一種腔腸素類似物及其制備方法與應(yīng)用【專利摘要】本發(fā)明公開了一種腔腸素類似物及其制備方法與應(yīng)用，具有結(jié)構(gòu)通式(I)，式中，R1，R2，R3均為不同的取代基。該類化合物作為生物發(fā)光底物的應(yīng)用，能利用生物發(fā)光檢測(cè)腔腸素螢光素酶的存在和數(shù)量(包括酶水平、細(xì)胞水平和動(dòng)物水平)，檢測(cè)螢光素酶在體外，細(xì)胞和體內(nèi)分布成像的應(yīng)用；能夠在螢光素酶的存在下作為報(bào)告信號(hào)檢測(cè)藥物在酶水平、細(xì)胞水平、動(dòng)物水平的藥理作用和毒性作用?！緦＠f明】一種腔腸素類似物及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明屬于藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一類腔腸素類似物及其制備方法與應(yīng)用?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]生物發(fā)光(bioluminescence)廣泛存在于自然界，是指生物體內(nèi)，基于生命活動(dòng)的化學(xué)反應(yīng)將化學(xué)能轉(zhuǎn)換成光能的發(fā)光現(xiàn)象。生物體提取物在體外構(gòu)建模型中亦會(huì)有發(fā)光的現(xiàn)象。它不依賴于有機(jī)體對(duì)光的吸收，而是一種特殊類型的化學(xué)發(fā)光，化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿男蕩缀鯙?00%。不同的生物發(fā)光系統(tǒng)的螢光素和螢光素酶也有所不同，但是其生物發(fā)光的機(jī)理大致相同：螢光素經(jīng)螢光素酶催化氧化，生成處于激發(fā)態(tài)的電子中間體，電子由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)釋放出光子，將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽?。[0003]生物發(fā)光成像(Bioluminescentimaging，BLI)是通過靈敏的光學(xué)檢測(cè)儀器監(jiān)控螢光素酶標(biāo)記的細(xì)胞或基因在活體生物內(nèi)的活動(dòng)和行為過程的一種新興的成像技術(shù)。生物發(fā)光成像技術(shù)已經(jīng)逐步地應(yīng)用到微生物學(xué)、生物化學(xué)、環(huán)境科學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等多個(gè)學(xué)科和領(lǐng)域，成為了一種重要的成像手段。該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、能夠?qū)崿F(xiàn)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀測(cè)以及非侵襲性等優(yōu)點(diǎn)。生物發(fā)光技術(shù)尤其在腫瘤生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)和轉(zhuǎn)移示蹤、目標(biāo)基因表達(dá)的檢測(cè)、蛋白-蛋白相互作用、藥物高通量篩選、細(xì)胞內(nèi)ATP水平探測(cè)和研究細(xì)菌病毒感染宿主過程等領(lǐng)域有著顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。隨著對(duì)生物發(fā)光研究的不斷深入，越來(lái)越多的螢光素酶被分離提純，其編碼基因也被克隆表達(dá)，如螢火蟲螢光素酶、叩頭蟲螢光素酶、海腎螢光素酶、腰鞭毛蟲螢光素酶和細(xì)菌螢光素酶等，一部分相關(guān)的螢光素或活性物質(zhì)也完成了分子結(jié)構(gòu)。但是只有部分生物發(fā)光體系適用于作為成像研究的工具。[O.Shimomura，Bioluminescence:ChemicalPrinciplesandMethods,WorldScientificPublishingCo.Pte.Ltd,2006.][0004]腔腸素（coelenterazine)及以其作為底物的螢光素酶組成的體系是一類常見的生物發(fā)光系統(tǒng)。研究最為透徹的是來(lái)源于海腎的螢光素酶(Renillaluciferase)系統(tǒng)。螢光素酶在分子氧存在的條件下，氧化底物腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間物質(zhì)，并且在此過程中釋放〇〇2和發(fā)射藍(lán)色光[0.?11，11.如1^11111^，厶.]\111^；[，0.311；[11101111^，016111；[-&11(1bioluminescenceofcoelenterazineanalogueswithaconjugatedgroupattheC_8position，TetrahedronLetters,42(2001)2997_3000?]，海腎螢光素酶氧化腔腸素發(fā)射的最大波長(zhǎng)為480nm。腔腸素及其螢光素酶體系成分簡(jiǎn)單，并且腔腸素的疏水性使其容易通過細(xì)胞膜。因而，腔腸素/螢光素酶體系在細(xì)胞水平和體內(nèi)的生物發(fā)光成像研究中具有一定的優(yōu)勢(shì)。除了天然腔腸素可以作為螢光素酶的底物之外，一些具有不同光譜學(xué)性質(zhì)、穩(wěn)定性等特征的腔腸素衍生物已經(jīng)上市，例如腔腸素h(coelenterazineh)、腔腸素400a(coelenterazine400a)，腔腸素f(coelenterazinef)，腔腸素cp(coelenterazinecp)，腔月易素fcp(coelenterazinefcp)，腔月易素hcp(coelenterazinehcp)，腔月易素ip(coelenterazineip)等。[0005]研究證實(shí)，腔腸素及其衍生物的3'位置是生物發(fā)光酶促反應(yīng)中的關(guān)鍵位點(diǎn)，同時(shí)也是自身降解的關(guān)鍵位置。腔腸素自身降解導(dǎo)致其穩(wěn)定性較差。因而如果在腔腸素及其衍生物的3'位置引入修飾集團(tuán)，使得該分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性提高，而修飾集團(tuán)在特定條件下可自動(dòng)降解從而釋放出腔腸素，這不失為一種腔腸素類底物改造的策略。而這一策略已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[￡丄；[11此6^，3.]\^2111^111；[，1(.]^&七&，八.]\^5^￥&1<：；[，1(.1(1101(311；[，DevelopmentofLuminescentCoelenterazineDerivativesActivatableby0-GalactosidaseforMonitoringDualGeneExpression，Chemistry-AEuropeanJournal，19(2013)14970-14976.]。[0006]總之，對(duì)腔腸素結(jié)構(gòu)的改造可能會(huì)使其生物發(fā)光性質(zhì)受到影響。通過結(jié)構(gòu)改造，人們希望得到諸如生物發(fā)光波長(zhǎng)紅移、強(qiáng)度增強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間增長(zhǎng)、穩(wěn)定性提高等特性的新型腔腸素類似物。腔腸素及其螢光素酶體系作為一組有前景的可視化生物成像系統(tǒng)，對(duì)于各類探針基于酶水平、細(xì)胞水平、動(dòng)物水平的成像具有重大意義。腔腸素類似物以及具有新骨架的螢光素酶底物的發(fā)現(xiàn)能夠拓展此類生物發(fā)光體系在成像領(lǐng)域的應(yīng)用，推動(dòng)基礎(chǔ)生命活動(dòng)過程的探索和揭示?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0007]針對(duì)以上問題，本發(fā)明在腔腸素400a(DeepBlueC)的基礎(chǔ)上，對(duì)其2位、6位、8位、3位的取代基進(jìn)行改造，得到生物發(fā)光強(qiáng)度提高或持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)或生物發(fā)光波長(zhǎng)紅移或穩(wěn)定性提高的腔腸素類似物。此類化合物可以作為腔腸素生物發(fā)光體系中的底物。其合成方法簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)適用，對(duì)于生物發(fā)光在體內(nèi)的應(yīng)用有著較大的推進(jìn)作用。[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：[0009]本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供一種腔腸素類似物，該類似物具有通式(I)的結(jié)構(gòu)：[0011]式中，Ri為氛基，羥基;R2為4_氣苯基，3_氣_4_氛基苯基，4_輕甲基苯基，4_臆基苯基，5-甲基呋喃基，呋喃基-3，萘基，苯并呋喃基-2，呋喃基-2，噻吩基-2，或者此時(shí)R4為氛，4_氣，3_氣，2_氣，3_甲基，3_羥基;或者此時(shí)R5為1-羥基乙基，1_羥基丙基，1-氟-乙基;R3為芐基，1-苯基乙烯基。[0012]上述的具有通式(I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物，包括下述的化合物，其名稱如下：[0013]2-(苯基甲基)-6-(4-氟苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(B1)，[0014]2-(苯基甲基)-6-(3_氟-4-氨基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B2)[0015]2-(苯基甲基)-6-(4_羥甲基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B3)[0016]2-(苯基甲基)-6-(4-腈基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(B4)[0017]2-(苯基甲基)-6-(5_甲基呋喃基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B5)[0018]2-(苯基甲基)-6-(呋喃基-3)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B6)[0019]2-(苯基甲基)-6-(3_乙氧基羰基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B7)[0020]2-(苯基甲基)-6-(苯并呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B8)[0021]2-(苯基甲基)-6-(呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B9)[0022]2-(苯基甲基)-6-(萘基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B10)[0023]2-(苯基甲基)-6-(噻吩基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B11)[0024]2-(4_羥基-苯基甲基）-6-(4_氟苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B12),[0025]2_(4_羥基-苯基甲基)-6_(3_氟-4-氨基苯基）_8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(B13)[0026]2-(4_羥基-苯基甲基)-6-(4_羥甲基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B14)[0027]2_(4_羥基-苯基甲基)-6_(4_腈基苯基)_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B15)[0028]2-(4_羥基-苯基甲基)-6-(5_甲基呋喃基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B16)[0029]2-(4_羥基-苯基甲基）-6-(呋喃基-3)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B17)[0030]2-(4_羥基-苯基甲基）-6-(呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B18)[0031]2-(4_羥基-苯基甲基）-6-(噻吩基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B19)[0032]2_(苯基甲基)-6_(4_氟苯基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B20)，[0033]2_(苯基甲基)-6_(3_氟-4-氨基苯基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3_(7H)_酮(B21)[0034]2_(苯基甲基）-6_(4_羥甲基苯基)-8-(1_苯基乙烯基）_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(B22)[0035]2_(苯基甲基）-6_(4_腈基苯基苯基乙烯基）_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(B23)[0036]2_(苯基甲基）-6_(5_甲基呋喃基)-8-(1_苯基乙烯基）_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮（B24)[0037]2-(苯基甲基)-6-(4_甲氧基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B25)[0038]2_(苯基甲基）-6_(呋喃基-3)-8-(1_苯基乙烯基）_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B26)[0039]2_(苯基甲基)-6_(呋喃基-2)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B27)[0040]2-(苯基甲基)-6-(苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(Al)[0041]2-(苯基甲基)-6-(4_氟-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A2)[0042]2-(苯基甲基)-6-(3_氟-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A3)[0043]2-(苯基甲基)-6-(2_氟-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A4)[0044]2_(苯基甲基）-6_(3_甲基-苯基炔基)_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A5)[0045]2_(苯基甲基）-6_(3_羥基-苯基炔基)_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A6)[0046]2_(苯基甲基)-6_(苯基炔基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A7)[0047]2_(苯基甲基)-6_(4_氟-苯基炔基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-_(A8)[0048]2_(苯基甲基)-6-(3_氟-苯基炔基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-_(A9)[0049]2_(苯基甲基)-6-(2_氟-苯基炔基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A10)[0050]2-(苯基甲基)-6-(3-甲基-苯基炔基)-8-(1-苯基乙烯基)-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3_(7H)_酮(All)[0051]2_(苯基甲基)-6-(3_羥基-苯基炔基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3_(7H)_酮(A12)[0052]2_(4_羥基-苯基甲基)-6_(苯基炔基)_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A13)[0053]2_(4_羥基-苯基甲基）-6_(4_氟-苯基炔基）_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A14)[0054]2_(4_羥基-苯基甲基）-6_(3_氟-苯基炔基）_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A15)[0055]2_(4_羥基-苯基甲基）-6_(2_氟-苯基炔基）_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