一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑的制作方法
【專利摘要】一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其組分包括：赤蘚醇、葡萄糖、動物血清、維生素類、氨基酸、細胞生長因子等，在一升餾水中各成分的含量為:葡萄糖、赤蘚醇、胰蛋白月示、氯化鈉、馬血清、煙酸、生物素、維生素B1、D?環(huán)絲氨酸、甲基乙醚、多黏菌素B、桿菌肽、放線菌酮、制霉菌素、硫酸鋅、硫酸錳、氯化銅、硫酸鈷、硼酸、三氯化鐵、三氯化鋁。使用該培養(yǎng)基強化劑用于布魯氏桿菌分離培養(yǎng)，能有效促進細菌在培養(yǎng)基中的生長而干擾菌生長受到抑制。該培養(yǎng)基強化劑針對布魯氏桿菌的分離培養(yǎng)通用性強，成本較低，配制及使用方便。
【專利說明】
一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種菌絲培養(yǎng)技術(shù)，特別是一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]布魯氏桿菌的危害和污染是人畜共患病中危害較大的一類生物因素。對于布魯氏桿菌的分析檢測一直不被重視，但是臨床和科研都需要有一種適宜于該菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基， 目前所用的培養(yǎng)基在檢驗過程中選擇性和對布魯氏桿菌的一些種生長不理想，導(dǎo)致了嚴重的漏檢，不利于科研工作和食品安全工作的開展。
[0003]眾所周知，細菌培養(yǎng)的效果、經(jīng)濟性和效率起決定性作用的是培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的優(yōu)化是建立高效的細菌培養(yǎng)試驗過程的核心環(huán)節(jié)。因此，根據(jù)布魯氏桿菌在生長、代謝和不同種的試驗生長表達過程中的營養(yǎng)需求，設(shè)計布魯氏桿菌培養(yǎng)基中營養(yǎng)物的成分、含量和配比是工作的重要內(nèi)容。
[0004]市售的商業(yè)布魯氏桿菌培養(yǎng)基在布魯氏桿菌檢驗過程中表現(xiàn)不穩(wěn)定，在培養(yǎng)分離效果方面仍有諸多缺陷。因此，在進行布魯氏桿菌的檢驗實驗時，多數(shù)培養(yǎng)基難以充分、平衡地向布魯氏桿菌提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基對布魯氏桿菌的選擇性和生長性表現(xiàn)不佳。
[0005]布魯氏桿菌的培養(yǎng)基成分復(fù)雜，其中除了對細胞的存活起維持作用的維生素、有機碳源和微量元素之外，赤蘚醇、馬血清、白細胞介素2對細菌的生長、代謝試驗結(jié)果起著至關(guān)重要的作用。其中，赤蘚醇在布魯氏桿菌的生長上起到了提高布魯氏桿菌的作用。氨基酸、蛋白月示是菌體生長和酶類代謝合成前體物質(zhì)，可合成細菌自身所需的結(jié)構(gòu)蛋白以及生化反應(yīng)中必不可少的生物酶，還直接參與抗體的生物合成，同時也是合成其他生物分子的代謝中間體，還可作為底物提供細胞生理活動所必需的能量，是細胞生長、代謝和產(chǎn)物生產(chǎn)的重要營養(yǎng)物質(zhì)。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)，D-環(huán)絲氨酸對抑制布魯氏桿菌培養(yǎng)時的耐藥性結(jié)核桿菌細菌污染有很好的效果。同時對抑制其他的細菌生長也具有很好的效果而不會對布魯氏桿菌培養(yǎng)引起抑制。這和單獨使用抗生素作為細菌抑制劑對其他細菌抑制效果和對布魯氏桿菌的抑制有很大區(qū)別。
[0007]綜上所述，蛋白月示、葡萄糖、赤蘚醇、維生素、微量元素作為關(guān)鍵的營養(yǎng)物質(zhì)在布魯氏桿菌培養(yǎng)基中起著至關(guān)重要的作用。國內(nèi)外許多布魯氏桿菌培養(yǎng)基一般組分單一或使用馬鈴薯成分組成，顯著影響不同種的布魯氏桿菌生長，這些培養(yǎng)基一般僅能確保部分布魯氏桿菌分離生長，并不能較好地支持所有布魯氏桿菌種的生長和生化試驗效果的表達， 因而阻礙了布魯氏桿菌衛(wèi)生學(xué)實驗的普及和應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出了一種提高細菌培養(yǎng)及表達穩(wěn)定，滿足布魯氏桿菌培養(yǎng)和代謝生化檢定需要的。
