一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于環(huán)境環(huán)?！炯夹g(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種用于垃圾除臭滅害的復(fù)合微生物制劑及其制備方法，其含有球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、植物乳桿菌（Lactobacillusplantar）、沼澤紅假單胞菌(RhodopseudomonasPalustris)和蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)。本發(fā)明提供了一種能夠去除垃圾異味和消滅垃圾蚊蠅、蟑螂等害蟲的具有綜合功能的除臭滅害復(fù)合菌劑，可以在垃圾中轉(zhuǎn)站、化糞池、公共廁所和垃圾填埋場等場所進(jìn)行去除異味和消滅害蟲，在五種微生物協(xié)同作用下，可以迅速降級垃圾的惡臭氣體，抑制腐敗細(xì)菌的繁殖，消滅垃圾堆的蚊蠅、蟑螂害蟲，改善垃圾堆的微生態(tài)環(huán)境，具有重大的經(jīng)濟意義和環(huán)保意義。
【專利說明】一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于環(huán)境環(huán)?！炯夹g(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種用于垃圾除臭滅害的復(fù)合微生物制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著我國城市化進(jìn)程的加快和人口數(shù)量增加，城市生活垃圾的產(chǎn)生和其帶來的環(huán)境污染已經(jīng)引起人們的重視，特別是在城市中心垃圾收集點和城市垃圾中轉(zhuǎn)站，生活垃圾所引發(fā)的惡臭散發(fā)，蚊蠅孳生，病蟲害傳播等問題，已經(jīng)對居民生活質(zhì)量和當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境造成一定的影響。城市生活垃圾收集和中轉(zhuǎn)的管理不規(guī)范，會嚴(yán)重破壞城市的生態(tài)，造成人們心理不快。
[0003]當(dāng)前，城市生活垃圾處理過程存在以下問題:
(I)堆放的垃圾中的有機質(zhì)腐爛分解，不可避免會產(chǎn)生大量的惡臭氣體，使人惡心、頭暈和嘔吐，嚴(yán)重會引起人們呼吸道疾病。
[0004](2).生活垃圾是病害微生物的集源地，這些病原微生物不僅是產(chǎn)生惡臭氣體當(dāng)?shù)刂髁?，他們也可以通過空氣、污水，蟲害，工作活動等各種途徑繁殖和傳播，嚴(yán)重時，會威脅到環(huán)境衛(wèi)生和人的健康。
[0005](3).垃圾堆中有大量的有機物質(zhì)，必然為蚊、蠅、蟑螂等有害生物提供場所，而垃圾堆放過程中所產(chǎn)生的垃圾滲濾液是蚊蟲產(chǎn)卵、孵化的場所，這些害蟲是病原菌傳播媒介，時刻威脅到人們健康。另外，垃圾的收集與堆放，不僅會產(chǎn)生大量的惡臭氣體，也會影響到土壤的生態(tài)環(huán)境及地下水的質(zhì)量。
[0006]然而，城市生活垃圾是人類活動不可避免的產(chǎn)物，隨著社會文化、經(jīng)濟的發(fā)展，城市人口密度增大、需求食品原料量大和多樣性、排泄物和生活垃圾不斷增加，人們對城市生活垃圾處理強度要求不斷提高，對生活垃圾中所產(chǎn)生的病源微生物，惡臭氣體及蚊蠅蟲害的去除壓力不斷增大。
[0007]目前，國內(nèi)外生活垃圾處理技術(shù)主要集中對垃圾的惡臭氣體去除，對病源蟲害的綜合治理技術(shù)研究較少。常用方法分為物理法、化學(xué)法和生物法。其中，(I)物理法主要包括吸附和掩蔽等，具有操作簡單、見效快等優(yōu)點，但該法僅適合處理低濃度、小范圍的垃圾，無法從源頭解決垃圾存在問題。(2)化學(xué)方法主要包括消毒、噴灑化學(xué)藥劑，具有效率高、適用范圍廣，但該方法存在嚴(yán)重的二次污染。(3)生物治理法是主要采用微生物菌群對垃圾的生態(tài)位的改變而改善垃圾環(huán)境，環(huán)保無污染，是目前最為理想的垃圾處理方法，但目前已知的微生物制劑主要針對去除垃圾臭味而開發(fā)的，不能治理生活垃圾存在的病菌及病蟲害的傳播。
[0008]所以， 針對上述問題，城市垃圾處理單位急需一種能夠?qū)σ种朴泻?xì)菌生長，改善垃圾生態(tài)環(huán)境，消除惡臭氣體的產(chǎn)生，殺滅蚊蠅、蟑螂等害蟲的綜合性垃圾處理微生物制劑。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是，針對現(xiàn)有的目前環(huán)保生物制劑不能全面解決垃圾存放或中轉(zhuǎn)過程出現(xiàn)異味和蚊蠅病蟲害的問題，提供一種高效的生活垃圾除臭滅害的復(fù)合菌劑，該復(fù)合微生物菌劑不僅能夠迅速去除垃圾異味的產(chǎn)生，還能有效抑制有害微生物的生長和消滅蟑螂蚊蠅，加速垃圾的有氧分解，本發(fā)明的另一目的是提供該復(fù)合微生物菌劑的其制備方法。
[0010]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種生活垃圾除臭滅害的復(fù)合菌劑，由下述以重量份計的原料制成:球孢白僵菌培養(yǎng)液10~20份、啤酒酵母培養(yǎng)液10~17份、植物乳桿菌培養(yǎng)液5~10份、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)液30~39份、蘇云金芽孢桿菌24~33份。