A16)[0056]2_(4_羥基-苯基甲基）-6_(3_甲基-苯基炔基）_8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A17)[0057]2_(4-羥基-苯基甲基）_6_(3-羥基-苯基炔基）-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(A18)[0058]2_(苯基甲基)-6_[(1-羥基乙基）_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3_(7H)_酮(T1)[0059]2_(苯基甲基)-6_[(1-羥基丙基)_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3_(7H)_酮(T2)[0060]2_(苯基甲基)-6-[(1_氟-乙基)_1，2,3_三氮唑]-8-芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-_(T3)[0061]2-(苯基甲基)-6-[(l-羥基乙基)-1，2,3_三氮唑]-8-(l-苯基乙烯基)-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T4)[0062]2_(苯基甲基)-6-[(1_羥基丙基)_1，2,3_三氮唑]-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T5)[0063]2_(苯基甲基)-6-[(1_氟-乙基）_1，2,3_三氮唑]-8-(1_苯基乙烯基）_咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T6)[0064]本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供具有通式（I)結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物的制備方法，當(dāng)式(I)的化合物中Ri為氫基，羥基;R2為4-氟苯基，3-氟-4-氨基苯基，4-羥甲基苯基，4-腈基苯基，5-甲基呋喃基，呋喃基-3,萘基，苯并呋喃基-2,呋喃基-2,噻吩基-2,或R3為芐基，1-苯基乙烯基時(shí)：[0065]該腔腸類似物的制備方法包括以下步驟：[0066](丨）中間體2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或者2-氨基-5-X-3_(l-苯基乙烯基)_吡嗪的制備[0067]首先將鋅粉、碘和芐基鹵素或者對(duì)羥基芐基鹵素混合反應(yīng)，然后將2-氨基_3,5二X吡嗪加入上述反應(yīng)液中得到2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪;或者將2-氨基-3，5二X-吡嗪與鈀催化劑混合，然后加入1-苯基乙烯基硼酸混合反應(yīng)，得到2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)_吡嗪；[0068](2)中間體2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物或2-氨基-3-(1_苯基乙烯基)_吡嗪類化合物的制備[0069]將步驟（1)中的2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪與硼酸類化合物或苯乙炔類化合物混合反應(yīng)得到中間體2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物或2-氨基-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物；[0070](3)中間體3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮或者3-(4-羥基苯基)_1，1-二乙氧基丙酮的制備[0071]將二乙氧基乙酸乙酯與芐基氯化鎂或芐基溴化鎂混合反應(yīng)制備得到中間體3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮;或者將二乙氧基乙酸乙酯與4-(叔丁基二甲基硅氧基）芐基氯化鎂或4_(叔丁基二甲基硅氧基）芐基溴化鎂混合反應(yīng)然后再與四丁基氟化銨混合反應(yīng)制備得到中間體3-(4_羥基苯基)-1，1_二乙氧基丙酮；[0072](4)具有通式(I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物的制備[0073]將步驟(2)中的中間體2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物或者2-氨基-5-X-3_(l-苯基乙烯基)_吡嗪與步驟(3)中的中間體3-苯基-1，1_二乙氧基丙酮或3_(4_羥基苯基)_1，1-二乙氧基丙酮混合反應(yīng)，得到具有通式(I)結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物;其中X表示鹵素。[0074]步驟（1)中，所述中間體2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪的結(jié)構(gòu)通式（II)或者2-氨基-5-X-3-苯基乙烯基-吡嘆（III)如下所;:[0076]所述芐基鹵素或?qū)αu基芐基鹵素的結(jié)構(gòu)通式為式如(IV)所示：[0078]式中，X為鹵素，優(yōu)選為溴芐和氯芐；[0079]當(dāng)所述中間體2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪的結(jié)構(gòu)通式為(II)時(shí)；[0080]優(yōu)選的，2-氨基-3，5二X吡嗪包括2-氨基-3，5二溴吡嗪和2-氨基-3，5二氯吡嗪。[0081]優(yōu)選的，所述鋅粉、芐基鹵素或者對(duì)羥基芐基鹵素和2-氨基_3,5二X吡嗪的摩爾比例為(1~2):(1~2):1。[0082]步驟（1)具體的方法為:在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將鋅粉和碘粒混合，加入DMF，室溫?cái)嚢柚敝恋獾念伾?，然后加入芐基鹵素或?qū)αu基芐基鹵素，在70~85°C反應(yīng)2~4小時(shí)，冷卻至室溫，加入2-氨基-3，5二X吡嗪和三苯基磷二氯化鈀，室溫反應(yīng)22~26小時(shí)。[0083]或者，當(dāng)所述中間體2-氨基-5-X-3-苯基乙烯基-吡嗪的結(jié)構(gòu)通式為（III)時(shí)；[0084]優(yōu)選的，2-氨基-3，5二X吡嗪包括2-氨基-3，5二溴吡嗪和2-氨基-3，5二氯吡嗪。[0085]優(yōu)選的，所述2-氨基-3,5二X-吡嗪與1-苯基乙烯基硼酸的摩爾比例為1:(1~2)。[0086]步驟（1)具體的方法為:將2-氨基-3，5二X吡嗪，（C6H5CN)2PdCl2溶于甲苯中，然后加入1-苯基乙烯基硼酸的甲苯溶液，加入K2C〇3溶液，100~115°C反應(yīng)7~9h。[0087]步驟(2)中，所述2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物或2-氨基-3-(1_苯基乙烯基)-吡P奉#化合物的結(jié)構(gòu)誦式如（V)所示：[0089]式中，辦為4-氟苯基，3-氟-4-氨基苯基，4-羥甲基苯基，4-腈基苯基，5-甲基呋喃基，呋喃基-3，萘基，苯并呋喃基-2,呋喃基-2,噻吩基-2,或者R3為芐基，I.1-苯基乙烯基。[0090]所述硼酸類化合物的結(jié)構(gòu)通式如(VI)或(W)所示：[0092]式中，辦為4-氟苯基，3-氟-4-氨基苯基，4-羥甲基苯基，4-腈基苯基，5-甲基呋喃基，呋喃基-3，萘基，苯并呋喃基-2，呋喃基-2，噻吩基-2。[0093]優(yōu)選的，所述2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或2-氨基-3-(1_苯基乙烯基)_吡嗪類化合物與硼酸類化合物的摩爾比例為1:(1~4)。進(jìn)一步優(yōu)選的，所述2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或2-氨基-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物與硼酸類化合物的摩爾比例1:(1:2);所述2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或者2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪與苯乙炔類化合物的摩爾比例為1:(2~4)。[0094]步驟（2)的具體方法為：在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將2-氨基-5-X-3-芐基-吡嗪或2-氨基-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物，Pd(dppb)Cl2，（C6H5CN)2PdCl2溶于甲苯中，然后加入硼酸類化合物的甲苯溶液，加入K2C03溶液，100~115°C反應(yīng)7~9h。[0095]當(dāng)R2為時(shí)，式中，R4為氛，4_氣，3_氣，2_氣，3_甲基，3_羥基。[0096]此時(shí)2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物或2-氨基-3-(1_苯基乙烯基)_吡嗪類化合物的結(jié)構(gòu)通式(V)的具體形式為：[0098]所述苯乙炔類化合物的結(jié)構(gòu)通式如(VIII)所示：[0100]步驟(2)的具體方法為:將2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或者2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪、三苯基膦二氯化粑、碘化亞銅、三苯基膦溶于甲苯中，然后加入苯乙炔類化合物和三乙胺，30~50°C反應(yīng)5~7小時(shí)。[0101]步驟(3)中，優(yōu)選的，所述二乙氧基乙酸乙酯與芐基氯化鎂或芐基溴化鎂的摩爾比例為1:(1~2)。[0102]步驟(3)的具體方法為:在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，二乙氧基乙酸乙酯溶于四氫呋喃中，待溫度降至-70~_85°C時(shí)，加入芐基氯化鎂，-70~-85°C反應(yīng)2~4小時(shí)。[0103]步驟(4)中，優(yōu)選的，所述2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物與3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮的摩爾比例為1:(1~2)。[0104]步驟(4)的具體方法為:在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2-氨基-3苯基甲基-吡嗪類化合物和3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮溶解于乙醇中，70~90°C反應(yīng)8~10小時(shí)。[0105]當(dāng)R2為時(shí)，式中，fo為1-羥基乙基，1-羥基丙基，1-氟-乙基。此時(shí)具有結(jié)構(gòu)通式(I)的化合物制備方法步驟如下：[0106](D中間體2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或者2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪的制備，與前述相同。[0107](2)中間體2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3_芐基-吡嗪或2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3-(1_苯基乙烯基)-吡嗪的制備[0108]將步驟（1)中的2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪與三甲基硅基乙炔混合反應(yīng)得到2-氨基_5_(三甲基硅基炔基）-3_芐基-吡嗪或2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3-(1-苯基乙烯基)-吡嗪；[0109](3)中間體2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪或2-氨基-5-炔基-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪的制備[0110]將步驟(2)中的2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3_芐基-吡嗪或2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3-(1_苯基乙烯基)_吡嗪與碳酸鉀混合反應(yīng)，得到2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪或2-氨基-5-炔基-3-(1-苯基乙烯基)-吡嗪；[0111](4)中間體1-疊氮基烷烴化合物的制備[0112]將鹵化物和疊氮化鹽(優(yōu)選疊氮化鈉或疊氮化鉀)混合反應(yīng)得到1-疊氮基烷烴化合物；[0113](5)中間體2-氨基-6-[1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-三氮唑-3-(1-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物的制備[0114]將步驟(3)中的2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪或2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3_(1-苯基乙烯基)-吡嗪與步驟(4)中的1一疊氮基烷烴化合物混合反應(yīng)制備得到2-氨基-6_[1，2，3]-三氮唑-3-芐基-吡嗪類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-三氮唑-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物；[0115](6)中間體3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮或者3-(4_羥基苯基)-1，1_二乙氧基丙酮的制備，與前述相同。[0116](7)具有通式(I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物的制備[0117]將步驟(5)中的2-氨基-6-[1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪類化合物或2-氨基-6-[1，2,3]_三氮唑-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物與步驟(6)中的3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮或者3_(4_羥基苯基)-1，1_二乙氧基丙酮混合反應(yīng)，制備得到具有通式（I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物。[0118]步驟(2)中，2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪與三甲基硅基乙炔的摩爾比例為1:(2~4)。[0119]步驟（2)的具體方法為：在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2-氨基-5-X-3-苯基甲基-吡嗪或2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪、三苯基膦二氯化鈀、碘化亞銅、三苯基膦溶于甲苯中，然后加入三甲基硅基乙炔和三乙胺，30~50°C反應(yīng)8~10小時(shí)。[0120]步驟(3)中，所述2-氨基-5_(三甲基硅基炔基)-3_芐基-吡嗪與碳酸鉀的摩爾比例為(1~2):1。[0121]步驟(3)的具體方法為:將2-氨基-5-三甲基硅基炔基-3-芐基-吡嗪或2-氨基-5-(三甲基硅基炔基)-3-(1_苯基乙烯基)-吡嗪和碳酸鉀溶于甲醇中，室溫反應(yīng)1~3小時(shí)。[0122]步驟(4)中，所述1-疊氮基烷烴化合物的結(jié)構(gòu)通式如（IX)所示：[0124]式中，R5為1-羥基乙基，1-羥基丙基，1-氣-乙基。[0125]所述鹵化物的結(jié)構(gòu)通式如（X)所示：[0127]式中，抱為1_羥基乙基，1-羥基丙基，1-氟-乙基;X為鹵素。[0128]優(yōu)選的，所述鹵化物和疊氮化鹽的摩爾比例為1:(1~3)。[0129]步驟(5)中，所述結(jié)構(gòu)通式(V)的具體形式為2-氨基-6-[1，2,3_三氮唑]-3-芐基_吡嗪類化合物，如下所示：[0131]式中，R3為氫基，羥基;抱為1_羥基乙基，1-羥基丙基，1-氟-乙基。[0132]優(yōu)選的，所述2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪或2-氨基_5_(三甲基硅基炔基)-3-(1_苯基乙烯基)_吡嗪與1-疊氮基烷烴化合物的摩爾比例為1:(1~2)。[0133]步驟(5)的具體方法為:在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將2-氨基-6-炔基-8-芐基-吡嗪或2-氨基-5-(三甲基硅基炔基)-3-(1_苯基乙烯基)-吡嗪、1-疊氮基烷烴化合物、五水硫酸銅、抗壞血酸鈉溶于四氫呋喃和水混合溶液中，然后加入三乙胺，室溫反應(yīng)7~9小時(shí)。