專(zhuān)利名稱(chēng)：蛋白酪氨酸激酶的環(huán)狀抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)狀化合物及其鹽，以及采用該化合物治療蛋白酪氨酸激酶相關(guān)疾病例如免疫和腫瘤疾病的方法，以及含有該化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是一種酶，它與作為底物的ATP一起，將肽和蛋白質(zhì)中的酪氨酸殘基磷酸化。這些酶是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)控(包括細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化)中的關(guān)鍵因素。PTK特別還包括受體酪氨酸激酶(RPTK)，這包括表皮生長(zhǎng)因子激酶家族的成員(例如HER1和HER2)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)和在血管形成中起作用的激酶(Tie-2和KDR)；此外，還包括非受體酪氨酸激酶，這包括Syk、JAK和Src家族的成員(例如Src，F(xiàn)yn，Lyn，Lck和Blk，參見(jiàn)Bolen，J.B.，Rowley，R.B.，Spana，C.，和Tsygankov，A.V.，”The src family of tyrosineprotein kinases in hemopoietic signal transduction”，F(xiàn)ASEB J.，6，3403-3409(1992)；Ullrich，A.和Schlessinger，J.，”Signaltransduction by receptors with tyrosine kinase activity”，Cell，61，203-212(1990)；和Ihle，J.N.，“The Janus protein tyrosinekinases in hematopoetic cytokine signaling”，Sem.Immunol.，7，247-254(1995))。
在許多惡性和非惡性增殖性疾病中都顯示出PTK的活性增強(qiáng)。此外，PTK在免疫系統(tǒng)的細(xì)胞調(diào)控中起關(guān)鍵作用。因此，PTK抑制劑會(huì)影響許多種腫瘤和免疫學(xué)疾病。這些病癥可以通過(guò)選擇性地抑制某種受體或非受體PTK，例如Lck，或者由于各類(lèi)PTK之間的同源性，利用抑制劑抑制一種以上的PTK，而得到緩解。
特別重要的一種PTK是在T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的Lck，它與T細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵蛋白底物的磷酸化有關(guān)。它是生產(chǎn)性抗原受體信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞活化所需要的。在沒(méi)有Lck活性時(shí)，T細(xì)胞受體(TCR)的Zeta鏈不被磷酸化，激酶ZAP-70不被活化，而且對(duì)于T細(xì)胞活化至關(guān)重要的Ca2+活化也無(wú)法發(fā)生(參見(jiàn)Weiss，A.和Littman，D.R.，″Signal transductionby lymphocyte antigen receptors″，Cell，76，263-274(1994)；Iwashima，M.，Irving，B.A.，van Oers，N.S.C.，Chon，A.C.，和Weiss，A.，″Sequential interactions of the TCR with two distinctcytoplasmic tyrosine kinases′，Science，263，1136-1139(1994)；和Chart，A.C.，Dalton，M.，Johnson，R.，Kong，G.，Wang，T.，Thoma，R.，和Kuresaki，T.，″Activation of ZAP-70 kinase activity byphosphorylation of tyrosine 493 is required for lymphocyteantigen receptor function″，EMBO J.，14，2499-2508(1995))。因此，Lck的抑制劑可用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，例如T細(xì)胞起重要作用的慢性病，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化病和狼瘡，以及T細(xì)胞已知在其中起主要作用的急性病，例如急性移植物排斥和遲發(fā)性超敏(DTH)反應(yīng)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及用作蛋白酪氨酸激酶抑制劑的下列式I環(huán)狀化合物及其鹽 其中Q為(1)5-元雜芳基環(huán)；
(2)6-元雜芳基環(huán)；或(3)芳環(huán)；任選地被一個(gè)或更多R1取代；Z為(1)單鍵；(2)-R15C＝CH-；或(3)-(CH2)m-，其中m為1-2；X1和X2各自為H，或一起形成＝O或＝S；R1為(1)H或R6，其中R6為烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)鏈烯基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)、或雜環(huán)烷基，它們各自未被取代或被Z1、Z2和一種或更多(優(yōu)選1或2種)Z3取代；(2)-OH或-OR6；(3)-SH或-SR6；(4)-C(O)2H、-C(O)qR6、或-O-C(O)qR6，其中q為1或2；(5)-SO3H或-S(O)qR6；(6)鹵素；(7)氰基；(8)硝基；(9)-Z4-NR7R8；(10)-Z4-N(R9)-Z5-NR10R11；(11)-Z4-N(R12)-Z5-R6；(12)-P(O)(OR6)2；R2和R3各自獨(dú)立地為(1)H或R6；(2)-Z4-R6，或；(3)-Z13-NR7R8；R4和R5(1)各自獨(dú)立地為H或R6；(2)-Z4-(R9)-Z5-NR10R11；(3)-N(R9)Z4R6；或
(4)與其連接的氮原子一起形成任選被Z1、Z2和Z3取代的3-8元飽和或不飽和雜環(huán)，所述雜環(huán)任選稠合成未取代或被Z1、Z2和Z3取代的苯環(huán)；R7、R8、R9、R10、R11和R12(1)各自獨(dú)立地為H或R6；(2)R7和R8一起為亞烷基、亞鏈烯基或雜烷基，與其連接的氮原子一起形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，所述環(huán)是未取代或被Z1、Z2和Z3取代的；或(3)R9、R10和R11中的任何2個(gè)一起為亞烷基、亞鏈烯基，與其連接的氮原子一起形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，所述環(huán)是未取代或被Z1、Z2和Z3取代的；R13為(1)氰基；(2)硝基；(3)-NH2；(4)-NHO烷基；(5)-OH；(6)-NHO芳基；(7)-NHCOO烷基；(8)-NHCOO芳基；(9)-NHSO2烷基；(10)-NHSO2芳基；(11)芳基；(12)雜芳基；(13)-O烷基；或(14)-O芳基；R14為(1)-NO2；(2)-COO烷基；或(3)-COO芳基；R15為(1)H；
(2)烷基；(3)芳基；(4)芳基烷基；或(5)環(huán)烷基；Z1、Z2和Z3各自獨(dú)立地為(1)H或Z6，其中Z6為(i)烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)鏈烯基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)、或雜環(huán)烷基；(ii)被一種或更多相同或不同(i)取代的(i)；(iii)被Z1、Z2和Z3中定義的一種或更多(2)-(16)基團(tuán)取代的(i)或(ii)；(2)-OH或-OZ6；(3)-SH或-SZ6；(4)-C(O)qH、-C(O)qZ6、或-O-C(O)qZ6；(5)-SO3H、-S(O)qZ6；或S(O)qN(Z9)Z6；(6)鹵素；(7)氰基；(8)硝基；(9)-Z4-NZ7Z8；(10)-Z4-N(Z9)-Z5-NZ7Z8；(11)-Z4-N(Z10)-Z5-Z6；(12)-Z4-N(Z10)-Z5-H；(13)氧代基；(14)-O-C(O)-Z6；(15)Z1、Z2和Z3中的任何2個(gè)一起為亞烷基、亞鏈烯基，與其連接的原子一起形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，或；(16)Z1、Z2和Z3中的任何2個(gè)一起為-O-(CH2)r-O-，其中r為1-5，與其連接的原子一起形成4-8元環(huán)；Z4和Z5各自獨(dú)立地為(1)單鍵；(2)-Z11-S(O)q-Z12-；(3)-Z11-C(O)-Z12-；(4)-Z11-C(S)-Z12-；(5)-Z11-O-Z12-；
(6)-Z11-S-Z12-；(7)-Z11-O-C(O)-Z12-；或(8)-Z11-C(O)-O-Z12-；Z7、Z8、Z6和Z10(1)各自獨(dú)立地為H或Z6；(2)Z7和Z8、或Z6和Z10一起為亞烷基、亞鏈烯基，與其連接的原子一起形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，所述環(huán)是未取代或被Z1、Z2和Z3取代的；或(3)Z7或Z8與Z9一起為亞烷基、亞鏈烯基，與其連接的氮原子一起形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，所述環(huán)是未取代或被Z1、Z2和Z3取代的；Z11和Z12各自獨(dú)立地為(1)單鍵；(2)亞烷基；(3)亞鏈烯基；或(4)亞炔基；和Z13為(1)單鍵；(2)-Z11-S(O)q-Z12-；(3)-Z11-C(O)-Z12-；(4)-Z11-C(S)-Z12-；(5)-Z11-O-Z12-；(6)-Z11-S-Z12-；(7)-Z11-O-C(O)-Z12-；(8)-Z11-C(O)-O-Z12-；(9)-C(NR13)-；(10)-C(CHRI4)-；或(11)-C(C(R14)2)-所述式I化合物包括下式II化合物
其中n為1或2；A選自C或N；B選自N、O和S；X3為O或S；和R1、R2、R3、R4和R5如上所述。

發(fā)明內(nèi)容
以下是對(duì)本文所用術(shù)語(yǔ)所作的定義。除非另有所指，在此對(duì)基團(tuán)或術(shù)語(yǔ)所作的初始定義適于上下文中的基團(tuán)或術(shù)語(yǔ)，無(wú)論是單獨(dú)的或是作為另一基團(tuán)的一部分。
術(shù)語(yǔ)“烷”或“烷基”是指含有1-12個(gè)C、優(yōu)選1-8個(gè)C的直鏈或支鏈烴基。用語(yǔ)“低級(jí)烷基”是指1-4個(gè)C的烷基。
術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”是指含有2-10、優(yōu)選2-4個(gè)碳原子的至少一個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈的鏈烴。其中一個(gè)鏈烯基與N結(jié)合，優(yōu)選這種基團(tuán)不是直接通過(guò)含碳雙鍵結(jié)合的。
術(shù)語(yǔ)“炔基”是指含有2-10、優(yōu)選2-4個(gè)碳原子的至少一個(gè)三鍵的直鏈或支鏈的鏈烴。其中一個(gè)炔基與N結(jié)合，優(yōu)選這種基團(tuán)不是直接通過(guò)含碳三鍵結(jié)合的。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”是指經(jīng)過(guò)單鍵(例如-(CH2)x-其中x為1-5)連接的含有1-5個(gè)碳原子的直鏈橋接，其可被1-3個(gè)低級(jí)烷基取代。
術(shù)語(yǔ)“亞鏈烯基”是指具有一個(gè)或二個(gè)雙鍵(即經(jīng)單鍵連接)的含有2-5個(gè)碳原子的直鏈橋接，其可被1-3個(gè)低級(jí)烷基取代。示例亞鏈烯基為-CH＝CH-CH＝CH-、-CH2-CH＝CH-、-CH2-CH＝CH-CH2-、-C(CH3)2CH＝CH-和-CH(C2H5)-CH＝CH-。
術(shù)語(yǔ)“亞炔基”是指含有2-5個(gè)碳原子的直鏈橋接，其中的三鍵經(jīng)過(guò)單鍵連接，其可被1-3個(gè)低級(jí)烷基取代。示例亞炔基為-C＝C-、-CH2-C＝C-、-CH(CH3)-C＝C-和-C＝C-CH(C2H5)CH2-。
術(shù)語(yǔ)“芳”或“芳基”是指包含6-14個(gè)碳原子的芳環(huán)基團(tuán)(例如6元單環(huán)、10元二環(huán)或14元三環(huán)體系)。示例芳基包括苯基、萘基、聯(lián)苯和蒽。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”和“環(huán)烯基”是指3-12個(gè)碳原子的環(huán)烴。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”和“鹵”是指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語(yǔ)“不飽和環(huán)”包括部分不飽和和芳香環(huán)。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”、“雜環(huán)的”是指在含有至少一個(gè)碳原子的環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子的完全飽和或不飽和環(huán)，包括非芳香(即雜環(huán)烷基)和芳香(即雜芳基)環(huán)，例如4-7元單環(huán)、7-11元二環(huán)、或10-15元三環(huán)體系。包含雜原子的雜環(huán)基團(tuán)中每個(gè)環(huán)具有1、2、3或4個(gè)選自N、O和/或S的雜原子，其中N和S雜原子任選被氧化，和N雜原子任選被季銨化。該雜環(huán)基可與環(huán)或環(huán)系中的任一雜原子或碳原子連接。
示例單環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧雜環(huán)丁烷基(oxetanyl)、吡唑啉基、二氮雜茂基、咪唑啉基、咪唑烷基、唑基、唑烷基、異唑啉基、異唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮雜基、氮卓基(azepiny)、4-哌啶基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫硫雜嗎啉基、硫雜嗎啉基砜、硫雜嗎啉基砜、1，3-二氧戊環(huán)和四氫-1，1-二氧代噻吩基、三唑基、三嗪基等。
示例二環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括吲哚、苯并噻唑基、苯并唑基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基(dioxolyl)、苯并噻吩基、奎寧環(huán)基、喹啉基、四異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基(indoliZinyl)、苯丙呋喃基、色酮基(chromonyl)、香豆素基(coumarinyl)、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃吡啶基(例如呋喃[2，3-c]吡啶基、呋喃[3，2-b]吡啶基]或呋喃[2，3-b]吡啶基)、二氫異吲哚基、二氫喹唑啉基(例如3，4-二氫-4-氧代-喹唑啉基)、四氫喹唑啉基等。
示例的三環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基(phenanthrolinyl)、吖啶基、菲啶基、占噸基等。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指芳香雜環(huán)基團(tuán)。
示例雜芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、異唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三唑基、三嗪基等。
其中q為1或2，“-C(O)qH”表示-C(O)-H或-C(O-OH；“-C(O)qR6”或“-C(O)qZ6”分別表示-C(O)-R6或-C(O)-OR6，或-C(O)-Z6或-C(O)-OZ6；“-O-C(O)QR6”或“-O-C(O)qZ6”分別表示-O-C(O)-R6或-O-C(O)-OR6，或-O-C(O)-Z6或-O-C(O)-OZ6；和“-S(O)qR6或“-S(O)qZ6”分別表示-SO-R6或-SO2-R6，或-SO-Z6或-SO2-Z6。
在某些情況下，式I化合物會(huì)形成同樣在本發(fā)明范疇內(nèi)的鹽類(lèi)。除非另有所指，所有涉及式I化合物的參考同樣包括其鹽類(lèi)。在此所用的術(shù)語(yǔ)“鹽(類(lèi))”表示與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)酸和堿所形成的酸和或堿式鹽。在此所用的術(shù)語(yǔ)“鹽(類(lèi))” (和將形成的，例如，其中R取代基包括酸部分例如羧基)包括兩性離子(內(nèi)鹽)。同樣地，所述“鹽”包括季銨鹽例如烷基銨鹽。盡管其它鹽是有利的，但是在制備過(guò)程中采用分離或純化步驟中優(yōu)選藥用(即無(wú)毒、生理性可接受的)鹽。例如，化合物I與一定量(例如等量)的酸或堿反應(yīng)，在適宜介質(zhì)例如(例如利于鹽析出)中或在水介質(zhì)中形成式I化合物的鹽，然后凍干。
