專利名稱：富血小板血漿的提取方法和提取的富血小板血漿的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取富含血小板的血漿的方法，本發(fā)明方法在特定條件下獲得的富血小板血漿具有血小板濃度高、血小板回收率高等至少一個方面的優(yōu)點。
背景技術(shù)：
富含血小板的血漿，在本發(fā)明中可稱為富血小板血漿(Platelet Rich Plasma,PRP)，其是是通過離心血液而得到的含高濃度的血小板血漿。人體的血小板除了可以在止血的時候提供凝聚作用外，血小板中還含有很多與創(chuàng)傷愈合和骨頭再生有關(guān)的多種生長因子。如血小板衍生生長因子(Platelet Derived Growth Factor, F1DGF),轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming Growth Factor,TGF),膜島素樣生長因子(Insulin-like Growth Factor, IGF),表皮生長因子(Epidermal Growth Factor, EGF)以及血管內(nèi)皮生長因子(VascularEndothelial Growth Factor,VEGF)等等,血小板來源的生長因子,對細(xì)胞的分化和增殖起著促進(jìn)作用，這些生長因子相互之間具有協(xié)同響應(yīng)，與其他促進(jìn)細(xì)胞活性的因子相互作用和影響，共同維持著組織環(huán)境的平衡，對傷口愈合、修復(fù)和再生有著重要的作用。另外，由于PRP可以從患者自身血液中提取，經(jīng)提取富集處理后，可用于相關(guān)疾病的治療，因而來源豐富，取材方便，制備方法簡單而且可以讓身體吸收。自身PRP使用能避免病毒傳播和免疫排斥的問題出現(xiàn)。因此PRP被廣泛應(yīng)用到不同的醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中。如骨科、口腔科、頜面外科、運動醫(yī)學(xué)以及美容醫(yī)學(xué)。PRP在目前為止還沒有一個統(tǒng)一的制備方法，PRP的制備原理主要是利用血液中各種成分沉降速度不同，通過離心將血液分層。從而獲取含血小板的血漿，并利用離心原理進(jìn)一步的濃縮以獲得高濃度的血小板血漿。人體全血中血小板的濃度一般為1 3X 105/ml。研究認(rèn)為濃縮后的PRP血小板濃度應(yīng)為全血血小板濃度的3-4倍。研究也發(fā)現(xiàn)PRP中血小板濃度的提高能有效提高干細(xì)胞的增殖和分化能力以及能夠顯著增加成纖維細(xì)胞的增殖和I型膠原蛋白的表達(dá)。因此有效的分離和提高PRP中血小板的濃度成為了整個PRP治療方案的關(guān)鍵。林庶茹等(CN101402940A，中國專利申請?zhí)?00810228726. 5，發(fā)明名稱一種小鼠血小板的提取方法)公開了一種小鼠血小板的提取方法，小鼠眶靜脈取血，置于抗凝離心管中，靜置30MIN后離心，800RPM離心10MIN，上清液即為富含血小板的血漿。吸出上清液置于干凈試管中，3500RPM離心10MIN，棄去上清液，管底沉淀物為血小板。向試管中滴加50 100ML質(zhì)量濃度為1%草酸銨溶液，以玻璃棒輕輕攪拌，再加入質(zhì)量濃度為1%草酸銨溶液2 3ML，靜置5MIN，使紅細(xì)胞溶解。3500RPM離心10MIN，棄去上清，加入血小板洗滌液并反復(fù)吹打，使成為血小板混懸液，3300RPM離心10MIN，棄去上清，加入少量血小板洗滌液并反復(fù)吹打使之成為混懸液。該血小板將作為抗原免疫豚鼠后，取豚鼠血清給小鼠注射，制備過敏性紫癜模型。此方法操作簡單，可以得到高濃度的血小板，并很好地解決血小板純度不佳的問題。這種針對小鼠血液進(jìn)行血小板富集的方法雖然據(jù)信可以獲得濃度達(dá)101°的血小板，然而該方法未公開其血小板的收率，并且方法在操作上比較繁雜，難以適用于人血的處理。此外，王悅等(CN102078644A，中國專利申請?zhí)?01110053979. 5，發(fā)明名稱一種簡便高效的自體富血小板血漿提取裝置及提取方法)中公開了一種簡便高效的自體富血小板血漿提取裝置及提取方法，所提取的自體富血小板血漿中含有多種復(fù)合生長因子，能夠有效地促進(jìn)組織的修復(fù)。由I個注射器、I個靜脈輸液器連接管、I個靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ虸個靜脈輸液器針頭組成；注射器用以抽取靜脈血并充當(dāng)離心管；靜脈輸液器針頭通過靜脈輸液器連接管和注射器出口連接，靜脈輸液器針頭用以皮膚血管穿刺、抽取抗凝劑和激活劑并向人體需要部位注射提取后的自體富血小板血漿；靜脈輸液器連接管可彎曲固定于靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ?。?jù)信這種裝置在提升血小板提取的操作性方面是有益的。