[0134]步驟(7)中，所述2-氨基-6-[l，2,3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-三氮唑-3-(1-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物與3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮的摩爾比例為1:(1~3)。[0135]步驟(7)的具體方法為:在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將2-氨基_6_[1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-三氮唑-3-(1-苯基乙烯基)-吡嗪類化合物和3-苯基-1，1-二乙氧基-丙酮溶于乙醇中，70~90°C反應(yīng)7~9小時(shí)。[0136]本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供所述腔腸素類似物的應(yīng)用，具體如下：[0137](1)本發(fā)明的化合物作為生物發(fā)光的底物應(yīng)用。[0138](2)本發(fā)明的化合物能利用生物發(fā)光檢測(cè)螢光素酶的存在和數(shù)量(包括酶水平、細(xì)胞水平和動(dòng)物水平），檢測(cè)螢光素酶在體外，細(xì)胞和體內(nèi)分布成像的應(yīng)用，其中螢光素酶的種類包括海腎螢光素酶0^]1；[113111(^€6抑86)、63118813螢光素酶、(^1(^1101'118螢光素酶和Aequorea螢光素酶。[0139](3)本發(fā)明的化合物在Aequorealuciferase存在條件下，用于檢測(cè)Ca2+的存在和數(shù)量以及檢測(cè)Ca2+在體外、細(xì)胞和體內(nèi)分布成像的用途。[0140](4)本發(fā)明的化合物能夠在螢光素酶的存在下作為報(bào)告信號(hào)檢測(cè)藥物在酶水平、細(xì)胞水平、動(dòng)物水平的藥理作用和毒性作用。[0141](5)本發(fā)明的化合物具有化學(xué)發(fā)光的性質(zhì)，也可應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光領(lǐng)域。[0142]本發(fā)明的有益效果：1.本發(fā)明的化合物均是腔腸素的類似物，擴(kuò)大了腔腸素衍生物的范圍，增加了腔腸素類似物的種類。2.本發(fā)明的部分化合物與現(xiàn)行通用的腔腸素類底物相比，在相同環(huán)境下具有發(fā)光強(qiáng)度更強(qiáng)或發(fā)光持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)或波長(zhǎng)紅移等特點(diǎn)。3.本發(fā)明的部分化合物與現(xiàn)行通用的腔腸素類底物相比，化合物溶液對(duì)螢光素酶具有較低的檢測(cè)限，在作為探針應(yīng)用時(shí)擁有較高的靈敏性。4.本發(fā)明的部分化合物與腔腸素與現(xiàn)行通用的腔腸素類底物相比，穩(wěn)定性有所提高?？蛇m用于研究細(xì)胞水平的生命活動(dòng)或體內(nèi)藥物代謝實(shí)時(shí)檢測(cè)。5.本發(fā)明的化合物的合成方法簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)適用，對(duì)于生物發(fā)光在體內(nèi)的應(yīng)用有著較大的推進(jìn)作用?！揪唧w實(shí)施方式】[0143]下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。[0145]反應(yīng)1:反應(yīng)試劑與條件：（a)鋅粉，碘粒，DMF，80°C回流，3h;(b)(Ph3P)2PdCl2，DMF，室溫?cái)嚢鑜〇h;(c)Pd(dppb)Cl2,（C6H5CN)2PdCl2，K2⑶3,甲苯回流，8h;(d)-78°C，四氫呋喃；(e)con.HCl，乙醇，80°C回流，8h。[0146]【實(shí)例1:2-(苯基甲基）-6-(4_氟苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B1)的制備】[0147]中間體2-氨基-5-溴-3-苯基甲基-吡嗪（卜丨）的制備[0148]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將鋅粉(235mg，3.6mmol)和碘粒（12mg)混合，加入DMF，室溫?cái)嚢柚敝恋獾念伾АＨ缓蠹尤肫S溴(〇.57mg，3mmol)，移至80°C回流攪拌約3小時(shí)。此反應(yīng)液放涼至室溫后，加入2-氨基-3，5二溴吡嗪（506mg，2mmol)和三苯基磷二氯化鈀（70mg，0.lmmo1)。室溫反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)液用硅藻土過濾，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯相用無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、200-300目硅膠柱層析純化，即得中間體化合物1-1為黃色固體313mg，產(chǎn)率59%。iHNMRGOOMHzJMSO-dehST.eSbJlOj.SO~7.25(m，5H)，6.56(s，lH)，3.98(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor264.01，266.01，found264.2,266.3〇[0149]中間體2-氨基-5-(4-氟苯基)-3-苯基甲基-吡嗪(2-i)的制備[0150]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（500mg，1?89mmol)，Pd(dppb)Cl2(68mg，0.llmmol)，（C6H5CN)2PdCl2(43mg，0.llmmol)溶于甲苯6ml中，然后加入4-氟苯硼酸（397mg，2?84mmol)的甲苯溶液，加入K2C03溶液（2M，0?6ml)，109°C回流反應(yīng)8h。反應(yīng)終止后，濃縮反應(yīng)液，然后加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯相用無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、200-300目硅膠柱層析純化，干燥后即得中間體化合物2-1為白色固體395mg，產(chǎn)率TS^aiHMMRGOOMHz.DMSO-de):S8.42(s，lH)，7.97~7.93(m，2H)，7.3~7.18(m，7H)6.48(s，2H)，4?09(s，2H)?ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor280?13，found280?1〇[0151]中間體3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮(3-1)的制備[0152]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，二乙氧基乙酸乙酯（500mg，2.84mmo1)溶于新制的四氫呋喃中。待溫度降至_78°C時(shí)，加入芐基氯化鎂(642mg，4.26mmol)。-78°(：反應(yīng)3小時(shí)。待反應(yīng)液升至室溫時(shí)，用保護(hù)氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)。旋蒸除去有機(jī)溶劑，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析，得無(wú)色油狀物380mg，產(chǎn)率60%。4匪1?(400MHz，DMS0-d6):S7.31~7.16(m，6H)，4.80(s，lH)3.87(s，2H)，3.66~3.53(m，4H).ESI-MS:m/z[M+NH4]+calcdfor240.16，found240.5。[0153]2-(苯基甲基)-6-(4-氟苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(Bl)的制備[0154]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將2-氨基-5-(4-氟苯基)-3-芐基-吡嗪(2-1)(100mg，0.35mmol)和3-苯基-1，1-二乙氧基丙酮（3-1)(160mg，0.72mmol)溶解于3ml乙醇中。室溫?cái)嚢?分鐘。0.2ml的濃鹽酸溶解于2ml乙醇中，然后加入到上述反應(yīng)液中。移至油浴80°C反應(yīng)9小時(shí)。反應(yīng)停止后待降至室溫，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃白色固體44mg，產(chǎn)率30%。7.22(m，10H)，4.55(s，2H)，4.30(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D):S165.16，162.69，136.62，135.52,128.95,128.82,128.53,128.36,128.16,126.90,126.79,115.70,115.48,110.07，37.74,29.24.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor410.1669，found410.1663。[0155]【實(shí)例2:2_(苯基甲基)-6_(3-氟-4-氨基苯基）-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B2)的制備】[0156]中間體2-氨基-5-(4-氨基-3-氟-苯基)-3_芐基-吡嗪的制備[0157]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（200mg，0.756mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(2011^，0.050111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(3011^，0.050mmol)溶解于8mL甲苯中，然后加入3-氟-4-氨基-苯硼酸頻哪醇酯（240mg，1.058mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.6mL)。109°C回流攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體133mg，產(chǎn)率60%</HNMR(400MHz，DMS0-d6):58?31(s，1H)，7?54~7.46(m，2H)，7.34~7.26(m，4H)，7.21~7.17(m，lH)，6.80~6.75(t，J=10Hz，2H)，6.21(s，2H)，5.26(s，2H)，4.04(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor295.14，found295.3〇[0158]2-(苯基甲基)-6-(3-氟-4-氨基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B2)的制備[0159]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(3-氟-4-氨基-苯基）-3-芐基-吡嗪(100mg，0?339mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(113mg，0?509mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得深黃色固體60mg，產(chǎn)率42%。1圓]\?(40冊(cè)抱，〇〇3〇0):58.97(8，111)，8.14~8.08(111，21〇,7.69(^=81^，111)，7.45~7.26(m，10H)，4.62(s，2H)，4.38(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D):Sl57.32，154.85，148.15,139.14,137.88,136.45,135.43,129.09,128.33,128.12,126.87,126.81,125.25，123.29,123.26,119.49,114.78,114.57,111.29,38.24,28.76.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor425.1778,found425.1777。[0160]【實(shí)例3:2-(苯基甲基)-6-(4-羥甲基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B3)的制備】[0161]中間體2-氨基-5(4-輕甲基苯基)-3-芐基-吡嗪的制備[0162]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（100mg，0.378mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(1011^，0.026111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(2011^，0.033mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入4-輕甲基苯硼酸（85mg，0.559mmol)和碳酸鈉水溶液（1M，0.4mL)。109°C回流攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體70mg，產(chǎn)率64%</HNMR(400MHz，DMS0-d6):S8.41(s，lH)，7.87(d，J=8Hz，2H)，7.35(d，J=8Hz，4H)，7.28(t，J=8Hz，2H)，7.21~7.17(t，J=8Hz，lH)，6.37(s，2H)，5.19(t,J=6Hz,lH),4.51(d,J=8Hz,2H),4.08(s,2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor292.15,found292.4〇[0163]2-(苯基甲基)-6-(4-羥甲基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B3)的制備[0164]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(4-羥甲基苯基）-3_芐基-吡嗪（63mg，0?216mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-1)(96mg，0.432mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體29mg，產(chǎn)率32%。4匪以4001抱，0)3〇0):57.65(8，11〇,7.50~7.18(111，1411)，4.67(8,211)，4.44(8,211)，4.20(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D):S147.40，143.52，139.81，136.76，132.53，129.13，128.96，128.72,128.51,128.39,128.26,127.49,127.17,127.12,126.94,126.73,125.25,125.19，110.18,63.23,37.42,29.58.ESI-HRMS:m/z[M+H+]calcdfor422.1869,found422.1865〇[0165]【實(shí)例4:2-(苯基甲基)-6-(4-腈基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B4)的制備】[0166]中間體2-氨基-5-(4-腈基苯基)-3-芐基-吡嗪的制備[0167]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（100mg，0.378mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(1011^，0.026111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(2011^，0.033mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入4-腈基苯硼酸（150mg，0.529mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.4mL)。109°C回流攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體58mg，產(chǎn)率54%</HNMR(400MHz，CD3〇D):S8.45(s，lH)，8.11(d，J=8Hz，2H)，7.76(d，J=8Hz，2H)，7.32~7.23(m，5H)，4.16(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor287.13，found287.4。