示例的酸加成鹽包括醋酸鹽(例如與醋酸或三氯醋酸如三氟乙酸形成的那些鹽)，己二酸鹽，褐藻酸鹽，抗壞血酸，天冬氨酸鹽，苯磺酸鹽，重硫酸鹽，硼酸鈉，丁酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環(huán)戊丙酸鹽，二葡糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，反式丁烯二酸，葡糖庚酸鹽(glucoheptanoate)，磷酸甘油鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來(lái)酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，果膠酸鹽(pectinate)，過(guò)硫酸鹽，3-苯丙酸鹽，磷酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，水楊酸鹽，丁二酸鹽，硫酸鹽(例如與硫酸形成的鹽)，磺酸鹽(例如在此所提及的)，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，甲苯磺酸鹽，十一酸鹽等。
示例的堿式鹽(例如，其中R取代基包括酸部分如羧基)包括銨鹽，堿金屬鹽例如鈉、鋰和鉀鹽，堿土族金屬鹽例如鈣和鎂鹽，含有機(jī)堿(例如有機(jī)胺)的鹽例如二芐基乙二胺(benzathines)、二環(huán)己胺、哈胺(hydrabamine)、N-甲基-D-還原葡糖胺(glucamine)，N-甲基-D-葡萄糖胺(glucamide)，叔丁胺，和含有氨基酸例如精氨酸、賴(lài)胺酸的鹽等。可采用試劑，例如低級(jí)烷基鹵化物(例如甲基、乙基、丙基和丁酰氯/溴/碘)、二烴硫酸鹽(例如二甲基、二乙基、二丁基、和二戊基硫酸鹽)、長(zhǎng)鏈鹵化物(例如癸基、十二烷基、肉豆蔻基和硬脂酰氯/溴/碘)、芳烷基鹵化物(例如芐基和苯乙基溴化物)等，對(duì)包含堿性氮的基團(tuán)進(jìn)行季銨化處理。
本發(fā)明同樣涉及所述化合物的前藥和溶劑化物。在此所用的術(shù)語(yǔ)“前藥”表示該物質(zhì)施用給受試者后，經(jīng)過(guò)代謝作用或化學(xué)過(guò)程進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)變?yōu)槭絀或其鹽和/或溶劑化物。式I化合物的溶劑化物優(yōu)選為水合物。
所述化合物的所有立體異構(gòu)體均在本發(fā)明范圍內(nèi)，例如由于式I化合物上R取代基中的不對(duì)稱(chēng)碳所導(dǎo)致的立體異構(gòu)體，包括對(duì)映體和非對(duì)映體形式。本發(fā)明化合物的個(gè)別立體異構(gòu)體基本上不摻有其它異構(gòu)體，或者是混合的，例如為外消旋物或是與所有其它或其它有擇異構(gòu)體混合的立體異構(gòu)體。本發(fā)明化合物的手性中心具有IUPAC 1974推薦所定義的S或R構(gòu)型。
在上下文中，對(duì)基團(tuán)和取代基加以選擇，以提供穩(wěn)定的部分和化合物。
優(yōu)選的化合物本發(fā)明的優(yōu)選化合物為式I化合物及其鹽，其中Q為噻唑，和其中Z、X1、X2、R1、R2、R3、R4和R5中的一種或更多(尤其是全部)選自以下定義Z為單鍵；R1選自H、鹵素、烷基、芳基、烷氧基、烷氧基羰基、或芳基氧基羰基和更優(yōu)選為H；X1和X2一起形成＝O或＝S，和更優(yōu)選形成＝O；R2為H；R3選自-Z4-R6或-Z13-NR7R8，和更優(yōu)選為-Z4-R6，其中Z4為單鍵，和R6為未取代或被Z1、Z2和一種或更多(優(yōu)選1或2種)Z3取代的芳基或雜芳基；R4為H；和R5選自被Z1、Z2和一種或更多(例如1或2種)Z3取代的芳基或雜芳基。
制備方法可采用例如下述路線(xiàn)A-E和I-XII所示的方法，制備式化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易選自適宜的溶劑、溫度、壓力和其他反應(yīng)條件。所有提及文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考?？刹捎檬惺刍蛘弑绢I(lǐng)域技術(shù)人員很容易制備的起始物。化合物的構(gòu)成在說(shuō)明中加以定義或者特定地如在所述路線(xiàn)所定義。
可采用起始物和/或試劑，或者采用與固體載體結(jié)合的一種或更多起始物和/或試劑，在溶液中進(jìn)行在此描述的方法(參見(jiàn)(1)Thompson，L.A.，Ellman，J.A.，Chemical Reviews，96，555-600(1996)；(2)Terrett，N.K.，Gardner，M.，Gordon，D.W.，Kobylecki，R.J.，Steele，J.，Tetrahedron，51，8135-8173(1995)；(3)Gallop，M.A.，Barrett，R.W.，Dower，W.J.，F(xiàn)odor，S.P.A.，Gordon，E.M.，Journalof Medicinal Chemistry，37，1233-1251(1994)；(4)Gordon，E.M.，Barrett，R.W.，Dower，W.J.，F(xiàn)odor，S.P.A.，Gallop，M.A.，Journalof Medicinal Chemistry，37，1385-1401(1994)；(5)Balkenhohl，F(xiàn).，von demBussche-Hiinnefeld，Lansky，A.，Zechel，C.，AngewandteChemie International Edition in English，35，2288-2337(1996)；(6)Balkenhohl，F(xiàn).，von dem Bussche-Hunnefeld，Lansky，A.，Zechel，C.，AngewandteChemie，108，2436-2487(1996)；和(7)Sofia，M.J.，Drugs Discovery Today，1，27-34(1996))。
路線(xiàn)A 路線(xiàn)A示例了制備式Ia化合物的通用方法，所述化合物是X1和X2一起形成＝O時(shí)的式I化合物。如路線(xiàn)A所示，可通過(guò)對(duì)i皂化反應(yīng)(R*為羧基保護(hù)基例如烷基或芳烷基)，然后采用已知方法與胺iii反應(yīng)，可以獲得R2和R3為H的式Ia化合物。另外，i可與R2L反應(yīng)，其中L離去基團(tuán)例如鹵素(例如等摩爾比)，然后任選與R3L(例如等摩爾比)反應(yīng)得到ii。另外，i也可以采用適宜的醛或酮對(duì)i進(jìn)行還原胺化反應(yīng)得到ii。然后，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件，對(duì)化合物ii進(jìn)行皂化，并與胺iii反應(yīng)，形成R2和/或R3不是H的Ia。
路線(xiàn)I-XI說(shuō)明了制備化合物中優(yōu)選取代基的方法。
路線(xiàn)B 路線(xiàn)B示例了制備式Ib化合物的通用方法，所述化合物是Z為-CH＝CH-、X1和X2一起形成＝O時(shí)的式I化合物。如路線(xiàn)B所示，適宜取代的2-氨基-化合物ia與銅(ii)鹵化物和亞硝酸烷基酯(例如叔-亞硝酸丁酯)在非質(zhì)子溶劑例如乙腈中反應(yīng)形成2-鹵素-化合物iv，可制得2-鹵素-化合物vi(參見(jiàn)J.Het.Chem. 22，1621(1985))。化合物iv與還原劑例如四氫硼化鈉在乙醇或含水四氫呋喃中進(jìn)行還原反應(yīng)形成醇，其與氧化劑例如氯鉻酸吡啶或重鉻酸吡啶進(jìn)行氧化反應(yīng)而形成醛v。對(duì)化合物vi進(jìn)行皂化，然后采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法與胺iii反應(yīng)形成vii?；衔飗ii與胺R2R3NH反應(yīng)形成Ib，其中Z為-CH＝CH-和X1、X2一起形成＝O。另外，化合物vii與適宜取代的芐胺例如4-甲氧芐胺形成化合物ix，其經(jīng)過(guò)氫解(hydrogenolyzed)或在苯甲醚存在下用酸例如三氟甲磺酸和三氟乙酸處理，形成R2和R3為H的式Ib化合物。
路線(xiàn)I-XI說(shuō)明了制備化合物中優(yōu)選取代基的方法。
路線(xiàn)C R2和/或R3°H
路線(xiàn)C示例了制備式Ic化合物的通用方法，所述化合物是Z為-R15C＝CH-、X1和X2一起形成＝O時(shí)的式I化合物。如路線(xiàn)C所示，2-氨基化合物與氯甲酸酯或碳酸氫鹽反應(yīng)形成x，其被皂化和用有機(jī)鋰處理形成化合物xi。化合物xi與烷基(三苯基磷酰亞基)乙酸酯)反應(yīng)，然后對(duì)氨基甲酸酯保護(hù)基脫保護(hù)形成xii。另外，對(duì)xii-進(jìn)行皂化，然后采用本領(lǐng)域技術(shù)人員的方法與胺R4R5NH反應(yīng)，可得到R2和R3為H的化合物Ic。另外，化合物xii與(例如等摩爾比)R2L反應(yīng)(其中L為離去基團(tuán)例如鹵素)，然后任選與R3L(例如等摩爾比)反應(yīng)形成xiii，其經(jīng)過(guò)皂化和采用本領(lǐng)域技術(shù)人員的方法與胺R4R5NH反應(yīng)，形成R2和/或R3不是H的Ia。
路線(xiàn)I-XI說(shuō)明了制備化合物中優(yōu)選取代基的方法。
路線(xiàn)D 路線(xiàn)D示例了制備式Id化合物的通用方法，所述化合物是X1和X2一起形成＝S時(shí)的式I化合物。采用試劑例如Lawesson試劑(2，4-雙(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫雜-2，4-二磷雜環(huán)丁烷(diphosphetane)-2，4-二硫化物(參見(jiàn)Bull.Soc.Chim.Belg.，87，223(1978))，可將路線(xiàn)A中獲得的式Ia化合物可轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硫代酰胺(thioamide)Id。
路線(xiàn)I-XI說(shuō)明了制備化合物中優(yōu)選取代基的方法。
路線(xiàn)E
路線(xiàn)E示例了制備式Ie化合物的通用方法，所述化合物是X1和X2各自為H時(shí)的式I化合物。如路線(xiàn)E所示，通過(guò)還原反應(yīng)，例如與Raney鎳反應(yīng)，路線(xiàn)D中得到的式Id化合物可轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的胺。
路線(xiàn)I-XI說(shuō)明了制備化合物中優(yōu)選取代基的方法。
路線(xiàn)I 起始2R2＝烷基、芳烷基或環(huán)烷基烷基起始3R2＝H如路線(xiàn)I所示，羧酸酯I與氯甲酸酯或二碳酸酯反應(yīng)形成1?；衔?經(jīng)堿例如氫化鈉、六甲基二硅氮化鈉/鉀(hexamthyldisilazide)、或二異丙基酰胺鋰(LDA)、和烷化劑R2X(其中X為鹵素和R2優(yōu)選為烷基、芳烷基或環(huán)烷基烷基)處理，然后與堿水例如氫氧化鉀進(jìn)行皂化，得到2。另外，采用適宜的醛或酮或?qū)?進(jìn)行還原胺化，和與堿水例如氫氧化鉀進(jìn)行皂化得到2。另外，僅用化合物1與堿水例如氫氧化鉀進(jìn)行皂化也可得到R2為H的3。
采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的肽鍵合成反應(yīng)條件(參見(jiàn)，例如Bodanszky和Bodanszky，The Pract ice of Peptide Chemistry，Springer-VeR1ag，1984；Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis，Springer-VeR1ag，1984)，將酸2與胺iii反應(yīng)得到化合物Id，其為X1和X2一起形成＝O、R3為COOR6時(shí)的式I化合物，和由于以2為起始物，R2優(yōu)選為烷基、芳烷基、或環(huán)烷基烷基。例如，用于活化與胺iv反應(yīng)的2中羧基的試劑包括雙-(2-氧-3-唑烷基)次膦酸氯(BOP氯)、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)(BOP試劑)、[O-(7-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲]六氟磷酸酯(HATU)，和碳二亞胺例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或3-乙基-3′-(二甲氨基)丙基碳化二亞胺(EDCI)，單獨(dú)或者與羥基苯并三唑組合應(yīng)用。另外，可分離出活化的酯中間體，然后在堿的存在下，在非質(zhì)子溶劑例如四氫呋喃(THF)或二甲基酰胺(DMF)中用適宜的胺iv處理，所述堿例如有機(jī)堿例如六甲基二硅氮化鈉/鉀、三乙胺、二異丙基乙胺或1，8-二氮二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，或無(wú)機(jī)堿例如碳酸鈉/鉀/銫或氫化鈉/鉀。另外，也可制備2的酰鹵，例如與亞硫酰氯或草酰氯反應(yīng)，接著與胺iii應(yīng)得到化合物If，其為R3為COOR6、X1和X2一起形成＝O時(shí)的式I化合物，和R2為烷基、芳烷基、或環(huán)烷基烷基。
上述用來(lái)將2轉(zhuǎn)化為If的方法，也適于將3轉(zhuǎn)化為If(R3位COOR6，X1和X2一起形成＝O，和R2為H)
路線(xiàn)II 如路線(xiàn)II所示，采用本領(lǐng)域已知方法(參見(jiàn)March，AdvancedOrganic Chemistry，Wiley，1985)，將酸4(其中R2和R3不是H，并且加以選擇使與其相連的N是非堿性的)還原為醛5。例如，酸4可轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的酯，然后經(jīng)二異丁基氫化鋁還原。另外，可將酸4還原成其相應(yīng)的伯醇，例如，經(jīng)硼烷/THF、LiAlH4處理，或經(jīng)混合酸酐的還原反應(yīng)，然后采用Cr(VI)(例如，氯鉻酸吡啶，″PCC″)或在Swern或Moffatt條件下(例如，(COCl)2/二甲基亞砜)，進(jìn)行后續(xù)氧化反應(yīng)，得到醛5。例如，通過(guò)對(duì)ii進(jìn)行皂化處理，可以得到起始酸4。
在還原劑例如NaBH3CN、NaBH(OAc)3(Ac＝乙?；?或H和鈀催化劑存在下，醛5與胺iii進(jìn)行還原胺化反應(yīng)(參見(jiàn)Hudlicky，Reductionsin Organic Chemistry，Wiley，1984)，得到胺化合物Ig，為式I化合物(X1和X2各自為H，和R2、R3不為H)。
路線(xiàn)III 如路線(xiàn)III所示，將酸4還原成伯醇(例如，經(jīng)硼烷/THF、LiAlH4處理，或經(jīng)混合酸酐的還原反應(yīng))，然后采用本領(lǐng)域已知方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)March，Advancod Organic Chemistry，Wiley，1985)，得到含有離去基團(tuán)例如鹵化物、甲苯磺酸酯(OTs)、甲磺酸酯(OMs)或三氟甲基磺酰酯(triflate，OTf)的6。對(duì)R2和R3加以選擇使與其相連的N是非堿性的。然后，通過(guò)與胺iii進(jìn)行置換反應(yīng)(優(yōu)選胺iii過(guò)量)，將化合物6轉(zhuǎn)化為化合物Ih，其為X1和X2各自為H、R2和R3不為H時(shí)的式I化合物。
路線(xiàn)IVR2＝如上定義R3＝?；蛄蝓；０?硫代酰胺 氨基甲酸酯 脲/硫脲 路線(xiàn)IV說(shuō)明了用于制備化合物Ij、Ik、Il、Im和In的方法。Ij、Ik、Il、Im即為R2為如上定義、R3為?；蛄蝓；?、X1和X2不是H、和R1不是伯或仲胺時(shí)的式I化合物。Ij、Ik、Il、Im和In還具有該路線(xiàn)和下述路線(xiàn)規(guī)定的其他特定取代基。采用路線(xiàn)A和D描述的適宜方法，可制備起始化合物Ii。
在如上所述用于活化反應(yīng)羧基的試劑(例如，BOP試劑、HATU，以及單獨(dú)或與羥基苯并三唑組合使用的碳二亞胺例如DCC或EDCI)的存在下，用羧酸7處理胺化合物Ii，可獲得酰胺Ij。另外，在酸清除劑(scavenger)例如二異丙基乙胺存在下，胺化合物Ii可與酰鹵8反應(yīng)。采用如上所述的Lawesson試劑，處理酰胺Ii(其中X1、X2≠0)，得到相應(yīng)的硫代酰胺Ik。
在酸清除劑例如二異丙基乙胺存在下，用氯甲酸酯9或碳酸氫鹽10處理胺化合物Ii，得到氨基甲酸酯Il。
用以下方法之一處理胺化合物Ii，得到脲Im1)氯甲酸酯9例如氯甲酸苯酯，然后與胺11反應(yīng)；2)在酸清除劑例如二異丙基乙胺存在下，氨基甲酰氯12；或3)與異氰酸酯13a反應(yīng)(其中Im中的Rc＝H)。用硫代異氰酸酯13b處理胺化合物Ii，得到相應(yīng)的硫脲In。
Ra選自R6定義所包括的那些基團(tuán)，這樣-C(＝A)-Ra在R3所定義的酰基或硫代?；秶鷥?nèi)。Rb和Rc選自R7和R8定義所包括的那些基團(tuán)，這樣-C(＝A)-N(Rb)(Rc)在R3所定義的?；蛄虼；秶鷥?nèi)。
路線(xiàn)VR2＝如上定義，但不是?；鵕3＝烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基烷基、芳烷基或飽和雜環(huán)
路線(xiàn)V說(shuō)明了用于制備Ip的方法，Ip即為式I化合物，其中R2如上定義但不是酰基，并加以選擇使與其連接的氮N為堿性的，R3為烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)鏈烯基烷基、芳烷基或飽和雜環(huán)，和X1和X2不是H。采用路線(xiàn)A和D描述的適宜方法，可制備起始化合物Io和Iq。
如路線(xiàn)V所示，在如上所述的還原胺化條件下，胺化合物Io與醛或酮14反應(yīng)，得到胺Ip。也可在銅(II)鹵化物存在下，用叔亞硝酸丁酯或亞硝酸鈉處理胺化合物Iq(R2和R3為H)得到鹵素-取代的化合物15，然后在堿例如氫化鉀/鈉等存在下，與胺16進(jìn)行置換反應(yīng)(參見(jiàn)Lee等，J.雜cyclic Chemistry，22，1621(1985))，得到化合物Ip。