[0011]其中，所述的球孢白僵菌是屬于白僵菌屬的真菌，優(yōu)選菌種為球孢白僵菌ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一種或兩種。球孢白僵菌是一種昆蟲病原真菌，對700多種有害昆蟲都能寄生，致病性強，適應(yīng)性強，無污染環(huán)境，不產(chǎn)生抗藥性，藥效期長，其主要用在農(nóng)林業(yè)害蟲的防治，把其用在生活垃圾害蟲治理尚屬于首次。球孢白僵菌主要通過其分生孢子在害蟲表皮、氣孔、消化道上，遇到適宜條件開發(fā)萌發(fā)并生出芽管，同時產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶和幾丁質(zhì)酶溶解害蟲表皮，再由芽管進(jìn)入害蟲體內(nèi)進(jìn)行大量生長與繁殖，消耗害蟲體內(nèi)營養(yǎng)成分，并產(chǎn)生毒素白僵素和卵孢白僵素，感染死掉的害蟲會產(chǎn)生大量的分生孢子進(jìn)而感染其他害蟲。 [0012]其中，所述的啤酒酵母是屬于酵母菌，優(yōu)選菌種為啤酒酵母ACCC20165，ACCC21135中的一種或兩種。啤酒酵母可以分解利用環(huán)境中的糖類、硫化氫、氨氣等，代謝工程中產(chǎn)生促進(jìn)細(xì)胞分裂的活性物質(zhì)，能夠促進(jìn)復(fù)合菌群中其他有效微生物(乳酸菌、沼澤紅假單胞菌、蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌)增殖，有利于復(fù)合菌群的快速增殖。
[0013]其中，所述的植物乳桿菌是屬于乳酸菌，優(yōu)選菌種為植物乳桿菌ACCC11118，ACCC11016中的一種或者兩種。植物乳桿菌以攝取光合細(xì)菌、酵母菌產(chǎn)生的糖類等物質(zhì)為基礎(chǔ)，在厭氧狀態(tài)發(fā)酵條件下產(chǎn)生乳酸，能有效抑制有害微生物的活動，降低有機物腐敗分解過程。乳酸菌還能夠使常態(tài)下不易分解的木質(zhì)素和纖維素等變得容易分解，并且消除未分解有機物產(chǎn)生的種種弊端，它也能夠?qū)⑽锤斓挠袡C物質(zhì)轉(zhuǎn)化成對生物的營養(yǎng)成分，促進(jìn)有益微生物的生長，改善環(huán)境中的微生物群落。
[0014]其中，所述的沼澤紅假單胞菌優(yōu)選菌種為沼澤紅假單胞菌ACCC10649。沼澤紅假單胞菌屬于光合細(xì)菌(英文縮寫PSB)的一種，是地球上最古老的微生物之一。光合細(xì)菌在光合作用過程中，以H2S作為供氫體，把硫化氫分解為無害的H2和H20 ;沼澤紅假單胞菌能以垃圾中的有機物、痕量有害氣體(硫化氫等)及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸類、維生素類、氮素化合物、抗病毒物質(zhì)和生理活性物質(zhì)等。另外光合細(xì)菌代謝的物質(zhì)可以為其他有益微生物生長提供養(yǎng)分，促進(jìn)有益生物群的增殖。
[0015]其中，所述的蘇云金芽孢桿菌是屬于芽孢桿菌屬的細(xì)菌，優(yōu)選菌種為蘇云金芽孢桿菌ACCC01480，CICC23650中的一種或者兩種。蘇云金芽孢桿菌是當(dāng)前生產(chǎn)量最大，應(yīng)用最為廣泛的細(xì)菌殺蟲劑，能夠在對3000多類昆蟲和原生動物產(chǎn)生毒性，特別在對蚊蠅消滅一直受到科研者的研究。蘇云金芽孢桿菌主要通過胃毒作用，其可以產(chǎn)生大量的芽孢和毒蛋白，芽孢被昆蟲吞食后，可以再昆蟲腸道大量繁殖進(jìn)入血腔，進(jìn)而引起昆蟲敗血癥。蘇云金產(chǎn)生的毒素可以分為內(nèi)毒素和外毒素，內(nèi)毒素即為δ-內(nèi)毒素,也稱伴孢晶體,其可以在昆蟲腸道分解大量的小分子毒素而殺死昆蟲，外毒素即為α-毒素和β-毒素,其中α-毒素是昆蟲腸道破壞酶，β_毒素是熱穩(wěn)定外毒素，對蚊蠅有特異治病作用。然而，蘇云金芽孢桿菌單獨使用效果并不佳，但與球孢白僵菌組合使用具有良好的殺蟲效果，能夠彌補球孢白僵菌受環(huán)境影響，藥效慢的不足，因此，發(fā)展復(fù)合微生物菌劑是不僅是克服單一菌劑存在的缺陷，也是未來環(huán)境治理生物制劑發(fā)展的方向。
[0016]本發(fā)明所述的除臭滅害復(fù)合菌劑中，微生物的總菌數(shù)較佳的為2.0X IO9個/mL以上。
[0017]本發(fā)明含有的球抱白僵菌(Beauveria bassiana)、啤酒酵母{^3ccharomycescerevisiae)、植物乳桿菌{Lactobacillus沼澤紅假單胞菌{Rhodop seudomonasPalustris)和蘇云金芽孢桿菌{Bacillus,都是現(xiàn)有常規(guī)菌種,均可在中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心及中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心購買。
