頭孢克洛的藥物組合物及其對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了頭孢克洛的藥物組合物及其對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用，本發(fā)明提供的頭孢克洛的藥物組合物中含有頭孢克洛和一種從石菖蒲的干燥根莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，頭孢克洛和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)肺損傷具有防治作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)肺損傷的防治作用進(jìn)一步提高，可以開(kāi)發(fā)成防治肺損傷的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
頭孢克洛的藥物組合物及其對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及頭孢克洛的新用途，具體涉及一種頭孢克洛的藥 物組合物及其對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 頭孢克洛屬第二代口服頭孢菌素，對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均具有很 強(qiáng)的殺滅作用。本品為廣譜半合成頭孢菌素類(lèi)抗生素。對(duì)產(chǎn)青霉素酶金黃色葡萄球菌、A組 溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌和表皮葡萄球菌的活性與頭孢羥氨芐相同，對(duì)不產(chǎn)酶金黃色 葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用較頭孢羥氨芐強(qiáng)2~4倍。對(duì)革蘭陰性桿菌包括對(duì)大腸埃希 菌和肺炎克雷伯菌等的活性較頭孢氨芐強(qiáng)，與頭孢羥氨芐相仿，對(duì)奇異變形桿菌、沙門(mén)菌屬 和志賀菌屬的活性較頭孢羥氨芐強(qiáng)。
[0003] 該品的作用機(jī)制是抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。
[0004] 目前尚未見(jiàn)頭孢克洛與肺損傷防治的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種頭孢克洛的藥物組合物，該藥物組合物中含有頭孢克 洛和一種從石菖蒲中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，頭孢克洛和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治 療肺損傷。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種頭孢克洛的藥物組合物，包括頭孢克洛、如上所述的化合物（I)和藥學(xué)上可以 接受的載體。
[0010] 如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將石菖蒲的干燥根莖 粉碎，用85~95 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，步驟(a)中用90%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012]進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制備治療肺損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 如上所述的頭孢克洛的藥物組合物在制備治療肺損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的頭孢克洛的藥物組合物中含有頭孢克洛和一種從石菖蒲中分離得 到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，頭孢克洛和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)肺損傷具有防治作用;二 者聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)肺損傷的防治作用進(jìn)一步提高，可以開(kāi)發(fā)成防治肺損傷的藥物。本發(fā)明與 現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019]分離方法：（a)將石菖蒲的干燥根莖（2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提?。?0L X 3 次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水飽 和的正丁醇(4LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70% 乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個(gè)柱體積）、20 :1 (8個(gè)柱體 積）、10:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體積） 和2:1(5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè) 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (395mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證：白色無(wú)定形粉末，冊(cè)431-1^顯示[1+!1]+為111/2 469.3243，結(jié)合核磁特 征可得分子式為〇3〇1144〇4，不飽和度為9。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)511(。。111，00(]13,60〇]\〇2):!1-1 (1.49，m)，H-l(2.91，ddd，J=13.3,7.0,4.2Hz)，H-2(2.41，ddd，J=15.4,6.8,4.2Hz)，H-2 (2.65，ddd，J=15.4，11.2,7.0Hz)，H-5(1.34，d，J=11.2Hz)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)， H-7(1.68，m)，H-7(1.87，m)，H-9(2.47，s)，H-16(2.21，d，J=13.1Hz)，H-16(2.43，d，J = 13.1Hz)，H-18(2.46，d，J=8.4Hz)，H-19(1.41，m)，Η-20(1·10，m)，H-21(1.28，m)，H-21 (1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6 · 1Hz)，OH-12(6 · 38，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，CDC13，125MHz): 39 · 2(CH2，1-C)，34 · 3 (CH2,2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.4(CH 2,7-C)， 46.5(C，8-C)，54.7(CH，9-C)，37.2(C，10-C)，196.2(C，11-C)，140.8(C，12-C)，143.2(C，13-C)，58.6(C，14-C)，209.4(C，15-C)，54.3(CH2，16-C)，53.4(C，17-C)，48.0(CH，18-C)，39.9 (CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8(CH2,21-C)，38.8(CH2,22-C)，26.6(CH 3,23-C)，15.7(CH3， 24-C)，13.7(CH3,25-C)，19.7(CH3,26-C)，14.3(CH3,27-C)，19.3(CH3,28-C)，17.2(CH 3,29-〇,2〇.4((：!13,3〇-〇。紅外波譜表明該化合物含有€[，0-不飽和羰基（1705(^_ 1)，羥基 (3425cm-羰基（1760cm-雙鍵（1663cm-4 和偕二甲基（1380cm-4 基團(tuán)。13C-匪R、DEPT 和 HSQC譜中顯示有30個(gè)碳信號(hào)，包括八個(gè)甲基，七個(gè)亞甲基，五個(gè)次甲基，三個(gè)羰基，一對(duì)四取 代烯烴碳，以及五個(gè)季碳，以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。 ^-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示的六個(gè)叔甲基質(zhì)子信號(hào)δ Η 1.02(3H，s)，0.82(3H，s)，1.19(3H，s)， 1.22(3H，s)，1.36(3H，s)和0.87(3H，s)，兩個(gè)仲甲基質(zhì)子信號(hào)δ Η 0.85(3H，d，J = 6.3Hz)， 0.93(3!1，(1，1 = 6.1他）以及1!1-匪1?數(shù)據(jù)表明該化合物為烏蘇烷型三萜類(lèi)化合物。在該烏蘇 烷型化合物中，C-3、C-11和C-15位形成酮基，C-12與C-13形成雙鍵結(jié)構(gòu)。HMBC譜中H 3-23和 H3-24與C-3，H2-16和H3-27與C-15的相關(guān)性以及它們的碳化學(xué)位移進(jìn)一步確證C-3和C-15位 形成酮基。另HMBC譜中H-9和H-18與C-12，H-18和H 3-27與C-13以及OH-12與C-12相關(guān)信號(hào)以 及它們的碳化學(xué)位移表明該化合物存在烯醇式結(jié)構(gòu)，羥基連接在C-12位與C-12和C-13形成 的雙鍵構(gòu)成烯醇式結(jié)構(gòu)。此外，OH-12和H-9與C-11的相關(guān)信號(hào)以及碳化學(xué)位移確認(rèn)C-11位 形成羰基。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類(lèi)型核磁數(shù)據(jù)，可基本確 定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致?；瘜W(xué) 結(jié)構(gòu)式和碳原子編號(hào)如下：
[0021]
[0022] 實(shí)施例2:藥理作用 [0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動(dòng)物
[0025]選用健康雄性清潔級(jí)SD大鼠，體重320-370g(由南京軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提 供）。動(dòng)物飼養(yǎng)在溫度(22 ± 1) °C、相對(duì)濕度55 %~65 %、12h光照周期的通風(fēng)干燥環(huán)境中，采 用大小鼠維持料1022飼養(yǎng)。
[0026] 1.2試劑與樣品
[0027] 頭孢克洛購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。大 鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-IO(IL-IO)，酶聯(lián)免疫吸附 法(ELISA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biosource International公司；大鼠 HMGB1ELISA檢測(cè)試劑 盒購(gòu)自日本Shino-Test公司產(chǎn)品。
[0028] 1.3大鼠分組及模型制備
[0029]采用盲腸結(jié)扎穿孔法(CLP)建立膿毒血癥模型，術(shù)前禁食12h，以烏拉坦（1250mg/ kg)腹腔注射劑量麻醉，沿腹正中線做一 2cm長(zhǎng)的切口，進(jìn)腹找到盲腸，以4-0絲線環(huán)形結(jié)扎 盲腸根部，以18G針頭在游離端對(duì)穿1次后擠出糞便少許，送回腹腔，隨后依次縫合腹膜和皮 膚。Sham組僅做剖腹、分離盲腸遠(yuǎn)端、關(guān)腹手術(shù)。術(shù)后立即皮下注射生理鹽水lmL補(bǔ)充術(shù)中液 體丟失。大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為假手術(shù)組(Sham組）、模型對(duì)照組(CLP組）、頭孢 克洛組（l〇mg · kg-Ο、化合物（I)組（10mg · kg-"、頭孢克洛與化合物（I)組合物組【5mg · kg 4頭孢克洛+5mg · kg<化合物（I)】<XLP+藥物組于CLP后即時(shí)及6h后腹腔分別注射藥物； Sham組于假手術(shù)后即時(shí)及6h后、CLP組于CLP后0及6h腹腔分別注射生理鹽水lmL。
[0030] 1.4檢測(cè)指標(biāo)及方法
[0031] 各組動(dòng)物均于CLP后24h取股靜脈血2mL，離心10min后取血清-80°C保存。采用 ELISA法檢測(cè)血清中TNF-a、HMGBl及IL-10的水平。此外，CLP 24h后檢測(cè)肺組織干濕重比(W/ D)、髓過(guò)氧化物酶活性(ΜΡ0)。
[0032] 1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0033] 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X 土 s)表示，多 組間比較采用單因素方差分析，P〈〇.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0034] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0035] 2.1對(duì)膿毒血癥大鼠 TNF_a、HMGBl及IL-10水平的影響
[0036] 與Sham組比較，CLP明顯增加血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平。CLP+藥物組CLP后24h 時(shí)的TNF-a和HMGB1水平低于CLP組；與模型對(duì)照組比較，頭孢克洛與化合物（I)組合物組血 漿TNF-a、HMGB1及IL-10水平明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，頭孢克洛組、化合物 (I)組血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平降低(Ρ<0·05)。結(jié)果如下。
[0037] 2.2對(duì)膿毒血癥大鼠肺組織W/D及ΜΡ0活性的影響
[0038] 與Sham組比較，CLP明顯增加肺組織W/D及ΜΡ0活性，（Ρ〈0·05);而CLP+藥物組肺組 織W/D及ΜΡ0活性低于CLP組。與模型對(duì)照組比較，頭孢克洛與化合物（I)組合物組肺組織W/D 及ΜΡ0活性明顯降低(P<0.01);與模型對(duì)照組比較，頭孢克洛組、化合物（I)組肺組織W/D及 ΜΡ0活性降低(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)下表。
[0039]
[0040] 上述結(jié)果表明，頭孢克洛與化合物（I)組合物可以顯著降低膿毒血癥引發(fā)的肺損 傷，且效果優(yōu)于頭孢克洛或化合物（I)單獨(dú)作用的結(jié)果，可以開(kāi)發(fā)成治療急性肺損傷的藥 物。
[0041] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種頭抱克洛的藥物組合物，其特征在于:包括頭抱克洛、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將石 富蒲的干燥根莖粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石 油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇 萃取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用 70%乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比 為8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用90%乙醇熱 回流提取，合并提取液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂。6. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療肺損傷的藥物中的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求2所述的頭抱克洛的藥物組合物在制備治療肺損傷的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK106083980SQ201610411907
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月13日 公開(kāi)號(hào)201610411907.6, CN 106083980 A, CN 106083980A, CN 201610411907, CN-A-106083980, CN106083980 A, CN106083980A, CN201610411907, CN201610411907.6
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請(qǐng)人】崔坤峰