Rd和Re獨(dú)立地選自H、烷基、芳基、環(huán)烷基或環(huán)烯基，或一起為亞烷基或亞鏈烯基，形成3-8元飽和或不飽和環(huán)，這樣-CH(Rd)(Re)即在R3定義的基團(tuán)范圍內(nèi)。
路線(xiàn)VIR2＝如上定義，但不是?；鵕3＝芳基或雜芳基 如路線(xiàn)VI所示，R2如上定義但不是?；⒓右赃x擇使與其連接的氮N為堿性的，R3為芳基、雜芳基，和X1和X2不是H。在鈀(0)催化劑存在下(參見(jiàn)J.Am.Chem.Soc.，118，7215(1996))，胺化合物Ir與鹵代苯基或鹵代雜芳基17反應(yīng)，得到胺Is，即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物。采用路線(xiàn)A和D描述的適宜方法，可制備起始化合物Ir。
路線(xiàn)VIIR2＝如上定義R3＝雜芳基 如路線(xiàn)VII所示，R2如上定義，和R3為雜芳基，在堿(如有需要)的存在下，胺化合物It與2-鹵素取代的雜芳族化合物17(其中Q1與其鍵合的原子形成5-或6-元單環(huán)或10-12-元雙環(huán)雜芳基，例如形成2-氯吡啶或2-氯嘧啶)反應(yīng)，得到胺Iu，即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物。采用路線(xiàn)A和D描述的適宜方法，可制備起始化合物It。
路線(xiàn)VIII 如路線(xiàn)VIII所示，在雙-(2-氧-3-唑烷基)次膦酸氯(BOP氯)、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)(BOP試劑)、[O-(7-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲]六氟磷酸酯(HATU)的存在下，和在有機(jī)堿(例如三乙胺、二異丙基乙胺或二甲氨基吡啶)存在下，在溶劑例如二甲基酰胺、二氯甲烷或四氫呋喃中，碳二亞胺例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或3-乙基-3′-(二甲氨基)丙基碳化二亞胺(EDCI)或二異丙基碳二亞胺(DIC)的存在下，硫脲化合物In(其中Xi和X不是H)與適宜的胺反應(yīng)，得到化合物Iv，即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物。
另外，在汞(II)鹽例如氯化汞存在下，化合物In與適宜的胺反應(yīng)，或者采用文獻(xiàn)中已知的方法，制得Iv。
路線(xiàn)IX 如路線(xiàn)IX所示，于室溫或升高溫度下，單獨(dú)或者在乙腈、四氫呋喃或二甲基酰胺中的堿例如氯化鈉、六甲基二硅氮化鈉、或二甲氨基吡啶的存在下，胺Ir(其中Xi和X不是H)與氰基亞氨碳酸二苯酯(diphenylcyanocarbonimidate)反應(yīng)，形成中間體化合物Iw?；衔颕w可與胺R7R8NH反應(yīng)形成化合物Iv，即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物。
路線(xiàn)X 如路線(xiàn)X所示，于室溫或高溫度下，單獨(dú)或者在二甲基酰胺或四氫呋喃中堿例如氯化鈉、六甲基二硅氮化鈉、或二甲氨基吡啶的存在下，胺Ir(其中X1和X2不是H)與18或19反應(yīng)，分別形成化合物Ix或Iy?；衔颕x或Iy可在室溫或高溫度下與胺R7R8NH反應(yīng)，分別形成化合物Iz或Iz*?；衔颕z即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物?；衔颕z*即為該路線(xiàn)中描述的具有特定取代基的式I化合物。
路線(xiàn)XIR2＝芳基、雜芳基、雙環(huán)雜芳基R3＝H、烷基、芳基、雜芳基、雙環(huán)雜芳基 如路線(xiàn)XI所示，也可由15在酸催化劑存在下用限定的胺處理來(lái)制備式I化合物(例如參見(jiàn)Gunzenhauser等，Helv.Chem.Acta 71，33(1988))。
本發(fā)明進(jìn)一步提供式III化合物 其中R1、R3和R4各自獨(dú)立地為雜環(huán)基團(tuán)或芳基，任選被一種或更多取代基取代；和R2為H或烷基。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物為式IV化合物 實(shí)用性本發(fā)明化合物抑制蛋白酪氨酸激酶，尤其是Src-家族激酶，例如Lck、Fyn、Lyn、Src、Yes、Hck、Fgr和Blk，因此可用于治療(包括預(yù)防和治療)蛋白酪氨酸激酶有關(guān)的疾病，例如免疫學(xué)和腫瘤學(xué)疾病。這些化合物還抑制受體酪氨酸激酶，包括HER1和HER2，因此可用于治療增殖性疾病，例如牛皮癬和癌癥。這些化合物抑制HER1和其它受體激酶的能力，還使其可以作為抗血管形成劑用于治療諸如癌癥和糖尿病視網(wǎng)膜病等病癥?！暗鞍桌野彼峒っ赣嘘P(guān)的疾病”是由酪氨酸激酶活性的異常引起的，而且/或者由于這些酶的一種或多種受到抑制而減輕。例如，Lck抑制劑可用于治療多種這類(lèi)病癥(例如治療自身免疫病)，這是因?yàn)長(zhǎng)ck的抑制阻斷了T細(xì)胞活化。T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的治療，包括T細(xì)胞活化和增殖的抑制，是本發(fā)明的一項(xiàng)特別優(yōu)選的實(shí)施方案。優(yōu)選那些選擇性阻斷T細(xì)胞活化和增殖的化合物。本發(fā)明化合物通過(guò)氧化應(yīng)激阻斷表皮細(xì)胞PTK的活化，從而限制了誘發(fā)嗜中性結(jié)合的粘著分子的表面表達(dá)，并抑制嗜中性活化所必需的PTK，它們可用于例如治療局部缺血癥和再灌注損傷。
因此，本發(fā)明提供了用于治療蛋白酪氨酸激酶有關(guān)的疾病的方法，其包括向?qū)Υ擞行枰氖茉囌呤┯糜行Я康闹辽僖环N式I化合物。其它的治療藥物，例如下面所述的那些，可以與本發(fā)明化合物一起用于本發(fā)明方法中。在本發(fā)明方法中，這些其它的治療藥物可以在施用本發(fā)明化合物之前、同時(shí)或之后施用。
本發(fā)明化合物在治療蛋白酪氨酸激酶有關(guān)的疾病方面的應(yīng)用實(shí)例包括但不限于治療多種疾病，例如移植物(例如器官移植物、急性移植物或異種移植物或同種移植物(例如用于燒傷處理))排斥；防止缺血性或再灌注損傷，例如在器官移植、心肌梗死、中風(fēng)期間或其它原因引起的缺血性或再灌注損傷；移植耐受誘導(dǎo)；關(guān)節(jié)炎(例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，牛皮癬關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎)；多發(fā)性硬化癥；慢性阻塞性肺病(COPD)，例如肺氣腫；發(fā)炎性腸病，包括漬瘍性結(jié)腸炎和Crohn氏病；狼瘡(全身性紅斑狼瘡)；移植物抗宿主??；T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)病，包括接觸性超敏反應(yīng)、遲發(fā)性超敏反應(yīng)和谷蛋白敏感性腸病(乳糜瀉病)；牛皮癬；接觸性皮炎(包括毒常春藤引起的皮炎)；Hashimoto甲狀腺腫；Sjogren綜合癥；自身免疫性甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)，例如Graves?。籄ddison病(腎上腺的自身免疫病)；自身免疫多腺體病(也稱(chēng)作自身免疫多腺體綜合癥)；自身免疫性脫發(fā)；惡性貧血；白癜風(fēng)；自身免疫性垂體機(jī)能衰退；Guillain-Barre二氏綜合癥；其它的自身免疫??；癌癥；包括Lck或其它Src家族激酶如Src被活化或過(guò)度表達(dá)的癌癥，例如結(jié)腸癌和胸腺瘤，以及Src家族激酶活性促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)或存活的癌癥；腎小球腎炎；血清?。皇n麻疹；過(guò)敏性疾病，如呼吸道過(guò)敏癥(哮喘、枯草熱、過(guò)敏性鼻炎)或皮膚過(guò)敏；Scleracierma；蕈樣真菌??；急性炎性反應(yīng)(例如急性呼吸道窘迫綜合癥和缺血/再灌注損傷)；皮肌炎；斑形脫發(fā)；慢性光化皮炎；濕疹；Behcet綜合癥；掌跖膿皰??；壞痘性膿皮??；Sezary綜合癥；特應(yīng)性皮炎；系統(tǒng)性硬皮癥；以及硬斑病。本發(fā)明還提供了一種通過(guò)施用能抑制蛋白酪氨酸激酶的任何化合物來(lái)治療上述疾病例如特應(yīng)性皮炎的方法。
非Lck的Src家族激酶，例如Hck和Fgr，在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的Fc-γ受體響應(yīng)中很重要。本發(fā)明的化合物對(duì)Fc-γ的抑制，依賴(lài)于不表達(dá)Lck的單核細(xì)胞系THP-1中TNF-α的產(chǎn)生。這種抑制Fc-γ受體依賴(lài)性單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞響應(yīng)的能力，在本發(fā)明化合物對(duì)T細(xì)胞的作用之外又產(chǎn)生附加的抗炎活性。這種活性在例如治療諸如關(guān)節(jié)炎或腸炎等炎癥中特別有用。本發(fā)明化合物尤其能用于治療自身免疫性腎小球腎炎，以及用于治療因免疫復(fù)合物在腎中沉積而觸發(fā)Fc-γ受體響應(yīng)并導(dǎo)致腎損傷引發(fā)的其它情形的腎小球腎炎。
此外，Lck之外的Src家族激酶，例如Lyn和Src，在Fc-ε受體誘發(fā)的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的脫粒作用中很重要，而這種脫粒作用在哮喘、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病中起重要作用。Fc-ε受體受IgE-抗原復(fù)合物的激發(fā)。本發(fā)明化合物抑制Fc-ε誘發(fā)的脫粒反應(yīng)，包括在不表達(dá)Lck的嗜堿性粒細(xì)胞系RBL中。這種抑制依賴(lài)于Fc-受體的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的響應(yīng)的能力，使本發(fā)明化合物在其對(duì)T細(xì)胞的作用之外又產(chǎn)生附加的抗炎活性。本發(fā)明化合物尤其可用于治療哮喘、過(guò)敏性鼻炎和其它的過(guò)敏性疾病。
本發(fā)明化合物對(duì)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等的組合活性，可能對(duì)治療任何上述疾病均有用。
在一項(xiàng)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物可用于治療上述的示例疾病，不管其病原如何，例如用于治療移植物排斥作用、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化病、慢性阻塞性肺病、腸炎、狼瘡、移植物抗宿主病、T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏性病、牛皮癬、Hashimoto氏甲狀腺腫、Guillain-Barre二氏綜合癥、癌癥、接觸性皮炎、過(guò)敏性疾病例如過(guò)敏性鼻炎、哮喘、缺血性或再灌注損傷，或者與PTK有關(guān)或無(wú)關(guān)的特應(yīng)性皮炎。
由于具有抑制HER1和HER2激酶的能力，本發(fā)明化合物還可用于治療增殖性疾病，包括牛皮癬和癌癥。HER1受體激酶已顯示出在很多實(shí)體腫瘤(包括非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸直腸癌和乳腺癌)中被表達(dá)和活化。類(lèi)似地，HER2受體激酶在乳房、卵巢、肺及胃癌中被過(guò)度表達(dá)。減量調(diào)節(jié)HER2受體的豐度或抑制HER1受體的信號(hào)傳導(dǎo)的單克隆抗體，已在臨床前研究和臨床研究中顯示出抗腫瘤效力。因此，預(yù)期HER1和HER2激酶的抑制劑會(huì)在依賴(lài)于來(lái)自?xún)煞N受體中任一個(gè)的信號(hào)傳導(dǎo)的腫瘤的治療中有效。預(yù)期這些化合物單獨(dú)或與其它化學(xué)治療劑如紫杉醇(Taxol)、鹽酸阿霉素和順鉑(Platino)組合使用時(shí)均有效。參見(jiàn)以下的文獻(xiàn)和其中引用的文獻(xiàn)Cobleigh，M.A.，Vogel，C.L.，Tripathy，D.，Robert，N.J.，Scholl，S.，F(xiàn)ehrenbacher，L.，Wolter，J.M.，Paton，V.，Shak，S.，Lieberman，G.，和Slamon，D.J.，″Multinational study of the efficacy and safety ofhumanized anti-HER2monoclonal antibody in women who haveHER2-overexpressing metastatic breast cancer that has progressedafter chemotherapy for metastatic disease″，J.ofClin.Oncol.17(9)，2639-2648頁(yè)(1999)；Baselga，J.，Pfister，D.，Cooper，M.R.，Cohen，R.，Burtness，B.，Bos，M.，D′Andrea，G.，Seidman，A.，Norton，L.，Gunnett，K.，F(xiàn)alcey，J.，and erson，V.，Waksal，H.，和Mendelsohn，J.，″Phase Istudies of anti-epidermalgrowth factor receptor chimeric antibody C225 alone and incombination with cisplatin″，J.Clin.Oncol.18(4)，904-914頁(yè)(2000)。
本發(fā)明化合物可用于治療癌癥，所述癌癥例如慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、黑素瘤、肥大細(xì)胞增殖病、生殖細(xì)胞瘤、急性髓性白血病(AM)、小兒肉瘤(pediatric sarcomas)、乳癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、或前列腺癌、和其他已知與PTK(例如SRC、BCR-AB和c-KIT)有關(guān)的癌癥。本發(fā)明化合物也可用于治療對(duì)靶向BCR-ABL和c-KIT的化學(xué)治療劑(例如GleeveC，即STI-571)敏感或抗性的癌癥。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，其中含有至少一種有效量的能治療蛋白酪氨酸激酶相關(guān)疾病的式I化合物和可藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明的組合物可以含有下述的其它治療藥物，并可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)，使用常規(guī)的固體或液體載體或稀釋劑以及適合于預(yù)定給藥方式的各類(lèi)藥用添加劑(例如賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑等)，進(jìn)行配制。
式I化合物可以任何適宜的方式施用，例如，以片劑、膠囊、粒劑或粉劑的形式口服；舌下；頰服；腸道外給藥，例如皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或胸骨內(nèi)注射或輸注法(例如，以無(wú)菌可注射的水性或非水性溶液或混懸液的形式)；經(jīng)鼻給藥，例如吸入噴霧；局部給藥，例如以霜?jiǎng)┗蚋鄤┑男问?；或直腸給藥，例如以栓劑的形式；以含有無(wú)毒性藥用載體或稀釋劑的劑量單位形式。本發(fā)明化合物可以適于立即釋放或延長(zhǎng)釋放的形式施用。立即釋放或延長(zhǎng)釋放可以通過(guò)使用含本發(fā)明化合物的適宜藥物組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)?；蛘?，尤其是對(duì)于延長(zhǎng)釋放的情形，通過(guò)使用例如皮下植入物或滲透泵等裝置來(lái)實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明化合物還可以脂質(zhì)體形式給藥。
示例性的口服組合物包括混懸劑，其中可含有例如用作填充劑的微晶纖維素，作為助懸劑的藻酸或藻酸鈉，作為增粘劑的甲基纖維素，以及本領(lǐng)域已知的甜味劑或矯味劑；以及立即釋放型片劑，其中可含有微晶纖維素、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂和/或乳糖，以及/或本領(lǐng)域已知的其它賦形劑、粘合劑、填充劑、崩解劑、稀釋劑和潤(rùn)滑劑。本發(fā)明化合物還可以舌下和/或頰的方式經(jīng)由口腔釋放。模制的片劑、壓制的片劑或冷凍干燥的片劑是可以采用的示例形式。示例組合物包括將本發(fā)明化合物與諸如甘露糖醇、乳糖、蔗糖和/或環(huán)糊精等速溶性稀釋劑一起配制的組合物。這類(lèi)制劑中還可包含高分子量的賦形劑，例如纖維素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。這些制劑還可含有促進(jìn)粘膜附著的賦形劑，例如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(SCMC)、馬來(lái)酸酐共聚物(如Gantrez)和用于控制釋放的試劑，例如聚丙烯酸共聚物(如Caropol 934)。還可以加入潤(rùn)滑劑、助流劑、矯味劑、著色劑和穩(wěn)定劑以方便制備和使用。