[0018]所用的菌種斜面菌種保藏培養(yǎng)基為微生物研究常用的培養(yǎng)基，球孢白僵菌和啤酒酵母斜面活化培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基，蘇云金芽孢桿菌斜面活化培養(yǎng)基牛肉膏培養(yǎng)基，植物乳桿菌斜面活化培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，沼澤紅假單胞菌斜面活化培養(yǎng)基YP培養(yǎng)基。
[0019]本發(fā)明所述的除臭滅害復(fù)合菌劑中，有益微生物菌種所用的種子培養(yǎng)基配方和原料是實驗室常用的。球孢白僵菌孢子懸浮液采用PDA培養(yǎng)基，啤酒酵母種子液培養(yǎng)基為液體PDA培養(yǎng)基，蘇云金芽孢桿菌種子液培養(yǎng)基為YG培養(yǎng)基，植物乳桿菌種子液培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，沼澤紅假單胞菌種子液培養(yǎng)基配方為研究光合細(xì)菌常用的配方，具體配方為:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03 wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.0 05 wt%,硫酸錳0.05 wt%,硫酸亞鐵0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%,蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6~7.8，121。。，滅菌20min。
[0020]本發(fā)明所述的除臭滅害復(fù)合菌劑中，第一發(fā)酵培養(yǎng)基配方為第一發(fā)酵培養(yǎng)基由蛋白腺0.4~0.8wt%,糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%,憐酸二氫鈉0.6~1.2wt%,硫酸鎂0.04~0.06wt%，硫酸錳0.01~0.03wt%以及余量為水，pH為6.8~7.2 ;所述的第二發(fā)酵培養(yǎng)基由糖蜜10~18wt%,玉米浸提液1.0~1.5wt%,磷酸二氫鉀1.0~1.7wt%,硫酸鎂0.4~0.8wt%，氯化鈣0.01~0.03wt%,吐溫-80 1.0~1.5wt%，以及余量為水，pH為
6.8 ~7.5。
[0021 ] 本發(fā)明的除臭滅害復(fù)合菌劑中含有的有益微生物之間存在良好的協(xié)同作用，其能夠把生活垃圾中腐敗生物的腐敗降解向發(fā)酵分解轉(zhuǎn)變，對已經(jīng)產(chǎn)生的惡臭氣體硫化氫和氨氣吸收降解，消除垃圾和垃圾滲濾液的惡臭。同時有益菌植物乳桿菌能夠產(chǎn)生乳酸抑制腐敗細(xì)菌的生長，從根本解決惡臭氣體的產(chǎn)生，球孢白僵菌和蘇云金芽孢桿菌代謝的毒素能夠殺死對攜帶病害的蚊子、蒼蠅和蟑螂等害蟲,并建立起害蟲之間相互傳播,形成一個能夠消除臭味和無病害傳播垃圾堆放環(huán)境。
[0022]本發(fā)明還涉及本發(fā)明的除臭滅害復(fù)合菌劑的制備方法:按照本領(lǐng)域常規(guī)方法，分別將啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌、沼澤紅假單胞菌進(jìn)行放大液體培養(yǎng)，按照發(fā)酵液體積的比例接入第一發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；按照本領(lǐng)域常規(guī)方法將球孢白僵菌按照接種比例接入到第二發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后按所需比例混合，裝桶或瓶，即可制得成品。
[0023]具體操作可以依照如下方法進(jìn)行:步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復(fù)合培養(yǎng)液:分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母菌、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°c高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基，放大培養(yǎng)，制得各有益菌2.0X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121°C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量分別為第一發(fā)酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，轉(zhuǎn)速100~250rpm,恒壓通氣培養(yǎng)6~IOh后,然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下靜止厭氧培養(yǎng)72~96h。
[0024]步驟2:制得球孢白僵菌液體發(fā)酵液:
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20~26°C下培養(yǎng)7~14d，然后再在無菌條件下加入含0.05~0.2%吐溫80的無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2.0~5.0%，在20~26°C下，轉(zhuǎn)速100~200rpm，培養(yǎng)84~108h。
