一種沙旋復(fù)花中標準化提取物及其分析方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種沙旋復(fù)花中標準化提取物及其提取方法和應(yīng)用。從沙旋復(fù)花中共分離得到16個化合物，綜合運用核磁共振光譜、紫外光譜和質(zhì)譜等現(xiàn)代波譜學技術(shù)，鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，新化合物化學式為C21H32O8，晶體顏色為白色，命名為II型澤蘭內(nèi)酯?；钚匝芯堪l(fā)現(xiàn)，化合物IS?10對黃曲條跳甲等害蟲有驅(qū)避作用；化合物IS?3，IS?16有拒食作用，證明沙旋復(fù)花中倍半萜化合物是產(chǎn)生殺蟲活性的有效成分。本發(fā)明還公開了一種標準化的沙旋復(fù)花提取物的制備和定量分析方法，活性測試發(fā)現(xiàn)提取物對黃曲條跳甲等害蟲也具有明顯的趨避和拒食作用。
【專利說明】
一種沙旋復(fù)花中標準化提取物及其分析方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種從草藥中提取的驅(qū)蟲殺蟲化學活性成分及其制備和分析方法，具 體，涉及沙旋復(fù)花中殺蟲化合物及一個新化合物的分離及活性和其標準化驅(qū)蟲殺蟲提取物 的制備和定量分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 沙復(fù)旋花為菊科旋復(fù)花屬植物沙地旋復(fù)花的花及全草，別名禿女子草、黃喇嘛、黃 花嵩、寥子樸。廣泛分布于我國中部和西部地區(qū)，在蒙、冀、晉、陜、新、青海北部和東部和遼 寧西部都有生長。國外分布于蒙古和原蘇聯(lián)中亞地區(qū)。一般在草原、戈壁荒漠、固定的沙丘 以及黃土高原都能生長，在河岸沖積地區(qū)也見生長，對于海拔要求不高，海拔500到2000米 都有分布，在潮濕的沙質(zhì)土，流動沙丘邊緣及河岸沙地上成片生長。是一種適應(yīng)能力強的亞 灌木植物。藥用全草，夏秋采收，曬干備用。味辛性涼，有清熱、利尿的功能。
[0003]已有文獻報道，沙旋復(fù)花提取物具有一定的抑菌殺蟲活性。屈秋耘等研究發(fā)現(xiàn)，沙 旋復(fù)花在驅(qū)蟲殺蟲方面體現(xiàn)出很強的生物活性。它對大皺鰓金龜、蒙古麗金龜、八字白眉天 蛾等三種害蟲均顯示出較高的毒殺效果，三種蟲子死亡率在90%以上。張宏利等研究發(fā)現(xiàn)， 沙旋復(fù)花提取物對粘蟲的拒食和毒殺效果均大于80%，表明其對粘蟲有$父好拒食和毒殺效 果。沙旋復(fù)花在寧夏鹽池縣被作為農(nóng)田雜草處理。
[0004] 林坤等研究沙旋復(fù)花乙醇提取物對小菜蛾的生物活性，研究過程中作者在室內(nèi)測 定了沙旋復(fù)花乙醇提取物對3齡小菜蛾幼蟲的觸殺、拒食、產(chǎn)卵忌避、胃毒、抑制生長發(fā)育5 種生物活性作用。結(jié)果表明：沙旋復(fù)花乙醇提取物對小菜蛾3齡幼蟲有很明顯的觸殺和拒食 活性，校正死亡率和拒食率均隨提取物濃度的升高而增大；乙醇提取物對小菜蛾也有胃毒、 抑制生長發(fā)育等活性。趙堂等也以小菜蛾為試蟲，對沙旋復(fù)花不同部位乙醇提取物進行殺 蟲活性比較，篩選出活性最高部位，然后采用不同溶劑對其進行萃取分，得到不同溶劑萃取 物后測試各萃取物對小菜蛾的觸殺和拒食活性。結(jié)果表明，沙旋復(fù)花乙醇提取氯仿萃取物 對小菜蛾的活性最好，且全草相較于其他各部位(花、葉、根、莖等)對小菜蛾的觸殺和拒食 活性最高。推斷這應(yīng)該是由于沙旋復(fù)花各部位所產(chǎn)生的協(xié)同效果，即全草中含有的殺蟲活 性成分較任一部位都高的緣故，各部位提取物在一起產(chǎn)生了增效作用。沙旋復(fù)花對小菜蛾 拒食活性隨著處理時間的增長，效果逐漸減弱，可能是沙旋復(fù)花中有拒食活性的成分易揮 發(fā)或者小蟲體內(nèi)產(chǎn)生耐藥性而導致活性持續(xù)期短。
[0005] 在篩選抗腫瘤植物時，陳杰等發(fā)現(xiàn)沙旋復(fù)花中的乙醚部位對白血病P-388細胞具 有較強的抑制作用。1994年，Bing-Nan Zhou等人從沙旋復(fù)花中分得兩個新的倍半砲內(nèi)酯 15-去氧沙地旋復(fù)花內(nèi)酯inulasalsolin和沙地旋復(fù)花內(nèi)酯inulasalsolide，和兩個已知的 化合物eupatolide和budlein B，并發(fā)現(xiàn)15-去氧沙地旋復(fù)花內(nèi)酯（inulasalsolinWPP^liil 旋復(fù)花內(nèi)酯（inulasal so 1 ide)對KB和P-388細胞株顯示出強烈的的細胞毒理活性。國內(nèi)學 者近年來報道的沙旋復(fù)花的藥理活性研究比較少，李玉平等報道發(fā)現(xiàn)沙旋復(fù)花具有很強的 抑菌活性，對小麥赤霉、蘋果炭疽、辣椒疫霉、玉米大斑等多種病原菌有100%的抑制率。