用于鼻用氣溶膠或吸入給藥的示例組合物包括在鹽水中的溶液，其中可含有例如芐基醇或其它合適的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑、和/或本領(lǐng)域已知的其它穩(wěn)定劑或分散劑。
腸道外給藥的組合物實(shí)例包括可注射的溶液或混懸劑，其中可含有，例如適宜的無(wú)毒的腸道外用稀釋劑或溶劑，例如甘露糖醇、1，3-丁二醇、水、Ringer溶液、等滲的氯化鈉溶液，或者其它適宜分散劑或潤(rùn)濕劑和助懸劑，包括合成的甘油單酯或二酯，以及脂肪酸，包括油酸。
用于直腸給藥的示例組合物包括栓劑，其中可含有例如合適的非刺激性賦形劑，如可可脂、合成的甘油酯或聚乙二醇，它們?cè)诔叵率枪腆w，但在直腸腔內(nèi)是液體和/或溶解的，釋放出藥物。
用于局部給藥的示例組合物包括局部用的載體，例如Plastibase(用聚乙烯膠凝的礦物油)。
可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定本發(fā)明化合物的有效量，對(duì)于成人的典型每天劑量為0.1-100mg活性化合物/kg體重可以單劑量服用，或者以各個(gè)分劑量的形式例如每天1-4次用藥?？梢岳斫獾氖?，對(duì)于任何特定的對(duì)象，具體的劑量水平和給藥次數(shù)可以變化，這取決于多種因素，其包括所用特定化合物的活性，該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)間長(zhǎng)短，用藥對(duì)象的物種、年齡、體重、健康概況、性別和飲食習(xí)慣，用藥的方式和時(shí)間，排泄速度，藥物的組合，以及具體病癥的嚴(yán)重程度。優(yōu)選的治療對(duì)象包括患有蛋白酪氨酸激酶相關(guān)病癥的動(dòng)物，最優(yōu)選哺乳動(dòng)物物種，例如人和家畜(例如犬、貓)等。
當(dāng)靜脈給藥時(shí)，優(yōu)選采用本發(fā)明制劑施用本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物。通常，采用IV輸液施用本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物約10分鐘-3小時(shí)，優(yōu)選約30分鐘-2小時(shí)，更優(yōu)選約45分鐘-90分鐘，和最優(yōu)選約1小時(shí)。典型地，所述化合物的靜脈給藥劑量約為0.5mg/m2-65mg/m2，優(yōu)選約1mg/m2-50mg/m2，更優(yōu)選約2.5mg/m2-30mg/m2，和最更優(yōu)選約25mg/m2。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知如何根據(jù)病人的身高和/或體重?fù)Q算mg/kg-mg/m2(參見(jiàn)，例如http//www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm)。
如上所述，本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，也可經(jīng)口服、靜脈或兩者途徑給藥。具體地說(shuō)，本發(fā)明方法包括例如以下劑量方案2-10天一次，優(yōu)選每3-9天一次，更優(yōu)選每4-8天一次，和最優(yōu)選每5天一次。在一個(gè)方案中，為3天-5周，優(yōu)選4天-4周，更優(yōu)選5天-3周，和最優(yōu)選1-2周，循環(huán)之間不實(shí)施治療。在另一個(gè)方案中，本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，也可經(jīng)口服、靜脈或兩者途徑3天給藥一次，其中在循環(huán)之間優(yōu)選1-3周內(nèi)不實(shí)施治療。在另一個(gè)方案中，本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，也可經(jīng)口服、靜脈或兩者途徑5天給藥一次，其中在循環(huán)之間優(yōu)選1-3周內(nèi)不實(shí)施治療。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物的給藥治療循環(huán)為每日一次連續(xù)5天，2-10天一次，優(yōu)選每周一次。在一個(gè)實(shí)施方案中，每日一次連續(xù)5天施用本發(fā)明化合物例如式III或IV化合物，接著2天不給于治療。
本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，也可經(jīng)口服、靜脈或兩者途徑給藥，每1-10周、優(yōu)選每2-8周、更優(yōu)選每3-6周、和更優(yōu)選每3周一次。
在本發(fā)明另一方法中，按照28天的循環(huán)施用本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，其中于1、7和14天經(jīng)靜脈給藥，和于21天經(jīng)口服給藥?；蛘?，本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，按照28天的循環(huán)施藥，其中于1天經(jīng)口服給藥施用式I和II化合物，和于7、14和28天經(jīng)靜脈給藥。
按照本發(fā)明，可向病人施用一定劑量的本發(fā)明化合物包括式III或IV化合物，直至出現(xiàn)反應(yīng)，例如腫瘤體積減小，或施以達(dá)到有限毒性的劑量。
本發(fā)明化合物可以單獨(dú)使用，或彼此組合使用，和/或與可用于治療蛋白酪氨酸激酶相關(guān)病癥的其它適宜治療劑，例如本發(fā)明之外的PTK抑制劑、抗炎劑、抗增殖劑、化學(xué)治療劑、免疫抑制劑、抗癌藥和細(xì)胞毒性劑聯(lián)用。
其它這些治療劑的示例包括環(huán)孢菌素(如環(huán)孢菌素A)，CTLA4-Ig，抗體如抗ICAM-3，抗-IL-2受體(抗-Tac)，抗-CD45RB，抗-CD2，抗-CD3(OKT-3)，抗-CD4，抗-CD80，抗-CD86，單克隆抗體OJKT3；阻斷CD40和gp39之間相互作用的試劑，例如對(duì)CD40和/或gp39特異的抗體(即CD154)；由CD40和gp39構(gòu)成的融合蛋白(CD40Ig和CD8gp39)；抑制劑，例如NF-Kappa B功能的核易位抑制劑，如脫氧精胍菌素(DSG)；非甾族抗炎藥(NSAID)，例如布洛芬；類(lèi)固醇，如脫氫可的松或地塞米松；金化合物；抗增殖劑如甲氨蝶呤；FK506(他克莫司，Prograf)，霉酚酸莫菲替克；細(xì)胞毒素藥物例如硫唑嘌呤和環(huán)磷酰胺；TNF-α抑制劑例如依那西普；抗TNF抗體或可溶性TNF受體，例如依那西普(Enbrel)；雷帕霉素(西羅莫司或Rapamune)，Ieflunimide(Arava)，和環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑，如塞來(lái)考昔(Celebrex)和羅非考昔(Vioxx)，或它們的衍生物；以及在以下美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)中公開(kāi)的PTK抑制劑，這些專(zhuān)利申請(qǐng)?jiān)诖巳囊胱鳛閰⒖?0/056,770，8/25/97提交(代理人備審案號(hào)QA202*)、60/069,159，12/9/97提交(代理人備審案號(hào)QA202a*)、09/097,338，6/15/98提交(代理人備審案號(hào)QA202b)、60/056,797，8/25/97提交(代理人備審案號(hào)QA205*)、09/094,797，6/15/98提交(代理人備審案號(hào)QA205a)、60/065,042，11/10/97提交(代理人備審案號(hào)QA207*)、09/173,413，10/15/98提交(代理人備審案號(hào)QA207a)、60,076,789，3/4/98提交(代理人備審案號(hào)QA208*)、和09,262,525，3/4/99提交(代理人備審案號(hào)QA208a)。參見(jiàn)以下文獻(xiàn)及其引用的文獻(xiàn)引用的文獻(xiàn)Hollenbaugh，D.，Douthwright，J.，McDonald，V.，和Aruffo，A.，″CleavableCD40Ig fusion proteins and the binding to sgp39″，J.Immunol.Methods(荷蘭)，188(1)，1-7頁(yè)(12/15/1995)；Hollenbaugh，D.，Grosmaire，L.S.，Kullas，C.D.，Chalupny，N.J.，Braesch-Andersen，S.，Noelle，R.J.，Stamenkovic，I.，Ledbetter，J.A.，和Aruffo，A.，′The human T cell antigen gp39，a member of theTNF gene family，is a ligand for the CD40 receptorexpressionof a soluble form of gp39 with B cell co-stimulatory activity″，EMBO J(英格蘭)，11(12)，4313-4321頁(yè)(12，1992)；和Moreland，L.W.etal.，′Treatment of rheuma toid arthritis with a recombinanthuman tumor necrosis factor receptor(p75)-Fc fusion proteiN，NewEngland J.of Medicine，337(3)，141-147頁(yè)(1997)。
典型的各類(lèi)抗癌藥和細(xì)胞毒性劑包括但不限于烷基化試劑，例如氮芥、烷基磺酸酯、硝基脲、氨丙啶和三氨烯；抗代謝物，例如葉酸鹽拮抗劑、嘌呤類(lèi)似物和嘧啶類(lèi)似物；抗生素類(lèi)，例如蒽環(huán)素、博來(lái)霉素、絲裂霉素、更生霉素和普卡霉素；酶，例如L-天冬酰胺酶；法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑；激素，例如糖皮質(zhì)激素、雌激素/抗雌激素、雄激素/抗雄激素、孕酮、和促黃體素釋放激素拮抗劑、醋酸奧曲肽；微管破壞劑，例如Ecteinascidins或其類(lèi)似物及衍生物；微管穩(wěn)定劑，例如紫杉醇(Taxol)、紫杉特爾(Taxotere)和EpothiloneA-F或其類(lèi)似物或衍生物；植物來(lái)源的產(chǎn)物，例如長(zhǎng)春花生物堿、表鬼臼毒素、紫杉烷；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑；異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑；和其他藥物，例如，羥基脲、丙卡巴肼、米托坦、六甲基密胺、鉑配位絡(luò)合物如順鉑和卡鉑；以及用于抗癌的其它藥劑和細(xì)胞毒性劑，例如生物學(xué)反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、生長(zhǎng)因子；免疫調(diào)節(jié)劑和單克隆抗體。本發(fā)明化合物還可與輻射療法聯(lián)用。
這類(lèi)抗癌藥和細(xì)胞毒性劑的代表性示例包括但不限于鹽酸氮芥、環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法侖、異環(huán)磷酰胺、白消安、卡氮芥、環(huán)己亞硝脲、甲環(huán)亞硝脲、鏈脲霉素、塞替哌、達(dá)卡巴嗪、甲氨蝶呤、硫鳥(niǎo)蝶呤、巰基嘌呤、氟達(dá)拉濱、Pentastatin、克拉屈濱、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、鹽酸阿霉素、柔紅霉素、去甲氧柔紅霉素、硫酸博來(lái)霉素、絲裂霉素C、放線(xiàn)霉素D、Safracins、Saframycins、Quinocarcins、Discodermolides、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春瑞濱、依托泊苷、鬼臼噻吩苷、紫杉醇、三苯氧胺、雌氮芥、磷酸雌二醇氮芥鈉鹽、氟利坦、布舍瑞林、亮丙瑞林、蝶啶、二炔類(lèi)、左旋咪唑、Aflacon、干擾素、白細(xì)胞間介素、阿地白介素、非格司亭、沙莫司亭、利妥昔單抗、BCG、維甲酸、鹽酸伊立替康、倍他米松、鹽酸吉西他濱、六甲嘧胺和托泊替康，以及它們的任何類(lèi)似物或衍生物。
這些類(lèi)別中的優(yōu)選成員包括但不限于紫杉醇、順鉑、卡鉑、阿霉素、去甲柔紅霉素、柔紅霉素、氨基喋呤、甲氨喋呤、甲基喋呤、絲裂霉素C、Ecteinascidin 743、波福霉素、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、吉西他濱、阿糖胞苷、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物，例如依托泊苷、磷酸依托泊苷或鬼臼噻吩苷，美法侖、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、異長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛和環(huán)氧長(zhǎng)春堿。
抗腫瘤藥和其它細(xì)胞毒性劑的示例包括2000年2月17日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)09/506,481(代理人待審案號(hào)LD186)、德國(guó)專(zhuān)利41380428、WO97/19086、WO98/22461、WO98/25929、WO98/38192、WO99/01124、WO99/02224、WO99/02514、WO99/03848、WO99/07692、WO99/27890、WO99/28324、WO99/43653、WO99/54330、WO99/54318、WO99/54319、WO99/65913、WO99/67252、WO99/67253，和WO00/00485；WO99/24416中的CDK抑制蛋白；以及WO97/30992和WO98/54966中的異戊二烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑。
以上其它治療劑，當(dāng)與本發(fā)明化合物一起使用時(shí)，可以按照例如在Physicians′Desk Reference(PDR)中所推薦的用量，或者按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定的用量應(yīng)用。
以下試驗(yàn)用來(lái)確定化合物(“試驗(yàn)化合物”)作為PTK抑制劑的活性大小。下列實(shí)施例中所述的化合物已在一種或更多這些試驗(yàn)方法中的試驗(yàn)中顯示了活性。
使用Lck、Fyn、Lyn、Hck、Fgr、Src、Blk或Yes的酶分析使用蛋白酪氨酸激酶Lck、Fyn、Lyn、Hck、Fgr、Src、Blk和Yes進(jìn)行了以下分析。
在試驗(yàn)化合物存在下，將待試驗(yàn)的蛋白酪氨酸激酶置于激酶緩沖液(20mM MOPS，pH7，10mM MgCl2)中培養(yǎng)。加入底物至最終濃度為1μM ATP、3.3μCi/ml[33P]γ-ATP和0.1mg/ml酸變性的烯醇化酶(按照Cooper，J.A.，Esch，F(xiàn).S.，Taylor，S.S.，和Hunter，T.，″Phosphorylation sites in enolase and lactate dehydrogenaseutilized by tyrosine protein kinases in vivo and in vitro″，J.Biol.Chem.，259，7835-7841(1984)所述制備)，以引發(fā)反應(yīng)。10分鐘后，加入10％三氯乙酸、100mM焦磷酸鈉，隨后加2mg/ml牛血清蛋白，中使反應(yīng)。于4℃，析出標(biāo)記的烯醇化酶蛋白底物，收集在Packard Unifilter板上并于Topcount閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)，以確定試驗(yàn)化合物的蛋白酪氨酸激酶抑制活性(活性與得到的標(biāo)記的烯醇化蛋白質(zhì)之量成反比)。試劑的準(zhǔn)確濃度和標(biāo)記物的數(shù)量可根據(jù)需要改變。
該分析方法的優(yōu)越之處在于使用外源底物(烯醇化酶)實(shí)現(xiàn)更準(zhǔn)確的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，并且可采用便于自動(dòng)化的96孔格式進(jìn)行。此外，與GST-蛋白酪氨酸激酶融合蛋白標(biāo)記物相比，His-標(biāo)記蛋白酪氨酸激酶(下面說(shuō)明)能提供更高的產(chǎn)率和純度。
蛋白酪氨酸激酶可由市售來(lái)源或用在此所述的重組方法得到。為制備重組Lck，利用Life Technologies(Gibco)桿狀病毒載體pFast-35-Bac Hta(市售品)，在昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)將人Lck制備成His-標(biāo)記的融合蛋白標(biāo)記物。向該載體內(nèi)插入用PCR法(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))分離的cDNA編碼的人Lck，按照制造商所述的方法表達(dá)該蛋白。用親合性色譜法將Lck純化。關(guān)于用桿狀病毒在昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)制造Lck，參見(jiàn)Spana，C.，O′Rourke，E.C.，Bolen，J.B.，和Fargnoli，J.，″Analysis ofthe tyrosine kinase p561ck expressed as a glutathione S-transferase protein in Spodoptera frugiperda cells，″Proteinexpression and purification，4卷，390-397頁(yè)(1993)。類(lèi)似的方法可用于其它Src-家族激酶的重組生產(chǎn)。