[0025]步驟3:制得除臭滅害復(fù)合菌劑:
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將所述步驟I和步驟2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0X IO9個/mL以上，灌裝，制得所述生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
[0026]步驟I和步驟2中所述的有益微生物液體培養(yǎng)發(fā)酵的操作按本領(lǐng)域常規(guī)操作，其中各個有益菌種的種子液培養(yǎng)基均采用本領(lǐng)域常用配方。其中球孢白僵菌孢子懸浮液制備采用為PDA培養(yǎng)基，在22°C下培養(yǎng)9d，然后再在無菌條件下加入含0.1%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；啤酒酵母菌種子液培養(yǎng)基為液體PDA培養(yǎng)基，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h ;蘇云金芽孢桿菌種子液培養(yǎng)基為YG培養(yǎng)基，在30°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)72h ;植物乳桿菌種子液培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，在28°C下，密封靜止培養(yǎng)48h;沼澤紅假單胞菌種子液培養(yǎng)基為光合細(xì)菌培養(yǎng)常用的配方，具體配方為:醋酸鈉0.5 wt%，氯化鈉0.1 wt%，硫酸銨0.03 wt%，磷酸二氫鉀0.05 wt%，磷酸氫二鉀
0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%,硫酸亞鐵0.0005 wt%,酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.8，121°C滅菌20min，在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養(yǎng)72h。
[0027]所述的第一發(fā)酵培養(yǎng)基配方最佳為:蛋白胨0.5wt%,糖蜜20wt%,葡萄糖1.0wt%,磷酸二氫鈉1.0wt%，硫酸鎂0.06wt%，硫酸錳0.01wt%以及余量為水，pH為7.0。
[0028]所述的第二發(fā)酵培養(yǎng)基最佳配方為:由糖蜜10wt%，玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氫鉀1.5wt%，硫酸鎂0.5wt%，氯化鈣0.01wt%,吐溫-80 1.0wt%,以及余量為水，pH為6.8。
[0029]一種所述除臭滅害復(fù)合菌劑的使用方法，將所述除臭滅害復(fù)合菌劑與潔凈的水按1:10~1:15的比例稀釋，均勻噴灑在垃圾的底部和表面，每天噴灑一次，連續(xù)噴灑3d~5d。
[0030]本發(fā)明所述的復(fù)合微生物制劑主要用于生活垃圾中轉(zhuǎn)站、公共廁所、垃圾填埋場等地方惡臭氣體去除和蚊蠅和蟑螂等有害生物消滅?？梢詫⒈景l(fā)明的除臭滅害復(fù)合菌劑按照1: 10~1: 50比例(重量比)與水混合噴灑在垃圾堆或垃圾滲濾液上，使用量也可以根據(jù)惡臭氣體或者害蟲多少調(diào)整使用量。除臭滅害復(fù)合菌劑的功效不僅可以有效去除垃圾的異味，抑制腐敗細(xì)菌的惡性繁殖，減少惡臭氣味再生，還能夠殺死蚊蠅、蟑螂等害蟲，在很大程度降低疾病的傳播，改善垃圾發(fā)酵的生態(tài)環(huán)境。
[0031]本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。
本發(fā)明的有益效果是:相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種能夠去除垃圾異味和消滅垃圾蚊蠅、蟑螂等害蟲的具有綜合功能的除臭滅害復(fù)合菌劑，彌補現(xiàn)有垃圾處理生物制劑僅去除垃圾異味，而不能對垃圾害蟲滅害的缺陷，避免垃圾物理劑和化學(xué)處理制劑在垃圾使用除臭滅害帶來的二次污染風(fēng)險。其可以在垃圾中轉(zhuǎn)站、化糞池、公共廁所和垃圾填埋場等場所進(jìn)行去除異味和消滅害蟲，在五種微生物協(xié)同作用下，可以迅速降級垃圾的惡臭氣體，抑制腐敗細(xì)菌的繁殖，消滅垃圾堆的蚊蠅、蟑螂害蟲，改善垃圾堆的微生態(tài)環(huán)境，具有重大的經(jīng)濟意義和環(huán)保意義。本產(chǎn)品用于垃圾除臭滅害，綜合治理垃圾惡臭氣體產(chǎn)生和病蟲害的傳播，生態(tài)環(huán)保，使用方便，生產(chǎn)成本低，對環(huán)境無二次污染，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0032]【專利附圖】

【附圖說明】
下面參照附圖結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
圖1為本發(fā)明對垃圾處理效果的對比圖。
【具體實施方式】
