一種依諾肝素的純化方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種依諾肝素的純化方法，包括以下步驟：a、設(shè)備預(yù)準(zhǔn)備；b、參數(shù)設(shè)置；c、換鹽水、乙醇、水超濾；d、完成超濾；e、凍干檢測。在依諾肝素生產(chǎn)中，往往需要經(jīng)過水解液醇沉這一工序得到依諾肝素粗品。由于該工序消耗大量乙醇溶劑、醇沉?xí)r間較長、醇沉以后的樣品需要進(jìn)行烘干，從而導(dǎo)致了生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)周期長，而且?guī)砹艘恍┥a(chǎn)弊端，例如溶劑揮發(fā)的安全隱患。本發(fā)明提供的純化依諾肝素的方法，在超濾過程中依次采用鹽水、乙醇、水換液，替代了依諾肝素合成生產(chǎn)過程中的醇沉步驟，去除了醇沉和粗品烘干的工序，縮短操作時間，提高效率，縮短了產(chǎn)品生產(chǎn)周期，消除了工藝上的一些安全隱患，簡化了工藝。
【專利說明】
一種依諾肝素的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及依諾肝素的領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及依諾肝素的純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝素鈉（ifeparin)是一種在臨床應(yīng)用有近百年歷史的天然黏多糖類生物活性藥 物，由右旋葡萄糖醛酸和右旋葡萄糖胺交替連接而成，平均分子量為15, 000道爾頓，廣 泛存在于人和哺乳動物組織中。肝素鈉具有很強(qiáng)的抗凝血、抗血栓功能，是預(yù)防手術(shù)后血栓 形成和治療急性靜脈血栓的首選藥物。但是長期使用普通肝素鈉，會產(chǎn)生誘導(dǎo)血小板減少 癥的風(fēng)險，從而導(dǎo)致血栓癥和死亡率的增加。
[0003] 依諾肝素鈉 （Enoxaparin Sodium)為低分子肝素類（low molecular weight heparin，簡稱LMWH)的一種。與肝素鈉相比，依諾肝素不僅具有相似的抗血栓、抗凝血、治 療急性心梗和不穩(wěn)定性心絞痛等功效，還能使引起血小板減少的副作用明顯降低，出血并 發(fā)癥減少，具有皮下注射吸收好、體內(nèi)半衰期較長等諸多優(yōu)點(diǎn)。與普通肝素鈉相比，依諾肝 素適應(yīng)性比較廣泛，具有更廣闊的市場前景。目前，依諾肝素生產(chǎn)主要包括如下流程：肝素 鈉經(jīng)過芐索氯銨成鹽和酯化，酯化物在堿性條件下裂解，反應(yīng)液用乙醇溶液醇沉，沉淀烘干 后透析/超濾，最后凍干等步驟得到藥用級依諾肝素。
[0004] 當(dāng)前依諾肝素鈉純化手段中，在肝素芐基酯水解后，水解液需要進(jìn)行醇沉，醇沉樣 品烘干，然后進(jìn)行超濾或透析得到符合原料藥標(biāo)準(zhǔn)的依諾肝素產(chǎn)品。醇沉的主要目的是通 過加入乙醇從水解液中析出依諾肝素粗品，同時去除在水解中產(chǎn)生的少量有機(jī)小分子如芐 醇等。水解液醇沉?xí)r，一般加入水解液3-4倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，這一過程中，水解液需 要靜置24-48h乃至更長時間，且醇沉出來樣品顆粒較小并黏在容器底部，使用抽濾和離心 等現(xiàn)有技術(shù)分離時比較困難。醇沉后的樣品，經(jīng)過烘箱烘干，然后進(jìn)行超濾凍干精制?，F(xiàn)有 的生產(chǎn)工藝存在一些不容忽視的弊端，例如醇沉?xí)r間過長導(dǎo)致整個生產(chǎn)過程耗時長，生產(chǎn) 效率低下，醇沉的生產(chǎn)放大存在限制，也帶來溶劑的巨大浪費(fèi)、溶劑揮發(fā)等問題，同時大量 乙醇的使用還有安全上的隱患。大量依諾肝素粗品黏在容器底部，醇沉樣品很難被完全取 出烘干。由于水解液體積較大，所以導(dǎo)致容器很大，給生產(chǎn)帶來很大的不便。烘干時由于樣 品中仍有部分乙醇?xì)埩簦矌砹松a(chǎn)安全隱患，對生產(chǎn)車間和設(shè)備也有了額外的要求。該 發(fā)明旨在提出一種純化依諾肝素的簡便方法，通過在超濾過程中換鹽水-乙醇-水，替代生 產(chǎn)過程中的醇沉步驟，去除了醇沉和烘干的工序，從而能夠減小生產(chǎn)周期、節(jié)約生產(chǎn)成本、 消除安全隱患，且整個純化過程操作簡單，易于放大，依諾肝素得率較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在采用超濾中換乙醇的方法，提供一種使用超濾純化依諾肝素的工藝， 從而克服現(xiàn)有生產(chǎn)工藝的不足，避免了醇沉這一操作，一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效 溫和，縮短生產(chǎn)時間，降低成本。