因此為了從血液中富集血小板而得到有臨床治療意義的富血小板血漿，探尋一種操作過程簡單、收率高、富集的血漿中血小板濃度高的方法，是本領(lǐng)域技術(shù)人員迫切期待的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是探索一種簡單和高效地分離和濃縮血漿中血小板的方法；特別是本發(fā)明為了從血液中富集血小板而得到有臨床治療意義的富血小板血漿，探尋一種操作過程簡單、收率高、富集的血漿中血小板濃度高的方法。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)利用梯度離心法進(jìn)行血小板的濃縮和分離，在特定操作條件下可以以高收率地獲得含濃度高血小板的血漿。為此，本發(fā)明第一方面提供了一種從血液中提取富血小板血漿的方法，其包括以下步驟(a)使采集的全血置于含有抗凝劑的容器中，使血液和抗凝劑充分混勻；(b)使混有抗凝劑的血液置于離心管中，進(jìn)行第一次離心，使血液基本上分成三層；(C)將最上層和大部分的中間層抽出并轉(zhuǎn)移到新的離心管中，混合均勻，進(jìn)行第二次離心；(d)棄掉離心管上層的血漿，利用剩余的血漿使沉淀的血小板重新懸浮，即得富血小板血衆(zhòng)(Platelet Rich Plasma PRP)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中所述全血是新鮮的全血。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中所述全血是受試個體例如患者的全血。由此，本發(fā)明獲得的富血小板血漿可以方便地重新用于該患者以治療相關(guān)疾病。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中抗凝劑選自乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid :EDTA)、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸I丐鈉、枸橡酸葡萄糖(Acid Citrate Dextrose-Solution A :ACD_A)、或其組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中抗凝劑與全血的重量比為I :8 10，例如I :9。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中所述容器可以是離心管或是采血袋等。如果是離心管并且該離心管容量適合直接離心，則所述步驟(b)中不需要另置于離心管中，而可以直接進(jìn)行離心。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(a)中還包括在使血液和抗凝劑后取適量(例如少于500ul，例如約IOOul)用于測定其中血液中血小板的數(shù)量，以便用于后續(xù)的過程比照、監(jiān)控。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(b)中經(jīng)第一次離心后是達(dá)到使血液基本上分成三層的程度。在一個實施方案中，其中最上層是含血小板的血漿層，中間一層是血塊黃層(Buffy Coat層，其中含有血小板和白細(xì)胞)，最底層的是紅細(xì)胞層。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2000rpnT3000rpm，例如 2200rpm 2800rpm,例如 2300rpm 2500rpm,例如約 2400rpm。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(b)中離心的時間為1-lOmin，例如2_8min,例如 3_5min,例如約 4min。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2300rpnT2500rpm，時間為 3_5min?！じ鶕?jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(b)中離心的轉(zhuǎn)速為2400rpm，時間為4min。