[0009]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的，一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特點是在一升餾水中個有效物質(zhì)的含量為:赤蘚醇0.3-0.6g促生長因子1-1.5yg胰蛋白月示18-22g葡萄糖1-1.5g氯化鈉5-8g動物血清45-55ml維生素1.5-2.2 mg氨基酸320-325mg甲基乙醚1:20000多黏菌素B1:4000桿菌肽1:25000放線菌酮1:100000制霉菌素10000單位硫酸鋅2-3yg硫酸錳8-12yg氯化銅Hyg硫酸鈷2-5yg硼酸0.5-0.8yg三氯化鐵25-30yg三氯化鋁8-15yg其制備方法是將上述的除維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚外的組分充分溶解于蒸餾水中，110_120°C滅菌10_20min配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基;在冷卻到45°C以下的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中采用無菌方式加入維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚，混合均勻，其pH值為6.8-7.0〇
[0010]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還可以通過以下技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)，在培養(yǎng)基強化劑中加入有質(zhì)量百分為1-2%的瓊脂。
[0011]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還可以通過以下技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)，所述動物血清為馬血清。
[0012]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還可以通過以下技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)，所述促生長因子為白細胞介素2。
[0013]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還可以通過以下技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)，所述氨基酸為 D-環(huán)絲氨酸。
[0014]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還可以通過以下技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)，所述維生素為維生素也、煙酸和生物素，維生素出、煙酸和生物素的質(zhì)量比為1:0.5:0.3。
[0015]本發(fā)明適于布魯氏桿菌分離檢驗實驗。其所適用于牛、羊、豬肉和牛、羊生乳的布魯氏桿菌污染檢測。
[0016]本發(fā)明的效果是:(1)本培養(yǎng)基強化劑能有效提高布魯氏桿菌的分離效果，提高在培養(yǎng)基中的細菌密度， 抑制雜菌的干擾和結(jié)核桿菌對檢驗的影響；(2)本培養(yǎng)基強化劑可以有效分離不同的布魯氏桿菌，提高可靠性；(3)組分明確，具有較強的通用性，能適用于多種布魯氏桿菌培養(yǎng)；(4)提高布魯氏桿菌分離效果和縮短培養(yǎng)時間，提高布魯氏桿菌的生存時間，可以作為保存培養(yǎng)基使用；(5)成分所用原材料易獲得和價格低廉具有很好的使用成本和經(jīng)濟性；(6)配制及使用方便，適于大規(guī)模生產(chǎn)與使用?！揪唧w實施方式】
[0017]—種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，在一升餾水中個有效物質(zhì)的含量為:赤蘚醇0.3-0.6g促生長因子1-1.5yg胰蛋白月示18-22g葡萄糖1-1.5g氯化鈉5-8g動物血清45-55ml維生素1.5-2.2 mg氨基酸320-325mg甲基乙醚1:20000多黏菌素B1:4000桿菌肽1:25000放線菌酮1:100000制霉菌素10000單位硫酸鋅2-3yg硫酸錳8-12yg氯化銅Hyg硫酸鈷2-5yg硼酸0.5-0.8yg三氯化鐵25-30yg三氯化鋁8-15yg其制備方法是將上述的除維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚外的組分充分溶解于蒸餾水中，110_120°C滅菌10_20min配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基;在冷卻到45°C以下的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中采用無菌方式加入維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚，混合均勻，其pH值為6.8-7.0〇