[0006] 為解決醇沉耗時以及溶劑消耗問題，本發(fā)明采用的一個技術(shù)方案是提供了一種使 用超濾純化依諾肝素的方法，包括以下步驟： a、 預(yù)準(zhǔn)備：將肝素芐基酯水解液，經(jīng)中性濾紙和微孔濾膜過濾后裝至端口處理容器中， 并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、 參數(shù)設(shè)置：壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，連接超濾軟件進(jìn) 行參數(shù)設(shè)置；設(shè)置蠕動栗的流速：開啟蠕動栗，通過蠕動栗從端口處理器中抽取依諾肝素 溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測器， 依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動反壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中； 設(shè)置日期和過濾組件零件號等。然后設(shè)置并逐步提高TMP，來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的 流速。
[0007] C、換鹽水、乙醇、水超濾階段：在緩沖液容器中加入鹽水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉 狀態(tài)，當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器中鹽水吸 入，依諾肝素溶液進(jìn)入換鹽水階段，然后依次進(jìn)行換乙醇和換純水，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的 脫除. d、 完成超濾：通過測定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時，依諾肝 素溶液完成超濾，濃縮依諾肝素至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉 蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備； e、 指標(biāo)檢測：將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計算收率，產(chǎn)品GPC指標(biāo)檢測。
[0008] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的水解液為肝素芐基酯在堿性條件下水解，水 解后調(diào)pH 6-7,加 NaCl攪拌溶解，經(jīng)中性濾紙和0. 45 μ m水膜過濾得到。
[0009] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的肝素芐基酯為肝素芐索氯胺鹽與氯化芐發(fā)生 酯化反應(yīng)得到。
[0010] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的肝素芐索氯銨鹽為肝素與芐索氯銨發(fā)生成鹽 反應(yīng)得到。
[0011] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，整個超濾過程包括換鹽水、換乙醇、換水以及濃縮階 段。
[0012] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的超濾設(shè)備為KR2i切向流超濾系統(tǒng)。包括中空 纖維膜過濾器、滲透天平、壓力檢測器、壓力傳感器、蠕動栗、緩沖液容器。
[0013] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的中空纖維膜過濾器上設(shè)置有三個接口，包括 滲透口、膜上出液口以及膜上回流液口，所述的滲透口設(shè)置在中空纖維膜過濾器的一側(cè)中 部與滲透鉗相連接，所述的膜上回流液口和膜上出液口分別安裝在中空纖維膜過濾器的頂 部和底部。
[0014] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的中空纖維膜過濾器組件分別與自動反壓閥和 壓力監(jiān)測器相連接，所述的端口處理容器連接在自動反壓閥和壓力監(jiān)測器之間，所述的緩 沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計算機(jī)與壓力監(jiān)測器外接，所述的液體收集器放 置在滲透天平上面，所述的壓力監(jiān)測器設(shè)置在蠕動栗上。
[0015] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的懦動栗的流速600-700mL/min。
[0016] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的中空纖維膜組件包括中空纖維膜過濾器以及 在中空纖維膜過濾器內(nèi)部的790cm 2超濾膜。
[0017] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的超濾膜為聚醚砜改性膜，截留分子量lkD。
[0018] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述的壓力傳感器包 括PP壓力傳感器、pr壓力傳感器和pf壓力傳感器，所述的PP壓力傳感器和pf壓力傳感 器分別安裝在膜上出液口和膜上回流液口的位置，所述的pr壓力傳感器安裝在滲透口的 位置。