[0168]2-(苯基甲基)-6-(4-腈基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B4)的制備[0169]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(4-腈基苯基）-3_芐基-吡嗪（60mg，0.209mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-1)(90mg，0.419mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得淺褐色固體34mg，產(chǎn)率39%。4匪1?(4001抱，0)3〇0):58.88(8，11〇,8.23((1，了=8抱，21〇,7.86((1，了=8抱，21〇,7.42~7.25(m,10H),4.58(s,2H),4.34(s,2H).13CNMR(100MHz,CD30D):8150.66,148.14,139.69,138.99,137.93,135.46,132.52,132.46,129.06,128.59,128.36,128.16,127.18,126.90，126.87,121.90,121.90,118.00,112.70,111.61,38.19，28.84.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor417.1715,found417.1717〇[0170]【實(shí)例5:2-(苯基甲基)-6-(5-甲基呋喃基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B5)的制備】[0171]中間體2-氨基-5-(5-甲基呋喃基)-3_芐基-吡嗪的制備[0172]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-6-溴-8-芐基-吡嗪（11011^，0.416111111〇1)，雙芐腈二氯化鈀（11)(1011^，0.026111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(2011^，0?033mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入5-甲基咲喃-2-硼酸頻哪醇酯（120mg，0?624mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.4mL)。109°C回流攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體2611^，產(chǎn)率24%。111匪1?(40010^，0〇3〇0):58.18(8，111)，7.32~7.21(m，5H)，6.71(d，J=3.2Hz，lH)，6.13(d，J=2.4Hz，lH)，4.13(s，2H)，2.38(s，3H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor266.13,found266.4〇[0173]2_(苯基甲基)-6_(5-甲基呋喃基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B5)的制備[0174]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(5-甲基呋喃基）-3_芐基-吡嗪（82mg，0?309mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(137mg，0?618mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得淺褐色固體36mg，產(chǎn)率30%〇1HMffi(400MHz，CD30D):S7.72(s，lH)，7.27~7.09(m，10H)，6.72(d，J=3.2Hz，lH)，6.07(d，J=2.8Hz，lH)，4.31(s，2H)，4.07(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D):Sl54.69，148.05，147.26,137.90,136.59,135.44,133.87,128.89,128.53,128.34,128.21,126.88,126.78，121.91,111.74,108.23,106.75,37.70,29.12.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor396.1712，found396.1704〇[0175]【實(shí)例6:2-(苯基甲基）-6-(呋喃基-3)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B6)的制備】[0176]中間體2-氨基-5-(呋喃基-3)-3_芐基-吡嗪的制備[0177]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪(400mg，1.51mmol)，雙芐腈二氯化鈀（II)(40mg，0.104mmol)，[1，4_雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（II)(80mg，0?132mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入咲喃-3-硼酸（255mg，2?27mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.8mL)。109°C回流攪拌10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得淺黃色固體28911^，產(chǎn)率76%。1顯]\?(40011^，015〇-(16):58.19(8，11〇,8.07(8，111)，7.70(8，lH)，7.32~7.19(m，5H)，6.91(s，lH)，6.27(s，lH)，4.04(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor252.11,found252.1〇[0178]2_(苯基甲基)-6_(呋喃基-3)_8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B6)的制備[0179]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基_5_(呋喃基-3)-3-芐基-吡嗪（200mg，0?796mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-1)(283mg，1?19mmol)溶于6mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.4mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體130mg，產(chǎn)率43%。4匪1?(4001抱，0)3〇0):58.54(8，11〇,8.19(8，11〇,7.65(8，11〇,7.43((1，了=8抱，21〇,7.37~7.23(m,8H),7.02(d,J=4Hz,lH),4.58(s,2H),4.34(s,2H).13CNMR(100MHz,CD30D)：8147.66,144.55,142.33,136.67,135.47,128.89,128.51,128.34,128.18,126.89,126.75,121.69,109.12,107.73,37.44,29.34.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor382.1556,found382.1557。[0180]【實(shí)例7:2-(苯基甲基)-6-(3-乙氧基羰基苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B7)的制備】[0181]中間體2-氨基-5-(3-甲氧基羰基苯基)-3_芐基-吡嗪的制備[0182]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（100mg，0.378mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(1011^，0.026111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(2011^，0.033mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入3-甲氧基羰基硼酸（11〇11^，0.5761]11]1〇1)和碳酸鉀水溶液(2M，0.3mL)。109°C回流攪拌6小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體90mg，產(chǎn)率74%。hNMR(400MHz，DMS0-d6):58?50(d，J=4Hz，2H)，8?19(d，J=8Hz，lH),7.88(d,J=8Hz,lH),7.56(tJ=8Hz,lH),7.31(m,4H),6.55(s,2H),4.11(s,2H),3.88(s,3H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor320.1,found320.5〇[0183]2_(苯基甲基)-6_(3-乙氧基羰基苯基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B7)的制備[0184]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(3_甲氧基羰基苯基）_3_芐基-吡嗪(80mg，0?250mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(1llmg，0?501mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，深黃色固體36mg，產(chǎn)率Sl^oiHNMRGOOMHz.CDsOD):S8.78(s，lH)，8.65(s，lH)，8.23(d，J=8Hz，lH)，8.07(d，J=8Hz，lH)，7.46(d，J=4Hz，2H)，7.39~7.24(m，9H)，4.61(s，2H)，4.42(q，J=8Hz，2H)，4.40~4?34(m，2H)，1?43(t，J=8Hz，3H)?13C匪R(100MHz，CD30D):5166?15，150?35，147?80，140.06,138.00,136.57,135.46,134.79,130.82,129.04,128.57,128.36,128.19,126.90，126.83,110.61,61.15,37.92,29.08,13.29.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor464.1974,found464.1964〇[0185]【實(shí)例8:2-(苯基甲基)-6-(苯并呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B8)的制備】[0186]中間體2-氨基-5-(苯并呋喃基-2)-3_芐基-吡嗪的制備[0187]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（218mg，0.826mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(2711^，0.070111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(5011^，0.083mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入苯并咲喃硼酸（200mg，1.24mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.4mL)。109°C回流攪拌6小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體9〇11^，產(chǎn)率37%。1顯]\?(40冊(cè)1^，01^〇-(16):58.41(8，11〇,7.65~7.59(111，211)，7.36~7.18(m,7H),6.72(s,2H),4.11(s,2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor302.13,[M+Na]+calcdfor324.11,found302.5,324.4〇[0188]2-(苯基甲基)-6-(苯并呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B8)的制備[0189]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(苯并呋喃基）-3_芐基-吡嗪（200mg，0.686mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-1)(244mg，1.lOmmol)溶于6mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.4mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，深黃色固體172mg，產(chǎn)率58%。4匪1?(4001抱，0)3〇0):58.55(8，11〇,7.57(^=6抱，41〇,7.47((1，了=8抱，31〇,7.31(^=8Hz，4H)，7.24(m，3H)，7.13(s，lH)，4.63(s，2H)，4.36(s，2H)?13C匪R(100MHz，CD30D):5154.98,151.55,149.08,138.04,137.74,136.66,132.77,129.87,129.11,129.04,128.93，128.70,128.37,127.41,127.26,127.11,126.37,124.13,122.34,120.50,111.84,110.34，106.71，100.00,38.12,29.15.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor432.1712,found432.1703。[0190]【實(shí)例9:2-(苯基甲基）-6-(呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B9)的制備】[0191]中間體2-氨基-5-(呋喃基-2)-3-芐基-吡嗪的制備[0192]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪(400mg，1.51mmol)，雙芐腈二氯化鈀（II)(40mg，0.104mmol)，[1，4_雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（II)(80mg，0.132mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入咲喃-2-硼酸（255mg，2.26mmol)和碳酸鉀水溶液(2M，0.8mL)。109°C回流攪拌6小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體50mg，產(chǎn)率5H),6.74(d,J=3.2Hz,lH),6.56(d,J=1.2Hz,lH),6.45(s,2H),4.06(s,2H),ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor252.11,found252.l〇[0193]2-(苯基甲基)-6-(呋喃基-2)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B9)的制備[0194]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(呋喃基-2)-3-芐基-吡嗪（88mg，0?350mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(120mg，0?525mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，深黃色固體40mg，產(chǎn)率30%。4匪以40010^，0)3〇0):58.50(8，111)，7.69(8，111)，7.43~7.27(111，101〇,7.08((1，了=41^，1H)，6.60(s，lH)，4.56(s，2H)，4.34(s，2H).13C匪R(100MHz，CD30D):S149.19，148.16，144.34，138.00，136.50，135.38，134.00，128.56，128.34，128.11，121.04，111.94，110.45，107.63,37.82,28.97.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor382.1556，found382.1545。[0195]【實(shí)例10:2_(苯基甲基）-6_(4-甲氧基苯基）-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B25)的制備】[0196]中間體2-氨基-5-(4-甲氧基-苯基)-3-芐基-吡嗪的制備[0197]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（100mg，0.378mmol)，雙芐腈二氯化鈀（11)(1011^，0.025111111〇1)，[1，4-雙（二苯基膦基）丁烷]二氯化鈀（11)(1511^，0.025mmol)溶解于6mL甲苯中，然后加入對(duì)甲氧基苯硼酸(85mg，0.530mmol)和碳酸鈉水溶液（1M，0.39mL)。109°C回流攪拌4小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體4011^，產(chǎn)率36%。1顯]\?