[0033]下面用實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此把本發(fā)明限制實施例的范圍之中。實施例中，所述的球孢白僵菌、啤酒酵母、植物乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和蘇云金芽孢桿菌都是現(xiàn)有常規(guī)菌種，均可在中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心購買。
[0034]實施例1
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復(fù)合培養(yǎng)液。
[0035]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基(啤酒酵母:PDA培養(yǎng)基，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養(yǎng)基，在30°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)72h ；植物乳桿菌=MRS培養(yǎng)基，在28°C下，密封靜止培養(yǎng)48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養(yǎng)72h，培養(yǎng)基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121°C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基(蛋白胨0.6wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.2wt%，磷酸二氫鈉1.2wt%，硫酸鎂0.05wt%，硫酸錳0.02wt%以及余量為水，pH為7.0)中，接種量分別為第一發(fā)酵液的2.0%和8.0%，在30°C下，轉(zhuǎn)速200rpm，恒壓通氣培養(yǎng)8h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的1.5%和10.0%，在30°C下靜止厭氧培養(yǎng)72h。
[0036]步驟2:制得球孢 白僵菌液體發(fā)酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在22°C下培養(yǎng)10d，然后再在無菌條件下加入含0.1%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基(糖蜜15wt%,玉米浸提液1.2wt%,磷酸二氫鉀1.2wt%,硫酸鎂0.6wt%,氯化鈣0.02wt%,吐溫-801.2wt%，以及余量為水，pH為7.0)中，接種量為2.0%，在22°C下，轉(zhuǎn)速150rpm，培養(yǎng)96h。
[0037]步驟3:制得除臭滅害復(fù)合菌劑
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發(fā)酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
[0038]實施例2
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復(fù)合培養(yǎng)液。
[0039]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基(啤酒酵母:PDA培養(yǎng)基，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養(yǎng)基，在30°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)72h ；植物乳桿菌=MRS培養(yǎng)基，在28°C下，密封靜止培養(yǎng)48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養(yǎng)72h，培養(yǎng)基配方:醋酸鈉0.5 wt%，氯化鈉0.1 wt%，硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121°C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基(蛋白胨0.5wt%，糖蜜20wt%，葡萄糖1.0wt%,磷酸二氫鈉1.0wt%,硫酸鎂0.06wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量為水，pH為7.2)中，接種量分別為第一發(fā)酵液的5.0%和6.0%，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm，恒壓通氣培養(yǎng)IOh后，然后將植物乳桿菌 和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的1.0%和9.0%，在28°C下靜止厭氧培養(yǎng)96h。
[0040]步驟2:制得球孢白僵菌液體發(fā)酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20°C下培養(yǎng)14d，然后再在無菌條件下加入含0.2%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基(糖蜜10wt%,玉米浸提液1.0wt%,磷酸二氫鉀1.5wt%,硫酸鎂0.5wt%,氯化鈣0.01wt%,吐溫-801.0wt%，以及余量為水，pH為6.8)中，接種量為5%，在22°C下，轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)108h。
