一種硫酸異帕米星的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種硫酸異帕米星的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的硫酸異帕米星的藥物組合物中含有硫酸異帕米星和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，硫酸異帕米星、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對佝僂病具有治療作用；硫酸異帕米星和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對佝僂病的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療佝僂病的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
一種硫酸異帕米星的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及硫酸異帕米星的新用途，具體涉及硫酸異帕米星 的藥物組合物及其在佝僂病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 硫酸異帕米星臨床用于大腸桿菌、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯氏桿菌屬、腸桿菌屬、沙 雷氏菌屬、變形桿菌屬、綠膿桿菌中，耐慶大霉素而對硫酸異帕米星敏感菌引起的感染癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種硫酸異帕米星的藥物組合物，該藥物組合物中含有硫 酸異帕米星和一種天然產(chǎn)物，硫酸異帕米星和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療佝僂病。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -種硫酸異帕米星的藥物組合物，包括硫酸異帕米星、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將珠子參粉碎，用70~80%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用15 %乙醇洗脫6個柱體積，再用70 %乙醇洗脫10個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到純的化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療佝僂病的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述硫酸異帕米星的藥物組合物在制備治療佝僂病的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0017] 本發(fā)明提供的硫酸異帕米星的藥物組合物中含有硫酸異帕米星和一種結(jié)構(gòu)新穎 的天然產(chǎn)物，硫酸異帕米星、化合物（I)單獨作用時，對佝僂病具有治療作用;硫酸異帕米星 和化合物（I)聯(lián)合作用時，對佝僂病的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療佝僂病的藥 物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將珠子參(2kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫10 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (8個柱體積）、30:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱 體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分3用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1 (8個柱體積）、15:1 (10個柱體積)和2:1 (5個柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0022] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 439.3538，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C30H46〇3，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ppm，CDC13，600MHz): H-1 (1 · 62，dd，J = 12 · 4， 8.9Hz)，H-l(2.11，dd，J=12.4,3.6Hz)，H-2(5.82，ddd，J=10.9,8.9,3.6Hz)，H-3(5.68，d， J = 10.9Hz)，H-5(0.77，d，J=ll ·2Ηζ)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)，H-7(1.68，m)，H-7 (1.87，m)，H-9(1.54，d，J = 8.4Hz)，H-ll(4.27，d，J = 8.8,3.3Hz)，H-12(5.28，d，J = 3.3Hz)，H-15(5.43，d，J=10.3Hz)，H-16(5.52，d，J = 10.3Hz)，H-18(2.46，d，J = 8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10，m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)， H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87， s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6.1Hz)，ll-OH(2.83，br，s);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù)Sc(ppm，CDCl3,125MHz) :40.2(CH2，1-C)，122.6(CH，2-C)，138.3(CH，3-C)，36.8(C，4-C)，52.7(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.9(CH2,7-C)，57.8(C，8-C)，56.1(CH，9-C)，33.2(C， 10-C)，67.9(CH，11-C)，126.7(CH，12-C)，138.2(C，13-C)，43.5(C，14-C)，132.1(CH，15-C)， 139.8(CH，16-C)，41.4(C，17-C)，59.3(CH，18-C)，39.9(CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8 (CH2,21-C)，38.8(CH 2,22-C)，26.6(CH3,23-C)，15.7(CH3,24-C)，13.7(CH 3,25-C)，19.7 (CH3，26-C)，14 · 3 (CH3，27-C)，19 · 3 (CH3，28-C)，17 · 2 (CH3，29-C)，20 · 4 (CH3，30-C)。紅外波譜 表明該化合物含有羥基（3478cm-雙鍵（1663cm-3和偕二甲基（1380cm-3基團(tuán)。 13C-NMR、 DEPT和HSQC譜中顯示有30個碳信號，包括八個甲基，五個亞甲基，十一個次甲基(一個連氧 碳和五個烯烴碳），以及六個季碳(一個烯屬季碳），以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化 合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。 1H-匪R譜結(jié)合HSQC譜顯示的六個單峰甲基質(zhì)子信號δΗ l.〇2(3H，s)， 0.82(3!1，8)，1.19(3!1，8)，1.22(3!1，8)，1.36(3!1，8)和0.87(3!1，8)，兩個雙峰甲基質(zhì)子信號 δΗ 0.85(3!1，(1，1 = 6.3抱），0.93(3!1，(1，1 = 6.1抱）以及1!1-匪1?數(shù)據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型 三萜類化合物。從紅外譜中可知結(jié)構(gòu)中含有羥基，根據(jù)HMBC譜中11-ΟΗ與C-l 1的相關(guān)信號以 及碳化學(xué)位移確認(rèn)羥基連在C-l 1位。HMBC譜中單烯烴質(zhì)子信號δΗ 5.28 (1Η，d，J = 3.3Hz)與 C-12相關(guān)信號以及C-12與C-13的碳化學(xué)位移可以確認(rèn)C-12與C-13形成雙鍵結(jié)構(gòu)，另通過 匪R與13C-匪R可知C-2與C-3、C-15與C-16也形成雙鍵結(jié)構(gòu)。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0023]