(40冊(cè)1^，00(：13):88.34(8，111)，7.90~7.87((1，1=12泡，2H)，7.34~7.24(m，5H)，7.01~6.98(d，J=12Hz，2H)，4.35(s，2H)4.18(s，2H)，3.86(s，3H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor292.15,found292.5〇[0198]2_(苯基甲基）-6_(4-甲氧基-苯基）-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B25)的制備[0199]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(4-甲氧基-苯基)-3_芐基-吡嗪（40mg，0?137mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-l)(61mg，0.274mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體30mg，產(chǎn)率52%。1HMffi(400MHz，CD30D):S7.91(s，lH)，7.68~7.66(d，J=8Hz，2H)，7.40~7.38(d，J=8Hz，2H)，7.32~7.17(m，8H)，7.04~7.02(d，J=8Hz，2H)，4.46(s，2H)，4.21(s，2H)，3.83(s，3H).13C匪R(100MHz，CD30D):5161.37,139.59,138.38,136.80,135.56,128.93,128.49，128.39,128.24,128.17,126.94,126.71，125.77,114.19,109.27,54.64,37.35，29.67.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor422.1869,found422.1863〇[0201]反應(yīng)2:反應(yīng)試劑與條件：（a)(C6H5CN)2PdCl2，K2⑶3,甲苯回流，8h;(b)Pd(dppb)Cl2，（C6H5CN)2PdCl2，K2C03,甲苯回流，8h;(c)con.HCl，乙醇，80°C回流，8h。[0202]【實(shí)例11:2-(苯基甲基)-6-(4_氟苯基)-8-(1_苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B2〇)的制備】[0203]中間體2-氨基-5-溴-3-(1-苯基乙烯基)_吡嗪（1-2)的制備[0204]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，2-氨基-3，5二溴吡嗪（500mg，1?98mmol)和（C6H5CN)2PdCl2(43mg，0.llmmol)。溶于甲苯6ml中，然后加入1-苯基乙烯基硼酸（321mg，2.17mmol)的甲苯溶液，加入K2C03溶液(2M，lml)，109°C回流反應(yīng)8h。反應(yīng)終止后，濃縮反應(yīng)液，然后加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯相用無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、200-300目硅膠柱層析純化，干燥后即得中間體化合物1-2為白色固體300mg，產(chǎn)率55%。1顯]\?(4001〇^，01^0-d6):S7.65(s，lH)，7.30~7.25(m，5H)，6.56(s，lH)，5.90(d，J=2.0Hz，lH)，5.62(d，J=2.0Hz，lH).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor276.01，277.13，found276.2,277.3〇[0205]中間體2-氨基-5_(4-氟苯基)-3_(l-苯基乙烯基)_吡嗪(2-18)的制備[0206]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將2-氨基-5-溴-3-(l-苯基乙烯基）-吡嗪（l-2)(500mg，1.81mmol)，Pd(dppb)Cl2(68mg，0.11mmol)，（C6H5CN)2PdCl2(43mg，0.llmmol)溶于甲苯6ml中，然后加入4-氟苯硼酸（380mg，2.72mmo1)的甲苯溶液，加入K2C03溶液（2M，lml)，109°C回流反應(yīng)8h。反應(yīng)終止后，濃縮反應(yīng)液，然后加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯相用無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、200-300目硅膠柱層析純化，干燥后即得中間體化合物2-1為白色固體40〇11^，產(chǎn)率75%。111匪1?(4001他，015〇-(16):58.42(8，11〇,7.97~7.93(111，21〇,7.3~7.18(m，7H)6.48(s，2H)，5.90(d，J=2.0Hz，lH)，5.62(d，J=2.0Hz，lH)，4.09(s，2H)?ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor292.13，found292.1。[0207]2_(苯基甲基)-6_(4-氟苯基)-8_(l-苯基乙烯基)_咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(B20)的制備[0208]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-(4-氟苯基)-3-(l-苯基乙烯基)-吡嗪(2-18)(100mg，0?34mmol)和3_苯基_1，1_二乙氧基丙酬（3-1)(114mg，0?51mmol)溶解于3ml乙醇中。室溫?cái)嚢?分鐘。0.2ml的濃鹽酸溶解于2ml乙醇中，然后加入到上述反應(yīng)液中。移至油浴80°C反應(yīng)9小時(shí)。反應(yīng)停止后待降至室溫，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃白色固體45mg，產(chǎn)率31%。hNMRGOOMHz，DMS0-d6):58?58(s，1H)，8?02~7?98(m，2H)，7?40~7?39(m，2H)，7.34~7.22(m，10H)，5.96(d，J=2.0Hz，lH)，5.69(d，J=2.0Hz，lH)，4.55(s，2H)，4.30(s，2H).13C匪R(100MHz，CD30D):S165.16,162.69,149.2,136.62,135.52,128.95，128.82,128.53,128.36,128.16,126.90,126.79,115.70,115.48,115.1，110.07，29.24.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor422.1669,found422.1665〇[0210]反應(yīng)3:反應(yīng)條件與試劑：（p)TBDMSC1,咪唑，THF,rt,12h;Naffl4，MeOH,0°C，2h,86%；(q)S0Cl2,CH2Cl2,0〇,2h,81%；(d)Mg,EtBr2；THF,-78〇C,6h,34%；(o)Bu4NF,THF,0°C,lh,88%;(。）。〇11.11(：1，￡切11，80°(：回流，811。[0211]【實(shí)例12:2-(4-羥基-苯基甲基)-6-(4-氟苯基)-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B12)的制備】[0212]中間體4-(叔丁基二甲基娃氧基)苯基甲醇的制備：[0213]在氬氣保護(hù)下，4-羥基苯甲醛（1.15g，9.42mmol)和咪唑（1.3g,18.96mmol)混合于干燥的二氯甲烷中，然后加入叔丁基二甲基氯硅烷（1.6g，10.4mmol)，室溫?cái)嚢柽^夜。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液倒入水中，油層用水洗，飽和食鹽水洗，然后干燥過濾得粗品。粗品溶于甲醇中，并在0°C下加入硼氫化鈉(0.5g，12mmol)，反應(yīng)室溫?cái)嚢?小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析純化，干燥后得淺黃色油狀物1.98，產(chǎn)率86%。111匪1?(4001抱，〇0(：13)87.22((1，了=8.6抱，21〇,6.82((1，了=8.6抱，21〇,4.60(s，2H)，0.99(s，9H)，0.20(s，6H)。[0214]中間體4-(叔丁基二甲基硅氧基)芐基氯的制備:在氬氣保護(hù)，0°C下，中間體4-(叔丁基二甲基硅氧基）苯基甲醇（1.068,4.03111111〇1)溶于干燥的二氯甲烷中，二氯亞砜(0.46mL，6.3mmol)緩慢加入到反應(yīng)液中，然后室溫?cái)嚢?，反?yīng)持續(xù)2.5小時(shí)后加入水淬滅反應(yīng)。有機(jī)層多次水洗，飽和氯化鈉溶液洗，干燥，濃縮，200-300目硅膠柱層析純化得淺黃色油狀物〇.86g，產(chǎn)率81%</HNMR(400MHz，CDCl3):S7.26(d，J=8.6Hz，2H)，6.83(d，J=8.6Hz，2H)，4.57(s，2H)，1.00(s，9H)，0.22(s，6H)。[0215]中間體3-(4_叔丁基二甲基硅氧基苯基)-1，卜二乙氧基丙酮的制備：[0216]鎂粉（1.lg，44mmol)和中間體4-(叔丁基二甲基娃氧基）芐基氯(2.15g，8.4mmol)混懸于干燥的四氫呋喃中，加入1，2-二溴乙烷（13微升，0.15mmo1)，反應(yīng)液50°C反應(yīng)2小時(shí)，放涼至室溫。在氬氣保護(hù)下，二乙氧基乙酸乙酯（2mL，11.2mmo1)溶于四氫呋喃，降溫至-78°C，然后用針抽取新制的格式試劑加入到反應(yīng)液中，反應(yīng)4小時(shí)。待反應(yīng)液升至室溫時(shí)，用保護(hù)氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)。旋蒸除去有機(jī)溶劑，加入乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析，得淺黃色油狀物lg，產(chǎn)率34%DlHNMR(400MHz，CDC13)S7.07(d，J=8.0Hz，2H)，6.78(d，J=8.0Hz，2H)，4.62(s，lH)，3.80(s，2H)，3.70~3.51(m，4H)，1.24(t，J，=7.0Hz，6H)，0.97(s，9H)，0.18(s，6H)。[0217]中間體3-(4_羥基苯基)-1，卜二乙氧基丙酮(3-2)的制備：[0218]在氬氣保護(hù)下，〇攝氏度下，中間體3-(4_叔丁基二甲基硅氧基苯基)-1，1-二乙氧基丙酮（1.58,4.251111]1〇1)溶于四氫咲喃中，加入四丁基氟化銨（2.21]11]1〇1)，反應(yīng)持續(xù)1小時(shí)后，反應(yīng)用飽和氯化銨淬滅。反應(yīng)液用二氯甲烷萃取，干燥，200-300目柱層析純化，得淺黃色油狀物900mg，產(chǎn)率88%。咕匪1?(40010^，〇0(：13)87.26((1，J=8.0Hz，2H)，6.78(d，J=8.0泡，21〇,4.69(8，11〇,4.63(8,211)，3.82(8,21〇,3.72~3.53(111，411)，1.25(七，61〇』51-MS:m/z[M+NH4]+calcdfor256.15，found:256.16。[0219]2-(4-羥基-苯基甲基）-6-(4-氟苯基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(B12)的制備：[0220]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-(4-氟苯基）-3-(1_苯基甲基）-吡嗪（2-1)(10011^，0.341]1111〇1)和3-(4-羥基苯基)-1，1-二乙氧基丙酮(3-2)(11111^，0.461]11]1〇1)溶解于3ml乙醇中。室溫?cái)嚢?分鐘。0.2ml的濃鹽酸溶解于2ml乙醇中，然后加入到上述反應(yīng)液中。移至油浴80°C反應(yīng)9小時(shí)。反應(yīng)停止后待降至室溫，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體40mg，產(chǎn)率26%。七匪以400MHz，DMS0-d6):58?58(s，1H)，8?02~7?98(m，2H)，7?40~7.39(m，2H)，7.34~7.22(m，10H)，4.55(s，2H)，4.30(s，2H).13CMffi(100MHz，CD30D):S165.16,162.69,149.2,136.62,135.52,128.95,128.82,128.53,128.36,128.16,126.90，126.79,115.1,110.07,37.20,29.24.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor426.1618,found426.1645〇[0222]反應(yīng)4:反應(yīng)試劑與條件：（f)Pd(PPh3)Cl2，PPh3，CuI，TEA，40°C，6h;(g)con.HCl，乙醇，80°C回流，8h。[0223]【實(shí)例13:2-(苯基甲基)-6-(苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A1)的制備】[0224]中間體2-氨基_5_(苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-1)的制備[0225]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪(200mg，0.76mmol)、三苯基膦二氯化IE(27mg，0?038mmol)、碘化亞銅（29mg，0?15lmmol)、三苯基膦（20mg，0.076mmol)溶于5mL甲苯中，然后加入苯乙塊(232mg，2.27mmol)和三乙胺0.7mLD40°C攬摔反應(yīng)6小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體165mg，產(chǎn)率77%。2H),4.04(s,2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor286.13,found286.4〇[0226]2_(苯基甲基)-6_(苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(Al)的制備[0227]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-苯基炔基-3-芐基-吡嗪（4-1)(80mg，0?28mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(3-1)(124mg，0?56mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得淺棕色固體30mg，產(chǎn)率26%。4匪1?(4001抱，0)3〇0):58.47(8，11〇,7.58~7.24(111，151〇,4.59(8,21〇,4.34(8,21〇.13〇匪1?(100MHz，CD30D):5147.24,137.12,134.94,131.58,129.75,128.94,128.60,128.45，128.42,127.28,126.60,120.68,117.41,94.22,80.17,35.89,31.07.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor416.1763,found416.1757〇[150925-JTY-061-003][0228]【實(shí)例14:2-(苯基甲基）-6-(4_氟-苯基炔基）-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A2)的制備】[0229]中間體2-氨基-5-(4-氟-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-2)的制備[0230]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪(90mg，0.34mmol)、三苯基勝二氯化IE(12mg，0.017mmol)、鵬化亞銅（13mg，0?068mmol)、三苯基勝(9mg，0.034mmol)溶于5mL甲苯中，然后加入4-氟-苯乙炔（125mg，1.02mmol)和三乙胺O.^LJCTC攪拌反應(yīng)10小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體52mg，產(chǎn)率50%。hNMR(400MHz，DMS0-d6):S8.09(s，lH)，7.61~7.58(m，2H)，7.48~7.43(m，2H)，7.30~7.21(m，5H)?6?82(s，2H)，4?03(s，2H)?ESI-MS:m/z[M+H].calcdfor304?13，found304?1〇[0231]2-(苯基甲基)-6-(4-氟-苯基炔基)-8-芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A2)的制備[0232]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(4-氟苯基炔基）-3_芐基-吡嗪（4-2)(40mg，0?099mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(44mg，0?198mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體15mg，產(chǎn)率35%。咕匪1?