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中，所述大部分的中間層是指盡量將中間層全部吸出但避免抽取紅細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中離心的轉(zhuǎn)速為1000rpnT2000rpm，例如 1200rpm 1800rpm,例如 1400rpm 1600rpm,例如約 1500rpm。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中離心的時間為10_30min，例如15_25min,例如 18_22min,例如約 20min。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中離心的轉(zhuǎn)速為1400rpnTl600rpm，時間為 18-22min。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中離心的轉(zhuǎn)速為1500rpm，時間為20mino根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中所得上層和大部分中間層經(jīng)混勻后，其中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的1-5倍，例如I. 5^4倍，例如2 3倍。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(C)中還包括在使抽取的最上層和中間層混合均勻后，取適量(例如少于500ul，例如約IOOul)用于測定其中的血小板的數(shù)量，以便用于后續(xù)的過程比照、監(jiān)控。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(d)中，所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少2/4的血漿。在一個實施方案中，在步驟(d)中，所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少3/4的血漿。在此應(yīng)當(dāng)說明，上層血漿中僅含有低濃度的血小板。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(d)中，棄掉離心管上層的血漿后，可以利用下部剩下的(約2/4，或者更優(yōu)選的約1/4)血漿重新使沉淀下來的血小板懸浮，由此可以獲取本發(fā)明所述富血小板血漿(PRP)。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(d)所得富血小板血漿(PRP)中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的5-10倍，例如6 8倍，例如6 7倍。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中步驟(d)中還包括在獲得富血小板血漿(PRP)后，取適量(例如少于500ul，例如約IOOul)用于測定其中的血小板的數(shù)量。本發(fā)明由此獲得的富血小板血漿(PRP)具有濃度高的特點，并且血小板回收率聞。本發(fā)明第二方面提供了一種富血小板血漿，其中包含O. 5^3XlOVml濃度的血小板。例如其中包含f 2X 109/ml濃度的血小板。根據(jù)本發(fā)明第二方面的富血小板血漿，其基本上是由本發(fā)明第一方面任一實施方案所述的方法獲得的。 下面對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。本發(fā)明所引用的文獻(xiàn)，以及該文獻(xiàn)中所引用的文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過弓I用并入本文。 在本發(fā)明中，本發(fā)明任一方面的任一技術(shù)方案中，其任一技術(shù)特征同樣適用于本發(fā)明的任一方面的任一實施方案，只要它們不會引起矛盾，并且這種相互適用在必要時可以作適當(dāng)?shù)男薷?。在本發(fā)明一個實施方案中，所述的全血是人的全血。在本發(fā)明中，提供了一種采用特定處置條件進(jìn)行血小板富集的方法。然而本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，使用本發(fā)明的處置條件，其中所用的器具是可以作適當(dāng)變動的，例如其中的離心裝置。例如可以使用王悅等(CN102078644A，中國專利申請?zhí)?01110053979. 5，發(fā)明名稱一種簡便高效的自體富血小板血漿提取裝置及提取方法)中所用的由注射器、靜脈輸液器連接管、靜脈留置針?biāo)芰峡ㄆ挽o脈輸液器針頭組成的裝置，該文獻(xiàn)所記載的裝置可以用于本發(fā)明方法，并使本發(fā)明方法在保持操作過程的潔凈度中是有益的。出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明在研究梯度離心法進(jìn)行血小板的濃縮和分離的過程中，獲得了一種操作過程簡單、收率高、富集的血漿中血小板濃度高的方法。