[0019] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提出了一種用鹽水-乙醇-水超濾純化依諾肝素的 方法，在依諾肝素純化過程中去除了乙醇醇沉，粗品需要烘干的步驟，生產(chǎn)周期減少，降低 了能耗，降低了生產(chǎn)成本，能夠一步實(shí)現(xiàn)除雜脫鹽濃縮，快速，高效溫和，縮短操作時間和可 操作性。
【附圖說明】
[0020] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使 用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它 類似的實(shí)施圖例，其中： 圖1是本發(fā)明純化依諾肝素的方法一較佳實(shí)施例的流程圖； 圖2是本發(fā)明純化依諾肝素使用設(shè)備的結(jié)構(gòu)框圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面通過本發(fā)明的一部分實(shí)施例，對實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述， 但所描述的實(shí)施例不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒 有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0022] 請參閱圖1，本發(fā)明實(shí)施例包括： a、 預(yù)準(zhǔn)備：將肝素芐基酯水解液，經(jīng)中性濾紙和0. 45 μ m水膜過濾后裝至端口處理容 器中，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、 參數(shù)設(shè)置：壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，連接超濾軟件進(jìn) 行參數(shù)設(shè)置；設(shè)置蠕動栗的流速：開啟蠕動栗，通過蠕動栗從端口處理器中抽取依諾肝素 溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測器， 依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動反壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中； 設(shè)置并逐步提高TMP，來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的流速。
[0023] c、換鹽水、乙醇、水超濾階段：在緩沖液容器中加入鹽水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉 狀態(tài)，當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器中鹽水吸 入，依諾肝素溶液進(jìn)入換鹽水階段，然后依次進(jìn)行換乙醇和換純水，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的 脫除。
[0024] d、完成超濾：通過測定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時，依 諾肝素溶液完成超濾，濃縮依諾肝素至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)， 關(guān)閉蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備； e、指標(biāo)檢測：將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計算收率，產(chǎn)品GPC指標(biāo)檢測。
[0025] 上述中，步驟b中的參數(shù)設(shè)置包括： 1.日期； 2. 過濾組件零件號，輸入過濾零件號后，包括表面積、近似纖維支數(shù)、纖維長度、剪切率 指南及膜類型在內(nèi)的過濾信息會自動輸入； 3. 序號； 4. 通過栗頭和管道校正的管道尺寸，例如：tubing size: 18。
[0026] 5.組件表格日期。
[0027] 完成超濾后，需要外接10ml純凈水沖洗超濾管道并收集，然后50mL純凈水沖洗超 濾系統(tǒng)，最后使用〇. 4%氫氧化鈉溶液清洗超濾膜，并濕潤保存。
[0028] 進(jìn)一步的，所述的懦動栗的流速為600-700mL/min。
[0029] 如圖2所示，所述的滲透天平通過滲透鉗與中空纖維膜組件相連接，所述的中空 纖維膜組件分別與自動反壓閥和壓力監(jiān)測器相連接，所述的端口處理容器連接在自動反壓 閥和壓力監(jiān)測器之間，所述的緩沖液容器與端口處理容器相連接，所述的計算機(jī)與壓力監(jiān) 測器外接，所述的液體收集器放置在滲透天平上面，所述的壓力監(jiān)測器設(shè)置在蠕動栗上。
[0030] 本發(fā)明中，所述的中空纖維膜組件包括中空纖維膜過濾器以及超濾膜，所述的超 濾膜設(shè)置在中空纖維膜過濾器內(nèi)部。其中，所述的超濾膜為聚醚砜改性膜，截留分子量lkD。
[0031] 上述中，所述的中空纖維膜過濾器上設(shè)置有三個接口，包括滲透口、膜上出液口以 及膜上回流液口，所述的滲透口設(shè)置在中空纖維膜過濾器的一側(cè)中部與滲透鉗相連接，所 述的膜上回流液口和膜上出液口分別安裝在中空纖維膜過濾器的頂部和底部。