(4001抱，〇〇3〇0):S8.07(s，lH)，7.64~7.60(m，2H)，7.38~7.36(m，2H)，7.29~7.21(m，7H)，7.19~7.15(m，3H)，4.42(s，2H)，4.22(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D)164.74，162.25，147.35，140.52，137.03，134.98，134.07，134.03，133.98，128.85，128.38，128.34,127.23,127.10,126.57,117.39,115.84,115.61,92.98,80.05,35.85,30.94.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor434.1669，found434.1663。[0233]【實(shí)例15:2-(苯基甲基）-6-(3_氟-苯基炔基）-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A3)的制備】[0234]中間體2-氨基-5-(3-氟-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-3)的制備[0235]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（200mg，0.758mmol)、三苯基勝二氯化IE(35mg，0?050mmol)、鵬化亞銅（35mg，0?183mmol)、三苯基勝（20mg，0?076mmol)溶于10mL甲苯中，然后加入3_氣-苯乙塊（260mg，2?16mmol)和三乙胺0?6mL〇40°(：攪拌反應(yīng)24小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體102mg，產(chǎn)率45%。咕匪1?(4001抱，015〇-(16):58.11(8，11〇,7.49~7.38(111，31〇,7.32~7.19(111，61〇，6?86(s，2H)，4?04(s，2H)?ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor304?13，found304?4〇[0236]2_(苯基甲基)-6_(3-氟-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A3)的制備[0237]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(3-氟苯基炔基）-3_芐基-吡嗪（4-3)(60mg，0?198mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(90mg，0?395mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體26mg，產(chǎn)率30%。咕匪1?(40冊(cè)抱，〇〇3〇0):58.58(8，111)，7.46~7.20(111，141〇,4.59(8,21〇,4.34(8,21〇?13C匪R(100MHz，CD30D):5163.64,161?19,147.39,137.00,134.98,130.58,130.49，128.56,128.40,128.34,127.75,127.22,126.60,118.19,117.95,117.72,117.04,116.82，92.29,81.25,35.98,30.83.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor434.1669，found434.1664。[0238]【實(shí)例16:2-(苯基甲基）-6-(2_氟-苯基炔基）-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)-酮(A4)的制備】[0239]中間體2-氨基-5-(2-氟-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-4)的制備[0240]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（200mg，0.758mmol)、三苯基勝二氯化IE(35mg，0?050mmol)、鵬化亞銅（35mg，0?183mmol)、三苯基勝（20mg，0?076mmol)溶于10mL甲苯中，然后加入2_氣-苯乙塊（260mg，2?16mmol)和三乙胺0?6mL〇40°(：攪拌反應(yīng)24小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體100mg，產(chǎn)率44%<31HNMR(400MHz，DMS0-d6):S8.11(s，lH)，7.64~7.60(td，J=7.53Hz，1.6Hz，lH)，7.48~7.46(m，lH)，7.36~7.20(m，7H)，6.88(s，2H)，4.04(s，2H).[M+H]+calcdfor304.13，found304.4〇[0241]2-(苯基甲基)-6-(2_氟-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A4)的制備[0242]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(2-氟苯基炔基）-3_芐基-吡嗪（4-4)(56mg，0?185mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(80mg，0?360mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體llmg，產(chǎn)率M^d^NMRGOOMHz.CDsOD):S8.57(s，lH)，7.69~7.65(td，J=7.36Hz，1.6Hz，lH)，7.52~7.43(m，3H)，7.34~7.22(m，10H)，4.59(s，2H)，4.34(s，2H).13CNMR(100MHz，CD30D)164.06,161.55,147.41,140.59,136.99,134.98,133.59,128.80,128.40,128.31,127.21，126.60,124.42,124.39,117.71,115.55,15.34,109.38,109.22,87.15,85.15,35.96，30.82.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor434.1669,found434.1662〇[0243]【實(shí)例17:2-(苯基甲基)-6-(3-甲基-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A5)的制備】[0244]中間體2-氨基_5_(3-甲基-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-5)的制備[0245]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（100mg，0.379mmol)、三苯基膦二氯化IE(15mg，0?021mmol)、碘化亞銅（15mg，0?079mmol)、三苯基膦（10mg，0?038mmol)溶于5mL甲苯中，然后加入3_甲基-苯乙塊（130mg，1?121mmol)和三乙胺0?4mL〇40°C攪拌反應(yīng)24小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體62mg，產(chǎn)率62%。111匪1?(4001〇^，0150-(16):58.07(8，11〇,7.36~7.19(111，91〇,6.77(8,21〇,4.03(8，2H)，2.31(s，3H).ESI-MS:m/z[M+h]+calcdfor300.15，found300.5。[0246]2_(苯基甲基）-6-(3_甲基-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7H)_酮(A5)的制備[0247]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(3-甲基-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-5)(120mg，0?401mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(180mg，0?810mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體70mg，產(chǎn)率40%。1顯]\?(40冊(cè)1^，〇〇3〇0):57.70(8，11〇,7.40~7.18(111，141〇,4.34(8,21〇,4.18(8，2H),2.36(s,3H).13CNMR(100MHz,CD30D):8147.24,140.63,138.54,138.47,137.10,134.99,134.95,134.02,131.94,130.95,130.58,128.86,128.79,128.72,128.56,128.37，128.22,128.12,127.24,126.56,120.95,120.57,117.28,94.50,79.72,35.73,31.06,20.1.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor430.1919,found430.1914〇[0248]【實(shí)例18:2-(苯基甲基)-6-(3-羥基-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)-酮(A6)的制備】[0249]中間體2-氨基-5-(3-羥基-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-6)的制備[0250]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪（150mg，0.568mmol)、三苯基膦二氯化IE(30mg，0?043mmol)、碘化亞銅（20mg，0?105mmol)、三苯基膦（10mg，0?038mmol)溶于5mL甲苯中，然后加入3_甲基-苯乙塊（100mg，0?847mmol)和三乙胺0?4mL〇40°C攪拌反應(yīng)24小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得黃色固體62mg，產(chǎn)率62%。1顯]\?(40011^，01^〇-(16):59.69(8，11〇,8.07(8，11〇,7.29~7.26(111，31〇,7.22~7.18(t，J=8Hz，2H)，6.95(d，J=8Hz，lH)，6.87(s，lH)，6.82~6.79(m，lH)，6.77(s，2H)，4.03(s,2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor302.13,found302.5〇[0251]2_(苯基甲基）-6_(3-羥基-苯基炔基)-8_芐基-咪唑并[l，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(A6)的制備[0252]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-(3-羥基-苯基炔基)-3-芐基-吡嗪(4-6)(70mg，0?232mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（3-1)(90mg，0?405mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體15mg，產(chǎn)率15%。咕匪1?(40冊(cè)抱，〇〇3〇0):57.69(8，111)，7.41~7.18(111，141〇,4.33(8,21〇,4.18(8,21〇?13C匪R(100MHz，CD30D):5157.37,147.15,137.09,134.96,129.59,128.80,128.57，128.36,127.25,126.56,122.87,121.52,117.94,117.28,94.44,79.38,35.66,31.11.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor432.1712,found432.1701〇[0254]反應(yīng)5:反應(yīng)試劑與條件：（h)Pd(PPh3)C12，PPh3，Cul，TEA，40°C，7h;(i)K2C03，CH30H,r.t.2h；(j)NaN3,THF,80°C,8h；(k)CuS04?5H20,VcNa,THF/H2O,r.t.overnight；(m)。〇11.11(：1，￡切11，80。(：回流，811。[0255]【實(shí)例19:2_(苯基甲基）-6_[(1-羥基乙基）_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T1)的制備】[0256]中間體2-氨基-5-(三甲基硅基炔基)-3-芐基-吡嗪(5)的合成[0257]在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將中間體2-氨基-5-溴-3-芐基-吡嗪(200mg，0.76mmol)、三苯基膦二氯化lE(27mg，0?038mmol)、鵬化亞銅（29mg，0?151mmol)、三苯基勝（20mg，0?076mmol)溶于5mL甲苯中，然后加入三甲基硅基乙炔（223mg，2.27mmol)和三乙胺0.81^。40°(：攪拌反應(yīng)9小時(shí)。停止反應(yīng)后，反應(yīng)液過濾，濾液濃縮，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉溶液，萃取后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得淺黃色固體129mg，產(chǎn)率60%。hNMR(400MHz，DMS0-d6):S7.98(s，lH)，7.29~7.20(m，5H)，6.79(s，2H)，3.99(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor282.14,found282.5〇[0258]中間體2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪(6)的制備[0259]中間體2-氨基-5-三甲基硅基炔基-3-芐基-吡嗪（100mg，0?356mmo1)，碳酸鉀(40mg，0.284mmol)溶于3mL甲醇中，室溫?cái)嚢?小時(shí)。停止反應(yīng)后，旋干溶劑，加入乙酸乙酯和飽和氯化鈉水溶液，進(jìn)行萃取。乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體501^，產(chǎn)率67%。1謂\?(40冊(cè)泡，0150-(16):57.98(8，111)，7.30~7.20(111，5H),6.76(s,2H),4.15(s,2H),3.99(s,2H).ESI-MS:m/z[M++]calcdfor210.10,found210.3〇[0260]中間體1-疊氮基-2-乙醇(7-1)的制備[0261]溴乙醇（1.76g，14.08mmol)溶于3mL水中，室溫?cái)嚢柘轮鸩郊尤氙B氮化鈉（1.83g，28.17mmol)，室溫?cái)嚢?0小時(shí)。反應(yīng)停止后，加入乙醚萃取，乙醚層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、旋干溶劑得粗品，不必進(jìn)行精制，直接投入下步反應(yīng)。[0262]中間體2-氨基-5-[(1-羥基乙基)-1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪(8-1)的制備[0263]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-6-炔基-8-芐基-吡嗪(30mg，0.143mmol)，l-疊氮基_2_乙醇（16mg，0.186mmol)，五水硫酸銅(2mg，7.15_〇1)，抗壞血酸鈉(4mg，21.45ymol)溶于1:1的四氫呋喃和水混合溶液中，然后加入2微升三乙胺。室溫反應(yīng)8小時(shí)。停止反應(yīng)后，旋去有機(jī)溶劑，然后加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得淡黃色固體40mg，產(chǎn)率95%c/HNMRGOOMHz.CDChhSS.TCKsJHhS.HKsJlOj.SA-TJSUjlOjJe-TJSUjH)，4.55(t,J=4Hz,2H),4.49(s,2H),4.13(m,4H).ESI-MS:m/z[M++]calcdfor297.1464,found〇[0264]2_(苯基甲基)-6_[(1-羥基乙基）_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3_(7H)_酮(T1)的制備[0265]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-[(1-羥基乙基)-1，2，3-三氮唑]-3-芐基-P比嘆(60mg，0?202mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(90mg，0?404mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體60mg，產(chǎn)率6Hz，2H)，4.32(s，2H)，4.04(s，2H)，3.86(t，J=6Hz，2H).13CNMR(100MHz，CD30D):S148.40，143.06，138.07，136.52，135.47，133.85，128.86，128.54，128.37，128.17，126.88，126.80，124.56,109.73,60.10,52.93,37.81,29.08.ESI-HRMS:m/z[M++]calcdfor427.1882,found427.1876〇[0266]【實(shí)例2〇:2-(苯基甲基)-6_[(1-羥基丙基)_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T2)的制備】[0267]中間體1-疊氮基-3-丙醇的制備[0268]1-溴-3-丙醇（lg，7.19mmol)溶于3mL水和DMF為1:1的混合溶劑中，室溫?cái)嚢柘轮鸩郊尤氙B氮化鈉(〇.9g，14.39mmol)，80°C回流8小時(shí)。