具體實施例方式通過下面的實施例可以對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對試驗中所使用到的材料以及試驗方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)的描述。以下提供了本發(fā)明操作方法的一般流程，在下文實施例中如未另外注明，使用下面一般流程的操作條件(I)把患者的全血采集到含有抗凝劑的容器里，容器可以是離心管或是采血袋?？鼓齽┛梢允褂靡叶匪囊宜?。抗凝劑和全血的比例為I :9。(2)將血液和抗凝劑充分混勻，避免出現(xiàn)凝血。提取100微升以計算血小板數(shù)量。(3)把血液分配到離心管(15毫升)。(4)把離心管放進(jìn)離心機(jī)，以轉(zhuǎn)速2400rpm離心4分鐘。(5)離心后的血液應(yīng)分為三層最底層的是紅細(xì)胞，最上層的是含血小板血漿，中間一層是Buffy Coat，含有血小板和白細(xì)胞。(6)利用移液器把最上層的血衆(zhòng)和大部分的buffy coat抽出并轉(zhuǎn)移到新的離心管中，盡量避免抽取紅細(xì)胞。提取100微升以計算血小板數(shù)量。
(7)把含有血衆(zhòng)和buffy coat混合物的離心管放進(jìn)離心機(jī)，以轉(zhuǎn)速1500rpm離心20分鐘。(8)把3/4的低濃度血小板血衆(zhòng)(Platelet Poor Plasma PPP)去掉,利用剩下的1/4血漿重懸沉淀下來的血小板，獲得富血小板血漿(PRP)。(9)抽取100微升PRP以進(jìn)行血小板計數(shù)。實施例I :提取富血小板血漿(PRP)(I)分離前全血中血小板濃度250X107ml，全血體積為10ml?？傃“鍞?shù)量為
2.5X109。(2)第一次離心后血漿中血小板濃度570 X 106/ml (濃縮2. 28倍)，血漿體積為4ml?？傃“鍞?shù)量為2. 28 X 109?；厥章蕿?1. 2%。 (3)第二次離心后血漿中(PRP)血小板濃度1685 X 106/ml (濃縮6. 74倍)，血漿體積為I. 2ml，得到富血小板血漿?？傃“鍞?shù)量為2. 02X 109。最終回收率為80. 8%。實施例2 :提取富血小板血漿(PRP)使用乙二胺四乙酸二鈉為抗凝劑，抗凝劑與全血的重量比為I :8。(I)分離前全血中血小板濃度165X107ml，全血體積為10ml?？傃“鍞?shù)量為
1.65X 109。(2)第一次離心后血漿中血小板濃度444X 106/ml (濃縮2. 69倍)，血漿體積為
3.5ml。總血小板數(shù)量為I. 55 X IO9?；厥章蕿?3. 9%。(3)第二次離心后血漿中(PRP)血小板濃度1105 X 106/ml (濃縮6. 70倍)，血漿體積為I. 2ml，得到富血小板血漿?？傃“鍞?shù)量為I. 33X 109。最終回收率為80. 6%。實施例3 :提取富血小板血漿(PRP)使用枸櫞酸葡萄糖為抗凝劑。(I)分離前全血中血小板濃度210X107ml，全血體積為10ml。總血小板數(shù)量為
2.IXlO90(2)第一次離心后血漿中血小板濃度542 X 106/ml (濃縮2. 58倍)，血漿體積為
3.5ml?？傃“鍞?shù)量為I. 90 X IO9?；厥章蕿?0. 5%。(3)第二次離心后血漿中(PRP)血小板濃度1370 X 106/ml (濃縮6. 52倍)，血漿體積為I. 2ml，得到富血小板血漿?？傃“鍞?shù)量為I. 64X 109。最終回收率為78. 1%。實施例4 :提取富血小板血漿(PRP)抗凝劑與全血的重量比為I :10，第一次離心為2300rpm并5min，第二次離心為1600rpm 并 18min。(I)分離前全血中血小板濃度195X107ml，全血體積為10ml?？傃“鍞?shù)量為
I.95X 109。(2)第一次離心后血漿中血小板濃度535 X 106/ml (濃縮2. 74倍)，血漿體積為
