一種酶法合成二元酸1，3?甘油二酯的方法
【專利摘要】一種酶法合成二元酸1，3?甘油二酯的方法，包括將單甘酯和游離脂肪酸或脂肪酸乙烯酯以1：1～3摩爾比混合，加入有機溶劑，預(yù)熱，攪拌，再加入脂肪酶，在30～60℃條件下，反應(yīng)1～8h，去酶，取上清液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。本發(fā)明制得的二元酸1，3?甘油二酯得率可達到90.4％，同時本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，較低的反應(yīng)溫度有利于抑制?；D(zhuǎn)移和增加固定化脂肪酶的使用次數(shù)，提高了反應(yīng)效率，降低了后續(xù)分離純化操作的難度。
【專利說明】
一種酶法合成二元酸1，3-甘油二酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于結(jié)構(gòu)酯的合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]甘油二酯(Diacylglycerol，DAG)是重要的兩親性乳化劑和表面活性劑，廣泛應(yīng)用在食品、藥品和化妝品領(lǐng)域。除此之外，二元酸I，3-DAG還具有很多生物學(xué)功能，如二元酸I，3-DAG與二元酸1，2-DAG相比，可對體內(nèi)的磷脂酶A2產(chǎn)生相同的活性(Dawson et al., 1984,B1chemical&B1physical Research Communicat1ns)。
[0003]目前為止，僅有少量文獻報道了二元酸I，3_DAG的合成方法。文獻中的主要方法有一步酶法酯化反應(yīng)和化學(xué)法合成兩種。以甘油和混合脂肪酸為底物，Lipozyme RM頂為催化劑經(jīng)一步酶法酯化反應(yīng)得到的二元酸1，3-DAG的含量為15%(Lo SK et al.,2007,Journal of Agricultural&Food Chemistry)，但此反應(yīng)過程中產(chǎn)生了諸多的副產(chǎn)物如單甘酯、一元酸I，2-DAG，二元酸I，2-DAG，一元酸I，3-DAG和甘三酯，從而使二元酸I，3-DAG的分離十分困難。通常經(jīng)化學(xué)法可合成高純度的二元酸I，3_甘油二酯，但是化學(xué)法這種合成方式需要使用有毒的溶劑如二氯甲烷、三乙胺，以及有毒的催化劑如二甲氨基吡啶(DMAP)、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC) (Craven et al.，2011，Crystal Growth&Design; Hui，2003，Lipids)。并且化學(xué)合成法需要較高的反應(yīng)溫度，能耗高，易造成環(huán)境污染。
[0004]此外，當(dāng)使用乙烯酯作為?；w時，由于反應(yīng)后，生成甲醛，甲醛的沸點低(19.8°C)，在室溫下就會揮發(fā)，使得酰胺化反應(yīng)不斷向正反應(yīng)方向進行，因此將乙烯酯作為反應(yīng)?；w，酶法酰胺化反應(yīng)是不可逆的，反應(yīng)效率特別高。而當(dāng)使用游離脂肪酸或脂肪酸酯作為?；w時，反應(yīng)是可逆的，反應(yīng)效率差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本部分的目的在于概述本發(fā)明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發(fā)明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。
[0006]鑒于上述和/或現(xiàn)有合成二元酸I，3_甘油二酯中存在的問題，提出了本發(fā)明。
[0007]因此，本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)化學(xué)法合成的不足，提供一種在有機相體系中酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法。
[0008]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案:一種酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于，包括，將單甘酯和游離脂肪酸或脂肪酸乙烯酯以1:1?3摩爾比混合，加入有機溶劑后預(yù)熱攪拌，再加入固定化脂肪酶，在30?65 °C的溫度下攪拌反應(yīng)，去酶，除去溶劑，得到二元酸I，3-甘油二酯產(chǎn)品。
[0009]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述固定化脂肪酶包括，固定化酶Lipozyme RM IM、固定化酶Novozym 435、固定化酶Lipozyme 435、固定化酶Lipozyme TL IM或固定化酶NS40086中的一種或幾種，其添加量為底物總質(zhì)量的4?12%。
[0010]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述固定化脂肪酶為固定化酶Lipozyme RM IM，其添加量為底物總質(zhì)量的6?10%。
[0011]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸1，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酸乙烯酯包括，油酸乙烯酯、棕櫚酸乙烯酯、硬脂酸乙烯酯中的一種或幾種。
[0012]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述單甘酯包括，油酸單甘酯、棕櫚酸單甘酯、硬脂酸單甘酯、亞油酸單甘酯、二十碳五烯酸單甘酯、二十二碳六烯酸單甘酯或花生四烯酸單甘酯中的一種或幾種。