[0018]在培養(yǎng)基強化劑中加入有質(zhì)量百分為1-2%的瓊脂。在不添加瓊脂的情況下可作為增菌培養(yǎng)基使用。
[0019]所述動物血清為馬血清。所述促生長因子為白細胞介素2。所述氨基酸為D-環(huán)絲氨酸。所述維生素為維生素B1、煙酸和生物素，維生素出、煙酸和生物素的質(zhì)量比為1:0.5:0.3。 所述的蒸餾水為雙蒸餾水。
[0020]以下具體介紹本發(fā)明適于布魯氏桿菌分離培養(yǎng)實驗的【具體實施方式】，提供1個實施例，但是，本發(fā)明的實施不限于以下的實施例。
[0021]實施例1應(yīng)用布魯氏桿菌分離培養(yǎng)對羊肉樣品的檢測。其使用如下:一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，在一升雙蒸餾水組成的含量為: 赤蘚醇〇.5g白細胞介素2lyg膜蛋白月不20g葡萄糖lg氯化鈉5g馬血清50ml煙酸0 ? 5 mg生物素0.3 mg維生素Bi1 mgD-環(huán)絲氛酸321 ? 5mg甲基乙醚1:20000多黏菌素B1:4000桿菌肽1:25000放線菌酮1:100000制霉菌素10000單位硫酸鋅2yg硫酸猛l〇yg氯化銅lyg硫酸鈷2yg硼酸〇.5yg三氯化鐵27yg三氯化鋁l〇yg瓊脂1.5%pH6.8-7.0將所述組分除維生素、白細胞介素2、馬血清、甲基乙醚外充分溶解于蒸餾水中，與115 °C滅菌15min配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基。，將在冷卻到45°C的基礎(chǔ)培養(yǎng)基無菌加入維生素、白細胞介素、2、馬血清、甲基乙醚。
[0022]使用添加了上述營養(yǎng)物添加劑的培養(yǎng)基，將布魯氏桿菌標準濃度菌液做限度檢查培養(yǎng)，以常用的布魯氏桿菌馬鈴薯培養(yǎng)基作為對照于36°C培養(yǎng)73h。
[0023]在不含本發(fā)明布魯氏桿菌馬鈴薯培養(yǎng)基中，最大活菌密度為2.4 X 102細胞/毫升， 細菌生化穩(wěn)定維持在90%以上的時間為193小時。
[0024]在本布魯氏桿菌培養(yǎng)基中，最大活菌密度達到3.6X104細胞/毫升，細菌生化穩(wěn)定活性維持在90%以上的時間為297小時，比對照時提高了53.8%。
【主權(quán)項】
1.一種適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于在一升餾水中個有效 物質(zhì)的含量為:赤蘚醇0.3-0.6g促生長因子1-1.5yg胰蛋白月示18-22g葡萄糖1-1.5g氯化鈉5-8g動物血清45-55ml維生素1.5-2.2 mg氨基酸320-325mg甲基乙醚1:20000多黏菌素B1:4000桿菌肽1:25000放線菌酮1:100000制霉菌素10000單位硫酸鋅2-3yg硫酸錳8-12yg氯化銅Hyg硫酸鈷2-5yg硼酸0.5-0.8yg三氯化鐵25-30yg三氯化鋁8-15yg其制備方法是將上述的除維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚外的組分充分溶解 于蒸餾水中，110_120°C滅菌10_20min配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)基;在冷卻到45°C以下的基礎(chǔ)培養(yǎng) 基中采用無菌方式加入維生素、促生長因子、動物血清、甲基乙醚，混合均勻，其pH值為6.8-7.0〇2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于:在 培養(yǎng)基強化劑中加入有質(zhì)量百分為1-2%的瓊脂。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于:所 述動物血清為馬血清。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于:所 述促生長因子為白細胞介素2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于:所 述氨基酸為D-環(huán)絲氨酸。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適于布魯氏桿菌分離和培養(yǎng)的培養(yǎng)基強化劑，其特征在于:所 述維生素為維生素也、煙酸和生物素，維生素出、煙酸和生物素的質(zhì)量比為1:0.5:0.3。
【文檔編號】C12N1/20GK105969688SQ201610366713
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月30日
【發(fā)明人】陳夢, 陳建, 郭瑛, 周翔, 周文靜, 楊維琴
【申請人】連云港市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心