3.5ml?？傃“鍞?shù)量為I. 87 X IO9。回收率為95. 9%。(3)第二次離心后血漿中(PRP)血小板濃度1235 X 106/ml (濃縮6. 33倍)，血漿體積為I. 2ml，得到富血小板血漿?？傃“鍞?shù)量為I. 48 X IO90最終回收率為75. 9%。實施例5 :提取富血小板血漿(PRP)第一次離心為2500rpm并3min,第二次離心為1400rpm并20min。
(I)分離前全血中血小板濃度265X107ml，全血體積為10ml?？傃“鍞?shù)量為
2.65X 109。(2)第一次離心后血漿中血小板濃度612 X 106/ml (濃縮2. 31倍)，血漿體積為4ml?？傃“鍞?shù)量為2. 45 XlO9?；厥章蕿?2. 5%。(3)第二次離心后血漿中(PRP)血小板濃度1839 X 106/ml (濃縮6. 94倍)，血漿體積為I. 2ml，得到富血小板血漿。總血小板數(shù)量為2. 21 X IO9。最終回收率為83. 4%。比較例I :除了第一次離心轉(zhuǎn)速改為2600rpm、3000rpm、3500rpm,并且這三種轉(zhuǎn)速均安排3min、6min、IOmin時間外,其余操作條件均同實施例I。結(jié)果顯示這樣獲得的9種 富血小板血漿，它們的血小板最終回收率僅在47飛3%之間，并且血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的I. 8^3. 7倍(在本發(fā)明中可稱為最終富集倍數(shù))。例如2600rpm并3min和2600rpm并6min兩種情況下，血小板最終回收率分別為56%和61%，最終富集倍數(shù)分別為
3.I 和 2. 8。比較例2 :除了第一次離心轉(zhuǎn)速改為2100rpm、1700rpm、1400rpm，并且這三種轉(zhuǎn)速均安排3min、6min、IOmin時間外,其余操作條件均同實施例I。結(jié)果顯示這樣獲得的9種富血小板血漿，它們的血小板最終回收率僅在31飛2%之間，并且血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的I. 3 2. 5倍。例如2IOOrpm并3min和2IOOrpm并6min兩種情況下，血小板最終回收率分別為42%和47%，最終富集倍數(shù)分別為I. 9和2. 2。比較例3 :除了第二次離心轉(zhuǎn)速改為1800rpm、2200rpm、2600rpm，并且這三種轉(zhuǎn)速均安排18min、20min、25min時間外,其余操作條件均同實施例I。結(jié)果顯示這樣獲得的9種富血小板血漿，它們的血小板最終回收率僅在52飛3%之間，并且血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的3. I 3. 9倍。例如1800rpm并18min和1800rpm并20min兩種情況下，血小板最終回收率分別為53%和57%，最終富集倍數(shù)分別為3. 9和3. 2。比較例4 :除了第二次離心轉(zhuǎn)速改為1300rpm、1000rpm、700rpm，并且這三種轉(zhuǎn)速均安排18min、20min、25min時間外,其余操作條件均同實施例I。結(jié)果顯示這樣獲得的9種富血小板血漿，它們的血小板最終回收率僅在33 46%之間，并且血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的I. 9 3. I倍。例如1300rpm并18min和1300rpm并20min兩種情況下，血小板最終回收率分別為43%和35%，最終富集倍數(shù)分別為2. 9和2. 4。比較例5 :第一次離心改為2300rpm并4min、或者2500rpm并4min,并且第二次離心改為1400rpm并20min、或者1600rpm并20min,其余操作條件均同實施例I。結(jié)果顯示這樣獲得的4種富血小板血漿，它們的血小板最終回收率僅在48飛1%之間，并且血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的3. 2^4. 2倍。例如第一次離心為2300rpm并4min、第二次離心為1600rpm并20min，血小板最終回收率為51%，最終富集倍數(shù)分別為3. 7。此外，參考CN 102078644A實施例I的操作，血小板最終回收率為47%，最終富集倍數(shù)分別為3. 45。然而，本發(fā)明以上結(jié)果顯示，本發(fā)明方法在第一次和第二次離心后的平均血小板回收率分別為92. 8%和79. 8%，分離后的PRP中血小板的濃度可以達(dá)到全血的6_7倍。表明本發(fā)明所用的離心的時間和轉(zhuǎn)速的設(shè)定能有效分離和回收大部分全血中的血小板。
權(quán)利要求