[0013]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述預(yù)熱攪拌，其中，所述預(yù)熱，其預(yù)熱溫度為30?65°C ;所述攪拌，其轉(zhuǎn)速為100?600rpm。
[0014]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述有機溶劑包括，正己烷、氯仿、石油醚、無水乙醚或異辛烷中的一種或幾種，其添加量與已加入混合液的質(zhì)量比為0.3?3:1。
[0015]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述攪拌反應(yīng)，其是在100?600rpm的轉(zhuǎn)速下，攪拌反應(yīng)I?8h。
[0016]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述除去溶劑，其是取混合物上清液在真空度為400?600mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5?2h除去溶劑。
[0017]作為本發(fā)明所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述單甘酯為油酸單甘酯，所述脂肪酸乙烯酯為棕櫚酸乙烯酯，所述有機溶劑為正己烷，所述預(yù)熱攪拌為預(yù)熱溫度30°C、攪拌轉(zhuǎn)速550rpm，所述固定化脂肪酶為固定化脂肪酶LipozymeRM頂，其中，
[0018]所述油酸單甘酯與所述棕櫚酸乙烯酯的摩爾比為I: I;
[0019]所述固定化脂肪酶Lipozyme RM頂，其添加量為底物總質(zhì)量的6% ;
[0020]保持整個體系在35°C、550rpm的條件下，攪拌反應(yīng)2h，去酶，取混合物上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h除去溶劑。
[0021 ]本發(fā)明所具有的有益效果:
[0022](I)本發(fā)明所提供的酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法，利用單甘酯和游離脂肪酸或脂肪酸乙烯酯作為反應(yīng)底物，利用酶的專一性和高效性，一步合成二元酸I，3_甘油二酯，反應(yīng)時間短，效率頗高，進一步優(yōu)選棕櫚酸乙稀酯作為反應(yīng)底物，固定化酶LipozymeRM頂作為選定脂肪酶，效率可進一步提高，得率可達到90.4%。
[0023](2)本發(fā)明所提供的酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，與現(xiàn)有的以甘油和游離脂肪酸為反應(yīng)底物經(jīng)一步酶法酯化反應(yīng)合成方法相比，避免了副產(chǎn)物單甘酯的形成;克服了現(xiàn)有化學(xué)方法合成的毒性大、溫度高的缺點，整個反應(yīng)條件溫和、沒有毒性試劑。
[0024](3)本發(fā)明所提供的酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，以脂肪酸乙烯酯和單甘酯為反應(yīng)底物，此反應(yīng)為不可逆反應(yīng)，合成的中間產(chǎn)物沸點較低，在反應(yīng)過程中促使反應(yīng)不斷向合成方向進行，使得反應(yīng)溫度顯著降低，反應(yīng)時間明顯縮短且合成的得率顯著提高。并且較低的反應(yīng)溫度還有利于抑制?；D(zhuǎn)移和增加固定化脂肪酶的使用次數(shù)，提高了反應(yīng)效率，同時也降低了后續(xù)分離純化操作的難度。由此可見，本發(fā)明提供酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，是一種高效、綠色，便于大規(guī)模推廣工業(yè)化生產(chǎn)二元酸I，3-甘油二酯的方法。
【附圖說明】
[0025]為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。其中:
[0026]圖1為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯的得率隨加酶量變化的關(guān)系示意圖，反應(yīng)條件為:油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1摩爾比混合，加入ImL正己烷并加入占底物總質(zhì)量4?12%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，在35°C下反應(yīng)lh。
[0027]圖2為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯的得率隨溶劑添加量變化的關(guān)系示意圖，反應(yīng)條件為:油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1摩爾比混合，加入0.5?2mL正己烷并加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，在35°C下反應(yīng)lh。
[0028]圖3為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯的得率隨反應(yīng)溫度變化的關(guān)系示意圖，反應(yīng)條件為:油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1摩爾比混合，加入0.5mL正己烷并加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，在30?50°C下反應(yīng)lh。