[0041]步驟3:制得除臭滅害復(fù)合菌劑
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發(fā)酵罐中的菌液按照85%和15%比例混合，活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
[0042]實施例3
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復(fù)合培養(yǎng)液。
[0043]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基(啤酒酵母:PDA培養(yǎng)基，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養(yǎng)基，在30°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)72h ；植物乳桿菌=MRS培養(yǎng)基，在28°C下，密封靜止培養(yǎng)48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養(yǎng)72h，培養(yǎng)基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 Wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121°C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基(蛋白胨0.8wt%，糖蜜15wt%，葡萄糖1.5wt%,磷酸二氫鈉0.8wt%,硫酸鎂0.04wt%,硫酸猛0.03wt%以及余量為水，pH為
6.8)中，接種量分別為第一發(fā)酵液的4.0%和7.0%，在32°C下，轉(zhuǎn)速250rpm，恒壓通氣培養(yǎng)6h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的3.0%和7.0%，在32 °C下靜止厭氧培養(yǎng)72h。
[0044]步驟2:制得球孢白僵菌液體發(fā)酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在26°C下培養(yǎng)12d，然后再在無菌條件下加入含0.15%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基(糖蜜18wt%,玉米浸提液1.5wt%,磷酸二氫鉀1.7wt%,硫酸鎂0.8wt%,氯化鈣0.03wt%吐溫-80
1.3wt%，以及余量為水，pH為7.5)中，接種量為3.0%，在26°C下，轉(zhuǎn)速180rpm，培養(yǎng)84h。
[0045]步驟3:制得除臭滅害復(fù)合菌劑
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發(fā)酵罐中的菌液按照90%和10%比例混合，活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
[0046]實施例4
步驟1:制得啤酒酵母、植物乳桿菌、蘇云金芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌復(fù)合培養(yǎng)液。
[0047]分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基(啤酒酵母:PDA培養(yǎng)基，在28°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)48h ;蘇云金芽孢桿菌:YG培養(yǎng)基，在30°C下，轉(zhuǎn)速180rpm培養(yǎng)72h ；植物乳桿菌=MRS培養(yǎng)基，在28°C下，密封靜止培養(yǎng)48h ;沼澤紅假單胞菌:在光照30001x下，30°C下，密封靜止培養(yǎng)72h，培養(yǎng)基配方:醋酸鈉0.5 wt%,氯化鈉0.1 wt%,硫酸銨0.03wt%,磷酸二氫鉀0.05 wt%,磷酸氫二鉀0.04 wt%,硫酸鎂0.04 wt%,氯化鈣0.005 wt%,硫酸錳0.05 wt%jt酸亞鐵0.0005 wt%，酵母膏0.05 wt%，蛋白胨0.05 wt%，其余為水，pH值為
7.6-7.8，121°C滅菌20min)，制得各有益菌2.0X109f/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121°C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基(蛋白胨0.4wt%，糖蜜25wt%，葡萄糖0.8wt%,磷酸二氫鈉0.6wt%,硫酸鎂0.04wt%,硫酸猛0.01wt%以及余量為水，pH為
7.1)中，接種量分別為第一發(fā)酵液的3.0%和7.0%，在30°C下，轉(zhuǎn)速150rpm，恒壓通氣培養(yǎng)9h后，然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的2.5%和7.5%，在35 °C下靜止厭氧培養(yǎng)84h。