[0006] 傳統(tǒng)化學農(nóng)藥的長期使用帶來了種種弊端，如有害生物抗藥性的產(chǎn)生、殘留毒性 以及環(huán)境污染等等。社會的發(fā)展、公眾的需要，促使人們在微生物學、植物化學等不同方面 尋求對人類健康和生態(tài)環(huán)境安全的新型有害生物控制劑。本課題基于陜北豐富的防風固沙 天然植物資源沙旋復(fù)花，擬初步研究出其活性部位，為研制開發(fā)出用于高效防治有害生物 的植物源殺蟲劑打下理論基礎(chǔ)，必將充分體現(xiàn)出我國的現(xiàn)代特色農(nóng)業(yè)科技發(fā)展的特色。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種沙旋復(fù)花中標準化提取物及其提取方法和應(yīng) 用。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0009] 一種沙旋復(fù)花中標準化提取物，該提取物包括如下成分：巴德萊茵.B:2.122mg/g; 卵南美菊素:〇.544mg/g;沙地旋復(fù)花內(nèi)酯：1.101mg/g ; 15-去氧沙地旋復(fù)花內(nèi)酯:0.855mg/ g; 4α，5β-環(huán)氧卵南美菊素：0 · 669mg/g;澤蘭內(nèi)酯：11 · 199mg/g;序菜素:0 · 362mg/g;總量為 16.852mg/g〇
[0010] 從沙旋復(fù)花中分離得到的一個新化合物的化學式為c21h32〇8,晶體顏色為白色，命 名為eupato 1 ide-II，結(jié)構(gòu)中共有21個碳原子，包括3個季碳原子，11個叔碳原子CH，5個仲碳 原子CH2和2個伯碳CH 3;結(jié)構(gòu)中有一個羰基信號δ178.36((Μ2)，四個烯碳原子信號δ139.21 (C-4)和δ136· 18(01)，δ132.01(05)，δ128.04(010)，一個連氧異頭碳信號δ103·13(Ο Γ )，且δ 103 · 13，76 · 70，73 · 65，68 · 80，61 · 04，57 · 02為一組葡萄糖信號；5個仲碳原子，分別 為δ67.82(013)，61·04(06'），42.07(09)，38.59(03)和25.24(02); 11個叔碳原子除去 糖環(huán)上的6個，剩下為5132.01(05)，128.04(010)，57.02((：-4'），48.54((：-7)和38.46((：-11);兩個季碳為316.45((：-15)，13.26((：-14) ;異頭碳信號6103.13((：-1'）與氫信號64.12 (Η-Γ)直接相連。
[0011] 為解決上述問題，本發(fā)明還提供了一種沙旋復(fù)花中標準化提取物和新化合物的提 取方法，包括如下步驟：
[0012] S1、取干燥沙旋復(fù)花全草10kg，粉碎后用6倍體積的90%乙醇水溶液室溫冷浸三 次，每次24h，過濾，濃縮濾液，得0.93kg黑棕色膏狀物，并回收溶劑；
[0013] S2、將步驟S1所得的膏狀物用適當?shù)乃稚⒑螅来斡枚燃淄?，乙酸乙酯分別萃 取三次，每個萃取部位再分別濃縮至浸膏，分別得到308.8g二氯甲烷萃取物，81.62g乙酸乙 酯萃取物，297. Og水層部分；
[0014] S3、將補助S1所得的濾渣部分繼續(xù)用水冷浸提取，三次，每次24h，濃縮至浸膏，得 沙旋復(fù)花水提取物；
[0015] S4、將步驟S2所得的二氯甲烷層，用300g硅膠拌樣，旋蒸干后上lkg硅膠柱，以石油 醚-乙酸乙酯梯度洗脫后，用甲醇沖洗，洗脫過程中根據(jù)TLC檢測結(jié)果，合并相同部分洗脫液 并濃縮，得到l〇g Fr. 1，12g流分Fr.3，18g流分Fr.4，10g流分Fr.5,8g流分Fr.6，F(xiàn)r.7;
[0016] S5、將上述所得的流分進行分離操作
[0017] S51、將步驟S4所得的流分Fr. 2,經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，將 其劃分為4段Fr2-1-Fr2-4,將Fr2-3流分，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯和石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，反復(fù)重結(jié)晶得到化合物36mg IS-7，54mg IS-8，將Fr2-4經(jīng)反復(fù)硅膠層 析得到化合物15mg IS-9;