[0029]圖4為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯的得率隨反應(yīng)時間變化的關(guān)系示意圖，反應(yīng)條件為:油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1摩爾比混合，加入0.5mL正己烷并加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，在35°C下反應(yīng)I?4h。
[0030]圖5為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯分離純化前的氣相色譜圖。該反應(yīng)產(chǎn)物為實施例3的反應(yīng)產(chǎn)物。
[0031]圖6為本發(fā)明反應(yīng)產(chǎn)物中二元酸I，3_甘油二酯分離純化后的氣相色譜圖。該反應(yīng)產(chǎn)物為實施例3的反應(yīng)產(chǎn)物。
【具體實施方式】
[0032]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】做詳細(xì)的說明。
[0033]在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施例的限制。
[0034]其次，此處所稱的“一個實施例”或“實施例”是指可包含于本發(fā)明至少一個實現(xiàn)方式中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。在本說明書中不同地方出現(xiàn)的“在一個實施例中”并非均指同一個實施例，也不是單獨的或選擇性的與其他實施例互相排斥的實施例。
[0035]本發(fā)明的反應(yīng)體系為混合反應(yīng)體系，通過反應(yīng)溫度、時間、酶添加量等因素的優(yōu)化，確定該混合反應(yīng)體系的最佳合成工藝。
[0036]1、反應(yīng)溫度
[0037]反應(yīng)中溫度的控制非常重要，由于酶促催化反應(yīng)是一個熱動力學(xué)過程，影響著酶的催化活性、底物的溶解狀態(tài)及粘度、底物和產(chǎn)物的傳質(zhì)速度等。溫度太低，不利于達到反應(yīng)所需的活化能，脂肪酶不能與底物有效結(jié)合，反應(yīng)速率較低，反應(yīng)時間延長，產(chǎn)物中二元酸I，3-甘油二酯較少;溫度太高，則會導(dǎo)致脂肪酶變性，降低酶活。
[0038]2、反應(yīng)時間
[0039]酯交換反應(yīng)包括催化劑接入、形成中間體、另一脂肪酸的接入以及催化劑的斷開四個階段，整個過程需要一定的時間。時間不足，則這一反應(yīng)過程還無法達到平衡，時間過長，則不但無益于二元酸1，3_甘油二酯含量的增加，反而還會增加副反應(yīng)的程度，不利于產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0040]3、脂肪酶添加量
[0041]加酶量的大小和反應(yīng)速度直接相關(guān)，如果底物的量能夠保持足夠大，且反應(yīng)速度與酶量也符合動力學(xué)關(guān)系，當(dāng)酶量增加時，反應(yīng)速度亦隨之增大。脂肪酶添加量太少，則降低反應(yīng)速率。脂肪酶添加量過多，也就是底物含量相對較低時，雖然這時反應(yīng)速度也隨著增大，但底物和產(chǎn)物的傳質(zhì)阻力的影響已開始大于酶反應(yīng)催化速度的影響，其反應(yīng)速度的增量減少，酶的催化效率降低。
[0042]4、攪拌速率
[0043]發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，隨著反應(yīng)的進行，一定速率的攪拌對酶法合成反應(yīng)的形成具有促進作用，但過攪拌速率過高卻反而不利于目標(biāo)產(chǎn)物的生成。不同攪拌速率下，樣品的硬度等存在差異可能與其微觀交聯(lián)度有關(guān)。同時交聯(lián)結(jié)構(gòu)的強度和數(shù)量也直接影響到體系的粘彈性能。借助于其相同條件下粘彈性能的變化，能進一步闡明攪拌剪切對二元酸I，3_甘油二酯質(zhì)構(gòu)的影響。
[0044]實施例1:
[0045]將油酸單甘酯和硬脂酸乙烯酯以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入ImL正己烷，放入攪拌子，在溫度為35 °C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在400rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量10%的固定化脂肪酶Lipozyme RM頂，開始反應(yīng)，反應(yīng)2h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)Ih除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為83.6 %。
[0046]實施例2:
[0047]將二十二碳六烯酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入2mL正己烷，放入攪拌子，在溫度為40°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在500rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量8%的固定化脂肪酶Novozym 435，開始反應(yīng)，反應(yīng)Ih后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為450mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸1,3-DAG的得率為81.6%。
[0048]實施例3:
[0049]將油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入0.5mL正己烷，放入攪拌子，在溫度為35 °C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在550rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM頂，開始反應(yīng)，反應(yīng)2h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為90.4%。產(chǎn)物分離純化前后氣相色譜圖見附圖5、
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[0050]實施例4:
[0051 ] 將油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:3的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入3mL正己烷，放入攪拌子，在溫度為50°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在450rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme TL IM，開始反應(yīng)，反應(yīng)4h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為400mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1.5h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為81.3 %。
[0052]實施例5:
[0053]將花生四烯酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:2的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入0.5mL正己烷，放入攪拌子，在溫度為50°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在400rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量6 %的固定化脂肪酶Lipozyme 435，開始反應(yīng)，反應(yīng)3h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為450mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為85.6 %。
[0054]實施例6:
[0055]將硬脂酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入ImL無水乙醚，放入攪拌子，在溫度為35°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在600rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量8%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，開始反應(yīng)，反應(yīng)Ih后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為400mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)Ih除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為84.5 %。
[0056]實施例7:
[0057]將棕櫚酸單甘酯和油酸乙烯酯以1:2的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入0.5mL石油醚，放入攪拌子，在溫度為35 °C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在350rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM頂，開始反應(yīng)，反應(yīng)Ih后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)Ih除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為86.8 %。
[0058]實施例8:
[0059]將油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入2mL異辛烷，放入攪拌子，在溫度為50°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在500rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量6%的固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，開始反應(yīng)，反應(yīng)4h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為80.2 %。
[0060]實施例9:
[0061]將油酸單甘酯和棕櫚酸乙烯酯以1:2的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入1.5mL氯仿，放入攪拌子，在溫度為50°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，在450rpm的條件下攪拌，加入占底物總質(zhì)量10 %的固定化脂肪酶Novozym 435，開始反應(yīng)，反應(yīng)3h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，取上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h除去溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為83.2 %。