反應(yīng)停止后，加入乙醚萃取，乙醚層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、旋干溶劑得粗品，不必進(jìn)行精制，直接投入下步反應(yīng)。[0269]中間體2-氨基-5-[(1-羥基丙基)-1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪的制備[0270]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪(45mg，0.215mmol)，l-疊氮基_3_丙醇（28mg，0?279mmol)，五水硫酸銅（4mg，0?016mmol)，抗壞血酸鈉（7mg，0.035mmol)溶于1:1的四氫呋喃和水混合溶液中，然后加入3.5微升三乙胺。30°C反應(yīng)8小時(shí)。停止反應(yīng)后，旋去有機(jī)溶劑，然后加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得淡黃色固體55mg，產(chǎn)率83%。1顯]\?(40冊(cè)他，0)(：13):88.76(8，111)，8.04(8，11〇,7.33~7.28(111，21〇,7.26~7.22(m，3H)，4.59(t，J=6Hz，2H)，4.48(s，2H)，4.14(s，2H)，3.70(m，J=6Hz，2H)，2.19(m，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor311.16,found311.3〇[0271]2_(苯基甲基)-6_[(1-羥基丙基）_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3_(7H)_酮(T2)的制備[0272]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-[(1-羥基丙基)-1，2，3-三氮唑]-3-芐基-P比嘆(60mg，0?202mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬(90mg，0?404mmol)溶于3mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體20mg，產(chǎn)率23%。咕匪1?(4001抱，〇〇3〇0):58.44(8，11〇，8.15(8，11〇,7.35~7.12(111，101〇,4.57(扒了=8Hz，2H)，4.44(s，2H)，4.14(s，2H)，3.58(t，J=8Hz，2H)，2.13(m，2H).13C匪R(100MHz，CD30D):5148.42,143.09,136.51，135.48,133.72,128.84,128.55,128.39,128.16，126?88，126?80，124?19，109?90，65?52，57?92，37?84，32?49，29?07?ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor441.2039,found441.2034〇[0273]【實(shí)例21:2-(苯基甲基)-6_[(1-氟-乙基)_1，2，3-三氮唑]-8-芐基-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-(7H)_酮(T3)的制備】[0274]中間體1-疊氮基-2-氟-乙烷的制備[0275]1-溴-2-氟-乙烷（1.5g，ll.82mmol)溶于3mL水和DMF為1:1的混合溶劑中，室溫?cái)嚢柘轮鸩郊尤氙B氮化鈉(2.3g，35.45mmo1)，80°C回流8小時(shí)。反應(yīng)停止后，加入乙醚萃取，乙醚層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥、過濾、旋干溶劑得粗品，不必進(jìn)行精制，直接投入下步反應(yīng)。[0276]中間體2-氨基-5-[(1-氟-乙基)-1，2，3-三氮唑]-3-芐基-吡嗪的制備[0277]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基-5-炔基-3-芐基-吡嗪(40mg，0.191mmol)，l-疊氮基-2_氟乙燒（3411^，0.3821]1111〇1)，五水硫酸銅（311^，0.0121]1111〇1)，抗壞血酸鈉（611^，0.030mmo1)溶于1:1的四氫呋喃和水混合溶液中，然后加入3微升三乙胺。30°C反應(yīng)8小時(shí)。停止反應(yīng)后，旋去有機(jī)溶劑，然后加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過濾，200-300目硅膠柱層析得淡黃色固體45mg，產(chǎn)率79%。111匪1?(4001〇^，0150-(16):58.45(8，11〇,8.39(8，11〇,7.33~7.19(111，51〇,6.46(8，2H)，4.93(t，J=4Hz，lH)，4.80(m，2H)，4.73(m，2H)，4.07(s，2H).ESI-MS:m/z[M+H]+calcdfor299.14，found299.5。[0278]2_(苯基甲基)-6_[(l-氟-乙基)-l，2,3_三氮唑]-8-芐基-咪唑并[l，2_a]吡嗪-3-(7田-酮〇3)的制備[0279]在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，將中間體2-氨基_5_[(1-氟-乙基)_1，2，3-三氮唑]-3-芐基-P比嘆（80mg，0?268mmol)和中間體3_苯基_1，1_二乙氧基-丙酬（120mg，0?536mmol)溶于4mL乙醇中，室溫?cái)嚢?分鐘。0.2mL濃鹽酸溶解于lmL乙醇，緩慢加入到上述反應(yīng)液中。移至80°C回流攪拌8小時(shí)。反應(yīng)停止后，濃縮反應(yīng)液，200-300目硅膠柱層析，得黃色固體29mg，產(chǎn)率4.85(m，3H)，4.46(s，2H)，4.21(s，2H).13CNMR(100MHz，CD3〇D):5148.43,143.66,138.03，136.52,135.46,134.00,128.86,128.55,128.38,128.17,126.88,126.81,124.36,109.68，82.24,80.54,37.85,29.03.ESI-HRMS:m/z[M+H]+calcdfor429.1839，found429.1833。[0280]【實(shí)例22:腔腸素衍生物與Renillaluciferase的體外酶活性研究】[0281]1、生物發(fā)光強(qiáng)度及米氏常數(shù)的測(cè)定:將50yL用Tris-HCl(50mM，pH7.42)溶解的不同濃度目標(biāo)化合物，腔腸素DeepBlue，腔腸素h，腔腸素分別加入到50yLRenillaluciferase(liig/ml)于全黑的96孔板中，用IVISKinetic小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)進(jìn)行生物發(fā)光強(qiáng)度的測(cè)定。根據(jù)測(cè)試結(jié)果用GraphPadPrism計(jì)算出不同化合物的米氏常數(shù)。以腔腸素DeepBlUe(2iiM)的測(cè)試結(jié)果為基準(zhǔn)，折算所有化合物的生物發(fā)光強(qiáng)度值。[0282]2、生物發(fā)光最大波長(zhǎng)的測(cè)定：向0.5mL用Tris-HCl(50mM，pH7.42)溶解的不同的目標(biāo)化合物，腔腸素DeepB1ue，腔腸素h，腔腸素（25yM)中分別加入0.5mLRenillaluciferase(lug/ml)，用F_1200焚光分光光度計(jì)在lampoff的luminescence模式下，responsetime為2s，掃描其生物發(fā)光光譜，得到最大生物發(fā)光波長(zhǎng)。[0283]3、生物發(fā)光Halflife的測(cè)定：向0.5mL用Tris-HCl(50mM，pH7.42)溶解的不同的目標(biāo)化合物，腔腸素DeepB1ue，腔腸素h，腔腸素（25yM)中分別加入0.5mLRenillaluciferaseQμg/ml)，用F-1200焚光分光光度計(jì)在lampoff的timescan模式下測(cè)定300s的生物發(fā)光曲線。用GraphPadPrism計(jì)算生物發(fā)光Halflife。[0284]表1.腔腸素類似物與Renillaluciferase的體外生物發(fā)光性質(zhì)[0286]結(jié)果表明，相較于腔腸素DeepBlue，部分目標(biāo)化合物顯示出了生物發(fā)光強(qiáng)度更強(qiáng)，生物發(fā)光半衰期更長(zhǎng)或者是具有較好的動(dòng)力學(xué)特性等特點(diǎn)。部分化合物如B2，B9，B5的生物發(fā)光性質(zhì)良好，具有潛力可以作為生物發(fā)光體系中底物的選擇。[0287]【實(shí)例23:腔腸素衍生物與Gaussialuciferase的體外酶活性研究】[0288]1、生物發(fā)光強(qiáng)度及米氏常數(shù)的測(cè)定：將50此用!>丨8-11(：1(2511^4117.8，含60〇11^NaCl，ImMEDTA，0.05%BSA)溶解的不同濃度目標(biāo)化合物，腔腸素De印Blue，腔腸素h，腔腸素分別加入到50yLGaussialuciferase(2μg/ml,用pH7.8,含600mMNaCl，lmMEDTA，0.05%BSA的25mMTris-HCl溶解)于全黑的96孔板中，用Q酶標(biāo)儀進(jìn)行生物發(fā)光強(qiáng)度的測(cè)定。根據(jù)測(cè)試結(jié)果用GraphPadPrism計(jì)算出不同化合物的米氏常數(shù)。以腔腸素DeepBlue(5yM)的測(cè)試結(jié)果為基準(zhǔn)，折算所有化合物的生物發(fā)光強(qiáng)度值。[0289]2、生物發(fā)光最大波長(zhǎng)的測(cè)定：向0.511^用1^8-11(：1(25111]\14117.8，含60〇111]\1恥(：1，ImMEDTA，0.05%BSA)溶解的不同的目標(biāo)化合物，腔腸素DeepBlue，腔腸素h，腔腸素（25yM)中分別加入0?5mLGaussialuciferase(2iig/ml，用Tris-HCl(pH7?8，含600mMNaCl，ImM￡0丁4,0.05%83六的25111]\11^18-11(：1溶解），用？-1200熒光分光光度計(jì)在1311^(^€的luminescence模式下，responsetime為2s，掃描其生物發(fā)光光譜，得到最大生物發(fā)光波長(zhǎng)。[0290]3、生物發(fā)光Halflife的測(cè)定：將50yL用Tris-HCl(25mM，pH7.8,含600mMNaCl,ImMEDTA，0.05%BSA)溶解的不同的目標(biāo)化合物，腔腸素DeepBlue，腔腸素h，腔腸素（25yM)中分別加入50yLGaussialuciferase(2μg/ml，pH7?8，含600mMNaCl，ImMEDTA，0?05%BSA的25mMTris-HCl溶解），用Q酶標(biāo)儀測(cè)定300s的生物發(fā)光曲線。用GraphPadPrism計(jì)算生物發(fā)光HaIflife。[0291]表2:腔腸素類似物與Gaussialuciferase的體外生物發(fā)光性質(zhì)[0292][0294]結(jié)果表明，相較于腔腸素DeepBlue，部分目標(biāo)化合物如B2，B3，B5顯示出了生物發(fā)光強(qiáng)度更強(qiáng)，生物發(fā)光半衰期更長(zhǎng)或者是具有較好的動(dòng)力學(xué)特性等特點(diǎn)。[0295]【實(shí)例24:腔腸素衍生物的細(xì)胞活性研究(細(xì)胞水平)】[0296]在黑色的96孔板中每孔加入100yL穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)Renillaluciferase的ES-2細(xì)胞懸液(4X105/孔），于37°C，5%⑶2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24h。之后吸出培養(yǎng)基，加入100yL用0.9%NaCl溶液溶解的不同濃度目標(biāo)化合物，腔腸素DeepBlue，腔腸素h，腔腸素(0，0.25，0.5，l，2,5，10,25yM)，用IVISKinetic小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)測(cè)試，得結(jié)果如下表：[0297]表3.腔腸素衍生物的細(xì)胞水平的生物發(fā)光性質(zhì)[0298][0299]結(jié)果表明，部分化合物如B2，B5，B9在細(xì)胞水平具有較好的生物發(fā)光活性。特別是B2的發(fā)光強(qiáng)度已經(jīng)和腔腸素h基本一致。[0300]【實(shí)例25:腔腸素衍生物的化學(xué)發(fā)光波長(zhǎng)測(cè)定】[0301]像200此用無(wú)水乙醇配制成的ImM目標(biāo)化合物或腔腸素DeepBlue的溶液中加入2mL的含0.05%的1M的NaOH溶液的DMS0，用F-1200熒光分光光度計(jì)在lampoff模式下測(cè)定化學(xué)發(fā)光光譜。得到其各自的化學(xué)發(fā)光最大波長(zhǎng)，見表3。[0302]【實(shí)例26:腔腸素衍生物的熒光性質(zhì)測(cè)定】[0303]將200此用1^8-11(：1(5〇111]\^117.42)配制的100虛的化合物置于全黑的96孔板中。用ThermoScientificVarioskanFlashmicroplatereader測(cè)試焚光激發(fā)光譜和焚光發(fā)射光譜。結(jié)果見表4。[0304]表4.腔腸素衍生物的化學(xué)發(fā)光和焚光性質(zhì)[0305][0306]【實(shí)例27:腔腸素衍生物的動(dòng)物體內(nèi)活性研究】[0307]選取在酶水平和細(xì)胞水平表現(xiàn)良好的化合物B2和B5,進(jìn)一步進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)活性研究。將目標(biāo)化合物和腔腸素配制成為ImM和5mM的氯化鈉溶液，選取荷瘤2周的裸鼠進(jìn)行體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)。腹腔注射化合物1〇〇此，用活體成像儀進(jìn)行成像。比較目標(biāo)化合物和陽(yáng)性對(duì)照腔腸素的最大發(fā)光強(qiáng)度。結(jié)果見表5。[0308]表5.腔腸素類似物的體內(nèi)最大生物發(fā)光強(qiáng)度比[0310]結(jié)果表明，化合物B2和B5的體內(nèi)的最大生物發(fā)光比陽(yáng)性對(duì)照腔腸素的強(qiáng)度要強(qiáng)3~6倍。這說明該化合物具有在體內(nèi)成像的潛力。[0311]實(shí)例22至27所涉及的化合物結(jié)構(gòu)如下：【主權(quán)項(xiàng)】1.一種腔腸素類似物，其特征是，該類似物具有通式(I)的結(jié)構(gòu)：式中，Ri為氨基，徑基;R2為4-氣苯基，3-氣-4-氨基苯基，4-徑甲基苯基，4-臘基苯基，5-甲基巧喃基，巧喃基-3，糞基，苯并巧喃基-2，巧喃基-2，嚷吩基-2，或^比時(shí)R4為氨，4-氣，3-氣，2-氣，3-甲基，3-徑基;或者此時(shí)Rs為1-徑基乙基，1-徑基丙?基，1-氣-乙基;R3為芐基，1-苯基乙締基。2.如權(quán)利要求1所述的腔腸素類似物，其特征是，具有通式（I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物，包括下述的化合物：Bl:2-(苯基甲基)-6-(4-氣苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬B2:2-(苯基甲基)-6-(3-氣-4-氨基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬B3:2-(苯基甲基)-6-(4-?甲基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B4:2-(苯基甲基)-6-(4-臘基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B5:2-(苯基甲基)-6-(5-甲基巧喃基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬B6:2-(苯基甲基)-6-(巧喃基-3)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B7:2-(苯基甲基)-6-(3-乙氧基幾基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B8:2-(苯基甲基)-6-(苯并巧喃基-2)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B9:2-(苯基甲基)-6-(巧喃基-2)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B10:2-(苯基甲基)-6-(糞基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬B11:2-(苯基甲基)-6-(嚷吩基-2)-8-芐基-咪挫并[1，2-a]化嗦-3-(7H)-酬612:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(4-氣苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B13:2-(4-?