利用HER1或HER2的酶分析在含20mM Tris.HCl、pH7.5、10mM MnCl2、0.5mM二硫蘇糖醇、0.1mg/ml牛血清蛋白、0.1mg/ml Poly(glu/tyr，4∶1)、1μM ATP和4μCi/ml[γ-33p]ATP的激酶緩沖液中，分析待試驗(yàn)的化合物。Poly(glu/tyr，4∶1)是作為磷酰基受體使用的合成聚合物，購(gòu)自SigmaChemicals公司。加入酶引發(fā)激酶反應(yīng)，并將反應(yīng)混合物在26℃培養(yǎng)1小時(shí)。加入EDTA至50mM終止反應(yīng)，加入三氯乙酸至5％使蛋白質(zhì)沉淀。
在Packard Unifilter板上過(guò)濾，回收析出的蛋白質(zhì)，在Topcount閃爍計(jì)數(shù)器內(nèi)測(cè)定結(jié)合的放射量。為制備重組HER1，受體的胞質(zhì)序列在昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)成GST融合蛋白標(biāo)記物，按照上述對(duì)Lck所述方法用親合性色譜純化。將HER2的胞質(zhì)序列亞克隆到桿狀病毒表達(dá)載體pBlueBac4(Invitrogen)中，作為未標(biāo)記的蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)。重組蛋白用離子交換色譜法部分純化。
細(xì)胞分析3.細(xì)胞酪氨酸磷酸化將Jurkat T細(xì)胞與試驗(yàn)化合物一起溫育，然后加入CD3的抗體(單克隆抗體G19-4)進(jìn)行激發(fā)。4分鐘后或在其它預(yù)定時(shí)間，加入含NP-40去垢劑的裂解緩沖液，將細(xì)胞裂解。利用抗磷酸酪氨酸免疫印跡法，檢測(cè)蛋白質(zhì)的磷酸化。通過(guò)使用抗-ZAP-70抗體的免疫沉淀法，并隨后用抗磷酸酪氨酸免疫印跡法，來(lái)檢測(cè)待試特定具體蛋白質(zhì)例如ZAP-70的磷酸化，這些步驟參見(jiàn)Schieven，G.L，Mittler，R.S.，Nadler，S.G.，Kirihara，J.M.，Bolen，J.B.，Kanner，S.B.，andLedbetter，J.A.，″ZAP-70 tyrosine kinase，CD45 and T cell receptorinvolvement in UV and H2O2induced T cell signal transduction″，J.Biol.Chem.，269，20718-20726(1994)，其全文引入作為參考。Lck抑制劑抑制由抗-CD3抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞蛋白的酪氨酸磷酸化。
關(guān)于G19-4的制備，參見(jiàn)Hansen，J.A.，Martin，P.J.，Beatty，P.G.，Clark，E.A.，和Ledbetter，J.A.，″Human T lymphocyte cellsurface molecules defined by the workshop monoclonalantibodies″，Leukocyte Typing I，A.Bernard，J.Boumsell，J.Dausett，C.Milstein，和S.Schlossman編輯(紐約SpringerVeR1ag)，195-212頁(yè)(1984)；和Ledbetter，J.A.，June，C.H.，Rabinovitch，P.S.，Grossman，A.，Tsu，T.T.，和Imboden，J.B.，″Signal transduction through CD4 receptorsstimulatoryvs.inhibitory activity is regulated by CD4 proximity to the CD3/Tcell receptor″，Eur.J.Immunol.，18，525(1988)。
3.鈣分析Lck抑制劑了阻斷受抗-CD3抗體激發(fā)的T細(xì)胞內(nèi)鈣活動(dòng)化(mobilization)。使細(xì)胞負(fù)載鈣指示劑染料indo-1(經(jīng)抗-CD3抗體例如單克隆抗體G19-4處理)，通過(guò)記錄藍(lán)/紫indo-1之比的變化，使用流動(dòng)式細(xì)胞計(jì)量法測(cè)定鈣活動(dòng)化，如Schieren，G.L.，Mittler，R.S.，Nadler，S.G.，Kirihara，J.M.，Bolen，J.B.，Kanner，S.B.，和Ledbetter，J.A.，″ZAP-70 tyrosine kinase，CD45 and T cellreceptor involvement in UV and H2O2induced T cell signaltransduction ″，J.Biol.Chem.，269，20718-20726(1994)所述，其全文引入作為參考。
3.增殖分析Lck抑制劑了抑制被抗-CD3+抗-CD28抗體所激發(fā)生長(zhǎng)的正常人外周血T細(xì)胞的增殖。在96孔板上，涂覆CD3的單克隆抗體(例如G19-4)，以結(jié)合抗體，然后洗板。與板結(jié)合的抗體用來(lái)激發(fā)細(xì)胞。向孔中加入正常人外周血T細(xì)胞，同時(shí)加入試驗(yàn)化合物和抗-CD28抗體，以產(chǎn)生共同激發(fā)作用。在預(yù)定的時(shí)間例如3天后，向細(xì)胞中加入[3H]胸苷，進(jìn)一步培養(yǎng)使標(biāo)記物得以結(jié)合到新合成的DNA之后，收集細(xì)胞并在閃爍計(jì)數(shù)器內(nèi)計(jì)數(shù)以測(cè)定細(xì)胞增殖。
以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，對(duì)本發(fā)明范疇沒(méi)有限制作用。實(shí)施例中采用了如下定義的縮寫(xiě)。用實(shí)施例和制備步驟來(lái)識(shí)別示例化合物(例如，“1A”表示實(shí)施例1步驟中的標(biāo)題化合物)，或者采用所述化合物是實(shí)施例中標(biāo)題化合物的實(shí)施例來(lái)識(shí)別示例化合物(例如，“2”表示實(shí)施例2中的標(biāo)題化合物)。
縮寫(xiě)aq.＝含水、水性conc.＝濃縮DMSO＝二甲基亞砜EtOAc＝乙酸乙酯Et2O＝乙醚h＝hHATU＝N-[二甲氨基-1H-1，2，3-三唑-[4，5-b]吡啶-1-基亞甲基]-N-甲基甲銨(methan aminium)六氟磷酸鹽N-氧化物MeOH＝甲醇MOPS＝4-嗎啉-丙磺酸MS＝質(zhì)譜法Ret Time＝保留時(shí)間RT＝室溫satd.＝飽和TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃DMF＝N，N-二甲基酰胺具體實(shí)施方式
實(shí)施例1制備[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1.1-二甲基乙酯 3.乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5羧酸酯通氮下，將在無(wú)水THF(300mL)中的乙基乙基-2-氨基-4-甲基-噻唑-5羧酸酯(18.6g，100mmol)、二-叔丁基二碳酸酯(26.2g，120mol)和4-二甲基氨基吡啶(800mg，6.55mmol)的懸浮液攪拌18小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于二氯甲烷(1)中，并經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾。濾液用1N HCl水溶液(300mL，2x)、水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并真空濃縮。殘余物用己烷研磨。過(guò)濾固體并真空干燥，得到褐色固體標(biāo)題化合物(20g，72％)。
B.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸用6N KOH溶液(250mL)，處理在THF-乙醇(250mL，2∶3)中的乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯(10g，34.95mmol)的攪拌溶液?；衔锛訜嶂?5℃過(guò)夜。溶液冷卻至0℃，并用濃HCl酸化至pHl。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物用水、乙醚洗滌，無(wú)水五氧化磷真空干燥，得到白色固體標(biāo)題酸(6g，89％)。
C.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酰氯于0℃，將在二氯甲烷(22.5mL，45mmol)中的2M草酰氯溶液，滴加至在二氯甲烷(150mL)和N，N-二甲基酰胺(150μl)中的2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸(10g，38.72mmol)的攪拌懸浮液中。滴加結(jié)束時(shí)懸浮液逐漸變得均勻。溶液放置至室溫，并攪拌1.5h。真空蒸發(fā)溶劑，殘余物用甲苯(300mL，2x)共蒸發(fā)(coevaporate)，然后真空干燥，得到褐色固體標(biāo)題氯化物(10.7g，99％)。
D.[5-[[(2，4.6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯于0℃，將2，4，6-三甲基苯胺(6.3mL，38.66mmol)滴加至在二氯甲烷(150mL)中的2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸氯化物(10.7g，38.66mmol)的攪拌溶液中。20分鐘后，滴加二異丙基乙胺(8.8mL，44.88mmol)。溶液放置至室溫，并再攪拌2小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于EtOAC(700mL)中，用1N HCl水溶液(300mL，2x)、水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用醚研磨，得到褐色固體標(biāo)題化合物(12.5g，86％)。
實(shí)施例2制備2-氨基-N-(2.4，6-三甲基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺 于室溫，將在三氟醋酸(100mL)中的[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸、1，1-二甲基乙酯(10g，26.63mmol)的溶液攪拌3小時(shí)。減壓濃縮溶液，殘余物用EtOAC(700mL)稀釋?zhuān)?％KHCO3水溶液(400mL，2x)水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用用醚(200mL)和乙腈(100mL)洗滌，得到白色固體標(biāo)題化合物(6.7g，91％)。
實(shí)施例3制備[5-[(2，4.6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-三氟甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 3.乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-三氟甲基-噻唑-5-羧酸酯通氮下，將在二氯甲烷(209mL)中的乙基-2-氨基-4-三氟甲基-噻唑-5-羧酸酯(5.05g，21.02mmol)、二-叔丁基二碳酸酯(4.82g，22.07mmol)和4-二甲基氨基吡啶(260mg，2.1mmol)的懸浮液攪拌1.5小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離。用在己烷中的5％EtOAc洗脫，接著用在己烷中的15％EtOAc洗脫，得到白色固體標(biāo)題化合物(6.57g，92％)。
B.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-三氟甲基-噻唑-5-羧酸用1N NaOH水溶液(573mL)，處理在甲醇(100mL)中的乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-三氟甲基-噻唑-5羧酸酯(6.5g，19.1mmol)的攪拌溶液。溶液于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。溶液冷卻至0℃，并用6M HCl水溶液酸化至pHl，并用氯仿(150mL，6x)萃取。合并氯仿萃取物，干燥(Na2SO4)，減壓、真空過(guò)濾并濃縮，得到白色固體標(biāo)題酸(5.75g，96％)。
C.5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-三氟甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯將4-甲基嗎啉(40μL，0.39mmol)加至在DMF(2mL)中的2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-三氟甲基-噻唑-5-羧酸(100mg，0.32mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(45μL，0.32mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)(BOP試劑，380mg，0.4mmol)的混合物中。溶液于室溫?cái)嚢?2小時(shí)，用二氯甲烷稀釋?zhuān)⒂?.25M KHSO4水溶液、接著用飽和KHCO3水溶液洗滌。分離二氯甲烷萃取物，干燥(Na2SO4)并濃縮，殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中的5％ EtOAc洗脫，接著用在己烷中的10％EtOAc洗脫，得到白色固體標(biāo)題化合物(90mg，65％)。
實(shí)施例4制備2-氨基-N-6-三甲基苯基)-4-三氟甲基-6-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1)
于0℃，將在三氟乙酸(5mL)的[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-三氟甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯(120mg，0.28mmol)溶液攪拌1小時(shí)。減壓濃縮溶液，殘余物與醚共蒸發(fā)得到白色固體，經(jīng)己烷研磨，得到淡黃色固體標(biāo)題化合物(96mg，76％)。
實(shí)施例5制備[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-苯基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 3.乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-苯基-噻唑-5-羧酸酯采用乙基-2-氨基-4-苯基-噻唑-5-羧酸酯，按照類(lèi)似于制備3A的方法，制備白色固體化合物5A(90.5％)。
B.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-4-苯基-噻唑-5-羧酸采用5A，按照類(lèi)似于制備3B的方法，制備白色固體化合物5B(99％)。
C.2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-苯基-噻唑-5-羧酸酰氯采用5B，按照類(lèi)似于制備1C的方法，制備白色固體化合物5C(90％)。
D.[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-苯基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯采用5C，按照類(lèi)似于制備1D的方法，制備淡黃色固體化合物5D(93％)。
實(shí)施例6制備2-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-4-苯基-6-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用5D，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體化合物6(68％)。
實(shí)施例7制備[5-[[苯基氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 采用苯胺代替2，4，6-三甲基苯胺和以三乙胺代替二異丙基乙胺，按照類(lèi)似于制備1D的方法，制備灰白色白色固體狀標(biāo)題化合物(76％)。
實(shí)施例8制備2-氨基-N-(苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用7，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物8(68％)。
實(shí)施例9制備[5-[[(2，4-二氯苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1.1-二甲基乙酯 采用2，4-二氯苯胺，按照類(lèi)似于制備1D的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物9(28％)。
實(shí)施例10制備2-氨基-N-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用9，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物8(100％)。
