專利名稱：一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)的制作方法
一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)
技術領域：
本發(fā)明涉及制備液相色譜系統(tǒng)領域，具體地說，是一種在線低、中、高壓結合的二
維制備液相色譜系統(tǒng)。背景技術：
制備液相色譜是以獲取純樣品為目的的一種分離技術，自20世紀30年代應用于 色素的分離至今，得到了長足發(fā)展。20世紀80年代高效制備液相色譜在醫(yī)藥工業(yè)中有了迅 速的發(fā)展，90年代在蛋白的分離純化上得到大量應用。如今，制備色譜幾乎在社會生產生活 的各個領域均有應用，如次生類代謝產物、天然產物、大分子化合物及某些重要的藥用生物 活性蛋白、生物治療品與診斷試劑的分離純化。但是，與分析色譜相比，制備液相色譜分離 效率不高，不能滿足高純度、高產量的需求。于是，人們致力尋找一種高分離效率的制備色 譜模式，降低生產成本，得到高純的樣品。進樣量與分離效率是液相制備色譜的兩個重要指 標，而進樣量增加，會降低分離效率。為了同時兼顧進樣量和分離效率，曾有人提出將一根 大內徑柱與一根小內徑柱串聯(lián)，其認為前面大內徑柱能提供大的柱容量，后面小內徑柱提 供有效的分離。但是結果表明該方法不是一個有效的途徑。2005年，關亞風等發(fā)明了一種 內徑逐漸縮小的錐形柱。此內徑逐漸縮小的錐形柱，選擇合適的錐角，使色譜譜帶流型接近 篩子狀流型，其上樣量大同時能有效提高柱效。但是該色譜柱提高的柱效有限，對一些復雜 物質分離效果不盡人意。 二維液相色譜(2D-LC)是將相互獨立的兩支色譜柱串聯(lián)起來構成的分離系統(tǒng)。樣 品經過第一維色譜柱分離后進入切換接口中，通過接口的富集、濃縮以及切割后進入第二 維色譜柱繼續(xù)分離。在一維系統(tǒng)中不能完全分離的組分，有可能在二維系統(tǒng)中得到較好的 分離，因此整個二維系統(tǒng)的分離能力，系統(tǒng)分辨率、峰容量較一維色譜系統(tǒng)得到了大大提 高。在制備色譜中，有人首先將樣品用低壓制備液相色譜粗分，將收集的洗脫液濃縮后，再 以中、高壓液相色譜分離。這種方法操作復雜費時費力，且浪費大量溶劑，生產成本高。至 今，還沒有人將低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)結合構建在線二維制備液相色譜系統(tǒng)，用于 規(guī)?；苽渖a。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種在線低、中、高壓結合的二維制 備液相色譜系統(tǒng)。 本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的 —種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，包含第一維分離系統(tǒng)和第二 維分離系統(tǒng)；第一維分離系統(tǒng)與第二維分離系統(tǒng)通過六通閥進行連接；第一維分離系統(tǒng)使 用低或中壓制備液相色譜系統(tǒng)，第二維分離系統(tǒng)使用低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)；第二 維系統(tǒng)使用的壓力不低于第一維分離系統(tǒng)； 當?shù)谝慌c第二維分離系統(tǒng)均為低壓或中壓制備液相色譜系統(tǒng)時六通閥1號位通過三通與第一維色譜柱出口端及其檢測器相連，4號位與第二維色譜柱進口端相連，5號位 與第二維輸液泵相連，2、3號位通過外管路相連，6號位外接廢液收集裝置；初始狀態(tài)六通 閥1與6、2與3、4與5號位相通，第一維分離系統(tǒng)的檢測器對樣品分離情況進行實時監(jiān)測， 當目標物從第一維分離系統(tǒng)中洗脫下來時，切換六通閥，使得1與2、3與4、5與6號位相通， 目標物直接進入第二維色譜柱；然后再次切換六通閥，使其恢復初始狀態(tài)，后于目標物洗脫 的物質進入廢液收集裝置，同時進行第二維分離；分離后的樣品經檢測器檢測確認后進行 收集。 當?shù)诙S分離系統(tǒng)使用的壓力高于第一維分離系統(tǒng)時六通閥1號位通過三通與 第一維色譜柱出口端及其檢測器相連，4號位與第二維色譜柱進口端相連，2、5號位之間接 一捕集柱，3號位與第二維輸液泵相連，6號位外接廢液收集裝置；初始狀態(tài)六通閥1與6、 2與3、4與5號位相通，第一維分離系統(tǒng)的檢測器對樣品分離情況進行實時監(jiān)測，當目標物 從第一維分離系統(tǒng)中洗脫下來時，切換六通閥，使得1與2、3與4、5與6號位相通，目標物 吸附于捕集柱柱頭；然后再次切換六通閥，使其恢復初始狀態(tài)，將目標物沖洗入第二維色譜 柱，進行第二維分離；分離后的樣品經檢測器檢測確認后進行收集。 