[0032] 再進(jìn)一步的，所述的壓力傳感器包括pp壓力傳感器、pr壓力傳感器和pf壓力傳 感器，所述的PP壓力傳感器和pf壓力傳感器分別安裝在膜上出液口和膜上回流液口的位 置，所述的pr壓力傳感器安裝在滲透口的位置。
[0033] 本發(fā)明中，所述的超濾得到的精品依諾肝素 GPC如表1所示。
[0034] 實(shí)例一： a、 4g肝素芐基酯水解，調(diào)解pH 7、加鹽溶解后得到水解反應(yīng)液，經(jīng)雙層中性濾紙和 0. 45 μ m水膜分別過濾后，加入三倍的水稀釋，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲 透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、 壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，在計算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參 數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD，790cm2; c、 設(shè)定蠕動栗的流速630mL/min，開啟蠕動栗，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液管道回流 至端口處理容器中； d、 將自動反壓閥調(diào)節(jié)至手動檔，進(jìn)行TMP壓力設(shè)置，逐步升至20psi ; e、 在緩沖液容器中加入10%鹽水（0. 5體積端口處理器中水解液的量），對依諾肝素溶 液進(jìn)入換鹽水、乙醇、水超濾階段。使用計算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，記錄。蠕動栗從端口處理容 器中抽取依諾肝素溶液中的小部分液體，可通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，大部 分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，滲透流率為22L/m 2/h ; f、 當(dāng)鹽水換完后，在緩沖器重加入等同鹽水體積的無水乙醇，膜通量開始慢慢下降，直 至TMP穩(wěn)定，滲透流率為15. 5 L/m2/h ; g、 當(dāng)緩沖器中乙醇完全進(jìn)入端口器重后，在緩沖液容器中加入純水，對依諾肝素溶液 進(jìn)行換水脫鹽除雜，膜通量開始上升，并穩(wěn)定。TMP為20psi時，滲透流率為26L/m 2/h ; h、 當(dāng)換水達(dá)到3倍時，依諾肝素溶液滲透液測定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素 至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí) 驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品得到3. 22g，編號INK001-4141201-a，產(chǎn)品符合藥典要求，GPC結(jié)果 見表1。
[0035] 實(shí)例二： a、 4g肝素芐基酯水解，調(diào)解pH 7、加鹽溶解后得到水解反應(yīng)液，經(jīng)雙層中性濾紙和 0. 45 μ m水膜分別過濾后，加入三倍的水稀釋，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲 透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、 壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，在計算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參 數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD，790cm2; c、 設(shè)定蠕動栗的流速630mL/min，開啟蠕動栗，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液管道回流 至端口處理容器中； d、 將自動反壓閥調(diào)節(jié)至手動檔，進(jìn)行TMP壓力設(shè)置，逐步升至20psi ; e、 在緩沖液容器中加入10%鹽水（1體積端口處理器中水解液的量），對依諾肝素溶液 進(jìn)入換鹽水、乙醇、水超濾階段。使用計算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，記錄。蠕動栗從端口處理容器 中抽取依諾肝素溶液中的小部分液體，可通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，大部分 液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，滲透流率為23L/m 2/h ; f、 當(dāng)鹽水換完后，在緩沖器重加入等同鹽水體積的無水乙醇，膜通量開始慢慢下降，直 至TMP穩(wěn)定，滲透流率為9. 5 L/m2/h ; g、 當(dāng)緩沖器中乙醇完全進(jìn)入端口器重后，在緩沖液容器中加入純水，對依諾肝素溶液 進(jìn)行換水脫鹽除雜，膜通量開始上升，并穩(wěn)定。TMP為20psi時，滲透流率為26. 5 L/m2/h ; h、 當(dāng)換水達(dá)到4倍時，依諾肝素溶液滲透液測定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素 至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí) 驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品得到3. 02g，編號INK001-4141201-b，產(chǎn)品符合藥典要求，GPC結(jié)果 見表1。