基-苯基甲基）-6-(3-氣-4-氨基苯基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬614:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(4-?甲基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬615:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(4-臘基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬616:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(5-甲基巧喃基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬617:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(巧喃基-3)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬618:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(巧喃基-2)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬619:2-(4-?基-苯基甲基)-6-(嚷吩基-2)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B20:2-(苯基甲基)-6-(4-氣苯基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B21:2-(苯基甲基)-6-(3-氣-4-氨基苯基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬622:2-(苯基甲基）-6-(4-徑甲基苯基）-8-(1-苯基乙締基）-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬623:2-(苯基甲基）-6-(4-臘基苯基）-8-(1-苯基乙締基）-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬B24:2-(苯基甲基）-6-(5-甲基巧喃基）-8-(1-苯基乙締基）-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬B25:2-(苯基甲基)-6-(4-甲氧基苯基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬;B26:2-(苯基甲基)-6-(巧喃基-3)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬B27:2-(苯基甲基)-6-(巧喃基-2)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬Al:2-(苯基甲基)-6-(苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A2:2-(苯基甲基)-6-(4-氣-苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A3:2-(苯基甲基)-6-(3-氣-苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬A4:2-(苯基甲基)-6-(2-氣-苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A5:2-(苯基甲基)-6-(3-甲基-苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A6:2-(苯基甲基)-6-(3-?基-苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A7:2-(苯基甲基)-6-(苯基烘基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[l，2-a]郵嗦-3-(7H)-酬A8:2-(苯基甲基）-6-(4-氣-苯基烘基）-8-(1-苯基乙締基）-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A9:2-(苯基甲基）-6-(3-氣-苯基烘基）-8-(1-苯基乙締基）-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A10:2-(苯基甲基)-6-(2-氣-苯基烘基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬All:2-(苯基甲基)-6-(3-甲基-苯基烘基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬A12:2-(苯基甲基)-6-(3-?基-苯基烘基)-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬A13:2-(4-^基-苯基甲基)-6-(苯基烘基)-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A14:2-(4-^基-苯基甲基）-6-(4-氣-苯基烘基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A15:2-(4-?基-苯基甲基）-6-(3-氣-苯基烘基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A16:2-(4-?基-苯基甲基）-6-(2-氣-苯基烘基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A17:2-(4-?基-苯基甲基）-6-(3-甲基-苯基烘基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬A18:2-(4-^基-苯基甲基）-6-(3-?基-苯基烘基）-8-芐基-咪挫并[l，2-a]化嗦-3-(7H)-酬；1'1:2-(苯基甲基)-6-[(1-徑基乙基)-1，2,3-^氮挫]-8-芐基-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬了2:2-(苯基甲基)-6-[(1-徑基丙基)-1，2,3-^氮挫]-8-芐基-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬1':3:2-(苯基甲基)-6-[(1-氣-乙基)-1，2,3-^氮挫]-8-芐基-咪挫并[1，2-曰]化嗦-3-(7H)-酬Τ4:2-(苯基甲基)-6-[(1-徑基乙基)-1，2,3-Ξ氮挫]-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1，2-a]化嗦-3-(7H)-酬Τ5:2-(苯基甲基)-6-[(1-徑基丙基)-1，2,3-Ξ氮挫]-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1，2-a]化嗦-3-(7H)-酬Τ6:2-(苯基甲基)-6-[(1-氣-乙基)-1，2,3-Ξ氮挫]-8-(1-苯基乙締基)-咪挫并[1,2-a]化嗦-3-(7H)-酬。3.權(quán)利要求1所述的腔腸素類似物的制備方法，其特征是，當(dāng)式（I)的化合物中Ri為氨基，徑基;R2為4-氣苯基，3-氣-4-氨基苯基，4-徑甲基苯基，4-臘基苯基，5-甲基巧喃基，巧喃基-3，糞基，苯并巧喃基-2，巧喃基-2，嚷吩基-2，或^R3為芐基，1-苯基乙締基時(shí)：該腔腸素類似物的制備方法包括W下步驟：(1)中間體2-氨基-5-X-3-苯基甲基-化嗦或者2-氨基-5-X-3-(1-苯基乙締基)-化嗦的制備首先將鋒粉、艦和芐基面素或者對(duì)徑基芐基面素混合反應(yīng)，然后將2-氨基-3,5二別比嗦加入上述反應(yīng)液中得到2-氨基-5-X-3-苯基甲基-化嗦；或者，將2-氨基-3,5二別比嗦與鈕催化劑混合，然后加入1-苯基乙締基棚酸混合反應(yīng)，得到2-氨基-5-X-3-(1-苯基乙締基)-化嗦；(2)中間體2-氨基-3苯基甲基-化嗦類化合物或2-氨基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物的制備將步驟（1)中的2-氨基-5-X-3-苯基甲基-化嗦或2-氨基-5-X-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與棚酸類化合物或苯乙烘類化合物混合反應(yīng)得到中間體2-氨基-3苯基甲基-化嗦類化合物或2-氨基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物；(3)中間體3-苯基-1，^二乙氧基丙酬或者3-(4-?基苯基)-1，1-二乙氧基丙酬的制備將二乙氧基乙酸乙醋與芐基氯化儀或芐基漠化儀混合反應(yīng)制備得到中間體3-苯基-1，^二乙氧基丙酬；或者將二乙氧基乙酸乙醋與4-(叔下基二甲基娃氧基)芐基氯化儀或4-(叔下基二甲基娃氧基)芐基漠化儀混合反應(yīng)然后再與四下基氣化錠混合反應(yīng)制備得到中間體3-(4-?基苯基)-1，1-二乙氧基丙酬；(4)具有通式(I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物的制備將步驟(2)中的中間體2-氨基-3苯基甲基-化嗦類化合物或氨基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物與步驟(3)中的中間體3-苯基-1，^二乙氧基丙酬或3-(4-?基苯基)-1，1-二乙氧基丙酬混合反應(yīng)，得到具有通式(I)結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物;其中X表示面素。4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是：步驟（1)中，所述鋒粉、芐基面素或者對(duì)徑基芐基面素和2-氨基-3,5二別比嗦的摩爾比例為（1~2):(1~2):1;所述2-氨基-3,5二X-化嗦與1-苯基乙締基棚酸的摩爾比例為1:(1~2)。5.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是:步驟(2)中，所述棚酸類化合物的結(jié)構(gòu)通式如(VI)或(VH)所示：式中，R2為4-氣苯基，3-氣-4-氨基苯基，4-徑甲基苯基，4-臘基苯基，5-甲基巧喃基，巧喃基-3，糞基，苯并巧喃基-2，巧喃基-2，嚷吩基-2;所述苯乙烘類化合物的結(jié)構(gòu)通式如(VIII)所示：其中，R4為氨，4-氣，3-氣，2-氣，3-甲基，3-徑基所述2-氨基-5-X-3-苯基甲基-化嗦或2-氨基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物與棚酸類化合物或苯乙烘類化合物的摩爾比例為1:(1~4)。6.權(quán)利要求1所述的腔腸素類似物的制備方法，其特征是，當(dāng)式（I)的化合物中的R2為時(shí)，該腔腸素類似物的制備方法包括W下步驟：(1)中間體2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基）-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基)-3-(1-苯基乙締基)-化嗦的制備將權(quán)利要求3所述的2-氨基-5-X-3-苯基甲基-R比嗦或2-氨基-5-Χ-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與Ξ甲基娃基乙烘混合反應(yīng)得到2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基）-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基)-3-(1-苯基乙締基)-化嗦；(2)中間體2-氨基-5-烘基-3-芐基-化嗦的制備將步驟（1)中的2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基）-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基)-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與碳酸鐘混合反應(yīng)，得到2-氨基-5-烘基-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-烘基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦；(3)中間體1-疊氮基燒控化合物的制備將面化物和疊氮化鹽混合反應(yīng)得到1--疊氮基燒控化合物；(4)中間體2-氨基-6-[1，2，3-Ξ氮挫]-3-芐基-化嗦類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-Ξ氮挫-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物的制備將步驟(2)中的2-氨基-5-烘基-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-烘基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與1--疊氮基燒控化合物混合反應(yīng)制備得到2-氨基-6-[1，2，3]-Ξ氮挫-3-芐基-化嗦類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-Ξ氮挫-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物；(5)具有通式(I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物的制備將步驟(4)中的2-氨基-6-[1，2，3-Ξ氮挫]-3-芐基-化嗦類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-Ξ氮挫-3-(1-苯基乙締基)-化嗦類化合物與權(quán)利要求3所述的3-苯基二乙氧基丙酬或者3-(4-?基苯基)-1,1-二乙氧基丙酬混合反應(yīng)，制備得到具有通式（I)的結(jié)構(gòu)的腔腸素類似物。7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是:步驟（1)中，2-氨基-5-X-3-苯基甲基-化嗦或2-氨基-5-X-3-(l-苯基乙締基)-化嗦與Ξ甲基娃基乙烘的摩爾比例為1:(2~4);步驟(2)中，所述2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基)-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-(Ξ甲基娃基烘基)-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與碳酸鐘的摩爾比例為(1~2):1。8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是:步驟(3)中，所述1-疊氮基燒控化合物的結(jié)構(gòu)通式如（IX)所示：式中，Rs為1-徑基乙基，1-徑基丙基，1-氣-乙基；所述面化物的結(jié)構(gòu)通式如（X)所示：式中，Rs為1-?基乙基，1-?基丙基，1-氣-乙基;X為面素；優(yōu)選的，所述面化物和疊氮化鋼的摩爾比例為1:(1~3)。9.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是：步驟(4)中，所述2-氨基-5-烘基-3-芐基-化嗦或2-氨基-5-烘基-3-(1-苯基乙締基)-化嗦與1--疊氮基燒控化合物的摩爾比例為1:(1~2);步驟(5)中，所述2-氨基-6-[1，2，3-Ξ氮挫]-3-芐基-化嗦類化合物或2-氨基-6-[1，2，3]-Ξ氮挫-3-(1-苯基乙締基）-化嗦類化合物與3-苯基-1,1-二乙氧基丙酬3-(4-?基苯基)-1，1-二乙氧基丙酬的摩爾比例為1:(1~3)。10.下述任一應(yīng)用：(1)權(quán)利要求1或2所述的腔腸素類似物在作為生物發(fā)光的底物中的應(yīng)用；(2)權(quán)利要求1或2所述的腔腸素類似物作為探針在檢測(cè)蛋光素酶在體外、細(xì)胞和體內(nèi)分布成像的應(yīng)用；(3)權(quán)利要求1或2所述的腔腸素類似物在Aequorea蛋光素酶存在條件下，用于檢測(cè)化的存在和數(shù)量W及檢測(cè)Ca2+在體外、細(xì)胞和體內(nèi)分布成像的用途；(4)權(quán)利要求1或2所述的腔腸素類似物在蛋光素酶的存在下作為報(bào)告信號(hào)檢測(cè)藥物在酶水平、細(xì)胞水平、動(dòng)物水平的藥理作用和毒性作用?！疚臋n編號(hào)】A61K49/00GK105968114SQ201610367854【公開日】2016年9月28日【申請(qǐng)日】2016年5月27日【發(fā)明人】李敏勇,杜呂佩,姜天宇【申請(qǐng)人】山東大學(xué)