，所述乙醇溶液體積濃度優(yōu)選為65%-75%。
[0011]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，所用油菜花粉原料粗粉粒度優(yōu)選為超微粉碎法破壁。分解提取效率高，溫度低，所以有必要對油菜花粉進(jìn)行超微粉碎法破壁，增加油菜花粉與溶劑接觸的面積，提高油菜花粉酶解肽的提取率。
[0012]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，油菜花粉與溶劑的重量體積比優(yōu)選為I:15-1:20。
[0013]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，超微粉碎法破壁。
[0014]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，溫度優(yōu)選為60-70°C。
[0015]在上述油菜花粉酶解肽的制備方法中，提取時間優(yōu)選為120-150min。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
1.該發(fā)明在提取過程中，利用超微粉碎法破壁的分解效應(yīng)、機(jī)械效應(yīng)及熱效應(yīng)等增強(qiáng)溶劑對油菜花粉的穿透力，有助于油菜花粉中有效成分的溶出，從而提高有效成分的提取率，節(jié)約原材料，降低提取溫度，降低能耗，提高提取效率，減少對環(huán)境污染。
[0017]2.該發(fā)明的制備工藝中溶劑用量少，既節(jié)約溶劑又節(jié)約能源，降低生產(chǎn)成本，對環(huán)境零污染。
[0018]由于油菜花粉微波技術(shù)提取油菜花粉酶解肽在《中國藥典》2005舨中缺乏含量測定項，所以參考文獻(xiàn)報道，油菜花粉酶解肽主要肽元，并結(jié)合實驗驗證，確定油菜花粉酶解肽的質(zhì)量指標(biāo)以薯蕷肽元為對照品，采用的測定方法為分光光度法。具體方法為:取2g花粉的提取液，濃縮至干，1ml水溶解，用水飽和正丁醇萃取4次，洗滌萃取液，合并正丁醇液，濃縮至干用甲醇定容至1ml。取甲醇液0.5ml，水浴揮干，加高氯酸1ml，65°C水浴15min，冰水冷卻終止反應(yīng)，制得樣品液。以高氯酸(分析純)為空白，在409nm下測定吸光度。
[0019]本發(fā)明所說的油菜花粉酶解肽得率=(總酶解肽重量/投入的花粉重量)X100%
油菜花粉酶解肽提取率=(油菜花粉酶解肽提取物中的總酶解肽含量X酶解肽重量/投入的油菜花粉酶解肽含量X投入的花粉重量)X 100%
下面通過具體實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案。
【具體實施方式】
[0020]以下實施例所用的油菜花粉酶解肽含量為3.06%0。
[0021]如下乙醇百分比均為體積百分比。
[0022]實施例1提取工藝條件的選擇
(I)超微粉碎法破壁分解的時間對油菜花粉酶解肽提取效果的影響實驗方法:取油菜花粉500g納米級超微粉碎法破壁，置于植物提取罐中，加入60%乙醇作為提取溶劑，花粉與溶劑的重量體積比為1:15，提取溫度65°C，選擇不同的分解時間提取一次，分解提取后的提取液經(jīng)過抽濾或離心，清液進(jìn)行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得油菜花粉提取物?？疾觳煌崛r間下油菜花粉酶解肽的提取效果。結(jié)果如表I所示:
表I
時間提取率(％)
10h24.2
14h30.1
18h45.6
20h73.5
24h90.3
實驗結(jié)果顯示延長分解時間能增加酶解肽的提取率，24h時含量就已經(jīng)達(dá)到最高。所以選取24h作為最佳提取時間。
[0023](2)提取溫度對油菜花粉酶解肽提取效果的影響
實驗方法:取500g油菜花粉原料超微粉碎法破壁粉末，置于植物提取罐中，分解，加入60%乙醇作為提取溶劑，油菜花粉與溶劑的重量體積比為1:15，選擇不同的提取溫度提取一次，超聲提取后的提取液經(jīng)過抽濾或離心，清液進(jìn)行濃縮，二氯甲烷萃取制備后得稠膏，干燥，即得油菜花粉提取物?？疾觳煌崛r間下油菜花粉酶解肽的提取效果。結(jié)果如表2所示:
表2
溫度提取率(％)
20°C58.5
30°C60.9