[0018] S52、將步驟S4所得的流分Fr. 3,經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫 過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr3-1-Fr3-3,將Fr3-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，得 到化合物6mg IS-l，100mg IS-5,24mg IS-14;
[0019] S53、將步驟S4所得的流分Fr.4,經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫 過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到4段Fr4-1-Fr4-4，將Fr4-2流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，得 到化合物18mg IS-2，10mg IS-4;將Fr4-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié)合MCI CHP-20P，得 到化合物 18mg IS-3，10mg IS-6，14mg IS-12;
[0020] S54、將步驟S4所得的流分Fr. 5,經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，洗脫過 程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到5段Fr5-1-Fr5-5,將Fr5-1流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié) 合Sephadex LH-20得到化合物18mg IS-10，10mg IS-17;將Fr5-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析， 并結(jié)合MCI CHP-20P，得到化合物45mg IS-ll，10mg IS-13;將Fr5-4流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層 析，純化得到化合物7mg IS-15;
[0021] S55、將步驟S4所得的流分Fr.6,經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，洗脫過 程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr6-1-Fr6-3,將Fr6-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié) 合MCI CHP-20P，得到化合物 14mg IS-16。
[0022] 其中，所述步驟S4中的硅膠為100-200目；步驟S5中硅膠為200-300目。
[0023] 其中，所述步驟S4中石油醚-乙酸乙酯的梯度為200:1-0:1;所述步驟S51中石油 醚-乙酸乙酯的梯度為100:1-5:1;步驟S52中石油醚-乙酸乙酯的梯度為60:1-0:1;步驟S53 中石油醚-乙酸乙酯的梯度為40:1 -0:1。
[0024] 其中，所述步驟S55中二氟甲烷-甲醇的梯度為60:1-1:1 [0025]本發(fā)明具有以下有益效果：
[0026] 從沙旋復(fù)花90%乙醇提取物的醋酸乙酯部位，經(jīng)硅膠，MCI CHP-20P，Sephadex LH-20羥丙基葡聚糖凝膠等各種柱層析色譜分離方法，并結(jié)合TLC跟蹤檢測以及HPLC純度分 析，從其中分離得到17個化合物，綜合運用核磁共振光譜（ 13C-匪R、匪R、COSY、 圓8(：、圓〇(：4(^5￥)、紫外光譜(群)和質(zhì)譜江1-15)等現(xiàn)代波譜學技術(shù)，鑒定了其結(jié)構(gòu)。包括1 個單砲類化合物:cis-1-p-Menthene-3，6-diol (IS-1); 12個倍半砲類化合物(含一個新化 合物）：巴德萊茵.B(IS_2)，l-Cyclodecene-2，5,6,9_tetrol，l，8-dimethyl-7-(l-methy 1 ethy 1)-，[ (2α，5β，6α，7α，8β，9α) ] (IS_3)，沙地旋復(fù)花內(nèi)酯，4α，5β-Εροχγ_8β-hydroxy-14-〇xoacanthospermolide(IS-5)，卵南美菊素（Ovatifolin，IS-9)，15-去氧沙地 旋復(fù)花內(nèi)酯（Inulasalsolin，IS-10)，4α，5β_環(huán)氧卵南美菊素（4α，5P_Epoxyovatifolin， 13_11)，沙地旋復(fù)花內(nèi)酯13(111111&8&18〇11(16 13，13-12)，澤蘭內(nèi)酯化卯&1:〇11(16，13-13)，11 β，13-二氫澤蘭內(nèi)酯（11β，13-dihydr〇-Eupatolide，IS-14)，II型澤蘭內(nèi)酯（eupatolide-11，15-15)，1個黃酮類化合物 :芹菜素以?1861^11，15-16)和3個留體類化合物:0-谷留醇(0-sitosterol，IS-6)，豆留醇（Stigmasterol，IS-7)，胡蘿卜戒（Daucosterol，IS-8)。