[0048]步驟2:制得球孢白僵菌液體發(fā)酵液
將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在24°C下培養(yǎng)7d，然后再在無菌條件下加入含0.05%吐溫-80無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液。將制的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基(糖蜜12wt%,玉米浸提液1.3wt%,磷酸二氫鉀1.0wt%,硫酸鎂0.4wt%,氯化鈣0.02wt%吐溫-80
1.0wt%，以及余量為水，pH為7.2)中，接種量為4.0%，在22°C下，轉(zhuǎn)速lOOrpm，培養(yǎng)108h。
[0049]步驟3:制得除臭滅害復(fù)合菌劑發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將步驟I和步驟2所述的2組發(fā)酵罐中的菌液按照80%和20%比例混合，活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
[0050]下面通過效果實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果。
[0051]效果實施例1
本發(fā)明與常用的生物殺蟲劑和除臭滅蠅劑對垃圾除臭滅害效果對比。
[0052]選用市場銷售的生物殺蟲劑，生物除臭滅蠅劑，生物除臭劑與本發(fā)明(實施例2)在垃圾中轉(zhuǎn)除臭效果對比分析實驗。選用的除臭滅蠅劑為命名為生物制劑A，主要成分為沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、德氏乳酸菌和中草藥混合的生物制劑；選用的生物殺蟲劑命名為生物制劑B，主要成分為:球孢白僵菌、放線菌、沼澤紅假單胞菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌等發(fā)酵液與中草藥、大蒜、蜜糖混合發(fā)酵的生物制劑。選用的生物除臭劑命名為生物制劑C，主要成分為光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、硝化細(xì)菌、放線菌混合發(fā)酵的生物除臭劑。選擇大學(xué)城4個高校食堂垃圾收集點作為除臭滅害對象，未使用前對各個收集點NH3、H2S、臭氣濃度、蒼蠅數(shù)量、蟑螂數(shù)量等做好測定和調(diào)查，將本品和對照品按照與水1:10的比例稀釋，均勻噴灑垃圾收集點的底部和垃圾表面，每天噴灑一次，連續(xù)5d，檢測惡臭和害蟲去除情況，如圖1所示。
[0053]由圖1可以看出，本發(fā)明(實施例2)在生活垃圾使用5d后的除臭滅害綜合效果優(yōu)于其他對比的三組生物制劑，對氨氣的去除率為78.56%，對硫化氫去除率為56.85%，惡臭去除率為72.38%，蒼蠅去除率達(dá)72.4%，蟑螂的去除率為54.32%。在除臭綜合效果方面，本發(fā)明最佳，略優(yōu)于生物制劑C，主要由于本發(fā)明不僅降解掉垃圾中的惡臭有機物，抑制腐敗抑菌的生長，還能夠控制蒼蠅蟑螂的繁殖，減少有害生物的傳播，改變生活垃圾的整個生態(tài)環(huán)境。在消滅蒼蠅和蟑螂方面，本發(fā)明的效果優(yōu)于生物制劑B，主要由于本發(fā)明所選用的球孢白僵菌ACCC30765，ACCC30878, ACCC30704在殺滅蒼蠅和蟑螂方面效果突出，特別是配合使用蘇云金芽孢桿菌，能夠彌補球孢白僵菌的殺蟲藥效慢的缺陷。
[0054]效果實施例2
本發(fā)明在合肥蜀山區(qū)某垃圾中轉(zhuǎn)站除臭滅害實際應(yīng)用效果。
[0055]將本產(chǎn)品(實施例3制備)與自來水(陽光暴曬去除水中氯離子)按照1:15的比例混合，均勻噴灑在垃圾中轉(zhuǎn)站部底部垃圾滲濾液和垃圾上，每次傾倒垃圾后噴灑一次。使用2d后已經(jīng)無明顯臭味，5d后在垃圾中轉(zhuǎn)站角落處發(fā)現(xiàn)死的蟑螂和蒼蠅，對死的蟑螂和蒼蠅體內(nèi)病源微生物檢測，發(fā)現(xiàn)有蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌，環(huán)衛(wèi)工人的工作環(huán)境得到明顯改善。
[0056]效果實施例3
本發(fā)明在合肥市大楊鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)集市公共廁所除臭滅害應(yīng)用效果。
[0057]將本產(chǎn)品(實施例4制備)與自來水(陽光暴曬去除水中氯離子)按照1:10的比例混合，每天均勻噴灑廁所內(nèi)各個角落，每天下午噴灑一次。連續(xù)使用2d后已經(jīng)廁所內(nèi)異味消除，可以明顯感覺到無惡臭異味，使用4d后在公共廁所內(nèi)發(fā)現(xiàn)死的蟑螂和蒼蠅，對死的蟑螂和蒼蠅體內(nèi)病源微生物檢測，發(fā)現(xiàn)有蘇云金芽孢桿菌和球孢白僵菌，公共廁所的周邊環(huán)境得到明顯改善。
[0058]盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。
【權(quán)利要求】