所述的在線二維制備液相色譜系統(tǒng)中第一維分離系統(tǒng)為等度或梯度低、中壓制備 液相色譜系統(tǒng)，第二維分離系統(tǒng)為等度或梯度低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)，第二維系統(tǒng) 使用的壓力不低于第一維分離系統(tǒng)。第一與第二維分離系統(tǒng)中使用的檢測器，可以為制備 型紫外_可見檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器及電導檢測器等各 種檢測器；第一與第二維分離系統(tǒng)中使用的色譜柱，為玻璃、PEEK或不銹鋼色譜柱。
所述在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)使用的固定相可以是各種規(guī) 格的聚合物材料及顆粒、硅膠以及原位聚合的整體材料，包括反相填料、正相填料、離子交 換樹脂填料、體積排阻填料、整體填料、手性填料以及親和填料等。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的積極效果是 (1)本發(fā)明通過六通閥以及軟件將兩個低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)有機組合構 成在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其第一維分離系統(tǒng)為低、中壓制備液相 色譜系統(tǒng)，第二維分離系統(tǒng)為低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)，保證大進樣量的同時大大提 高系統(tǒng)分離能力； (2)本發(fā)明的目標物經第一維分離后直接或被捕集柱富集后進入第二維分離系 統(tǒng)，進一步分離純化，一次進樣即可拿到純品，能節(jié)省溶劑處理步驟，節(jié)約大量時間、溶劑及 人力，降低生產成本； (3)本發(fā)明操作簡單，易于實現(xiàn)自動化。進樣之后僅需切換兩次六通閥，即可完成 在線二維分析； (4)本發(fā)明的應用范圍廣，可以用于天然產物的分離純化、生物樣品的分離純化、 藥物的分離及手性樣品的分離，特別適合于微量樣品的分離純化。


圖1為本發(fā)明實施例1系統(tǒng)結構示意圖；
圖2為本發(fā)明實施例2系統(tǒng)結構示意圖；
圖3為本發(fā)明實施例2樣品HPLC分析色譜4
圖4為本發(fā)明實施例2第一維分離系統(tǒng)色譜圖；
圖5為本發(fā)明實施例2第二維分離系統(tǒng)色譜圖。
具體實施方式
以下提供本發(fā)明一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)的具體實施 方式。 實施例1 如附圖l所示，一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，由兩個低 壓分離系統(tǒng)及連接兩個分離系統(tǒng)的六通閥組成，六通閥1號位通過三通與第一維色譜柱 (column 1)出口端及檢測器UV1相連，4號位與第二維色譜柱(column 3)進口端相連，5號 位與第二維輸液泵(Pump C， Pump D)相連，2、3號位通過外管路相連，6號位外接廢液收集 裝置。 初始狀態(tài)六通閥1與6、2與3、4與5號位相通，樣品進入第一維色譜柱(column l)，泵A(Pump A)與泵B(Pump B)運輸?shù)谝痪S流動相對其進行洗脫，第一維檢測器(UV1)在 線檢測，洗脫液直接進入廢液收集裝置；當目標物被洗脫下來時，切換六通閥，使得1與2、3 與4、5與6號位相通，目標物經2、3號位進入第二維色譜柱(column 3);當目標物被完全 洗脫出來后，再次切換六通閥，使其恢復初始狀態(tài)，泵C(Pump C)與泵D(Pump D)輸運第二
維流動相進行第二維分離，經檢測器確定目標物后進行收集。
實施例2 請參見附圖2 5，樣品氟苯尼考，目標物為其中一低含量雜質，原樣HPLC分析 色譜圖如圖2所示。 系統(tǒng)組成 一 種在線低、高壓混合二維制備液相色譜系統(tǒng)，column 1為 30mmX 300mm的玻璃色譜柱，內裝有50 ii m的C18填料；column 2為5mmX 50mm不銹鋼色譜 柱，±真料為30iim的C18色譜固定相；column 3為裝添5 ii m的C18填料的10mmX250mm不
銹鋼色譜柱。UV1及UV2均為雙波長紫外檢測器。 色譜條件檢測波長為225nm、230nm。第一與第二維色譜系統(tǒng)均使用水、甲醇為流 動相，梯度洗脫。 參照附圖4，即為使用本發(fā)明系統(tǒng)分離氟苯尼考得到的第二維色譜圖。 本發(fā)明解決了進樣量與分離能力之間的矛盾，保證大進樣量的同時大大提高了制