【附圖說明】
[0027] 圖1為本發(fā)明實施例中一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的分子結(jié)構(gòu)圖。
[0028] 圖2為本發(fā)明實施例中一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的提取流程圖。
[0029] 圖3為本發(fā)明實施例中一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0030] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步 詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0031] 如圖1所示，本發(fā)明實施例提供了一種沙旋復(fù)花中標準化提取物，該提取物包括如 下成分:巴德萊茵·Β:2· 122mg/g;卵南美菊素:0.544mg/g;沙地旋復(fù)花內(nèi)酯：1 · 101mg/g; 15-去氧沙地旋復(fù)花內(nèi)酯：0.855mg/g ; 4α，5β-環(huán)氧卵南美菊素：0.669mg/g ;澤蘭內(nèi)酯： 11.199mg/g;芹菜素:0.362mg/g;總量為16.852mg/g。從沙旋復(fù)花中分離得到的一個新化合 物的化學式為C21H32O8，晶體顏色為白色，分子量412.47。
[0032]其Η譜和C譜數(shù)據(jù)如下表所示。
[0033]表1沙旋復(fù)花中標準化提取物的Η譜和C譜(DMS〇-d6)

[0036]如圖2所示，上述的提取物通過以下方法制備：
[0037] S1、取干燥沙旋復(fù)花全草10kg，粉碎后用6倍體積的90 %乙醇水溶液室溫冷浸三 次，每次24h，過濾，濃縮濾液，得0.93kg黑棕色膏狀物，并回收溶劑；
[0038] S2、將步驟S1所得的膏狀物用適當?shù)乃稚⒑?，依次用二氯甲烷，乙酸乙酯分別萃 取三次，每個萃取部位再分別濃縮至浸膏，分別得到308.8g二氯甲烷萃取物，81.62g乙酸乙 酯萃取物，297.0g水層部分；
[0039] S3、將補助S1所得的濾渣部分繼續(xù)用水冷浸提取，三次，每次24h，濃縮至浸膏，得 沙旋復(fù)花水提取物；
[0040] S4、將步驟S2所得的二氯甲烷層，用300g硅膠（100-200目）拌樣，旋蒸干后上lkg硅 膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（200:1-0:1)梯度洗脫后，用甲醇沖洗，洗脫過程中根據(jù)TLC檢測 結(jié)果，合并相同部分洗脫液并濃縮，得到l〇g Fr. 1，12g流分Fr. 3，18g流分Fr. 4，10g流分 Fr · 5，8g 流分 Fr · 6，F(xiàn)r · 7;
[0041] S5、將步驟S4所得的流分Fr. 2,經(jīng)硅膠（200-300目）柱層析，以石油醚-乙酸乙酯 (100:1-5:1)梯度洗脫，將其劃分為4段?"-14^-4。其中？^-3流分，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析 (200-300目），石油醚-乙酸乙酯和石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，反復(fù)重結(jié)晶得到化合物 36mg IS-7,54mg IS-8,將Fr2-4(220mg)經(jīng)反復(fù)硅膠層析得到化合物15mg IS-9;
[0042] 將步驟S4所得的流分Fr. 3,經(jīng)硅膠(200-300目）柱層析，石油醚-乙酸乙酯(60:1-0 :1)梯度洗脫，洗脫過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr3-1-Fr3-3,將Fr3-3流分經(jīng) 反復(fù)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)、二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），得到化合物6mg IS-1， 100mg IS-5,24mg IS-14;