1.一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:該復(fù)合菌劑由下述以重量份計的原料制成:球孢白僵菌培養(yǎng)液10~20份、啤酒酵母培養(yǎng)液10~17份、植物乳桿菌培養(yǎng)液5~10份、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)液30~39份、蘇云金芽孢桿菌24~33份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述球孢白僵菌培養(yǎng)液所用菌種為球孢白僵菌、Beauveria bassiana) ACCC30765, ACCC30878, ACCC30704中的一種或兩種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述啤酒酵母培養(yǎng)液所用菌種為啤酒酵母iSacclmromyces cerevisiae)ACCC20165,ACCC21135中的一種或兩種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述的植物乳桿菌培養(yǎng)液所用菌種植物乳桿菌(Zacio如&77狀plantar) kCCCllllS, ACCC11016中的一種或者兩種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述的沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)液所用菌種為沼澤紅假單胞菌{Rhodop seudomonasACCC10649。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述的蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)液所用菌種為蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis) ACCCO1480,CICC23650中的一種或者兩種。
7.一種制備權(quán)I所述復(fù)合菌劑的方法，其特征在于包括以下步驟:.步驟1:分別將瓊脂斜面活化好的啤酒酵母菌、蘇云金芽孢桿菌、植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種到121°C高溫滅菌后的三角瓶液體種子培養(yǎng)基，放大培養(yǎng)，制得各有益菌.2.0 X IO9個/mL的種子液；將啤酒酵母菌和蘇云金芽孢桿菌接種于經(jīng)過121 °C高溫滅菌的第一發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量分別為第一發(fā)酵液的2.0~5.0%和6.0~8.0%，在28~32°C下，轉(zhuǎn)速100~250rpm,恒壓通氣培養(yǎng)6~IOh后,然后將植物乳桿菌和沼澤紅假單胞菌接種于該發(fā)酵液中，接種量的分別為第一發(fā)酵液的1.0~3.0%和7.0~10.0%，在28~35°C下靜止厭氧培養(yǎng)72~96h ； 步驟2:將瓊脂活化的球孢白僵菌接種PDA平板上，在20~26°C下培養(yǎng)7~14d，然后再在無菌條件下加入含0.05~0.2%吐溫-80的無菌水，在無菌條件下打散孢子，制得2.0X IO9個/mL白僵菌孢子懸浮液；將制得的球孢白僵菌的孢子懸浮液接種于121°C高溫滅菌的第二發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2.0~5.0%，在20~26°C下，轉(zhuǎn)速100~200rpm，培養(yǎng)84 ~108h ； 步驟3:發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，在無菌條件下，將所述步驟I和所述步驟2所得菌液按照80~90%和10~20%比例混合，按活菌計數(shù)，有益菌總數(shù)達(dá)到2.0 X IO9個/mL以上，灌裝，制得權(quán)I所述的生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述步驟I所用的第一發(fā)酵培養(yǎng)基，以重量百分比計算，包括以下組分:蛋白胨0.4~0.8wt%，糖蜜15~25wt%,葡萄糖0.8~1.5wt%，磷酸二氫鈉0.6~1.2wt%，硫酸鎂0.04~0.06wt%,硫酸錳0.01 ~0.03wt%，余量為水，pH 為 6.8 ~7.2。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種生活垃圾除臭滅害復(fù)合菌劑，其特征在于:所述步驟I所用的第二發(fā)酵培養(yǎng)基，以重量百分比計算，包括以下組分:糖蜜10~18wt%，玉米浸提液.1.0 ~1.5wt%,磷酸二氫鉀 1.0 ~1.7wt%,硫酸鎂 0.4 ~0.8wt%,氯化鈣 0.01 ~0.03wt%,吐溫-80 1.0~1.5wt%，余量為水，pH為6.8~7.5。
10.一種權(quán)I所述除臭滅害復(fù)合菌劑的使用方法，其特征在于:將權(quán)I所述除臭滅害復(fù)合菌劑與潔凈的水按1:10~1:15的比例稀釋，均勻噴灑在垃圾的底部和表面，每天噴灑一次，連續(xù)噴灑3d~ 5d。
【文檔編號】B09B3/00GK103992968SQ201410160437
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】趙海泉, 胡子全, 柴化建, 田春, 周理君, 曾蘇 申請人:安徽清明環(huán)保科技有限公司