實(shí)施例11制備5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 3.乙基-2-叔丁氧基羧基氧基氨基-噻唑-5羧酸酯采用乙基-2-氨基-噻唑-5羧酸酯，按照類(lèi)似于制備3A的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物11A(79.5％)。
B.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-噻唑-5-羧酸采用11A，按照類(lèi)似于制備3B的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物11B(95.5％)。
C.2-叔丁氧基羧基氧基氨基-噻唑-5-羧酸酰氯采用11B，按照類(lèi)似于制備1C的方法，制備標(biāo)題化合物11C。
D.[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基氨基甲酸，1.1-二甲基乙酯采用11C，按照類(lèi)似于制備1D的方法，制備灰白色固體狀標(biāo)題化合物11D(70％)。
實(shí)施例12制備2-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-4-苯基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用11D，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡黃色固體狀標(biāo)題化合物12(88％)。
實(shí)施例13-53通用方法按照下述方法制備化合物13-53。將適宜的胺(0.40mmol)和二異丙基乙胺(70μL，0.40mmol)加至在二氯甲烷(3mL)中的1C(100mg，0.36mmol)懸浮液中。于室溫，將溶液在封閉試管中機(jī)械攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物用甲醇(200μl)稀釋?zhuān)⒇?fù)載于Varian SCX離子交換柱上(2g/6cc)，所述柱經(jīng)甲醇-二氯甲烷(8mL，1∶1)、接著二氯甲烷(8mL)預(yù)處理。用Gilson自動(dòng)裝置進(jìn)行SCX柱過(guò)濾。順序用二氯甲烷(9m)、二氯甲烷-甲醇(9mL，4∶1)、二氯甲烷-甲醇(9mL，1∶1)、甲醇(9mL)、在甲醇(9mL)中的0.01M氫氧化銨和在甲醇(9ml)中的0.05M氫氧化銨(9Ml)洗脫所述柱子。用自動(dòng)裝置分別收集洗脫液，然后用真空離心蒸發(fā)濃縮器(speed vac)濃縮，合并含有產(chǎn)物的餾分。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMCS5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％ MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。







實(shí)施例54-129通用方法按照下述方法制備化合物54-129。將二異丙基乙胺(60μL，0.34mmol)加至在THF(0.4mL)中的胺2(30mg，0.11mmol)、適宜羧酸(0.13mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(19.5mg，0.14mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(26.8mg，0.14mmol)的混合物中。于45℃，將混合物在封閉試管中機(jī)械攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用二氯甲烷(4mL)，并用2N HCl水溶液(2mL，3x)洗滌。二氯甲烷溶液流經(jīng)Gilson自動(dòng)裝置上的Varian SCX陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(2g，6cc)。順序用乙腈-甲醇(10mL，4∶1)、甲醇-2M甲醇/氨(3mL，4∶1)，和2M甲醇/氨溶液(3mL，4x)洗脫所述柱子。用自動(dòng)裝置分別收集洗脫液。濃縮含有產(chǎn)物的餾分并真空干燥。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM化合物54-127?；衔?28-129HPLC條件Zorbox S8-C18 4.5mm×7.5mm短柱，由100％溶劑A(10％MeOH，90％H2O，0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH，10％H2O，0.2％H3PO4)的8分鐘梯度洗脫流速2.5ml/min，λ＝217nM。












實(shí)施例130制備[4-甲基-5[[(2-硝基苯)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 將2-硝基苯胺(55mg，0.4mmol)和二異丙基乙胺(70μL，0.4mmol)，滴加到在二氯甲烷(3mL)中2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酰氯1C(100mg，0.36mmol)的溶液中。室溫16h后，加入4-N，N-二甲基氨基吡啶(22mg，0.18mmol)，混合物再攪拌3.5h。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離。用在己烷中的5％EtOAc洗脫，接著用在己烷中的20％EtOAc洗脫，得到黃色固體標(biāo)題化合物(15mg，11％)。
實(shí)施例131制備[4-甲基-5f(2，4，6-三甲基苯基)氨基]arbony]-2-噻唑基]氨基甲酸，苯基甲酯
3.乙基-2-芐氧羰基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯于0-5℃，將3M NaHCO3水溶液(10mL，30mmol)，加至在THF(20mL)中的乙基-2-氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯(372mg，2mmol)的攪拌溶液中。加入氯甲酸芐酯(500μ)。2小時(shí)后，附加的氯甲酸芐酯(500μ)和二相溶液于0-5℃再攪拌2小時(shí)?；旌衔镉枚燃淄?50mL)和水(30mL)稀釋。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離。用在己烷中的10％EtOAc洗脫，接著用在己烷中的20％和30％EtOAc洗脫，得到白色固體標(biāo)題化合物(310mg，48％)。
B.2-芐氧羰基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸采用131A，按照類(lèi)似于制備3B的方法，制備灰白色粉末狀標(biāo)題化合物131B(77％)。
C.[4-甲基-5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，苯基甲酯將二異丙基乙胺(70μL，0.41mmol)加至131B(100mg，0.34mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(60μL，0.41mmol)和[O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲]六氟磷酸鹽(HATU，160mg，0.41mmol)的溶液中?；衔镉谑覝?cái)嚢?4小時(shí)，用EtOAC(20mL)稀釋?zhuān)?N HCl水溶液(3x)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用醚(40mL)研磨，得到灰白色固體標(biāo)題化合物(100mg，77％)。
實(shí)施例132制備甲基[4-甲基-5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸.11-二甲基乙酯
采用乙基-2-叔丁氧羰基氧基氨基甲基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備褐色固體狀標(biāo)題化合物132。
實(shí)施例133制備4-甲基-2-(甲基氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用132，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物133(91％)。
實(shí)施例134制備r4-甲基-5-[[甲基(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 采用N-甲基-2，4，6-三甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物134(60％)。
實(shí)施例135制備2-氨基-N，4-二甲基-N-(2，4，6-三甲基-苯基)-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1)
采用134，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物135(97％)。
實(shí)施例136制備[4-甲基-5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，甲酯 將在二氯甲烷(3mL)中的2(100mg，0.36mmol)、吡啶(87μL，1.08mmol)、甲基氯仿(111μL，1.44mmol)的混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。溶液用二氯甲烷稀釋?zhuān)陀肗aHCO3水溶液(20mL，2x)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用醚研磨，得到白色固體標(biāo)題化合物(88mg，82％)。
實(shí)施例137制備[4-乙基-5[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 采用甲基-2-氨基-4-乙基-噻唑-5羧酸酯，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物137(70％)。
實(shí)施例138制備2-氨基-4-乙基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸 采用137，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物138(89％)。
實(shí)施例139制備[5-[[(2，6-二氯苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯 將雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉(290μL，0.29mmol)的1M溶液加至在THF(1mL)中的2，6-d二氯苯胺(13.4mg，0.08mmol)攪拌溶液中。30分鐘后，混合物冷卻至0℃，并一次加入1C(30mg，0.11mmol)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?6小時(shí)。溶液用二氯甲烷稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(2mL，3x)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中30％EtOAc洗脫，得到淡黃色固體標(biāo)題化合物(20mg，45％)。
實(shí)施例140制備2-氨基-N-(2L6-二甲基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1)
采用53，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物140(100％)。
實(shí)施例141制備2-氨基-N-(2-甲氧基-6-甲苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用13，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備灰白色固體狀標(biāo)題化合物141(100％)。
實(shí)施例142制備2-氨基-N-(2-甲基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用18，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物142(90％)。
實(shí)施例143制備2-氨基-N-(2.6-二甲基-4-溴苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用15，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物143(70％)。
實(shí)施例144制備2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用19，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物144(81％)。
實(shí)施例145制備2-氨基-N-(2，4-二甲基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1) 采用17，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物145(68％)。
實(shí)施例146制備2-氨基-N-(2-甲基-6-異丙基苯基)-4-甲基-5-噻唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1)
采用16，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡褐色固體狀標(biāo)題化合物146(100％)。
實(shí)施例147制備2-(Acetv氨基)-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 于室溫，在中二氯甲烷(4.5mL)的2(54mg，0.2mmol)、乙酸酐(22μl，0.23mmol)、二甲基氨基吡啶(3mg)混合物攪拌4.5h。溶液用二氨甲烷(65m)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(20mL)、水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中35％EtOAc洗脫，得到白色固體標(biāo)題化合物(43mg，69％)。
實(shí)施例148制備2-(苯甲酰氨基)-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 將在二氯甲烷(10mL)和吡啶(2m)中的2(100mg，0.36mmol)和苯甲酸酐(226mg，1mmol)溶液于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜?；旌衔镉枚燃淄?50mL)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(15mL，2x)、10％NaHCO3水溶液(20mL，2x)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中30％EtOAc、接著用在己烷中50％EtOAc洗脫，得到摻有苯甲酸的題化合物。將固體溶于EtOAC(40mL)中，并用飽和KHCO3溶液(15mL，4x)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮，得到白色固體標(biāo)題化合物(110mg，80％)。
實(shí)施例149制備4-甲基-2-[(1-氧代丙基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 將在二氯甲烷(10mL)和吡啶(4m)中的2(100mg，0.36mmol)、丙酸酐(332μL，2.58mmol)的混合物于室溫?cái)嚢?h。加入二甲基氨基吡啶(122mg，1mmol)，再攪拌1.5h?；旌衔镉枚燃淄橄♂?zhuān)陀?N HCl水溶液(25mL，3x)、NaHCO3水溶液(20mL，2x)、水(20mL)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中20％EtOAc洗脫，得到白色固體標(biāo)題化合物(81mg，68％)。
實(shí)施例150制備4-甲基-2-[(1-氧丁基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 采用丁酸酐，按照類(lèi)似于制備149的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物150(76％)。
實(shí)施例151制備4-甲基-2-[(1-氧戊基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺
采用戊酸酐，按照類(lèi)似于制備149的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物151(77％)。
實(shí)施例152制備4-甲基-2-[(1-氧己基)氨基1-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 采用己酸酐，按照類(lèi)似于制備149的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物152(75％)。