[0036] 實(shí)例三： a、 4g肝素芐基酯水解，調(diào)解pH 7、加鹽溶解后得到水解反應(yīng)液，經(jīng)雙層中性濾紙和 0. 45 μ m水膜分別過濾后，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體 收集器，滲透天平歸零； b、 壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，在計算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參 數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD，790cm2; c、 設(shè)定蠕動栗的流速650mL/min，開啟蠕動栗，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液管道回流 至端口處理容器中； d、 將自動反壓閥調(diào)節(jié)至手動檔，進(jìn)行TMP壓力設(shè)置，逐步升至20psi ; e、 在緩沖液容器中加入10%鹽水（1. 5體積端口處理器中水解液的量），對依諾肝素溶 液進(jìn)入換鹽水、乙醇、水超濾階段。使用計算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，記錄。蠕動栗從端口處理容 器中抽取依諾肝素溶液中的小部分液體，可通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，大部 分液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，滲透流率為24. 3 L/m2/h ; f、 當(dāng)鹽水換完后，在緩沖器重加入2倍水解液體積的無水乙醇，膜通量開始慢慢下降， 直至TMP穩(wěn)定，滲透流率為9. 1 L/m2/h ; g、當(dāng)緩沖器中乙醇完全進(jìn)入端口器后，在緩沖液容器中加入純水，對依諾肝素溶液進(jìn) 行換水脫鹽除雜，膜通量開始上升，并穩(wěn)定。TMP為20psi時，滲透流率為25 L/m2/h。
[0037] h、當(dāng)換水達(dá)到5倍時，依諾肝素溶液滲透液測定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮至原 有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)。凍 干依諾肝素產(chǎn)品得到2. 88g，編號為INKOOl-4141201-c，產(chǎn)品符合藥典要求，GPC結(jié)果見表 1〇
[0038] 實(shí)例四： a、 4g肝素芐基酯水解，調(diào)解pH 7、加鹽溶解后得到水解反應(yīng)液，經(jīng)雙層中性濾紙和 0. 45 μ m水膜分別過濾后，加入三倍的水稀釋，置于端口處理容器中，并連接緩沖液容器，滲 透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、 壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，在計算機(jī)內(nèi)通過軟件進(jìn)行參 數(shù)設(shè)置，選用超濾膜為lkD，790cm2; c、 設(shè)定蠕動栗的流速630mL/min，開啟蠕動栗，依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液管道回流 至端口處理容器中； d、 將自動反壓閥調(diào)節(jié)至手動檔，進(jìn)行TMP壓力設(shè)置，逐步升至20psi ; e、 在緩沖液容器中加入10%鹽水（3體積端口處理器中水解液的量），對依諾肝素溶液 進(jìn)入換鹽水、乙醇、水超濾階段。使用計算機(jī)開始采集數(shù)據(jù)，記錄。蠕動栗從端口處理容器 中抽取依諾肝素溶液中的小部分液體，可通過滲透口的管道滲透至液體收集器中，大部分 液體通過膜上回流液口的管道回流進(jìn)入端口處理容器中，滲透流率為28L/m 2/h ; f、 當(dāng)鹽水換完后，在緩沖器重加入等同鹽水體積的無水乙醇，膜通量開始慢慢下降，直 至TMP穩(wěn)定，滲透流率為8. 5 L/m2/h ; g、 當(dāng)緩沖器中乙醇完全進(jìn)入端口器重后，在緩沖液容器中加入純水，對依諾肝素溶液 進(jìn)行換水脫鹽除雜，膜通量開始上升，并穩(wěn)定。TMP為20psi時，滲透流率為22. 5 L/m2/h ; h、 當(dāng)換水達(dá)到8倍時，依諾肝素溶液滲透液測定無鹽，斷開緩沖液容器，濃縮依諾肝素 至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí) 驗(yàn)。凍干依諾肝素產(chǎn)品得到2. 38g，編號INK001-4141201-d，產(chǎn)品符合藥典要求，GPC結(jié)果 見表1。