1.從血液中提取富血小板血漿的方法，其包括以下步驟 (a)使采集的全血置于含有抗凝劑的容器中，使血液和抗凝劑充分混勻； (b)使混有抗凝劑的血液置于離心管中，進(jìn)行第一次離心，使血液基本上分成三層； (C)將最上層和大部分的中間層抽出并轉(zhuǎn)移到新的離心管中，混合均勻，進(jìn)行第二次離心； (d)棄掉離心管上層的血漿，利用剩余的血漿使沉淀的血小板重新懸浮，即得富血小板血衆(zhòng)(Platelet Rich Plasma PRP)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的方法，其中步驟(a)中 所述全血是新鮮的全血；和/或 所述全血是受試個體例如患者的全血。
3.根據(jù)權(quán)利要求I至2任一項的方法，其中步驟(b)中 所述抗凝劑選自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣鈉、枸櫞酸葡萄糖、或其組合； 所述抗凝劑與全血的重量比為I :8 10 ;和/或 所述步驟(a)中還包括在使血液和抗凝劑后取適量用于測定其中血液中血小板的數(shù)量的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項的方法，其中步驟(b)中 經(jīng)第一次離心后是達(dá)到使血液基本上分成三層的程度；和/或 經(jīng)第一次離心后是達(dá)到使血液基本上分成三層的程度，其中最上層是含血小板的血漿層，中間一層是血塊黃層，最底層的是紅細(xì)胞層。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4任一項的方法，其中步驟(b)中 離心的轉(zhuǎn)速為2000rpnT3000rpm ； 離心的時間為I-IOmin ;和/或 離心的轉(zhuǎn)速為2300rpm 2500rpm,時間為3_5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5任一項的方法，其中步驟(c)中 離心的轉(zhuǎn)速為1000rpnT2000rpm ； 離心的時間為10_30min ； 離心的轉(zhuǎn)速為1400rpnTl600rpm,時間為18_22min ;和/或 離心的轉(zhuǎn)速為1500rpm,時間為20min。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6任一項的方法，其中步驟(c)中 所得上層和大部分中間層經(jīng)混勻后，其中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的1_5倍；和/或 還包括在使抽取的最上層和中間層混合均勻后，取適量用于測定其中的血小板的數(shù)量的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7任一項的方法，其中步驟(d)中 所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少2/4的血漿； 所述棄掉離心管上層的血漿是指棄掉離心管上層至少3/4的血漿； 棄掉離心管上層的血漿后，利用下部剩下的血漿重新使沉淀下來的血小板懸浮，獲取所述富血小板血漿；步驟(d)所得富血小板血漿中血小板的濃度是分離前全血中血小板濃度的5-10倍；和/或 步驟(d)中還包括在獲得富血小板血漿(PRP)后，取適量用于測定其中的血小板的數(shù)量的步驟。
9.一種富血小板血漿，其中包含0. 5^3XlOVml濃度的血小板。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的富血小板血漿，其基本上是由權(quán)利要求1-8任一項所述方法獲得的。
全文摘要
本發(fā)明涉及富血小板血漿的提取方法和提取的富血小板血漿。具體地，本發(fā)明涉及從血液中提取富血小板血漿的方法，其包括以下步驟(a)使采集的全血置于含有抗凝劑的容器中，使血液和抗凝劑充分混勻；(b)使混有抗凝劑的血液置于離心管中，進(jìn)行第一次離心，使血液基本上分成三層；(c)將最上層和大部分的中間層抽出并轉(zhuǎn)移到新的離心管中，混合均勻，進(jìn)行第二次離心；(d)棄掉離心管上層的血漿，利用剩余的血漿使沉淀的血小板重新懸浮，即得富血小板血漿(Platelet Rich PlasmaPRP)。本發(fā)明方法操作過程簡單、收率高、富集的血漿中血小板濃度高。
文檔編號B01D21/26GK102755770SQ20121026705
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月30日
發(fā)明者林卓衡, 陳俊峯 申請人:博雅干細(xì)胞科技有限公司