〇
[0024] 實施例2:藥理作用
[0025]本實施例使用喂以缺Vit D飼料和純凈水并避光喂養(yǎng)制備佝僂病大鼠模型，觀察 藥物促進(jìn)鈣吸收，增加佝僂病大鼠模型的鈣含量，改善佝僂病大鼠血生化紊亂狀況等方面 的抗佝僂病的作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 選用華西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供的Wistar種子鼠在同期配種、受孕，同期出 生;飼養(yǎng)21d，幼鼠斷乳，對反應(yīng)佳、進(jìn)食好、外觀無異常幼鼠。相同溫度、濕度下，每天定時定 量投食，每次每鼠20g，顆粒飼料附加10g新鮮麥芽，每周測體重一次，觀察生長、活動。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 硫酸異帕米星購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例 1?；A(chǔ)飼料配方（％ ):玉米粉30、麥麩35、魚粉8、豆餅20、酵母粉5、骨粉1、鹽0.5、蛋氨酸 0.1、AD30.1、多種維生素0.2，含鈣量達(dá)1.18%。模型組飼料配方主要采用美國Numerof的 USPNo2缺D飼料配方，主要成分有:玉米粉76%，麥麩20%，碳酸鈣3%，含碘食鹽1%，賴氨酸 0.5%及各種B族維生素。另附加新鮮麥芽每天每鼠投給10g，經(jīng)HPLC法(Waters)UV264nm檢 測:維生素 D含量未檢出，媽含量1.1%，磷含量0.6%。
[0031] 1.3儀器
[0032] 美國MET-ASCA全自動生化分析儀。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034]大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，雌雄各半。分別為正常對照組、模型對照組、硫酸異 帕米星組（80mg · kg^1)、化合物（I)組（80mg · kg^1)、硫酸異帕米星與化合物（I)組合物組 【40mg · kg^1硫酸異帕米星+40mg · kg^1化合物（I)】。正常對照組喂基礎(chǔ)飼料和自來水。實驗 組喂以缺Vit D飼料和純凈水并避光喂養(yǎng)30d。佝僂病X線診斷標(biāo)準(zhǔn)的主要標(biāo)準(zhǔn):先期鈣化帶 模糊，干骺端毛糙，凹陷杯口及毛刷狀改變，診斷以主要標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。實驗第30d，處死正常 對照組和模型對照組，其余組按照上述劑量灌胃給藥。實驗第60d處死動物，從心臟抽血 2.0mL檢測血清Ca、P、ALP(堿性磷酸酶)各項指標(biāo)，同時檢測體重。
[0035] 1 · 5血清Ca2+測定實驗
[0036] 血清Ca2+測定用鄰甲酚酞洛和酮法(0CPC)。
[0037] 1.6血清P3-測定實驗
[0038]血P用紫外分光光度法。
[0039] 1.7血八1^測定實驗
[0040] 血ALP用磷酸對硝基苯基動力學(xué)法。
[0041] 1.8統(tǒng)計學(xué)方法
[0042]實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0043] 2、實驗結(jié)果
[0044] 2.1對佝僂病模型大鼠體重的影響
[0045]與正常對照組比較，模型對照組大鼠的體重顯著下降(P<0.01);與模型對照組比 較，硫酸異帕米星與化合物（I)組合物組大鼠的體重顯著上升(p<0.01);與模型對照組比 較，硫酸異帕米星組、化合物（I)組大鼠的體重上升(P<〇.05)。結(jié)果見表1。
[0046] 2.2對佝僂病模型大鼠血清〇8、？^1^含量的影響
[0047] 與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清C a、P降低（P < 0.01)，血AL P升高（P < 〇.01)。與模型對照組比較，硫酸異帕米星與化合物（I)組合物組大鼠血清Ca、p明顯升高(P <0.01)，血清ALP明顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，硫酸異帕米星組、化合物（I)組 血清Ca、P升高(Ρ<0·05)，血清ALP降低(Ρ<0·05)。結(jié)果見表1。
[0048] 表1對佝僂病模型大鼠體重和血清Ca、P、ALP含量的影響
[0049]
[0051] 人體內(nèi)的鈣主要來自食物，但并不是食物中所有的鈣均能被人體吸收和利用。一 般情況下，人體對鈣的吸收率只有20%~30%。研究表明，食物中以復(fù)合形式存在的鈣在腸 道中的吸收過程主要發(fā)生在酸性強(qiáng)的小腸上部。腸鈣吸收過程是以主動轉(zhuǎn)運過程為主，這 是消耗能量的，而且是依賴于維生素 D及其代謝產(chǎn)物的轉(zhuǎn)運過程。此外，腸鈣的吸收還有被 動擴(kuò)散過程。維生素 D缺乏性佝僂病是由于發(fā)育期動物體內(nèi)維生素 D不足致使鈣磷代謝失常 的一種慢性營養(yǎng)性疾病，可以看成是機(jī)體為維持血鈣水平而對骨骼造成的損害。
[0052] 硫酸異帕米星、化合物（I)單獨作用時，對佝僂病具有治療作用;硫酸異帕米星和 化合物(I)聯(lián)合作用時，對佝僂病的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療佝僂病的藥物。
[0053] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種硫酸異帕米星的藥物組合物，其特征在于:包括硫酸異帕米星、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的硫酸異帕米星的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的硫酸異帕米星的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將珠 子參粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗 脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1、15:1 和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為72%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療何僕病的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的硫酸異帕米星的藥物組合物在制備治療何僕病的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P3/02GK106083981SQ201610416891
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月7日 公開號201610416891.8, CN 106083981 A, CN 106083981A, CN 201610416891, CN-A-106083981, CN106083981 A, CN106083981A, CN201610416891, CN201610416891.8
【發(fā)明人】劉慎權(quán)
【申請人】劉慎權(quán)