實(shí)施例153制備4-甲基-2-[(苯基乙?；鵠氨基]-N-(2，4，6-三甲基基)-5-噻唑甲酰胺 于封閉的瓶中，機(jī)械攪拌在二氯甲烷(0.62mL)中的胺2(50mg，0.18mmol)、二異丙基乙胺(101μl，0.58mmol)、苯乙酸(27.2mg，0.20mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(29.4mg，0.22mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(42.2mg，0.22mmol)的溶液16h。反應(yīng)混合物流經(jīng)Varian SCX離子交換樹(shù)脂(2g/6cc)。用乙腈-甲醇(10mL，4∶1)、接著用2M甲醇/氨(9mL)洗脫。合并含有產(chǎn)物的餾分，然后濃縮。殘余物溶于二氯甲烷中，并2N HCl水溶液(2x)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮，得到褐色固體標(biāo)題化合物(39mg，55％)。
實(shí)施例154制備2-[[(乙酰氨基)乙酰基]氨基-4-甲基-N-(2，4.6-三甲基苯基)-6-噻唑甲酰胺 將在THF(5m)中的胺2(50mg，0.18mmol)、二異丙基乙胺(400μL，2.3mmol)、N-乙?；拾彼?42mg，0.36mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(49mg，0.36mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(72mg，0.36mmol)的溶液加熱至50℃過(guò)夜。混合物冷卻，用二氯甲烷(60mL)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(20mL)、飽和KHCO3水溶液(20mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。固體粗品用醚(10mL)研磨，過(guò)濾，用醚(5mL，3x)洗滌，得到灰白色固體標(biāo)題化合物(40mg，59％)。
實(shí)施例155制備2-氨基-4-甲基-N-(2，4，6三甲基苯基)-5-噻唑硫代甲酰胺 將在甲苯(0.23mL)中的2(50mg，0.18mmol)和Lawesson試劑(44mg，0.11mmol)的懸浮液加熱至100℃4h。再加入Lawesson試劑(44mg，0.11mmol)，混合物再加熱3.5h。混合物粗品上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中50％EtOAc、接著用在己烷中70％EtOAc洗脫，得到黃色固體標(biāo)題化合物(11mg，21％)。
實(shí)施例156-170通用方法按照下述方法制備化合物156-170。將二異丙基乙胺(60μL，0.34mmol)，加至在THF(1mL)中的胺2(30mg，0.11mmol)、適宜羧酸(0.13mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(19.5mg，0.14mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(26.8mg，0.14mmol)的混合物中?；旌衔镉诜忾]試管中通氮45℃加熱24h。反應(yīng)混合物二氯甲烷(4m)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(2mL，3x)洗滌，干燥(Na2SO4)，用Speedvac濃縮。粗品用二氯甲烷-醚(5mL，1∶1)研磨，或經(jīng)硅膠色譜分離(洗脫溶劑在己烷中的50％EtOACEtOAc)。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。


實(shí)施例171-180通用方法按照下述方法制備化合物171-180。
將在THF(3.5m)中的2(80mg，0.29mmol)、適宜異氰酸酯(0.87mmol)和吡啶(2mL)的混合物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。某些反應(yīng)需要加熱至60-70℃5小時(shí)。某些反應(yīng)在催化性N，N-二甲基氨基吡啶存在下，于室溫反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(3x)、鹽水洗滌；干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。可采用以下方法純化粗品etheror ether-hexane混合物研磨；或硅膠柱色譜(洗脫溶劑在己烷中的20-40％EtOAc)，研磨，或者流經(jīng)接著Varian陽(yáng)離子SCX筒，用甲醇(5m)、二氯甲烷(5mL)、乙腈-甲醇(10mL，4∶1)和甲醇-2M甲醇/氨(10 mL，4∶1)連續(xù)洗脫，得到標(biāo)題化合物。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間，其中化合物171-172、175和177的HPLC條件為Zorbax SB-C18 4.5mm×7.5cm短柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的30分鐘梯度洗脫，流速2.5mL/min，λ＝217nM。其他化合物的HPLC條件為Zorbax SB-C18 4.5mm×7.5cm短柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的8分鐘梯度洗脫，流速2.5mL/min，λ＝217nM。

實(shí)施例181制備[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，苯基酯 將10％的KHCO3水溶液(170mL)加至在THF(130mL)中2(1.02g，3.7mmol)的攪拌溶液中。滴入Phenyl氯仿(1.39mL，11.1mmol)。雙相混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用二氯甲烷(200mL)稀釋?zhuān)⒂盟?50mL，2x)和鹽水洗滌。分離有機(jī)萃取物，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中的10％EtOAc洗脫，得到固體標(biāo)題化合物(980mg，69％)。
實(shí)施例182-236通用方法按照下述方法制備化合物182-236。
將在THF-乙腈(3mL，1∶1)中的氯甲酸苯酯181(20mg，0.054mmol)和適宜胺(0.08mmol)的溶液室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。某些反應(yīng)需要加熱至60℃4小時(shí)至過(guò)夜?；旌衔锒燃淄?4m)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(1.5mL，2x)、1N NaOH水溶液(1.5mL，2x)洗滌。分離二氯甲烷萃取物，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)品。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間，其中化合物182-192的HPLC條件為Zorbax SB-C18 4.5mm×7.5cm短柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的8分鐘梯度洗脫，流速2.5mL/min，λ＝217nM。其中化合物193-236的HPLC條件為YMC S5 ODS4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。








實(shí)施例237-285通用方法按照下述方法制備化合物237-285。
將在THF-乙腈(3mL，1∶1)中的氨基甲酸苯酯181(20mg，0.054mmol)和適宜胺(0.08mmol)的溶液室溫?cái)嚢柽^(guò)夜?；旌衔锒燃淄?4m)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(1.5mL，2x)、1N NaOH水溶液(1.5mL，2x)洗滌。分離二氯甲烷萃取物，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)品。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間，其中化合物237-278的HPLC條件為YMC S5 ODS4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。其中化合物279-285的HPLC條件為Zorbax S8-C18 4.5mm×7.5cm短柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的8分鐘梯度洗脫，流速2.5mL/min，λ＝217nM。









實(shí)施例286-311通用方法按照下述方法制備化合物286-311(除了307之外)。
用二異丙基乙胺(22.6μL，0.13mmol)，處理在THF(1m)中的2-[[(丁氨基)羰基]氨基-4-甲基-5-噻唑羧酸酰氯(30mg，0.11mmol)、適宜胺(0.12mmol)的溶液。用氬吹掃混合物，所述混合物置于瓶中機(jī)械攪拌22h，用二氯甲烷(4mL)稀釋并用2N HCl水溶液(3x)洗滌。分離有機(jī)萃取物，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮?？刹捎靡韵路椒兓制范燃淄?醚(1∶1)研磨，或硅膠柱色譜(洗脫溶劑在己烷中的80％EtOAc、接著EtOAc)，或者自動(dòng)制備HPLC(條件YMC S5 ODS A 20×100mm柱，由30％溶劑B(90％MeOH、100％H2O、0.1％TFA)至700％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)的10分鐘梯度洗脫，流速20mL/min，λ＝220nM。
按照下述方法制備化合物307。
用二異丙基乙胺(62mL，0.44mmol)，處理在DMF(3m)中的2-[[(丁氨基)羰基]氨基-4-甲基-5-噻唑羧酸(100mg，0.36mmol)和HATU(170mg，0.44mmol)的懸浮液?；旌衔锛訜嶂?0℃2小時(shí)，冷卻，用二氯甲烷(12mL)稀釋?zhuān)迷?N含水HCl中的8M尿素水溶液(6mL，3x)、5％KHCO3水溶液(6mL，3x)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用EtOAc-醚研磨，得到白色固體狀的混合酸酐中間體(102mg，74％)。向在THF(1m)中的2，6-二氯苯胺氨(19.4mg，0.12mmol)的攪拌溶液中滴加在THF(170μL，0.17mmol)中的1M雙(三甲基甲硅烷基)鈉溶液。15分鐘后，一次加入混合酸酐中間體(41.3mg，0.11mmol)。加入幾滴DMF，溶液攪拌16h。另外加入1M雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉溶液(110μ)，和混合再攪拌2h。混合物用二氯甲烷(4m)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(2mL，3x)、飽和KHCO3水溶液(3x)洗滌，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。固體用己烷(2x)洗滌，殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中的80％EtOAc、接著用EtOAc洗脫，得到淡褐色固體307(12mg，27％)。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％ MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。



實(shí)施例312制備4-甲基-2-[(甲磺酰)氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 3.乙基-2-[(甲磺酰)氨基]-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯用甲磺酰氯(687mg，6mmol)，于室溫處理在二氯甲烷(15m)和吡啶(5m)中的乙基-2-氨基-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯(558mg，3mmol)攪拌溶液過(guò)夜。溶液用二氯甲烷(50mL)稀釋?zhuān)陀?N HCl水溶液(15mL，3x)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并濃縮。粗品殘余物用醚(25m)稀釋?zhuān)^(guò)濾固體，用1∶1的醚∶己烷洗滌(10mL，3x)，真空干燥得到灰白色固體標(biāo)題混合物(687mg，87％)。
B.2-[(甲磺酰)氨基]-4-甲基-噻唑-5-羧酸用1N NaOH溶液(28.4mL，28.4mmol)，處理在甲醇(9mL)中的乙基-2-[(甲磺酰)氨基]-4-甲基-噻唑-5-羧酸酯(300mg，1.14mmol)的攪拌溶液?；旌衔镉谑覝?cái)嚢柽^(guò)夜。溶液冷卻至0℃，并用6N HCl水溶液酸化至pHl。溶液用二氯甲烷-氯仿混合物萃取。干燥(MgSO4有機(jī)萃取物，過(guò)濾并真空濃縮，得到標(biāo)題酸(148mg，55％)。
C.4-甲基-2-(甲磺?；?氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺將二異丙基乙胺(87μL，0.5mmol)，加至在DMF(3m)中312B(99mg，0.42mmol)、2，4，6-三甲基苯胺(68μL，0.5mmol)、和六氟磷酸[O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲](HATU，191mg，0.5mmol)的溶液中?；旌衔镉谑覝?cái)嚢柽^(guò)夜，用EtOAc稀釋?zhuān)?.5N HCl水溶液(15m)、10％LiCl水溶液(25mL，3x)、水(930mL，2x)、鹽水，干燥(MgSO4)。過(guò)濾并濃縮。殘余物上硅膠柱進(jìn)行色譜分離，用在己烷中的50％EtOAc、接著用在己烷中的75％EtOAc和在EtOAc中的2％MeOH洗脫，得到白色固體化合物(19mg，13％)。
實(shí)施例313制備4-甲基-2-[[(苯基氨基)硫羰基]氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 將在吡啶(2mL)中2(45mg，0.16mmol)和異硫氰酸苯酯(43mg，0.32mmol)的溶液加熱至to80℃20小時(shí)。混合物冷卻，用二氯甲烷-THF混合物(80mL，3∶1)稀釋?zhuān)?N HCl水溶液(15mL，2x)洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)萃取物，過(guò)濾并濃縮。殘余物用EtOAC(20mL)稀釋?zhuān)^(guò)濾出固體，用醚(10mL，3x)洗滌，真空干燥，得到灰白色固體標(biāo)題化合物(35mg，52％)。
實(shí)施例314制備2-[[(乙基氨基)羰基]氨基-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 采用異氰酸乙酯，按照類(lèi)似于制備171-180的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物314(65％)。
實(shí)施例315制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(環(huán)丙基羰基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 3.乙基-2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5羧酸酯在氮?dú)庀拢瑢⒃跓o(wú)水四氫呋喃(75mL)中乙基-2-氨基-噻唑-5羧酸酯(972mg，6mmol，B.Plouvler，C.Bailly，R.Houssin，j-P.Henlchart heterocyles 32(4)，693-701，1991；和H.J.Becker，J.deJonge Rec.Trav.Chim，61，463，1942)、二碳酸二叔丁酯(1.94g，9mmol)和4-二甲基氨基吡啶(73mg，0.6mmol)的懸浮液攪拌24h。真空蒸發(fā)溶劑。殘余物懸浮于醚(50mL)中。固體用醚(10mL，3x)洗滌，真空干燥，得到標(biāo)題化合物(1.1g，70％)。
B.2-叔丁氧羰基氧基氨基-噻唑-5-羧酸用6N NaOH水溶液(20mL，120mmol)，處理在四氫呋喃-甲醇(80mL，1∶1)中乙基-2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-噻唑-5羧酸酯(1.1g，4.2mmol)的攪拌溶液?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?4小時(shí)。減壓蒸餾除去大部分THF的甲醇，用6N HCl水溶液(22mL)酸化處理水溶液。濾出析出的固體，用水和醚洗滌，風(fēng)干、接著真空干燥，得到灰白色固體狀標(biāo)題酸(940mg，96％)。
C.5-[[(2-氯-6-甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯將在二氯甲烷(1mL，2mmol)中的2M草酰氯，滴加到在THF(10mL)和N，N-二甲基甲酰胺(幾滴)中2-叔丁氧羰基氧基氨基-噻唑-5-羧酸(234mg，1mmol)的攪拌溶液中。溶液于室溫?cái)嚢?h。減壓、真空蒸發(fā)溶劑，得到?；却制?。
于0℃，將2-氯-6-甲基苯胺(212mg，1.5mmol)，滴加到在二氯甲烷(10mL)中2-叔丁氧羰基氧基氨基-噻唑-5-羧酸酰氯(1mmol)粗品的攪拌溶液中。加入二異丙基乙胺(516mg，4mmol)。溶液加熱至室溫并攪拌24小時(shí)，用二氯甲烷(60mL)稀釋?zhuān)?N HCl水溶液(15mL)洗滌。干燥(MgSO4)有機(jī)提取物，過(guò)濾并濃縮。殘余物用EtOAc-醚(25mL，1∶4)稀釋?zhuān)^(guò)濾固體并用醚(5mL，4x)洗滌，真空干燥得到褐色固體標(biāo)題化合物(175mg，48％)。