[0043] 將步驟S4所得的流分Fr.4,經(jīng)硅膠(200-300目）柱層析，石油醚-乙酸乙酯(40:1-0 :1)梯度洗脫，洗脫過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到4段Fr4-1-Fr4-4,將Fr4-2流分經(jīng) 反復(fù)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），得到化合物18mg IS-2，10mg IS-4;將Fr4-3流 分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），并結(jié)合MCI CHP-20P(甲醇-水），得到化合 物18mg IS-3，10mg IS-6，14mg IS-12;
[0044] 將步驟S4所得的流分Fr. 5,經(jīng)硅膠(200-300目）柱層析，二氯甲烷-甲醇（60:1-1: 1)梯度洗脫，洗脫過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到5段Fr5-1-Fr5-5,將Fr5-1流分經(jīng)反 復(fù)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），并結(jié)合Sephadex LH_20(甲醇-水)得到化合物 18mg IS-10，10mg IS-17;將Fr5-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），并結(jié) 合MCI CHP-20P(甲醇-水），得到化合物45mg IS-ll，10mg IS-13;將Fr5-4流分經(jīng)反復(fù)硅膠 柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），純化得到化合物7mg IS-15;
[0045] 將步驟S4所得的流分Fr.6,經(jīng)硅膠(200-300目）柱層析，二氯甲烷-甲醇（60:1-1: 1)梯度洗脫，洗脫過程TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr6-1-Fr6-3,將Fr6-3流分經(jīng)反 復(fù)硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），并結(jié)合MCI CHP-20P(甲醇-水），得到化合物14mg IS-16〇
[0046] 上述沙旋復(fù)花提取物的分析方法，包括以下步驟：
[0047]步驟一、標準溶液的制備
[0048]用電子天平準確稱取上述7個化合物1. Omg標準品（精確至0.001 g)，用0.2mL甲醇 溶解，并定容至l.OmL容量瓶中，冷凍保存。分別取1(^1^、4(^1^、8(^1^、15(^1^、20(^1^上述標準 溶液至1 .OmL容量瓶中，用甲醇定容，混勾后配制成濃度為10mg/L、40mg/L、80mg/L、150mg/ L、200mg/L的系列標準溶液。4°C下保存待用。
[0049] 步驟二、HPLC方法
[0050] 表2 HPLC分析方法
[0051]
[0052] 色譜柱：Phenomenex Luna C-18(250mmX4.6mm 5um)
[0053] 柱溫：20 Γ
[0054] 流動相:Α(水)-C(乙腈）
[0055] 流速：lmL/min
[0056] 檢測波長：210nm
[0057] 步驟三、線性關(guān)系考查
[0058]用高效液相色譜儀分析表2中所配制的各化合物的系列標準溶液，進樣量6yL，分 別記錄各標準液的峰面積。繪制標準曲線時，以標準溶液濃度為橫坐標，以其相應(yīng)峰面積為 縱坐標，標準曲線及其各參數(shù)見表3。結(jié)果表明，各化合物濃度在10-200mg/L范圍內(nèi)時峰面 積與濃度呈良好的線性關(guān)系，R 2值均大于0.999。
[0059] 表3 7個化合物標準曲線 [0060]
[0061]
[0062]供試品溶液的制備
[0063] 準確稱取兩種沙旋復(fù)花樣品各10.0g，加入40mL90 %乙醇，70°超聲提取兩次，每次 2h，合并濾液后真空濃縮定容至10mL，上清液經(jīng)0.22μπι微孔濾膜過濾后4°C下保存待用。 [0064]樣品中各化合物含量測定
[0065]精密吸取60yL供試品溶液，用高效液相色譜儀進行測定。對比保留時間以及紫外 圖譜，確定各單體化合物在供試品溶液中的出峰位置。并記錄提取物中各化合物的峰面積， 利用標準曲線法計算各化合物在總的植物提取物中的含量，平行測定三次。計算結(jié)果見表 4〇
[0066]表4沙旋復(fù)花中各化合物含量
[0067]
[0068] b提取率=提取液中的固體含量/樣品量.