備色譜系統(tǒng)的分離能力；系統(tǒng)結構簡單，易于搭建；操作簡單，易于實現(xiàn)自動化；不僅能大
大降低制備過程的生產成本，而且通用性好，應用范圍廣。 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為 本發(fā)明的保護范圍內。
權利要求
一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于以六通閥為接口，將兩個制備液相色譜系統(tǒng)結合組成在線二維制備液相色譜系統(tǒng)，用于規(guī)模化制備生產；第一維分離系統(tǒng)使用低或中壓制備液相色譜系統(tǒng)，第二維分離系統(tǒng)使用低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)；第二維分離系統(tǒng)使用的壓力不低于第一維分離系統(tǒng)。
2. 如權利要求1所述的一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在 于，當?shù)谝慌c第二維分離系統(tǒng)均為低壓或中壓制備液相色譜系統(tǒng)時六通閥1號位通過三 通與第一維色譜柱出口端及其檢測器相連，4號位與第二維色譜柱進口端相連，5號位與第 二維輸液泵相連，2、3號位通過外管路相連，6號位外接廢液收集裝置；初始狀態(tài)六通閥1與 6、2與3、4與5號位相通，第一維分離系統(tǒng)的檢測器對樣品分離情況進行實時監(jiān)測，當目標 物從第一維分離系統(tǒng)中洗脫下來時，切換六通閥，使得1與2、3與4、5與6號位相通，目標 物直接進入第二維色譜柱；然后再次切換六通閥，使其恢復初始狀態(tài)，后于目標物洗脫的物 質進入廢液收集裝置，同時進行第二維分離；分離后的樣品經檢測器檢測確認后進行收集。
3. 如權利要求1所述的一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在 于，當?shù)诙S分離系統(tǒng)使用的壓力高于第一維分離系統(tǒng)時六通閥1號位通過三通與第一 維色譜柱出口端及其檢測器相連，4號位與第二維色譜柱進口端相連，2、5號位之間接一捕 集柱，3號位與第二維輸液泵相連，6號位外接廢液收集裝置；初始狀態(tài)六通閥1與6、2與3、 4與5號位相通，第一維分離系統(tǒng)的檢測器對樣品分離情況進行實時監(jiān)測，當目標物從第一 維分離系統(tǒng)中洗脫下來時，切換六通閥，使得1與2、3與4、5與6號位相通，目標物吸附于 捕集柱柱頭；然后再次切換六通閥，使其恢復初始狀態(tài)，將目標物沖洗入第二維色譜柱，進 行第二維分離；分離后的樣品經檢測器檢測確認后進行收集。
4. 如權利要求1所述的一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征 在于，所述在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)使用的固定相為各種規(guī)格的聚合 物材料及顆粒、硅膠以及原位聚合的整體材料，包括反相填料、正相填料、離子交換樹脂填 料、體積排阻填料、整體填料、手性填料以及親和填料。
5. 如權利要求1所述的一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在 于，所述的液相色譜系統(tǒng)應用于天然產物的分離純化、生物樣品的分離純化、藥物的分離及 手性樣品的分離。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種在線低、中、高壓結合的二維制備液相色譜系統(tǒng)，通過六通閥及軟件將兩個一維低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)有機結合；第二維系統(tǒng)使用的壓力不低于第一維分離系統(tǒng)。當?shù)谝慌c第二維系統(tǒng)均為低壓或中壓制備液相色譜系統(tǒng)時，通過切換六通閥，使目標物經第一維分離后直接進入第二維色譜柱，進行第二維分離；當?shù)诙S分離系統(tǒng)使用的壓力高于第一維分離系統(tǒng)時，在六通閥上接一捕集柱，目標物經第一維分離后吸附于捕集柱柱頭，然后進入第二維色譜柱，進行第二維分離。本發(fā)明優(yōu)點是解決了進樣量與分離能力之間的矛盾，保證大進樣量的同時大大提高了制備色譜系統(tǒng)的分離能力；系統(tǒng)結構簡單，易于搭建；操作簡便，易于實現(xiàn)自動化；應用范圍廣。
文檔編號B01D15/08GK101791491SQ20101013483
公開日2010年8月4日 申請日期2010年3月29日 優(yōu)先權日2010年3月29日
發(fā)明者張維冰, 戈兆松, 王安, 王蕓, 邵平 申請人:蘇州匯通色譜分離純化有限公司