[0039] 本發(fā)明提供了一種純化依諾肝素的簡便方法，旨在提高生產(chǎn)效率、減少生產(chǎn)成本 以及減少生產(chǎn)中的安全隱患。通過采用在超濾過程中用鹽水-乙醇-水換液替代依諾肝素 合成生產(chǎn)過程中的醇沉步驟的新工藝，成功地改進(jìn)了原有工業(yè)生產(chǎn)中乙醇沉淀這一操作步 驟帶來的一些弊端。例如，醇沉過程中需要消耗大量乙醇，但采用換鹽水-乙醇-水的超濾 方法，大大節(jié)省了溶劑，降低了生產(chǎn)成本。同時，采用換鹽水-乙醇-水的方法，將操作時間 從XXX縮短為YYY，減少了產(chǎn)品生產(chǎn)周期，從而提高了生產(chǎn)效率。
[0040] 以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā) 明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng) 域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
[0041] 表1 :超濾得到依諾肝素精品GPC結(jié)果表。
[0042] 注：Eno-USP為依諾肝素標(biāo)準(zhǔn)品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種依諾肝素的純化方法，其特征在于，包括以下步驟： a、預(yù)準(zhǔn)備：將肝素芐基酯水解液，經(jīng)中性濾紙和微孔濾膜過濾后裝至端口處理容器中， 并連接緩沖液容器，滲透天平上放置液體收集器，滲透天平歸零； b、參數(shù)設(shè)置：壓力監(jiān)測器和蠕動栗通過USB接口數(shù)據(jù)線外接計算機(jī)，連接超濾軟件進(jìn) 行參數(shù)設(shè)置；設(shè)置蠕動栗的流速：開啟蠕動栗，通過蠕動栗從端口處理器中抽取依諾肝素 溶液，通過膜上出液口的管道進(jìn)入中空纖維膜組件，壓力傳感器將數(shù)據(jù)反饋給壓力監(jiān)測器， 依諾肝素溶液進(jìn)入膜上回流液口的管道回流，通過自動反壓閥回流進(jìn)入端口處理容器中； 設(shè)置并逐步提高TMP，來改變滲透口的管道內(nèi)滲透液的流速； c、 換鹽水、乙醇、水超濾階段：在緩沖液容器中加入鹽水，由于管道系統(tǒng)為內(nèi)封閉狀態(tài)， 當(dāng)緩沖液容器中滲透出液體時，端口處理容器內(nèi)部形成真空，將緩沖液容器中鹽水吸入， 依諾肝素溶液進(jìn)入換鹽水階段，然后依次進(jìn)行換乙醇和換純水，實(shí)現(xiàn)低分子雜質(zhì)和鹽的脫 除； d、 完成超濾：通過測定滲透液中鹽含量，確定換水倍數(shù)，當(dāng)換水達(dá)到4-8倍時，依諾肝 素溶液完成超濾，濃縮依諾肝素至原有體積的一半，計算機(jī)終止數(shù)據(jù)收集，保存數(shù)據(jù)，關(guān)閉 蠕動栗，終止依諾肝素超濾的實(shí)驗(yàn)，清洗設(shè)備； e、 指標(biāo)檢測：將依諾肝素肝素樣品凍干，稱取質(zhì)量，計算收率，產(chǎn)品GPC等指標(biāo)檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于所用的超濾設(shè)備為切向流超濾系統(tǒng)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所用的超濾膜為截留分子量lkD的聚 醚砜改性膜，所述的膜面積為lOO-lOOOOcm 2。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的超濾蠕動栗的流速 100-1000mL/min〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的水解液為肝素芐基酯在堿性 條件下水解，水解后調(diào)pH 6-7,加 NaCl攪拌溶解，經(jīng)中性濾紙和微孔濾膜過濾得到。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的超濾過程包括換鹽水、換乙 醇、換水以及濃縮階段。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的鹽水濃度為4%-10%，體積為 0. 5-3倍水解液的體積。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的乙醇為分析級無水乙醇，體積 為0. 5-3倍水解液的體積。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的超濾方法，其特征在于，所述的水為高純水，體積為3-8倍水 解液的體積。
【文檔編號】C08B37/10GK105985454SQ201510062140
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月6日
【發(fā)明人】張中玉, 黃迎慶, 劉向暉
【申請人】蘇州英諾凱生物醫(yī)藥科技有限公司