[0070] 化合物提取物對黃曲條跳甲的驅(qū)避和拒食效果研究
[0071] 在同一個培養(yǎng)皿里放2片葉(未受害的，面積一樣均為20平方厘米），一片處理、一 片對照。然后放入10頭黃曲條跳甲，24小時后調(diào)查處理和對照上面的蟲口數(shù)，根據(jù)差異得到 驅(qū)避效果;調(diào)查兩者的受害面積，得到忌食效果。把菜葉直接浸在藥液里然后馬上取出來， 藥液干后放入試蟲。每種藥劑做3個重復(fù)。結(jié)果表明這12個樣品沒有體現(xiàn)出明顯的拒食或者 殺蟲活性。
[0072] 表5沙旋復(fù)花提取物及單體化合物對黃曲條跳甲的驅(qū)避和拒食效果選擇性實驗研 究
[0075] 非選擇性實驗
[0076] 把處理和對照葉片（面積為20平方厘米)分別單獨放在2個培養(yǎng)皿里，其它步驟同 選擇性實驗一樣，放的蟲量是選擇性實驗的一半，5頭。非選擇性實驗結(jié)果表明，化合物4對 黃曲條跳甲具有趨避活性，趨避率達到69.99%。而化合物1和5具有拒食活性，拒食率分別 為47.06%和65.22%。
[0077] 化合物4:13-4(1-。丫。1〇(16。6116-2,5,6,9-七61：1'〇1，1，8-(1;[11161:1171-7-(1-methylethyl)-，[(2α，5β，6α，7α，8β，9α)])
[0078] 化合物 1: IS-10(新化合物，eupatolide-II)
[0079] 化合物5:1S-5(去氧沙地旋復(fù)花內(nèi)酯）
[0080] 表6沙旋復(fù)花提取物及單體化合物對黃曲條跳甲的驅(qū)避和拒食效果非選擇性實驗 研究
[0081]

[0083]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，對發(fā)明而言僅僅是說明性的，而非限制性的。 本專業(yè)技術(shù)人員理解，在發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)可對其進行許多改變，修改，甚至等 效，但都將落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。本實驗研究表明，沙旋復(fù)花中的倍半萜類化合物是其 具有殺蟲活性的基礎(chǔ)，尤其是化合物4(1-0}^1〇(16〇6116-2,5,6,9-七61：1'〇1，1，8-(1;[11161:1171-7-(11161:117161:1171)-，[(2€[，50，6€[，7€[，80，9€[)])、化合物1(6卯31:〇1丨(16-11)、化合物5(去氧沙 地旋復(fù)花內(nèi)酯)等對害蟲黃曲條跳甲具有明顯的趨避及拒食活性，且標準化的提取物的殺 蟲活性也是基于此。另外，本發(fā)明對于化合物活性研究部分，選擇的是害蟲黃曲條跳甲，但 前述【背景技術(shù)】里引用文獻可知，沙旋復(fù)花中標準化提取物對于其他類的農(nóng)田害蟲例如粘 蟲、小菜蛾等，也具有同等的趨避以及拒食作用。對于沙旋復(fù)花中的倍半萜內(nèi)酯類化合物所 具有的其他廣泛生物活性，例如抗菌抗炎、抗腫瘤等活性，也將落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種沙旋復(fù)花中標準化提取物，其特征在于，該提取物包括如下成分：巴德萊茵.B: 2.122mg/g;卵南美菊素：0.544mg/g;沙地旋復(fù)花內(nèi)酯：1 · 101mg/g; 15-去氧沙地旋復(fù)花內(nèi) 酯：〇.85511^/^;4(1，50-環(huán)氧卵南美菊素：〇.66911^/^ ;澤蘭內(nèi)酯：11.19911^/^;芹菜素： 0.362mg/g;總量為16.852mg/g。從沙旋復(fù)花中分離得到的一個新化合物的化學式為 C21H32〇8，晶體顏色為白色，結(jié)構(gòu)中共有21個碳原子，包括3個季碳原子，11個叔碳原子CH，5個 仲碳原子CH 2和2個伯碳CH3;結(jié)構(gòu)中有一個羰基信號δ178.36((Μ2)，四個烯碳原子信號δ 139.21(04)和3136.18(01)，3132.01(05)，3128.04((：-10)，一個連氧異頭碳信號5 103.13(〇1'），且5103.13,76.70,73.65,68.80,61.04,57.02為一組葡萄糖信號；5個仲碳 原子，分別為δ67.82(013)，61·04(06'），42·07(09)，38.59(03)和25.24(02); 11 個叔 碳原子除去糖環(huán)上的 6個，剩下為 S132.01(C-5)，128.04(C-10)，57.02(C-4'），48.54(C_7) 和 38.46(C-11);兩個季碳為 616.45(〇15)，13.26((：-14);異頭碳信號6103.13((：-1'）與氫 信號δ4.12(Η-Γ)直接相連。2. -種沙旋復(fù)花中標準化提取物和新化合物的提取方法，其特征在于，包括如下步驟： 51、 取干燥沙旋復(fù)花全草10kg，粉碎后用6倍體積的90%乙醇水溶液室溫冷浸三次，每 次24h，過濾，濃縮濾液，得0.93kg黑棕色膏狀物，并回收溶劑； 52、 將步驟S1所得的膏狀物用適當?shù)乃稚⒑?