[0062]實施例10(對比實施例):
[0063]將油酸單甘酯和游離棕櫚酸以1:1的摩爾比加入反應(yīng)器中，加入ImL正己烷，放入攪拌子，在溫度為50°C的超級循環(huán)水浴鍋中預(yù)熱，打開磁力攪拌器，加入占底物總質(zhì)量10%的固定化脂肪酶Novozym 435，開始反應(yīng)，反應(yīng)3h后取出產(chǎn)物，去除脂肪酶，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除溶劑，通過HPLC分析，產(chǎn)物中二元酸I，3-DAG的得率為45.2 %。
[0064]由此可見，本發(fā)明所提供的酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，利用單甘酯和游離脂肪酸或脂肪酸乙烯酯作為反應(yīng)底物，利用酶的專一性和高效性，一步合成二元酸I，
3-甘油二酯，反應(yīng)時間短，效率頗高，進一步優(yōu)選棕櫚酸乙烯酯作為反應(yīng)底物，固定化酶Lipozyme RM IM作為選定脂肪酶，效率可進一步提高，得率可達到90.4% ;本發(fā)明所提供的酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，與現(xiàn)有的以甘油和游離脂肪酸為反應(yīng)底物經(jīng)一步酶法酯化反應(yīng)合成方法相比，避免了副產(chǎn)物單甘酯的形成;克服了現(xiàn)有化學(xué)方法合成的毒性大、溫度高的缺點，整個反應(yīng)條件溫和、沒有毒性試劑。
[0065]應(yīng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項】
1.一種酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:包括， 將單甘酯和游離脂肪酸或脂肪酸乙烯酯以1:1?3摩爾比混合，加入有機溶劑后預(yù)熱攪拌，再加入固定化脂肪酶，在30?65°C的溫度下攪拌反應(yīng)，去酶，除去溶劑，得到二元酸1，3_甘油二酯產(chǎn)品。2.如權(quán)利要求1所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述固定化脂肪酶包括，固定化酶Lipozyme RM IM、固定化酶Novozym 435、固定化酶Lipozyme 435、固定化酶Lipozyme TL IM或固定化酶NS40086中的一種或幾種，其添加量為底物總質(zhì)量的4?12%。3.如權(quán)利要求1或2所述酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法，其特征在于:所述固定化脂肪酶為固定化酶Lipozyme RM頂，其添加量為底物總質(zhì)量的6?10%。4.如權(quán)利要求1或2所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述脂肪酸乙烯酯包括，油酸乙烯酯、棕櫚酸乙烯酯、硬脂酸乙烯酯中的一種或幾種。5.如權(quán)利要求1或2所述的酶法合成二元酸I，3_甘油二酯的方法，其特征在于:所述單甘酯包括，油酸單甘酯、棕櫚酸單甘酯、硬脂酸單甘酯、亞油酸單甘酯、二十碳五烯酸單甘酯、二十二碳六烯酸單甘酯或花生四烯酸單甘酯中的一種或幾種。6.如權(quán)利要求1所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述預(yù)熱攪拌，其中，所述預(yù)熱，其預(yù)熱溫度為30?65 °C ；所述攪拌，其轉(zhuǎn)速為100?600rpm。7.如權(quán)利要求1所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述有機溶劑包括，正己烷、氯仿、石油醚、無水乙醚或異辛烷中的一種或幾種，其添加量與已加入混合液的質(zhì)量比為0.3?3:1。8.如權(quán)利要求1所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述攪拌反應(yīng)，其是在100?600rpm的轉(zhuǎn)速下，攪拌反應(yīng)I?8h。9.如權(quán)利要求1、2、6、7或8中任一項所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述除去溶劑，其是取混合物上清液在真空度為400?600mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5?2h除去溶劑。10.如權(quán)利要求9所述酶法合成二元酸I，3-甘油二酯的方法，其特征在于:所述單甘酯為油酸單甘酯，所述脂肪酸乙烯酯為棕櫚酸乙烯酯，所述有機溶劑為正己烷，所述預(yù)熱攪拌為預(yù)熱溫度30°C、攪拌轉(zhuǎn)速550rpm，所述固定化脂肪酶為固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，其中， 所述油酸單甘酯與所述棕櫚酸乙烯酯的摩爾比為I: I; 所述固定化脂肪酶Lipozyme RM IM，其添加量為底物總質(zhì)量的6% ; 保持整個體系在35°C、550rpm的條件下，攪拌反應(yīng)2h，去酶，取混合物上清液在真空度為500mm Hg的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2h除去溶劑。
【文檔編號】C12P7/64GK106047955SQ201610619745
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月31日
【發(fā)明人】王小三, 張晉芳, 祝雨筱, 金青哲, 王興國
【申請人】江南大學(xué)