，依次用二氯甲烷，乙酸乙酯分別萃取三 次，每個萃取部位再分別濃縮至浸膏，分別得到308.8g二氯甲烷萃取物，81.62g乙酸乙酯萃 取物，297. Og水層部分； 53、 將補助S1所得的濾渣部分繼續(xù)用水冷浸提取，三次，每次24h，濃縮至浸膏，得沙旋 復(fù)花水提取物； 54、 將步驟S2所得的二氯甲烷層，用300g硅膠拌樣，旋蒸干后上lkg硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫后，用甲醇沖洗，洗脫過程中根據(jù)TLC檢測結(jié)果，合并相同部分洗脫液并 濃縮，得到 1 〇g Fr · 1，12g流分Fr · 3，18g流分Fr · 4，1 Og流分Fr · 5，8g流分Fr · 6，F(xiàn)r · 7; 55、 將上述所得的流分進行分離操作 551、 將步驟S4所得的流分Fr. 2,經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，將其劃 分為4段Fr2-1-Fr2-4,將Fr2-3流分，經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯和石油醚-丙酮 系統(tǒng)梯度洗脫，反復(fù)重結(jié)晶得到化合物36mg IS-7,54mg IS-8,將Fr2-4經(jīng)反復(fù)硅膠層析得 到化合物15mg IS-9; 552、 將步驟S4所得的流分Fr. 3,經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫過程 TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr3-1-Fr3-3,將Fr3-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，得到化 合物6mg IS-l，100mg IS-5,24mg IS-14; 553、 將步驟S4所得的流分Fr.4,經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，洗脫過程 TLC跟蹤檢測，合并相同組分得到4段Fr4-1-Fr4-4,將Fr4-2流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，得到化 合物18mg IS-2，10mg IS-4;將Fr4-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié)合MCI CHP-20P，得到化 合物 18mg IS-3，10mg IS-6，14mg IS-12; 554、 將步驟S4所得的流分Fr.5,經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，洗脫過程TLC 跟蹤檢測，合并相同組分得到5段Fr5-1-Fr5-5,將Fr5-1流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié)合 Sephadex LH-20得到化合物18mg IS-10，10mg IS-17;將Fr5-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并 結(jié)合MCI CHP-20P，得到化合物45mg IS-ll，10mg IS-13;將Fr5-4流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析， 純化得到化合物7mg IS-15; S55、將步驟S4所得的流分Fr. 6，經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，洗脫過程TLC 跟蹤檢測，合并相同組分得到3段Fr6-1-Fr6-3,將Fr6-3流分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，并結(jié)合MCI CHP-20P，得到化合物 14mg IS-16。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的提取方法，其特征在于，所述 步驟S4中的硅膠為100-200目；步驟S5中硅膠為200-300目。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的提取方法，其特征在于，所述 步驟S4中石油醚-乙酸乙酯的梯度為200:1 -0:1;所述步驟S51中石油醚-乙酸乙酯的梯度為 100:1-5:1;步驟S52中石油醚-乙酸乙酯的梯度為60:1-0:1;步驟S53中石油醚-乙酸乙酯的 梯度為40:1-0:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的提取方法，其特征在于，所述 步驟S55中二氯甲烷-甲醇的梯度為60:1-1: 1。6. 如權(quán)利要求1所述的一種沙旋復(fù)花中標準化提取物的應(yīng)用，其特征在于，用于黃曲條 跳甲等害蟲的驅(qū)避殺蟲。
【文檔編號】A01P17/00GK105985390SQ201610066033
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2016年1月25日
【發(fā)明人】白乃生, 白璐, 劉慶超, 張麗, 郭森, 張鑫鑫, 郭靜
【申請人】西北大學