D.2-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺采用315C，按照類(lèi)似于制備2的方法，制備褐色固體狀標(biāo)題化合物315D。
E.2-(環(huán)丙基羰基)氨基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺將在二烷(2m)中的315D(50.6mg，0.19mmol)和環(huán)丙烷羧酸酐(302mg，1.96mmol)溶液加熱至93℃過(guò)夜。混合物真空濃縮，用EtOAc稀釋?zhuān)⒂蔑柡蚄HCO3水溶液(2x)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)提取物，過(guò)濾并濃縮。殘余物用醚研磨，得到白色固體標(biāo)題化合物(11mg，17％)。
實(shí)施例316制備2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 與0℃，將氫化鈉(19.2mg，0.8mmol)加至在THF(5m)中的315D(48.3mg，0.18mmol)和叔丁異氰酸酯(41μL，0.36mmol)的溶液中。1小時(shí)之后，混合物用EtOAc稀釋?zhuān)美鋮s的飽和氯化銨水溶液洗滌。分離水層，并用EtOAc萃取。合并EtOAc提取物，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物自動(dòng)制備HPLC純化(條件YMC S5 ODS A 20×100mm柱，由10％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)和90％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)至100％溶劑B的10分鐘梯度洗脫，流速20mL/min，λ＝220nM)，得到灰白色固體標(biāo)題化合物(18mg，28％)。
實(shí)施例317制備2-[(1，1-二甲基乙氧基羰基]氨基-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑乙酰胺 采用2-氨基-4-甲基-噻唑-5-乙酸甲酯，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備灰白色固體狀標(biāo)題化合物317。
實(shí)施例318制備2-氨基-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑乙酰胺
采用317，按照類(lèi)似于制備2的方法，制備淡棕色固體狀標(biāo)題化合物318。
實(shí)施例319制備N(xiāo)-(2-氯-6-meth，1苯基)-2-[(4，6-二甲基-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 3.2-溴-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺用氮?dú)馇鍜咴谝译?50mL)中溴化銅(II)(2.68g，12mmol)的溶液，溶液冷卻至0℃。加入亞硝酸叔丁酯(2mL，15mmol)，接著加入在乙腈(50mL)中的315D(2.68g，10mmol)的溶液，混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，并真空濃縮。殘余物溶于EtOAc中，用飽和NaHCO3水溶液洗滌，過(guò)濾除去沉淀。干燥(Na2SO4)有機(jī)提取物，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)EtOAc/醚/己烷混合物重結(jié)晶，得到黃色固體標(biāo)題化合物(1.68g，51％)。
B.N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(4，6-二甲基-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺將95％氫化鈉(15mg)加至在THF(1mL)中319A(25mg，0.075mmol)和4，6-二甲基-2-氨基吡啶(37mg，0.302mmol)的混合物中?；旌衔锛訜嶂?0℃過(guò)夜，冷卻至室溫，用飽和氯化銨水溶液稀釋?；旌衔镉肊tOAC(2x)萃取。合并有機(jī)萃取物，用水洗滌并干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)醚研磨，得到褐色固體標(biāo)題化合物(17.5mg，63％)。
實(shí)施例320
制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-r(4-乙基-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用4-乙基-2-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備固體狀標(biāo)題化合物320。
實(shí)施例321制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(2.6-二甲基-4-嘧啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用2，6-二甲基-4-氨基嘧啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備固體狀標(biāo)題化合物321。
實(shí)施例322制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-噠嗪基氨基)-5-噻唑甲酰胺 采用3-氨基嘧啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備固體狀標(biāo)題化合物322。
實(shí)施例323-335通用方法按照下述方法制備化合物323-335。將二異丙基乙胺(60μL，0.34mmol)加至在THF(0.4mL)中的胺144(31mg，0.11mmol)、適宜羧酸(0.13mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(19.5mg，0.14mmol)和乙基-3-(3-二甲基氨基)-丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(26.8mg，0.14mmol)的混合物中?；旌衔镉诿芊庠嚬苤性跉鍤庀?0℃加熱24小時(shí)。反應(yīng)混合物用二氯甲烷(4mL)稀釋?zhuān)?N HCl水溶液洗滌。二氯甲烷溶液流經(jīng)Varian Mega Bond Elut SCX陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(用甲醇預(yù)沖洗，和經(jīng)4∶1的乙腈-甲醇平衡)。柱子用乙腈-甲醇(4∶1)、甲醇-2M氨/甲醇(4∶1)連續(xù)洗脫。合并含有產(chǎn)物的餾分并真空濃縮。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。

實(shí)施例336-362通用方法以315D代替144，按照類(lèi)似于制備323-335的方法，制備化合物336-362。粗品用自動(dòng)制備HPLC純化(條件YMC S5 ODS A 20×100mm柱，由10％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)至90％溶劑A(10％ MeOH、90％H2O、0.1％TFA)的10分鐘梯度洗脫，流速20mL/min，λ＝220nM)，得到標(biāo)題化合物336-362。
“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。


實(shí)施例363制備2-[(環(huán)丙基羰基)氨基]-N-(2，6-二甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺
采用2，6-二甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備315的方法，制備標(biāo)題化合物363。
實(shí)施例364制備2-[(環(huán)丙基羰基)氨基]-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 采用2，4，6-三甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備315的方法，制備標(biāo)題化合物364實(shí)施例365制備N(xiāo)-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-2-[(環(huán)丙基羰基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用2-氯-4，6-二甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備315的方法，制備標(biāo)題化合物365。
實(shí)施例366制備[4-[2-氧-2-[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]乙基]-2-噻唑基]氨基甲酸1.1-二甲基乙酯
采用2-叔丁氧羰基氧基氨基-噻唑-4-乙酸，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物366。
實(shí)施例367制備2-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-4-噻唑乙酰胺 采用365，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物367。
實(shí)施例368制備2-甲基-5-硝基-N-(2，4，6-三甲基苯基)苯甲酰胺 采用2-甲基-5-硝基苯甲酸，按照類(lèi)似于制備3的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物368。
實(shí)施例369制備5-氨基-2-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)苯甲酰胺 將10％鈀/碳(30mg)加至在EtOAC(50mL)的368(149mg，0.5mmol)的攪拌溶液中。反應(yīng)燒瓶配有經(jīng)三通填充氫氣的氣球。對(duì)燒瓶中的氣體進(jìn)行減壓抽空，然后由氣球填充氫氣。4h后，濾過(guò)催化劑，用EtOAC(5mL，5x)洗滌。濃縮濾液，得到白色固體標(biāo)題化合物(133mg，99％)。
實(shí)施例370制備2-氨基-5-氯-N-(2，4，6-三甲基苯基)-4-嘧啶甲酰胺 采用2-氨基-5-氯-嘧啶-4-羧酸，按照類(lèi)似于制備3的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物370。
實(shí)施例371制備[4-甲基-5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-唑基]氨基甲酸1.1-二甲基乙酯 采用2-叔丁氧羰基氧基氨基-4-甲基-5-唑羧酸，按照類(lèi)似于制備1的方法，制備淡黃色固體狀標(biāo)題化合物371。
實(shí)施例372制備2-氨基-4-(甲基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-唑甲酰胺，三氟醋酸(1∶1)
采用369，按照類(lèi)似于制備4的方法，制備淡黃色固體狀標(biāo)題化合物372。
實(shí)施例373制備2-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-吡啶甲酰胺 采用6-氨基煙酸，按照類(lèi)似于制備3的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物373。
實(shí)施例374制備3-氨基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-4-吡啶甲酰胺 采用3-氨基-4-吡啶羧酸，按照類(lèi)似于制備3的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物374。
實(shí)施例375制備2-氨基-4-甲基-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-嘧啶甲酰胺 采用2-氨基-4-甲基-5-嘧啶羧酸，按照類(lèi)似于制備3的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物375。
實(shí)施例376制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(4-甲基-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用2-氨基-4-甲基-吡啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備灰白色固體狀標(biāo)題化合物376。
實(shí)施例377制備2-[(6-氨基-2-吡啶基)氨基]-N-(2-氯-6-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 采用2，6-二氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備淡棕色固體狀標(biāo)題化合物377。
實(shí)施例378制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(6-丙基-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用2-氨基-6-丙基-吡啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備灰白色固體狀標(biāo)題化合物378。
實(shí)施例379制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(6-乙基-4-嘧啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用4-氨基-6-乙基-嘧啶，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備白色固體狀標(biāo)題化合物379。
實(shí)施例380-409General Procedure按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備化合物380-409。對(duì)于380-527，“HPLC保留時(shí)間”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×50mm Ballastic柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.2％H3PO4)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.2％H3PO4)的4分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。其中“HPLC保留時(shí)間B”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 ODS 4.6×33mm Turbo柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)的2分鐘梯度洗脫，流速4mL/min，λ＝220nM。



實(shí)施例410制備′N(xiāo)-(2，6-二甲基苯基)-2-(苯基氨基)-5-噻唑甲酰胺 3.[5-[[(2，6-二甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯采用2，6-二甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備315C的方法，制備化合物410A。
B.2-氨基-N-(2，6-二甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺采用化合物410A，按照類(lèi)似于制備315D的方法，制備化合物410B。
C.標(biāo)題化合物采用化合物410B和苯胺，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.69min。
實(shí)施例411-427通用方法按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備化合物411-427。


實(shí)施例428制備′2-(2-吡啶基氨基)-N-(2，4，6-三甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 3.[5-[[(2，4，6-三甲基苯基)氨基]羰基]-2-噻唑基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙酯采用2，4，6-三甲基苯胺，按照類(lèi)似于制備315C的方法，制備化合物428A。
B.2-氨基-N-(2，6-二甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺采用428A，按照類(lèi)似于制備315D的方法，制備化合物428B。
C.標(biāo)題化合物采用化合物428B和2-氨基吡啶苯胺，按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.66min。
實(shí)施例429-443通用方法按照類(lèi)似于制備319B的方法，制備標(biāo)題化合物429-443。


實(shí)施例444制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[2-甲基-6-[r2-(4-嗎啉基)乙基]氨基-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺 向在THF(20mL)中NaH(148mg，6.17mmol)的懸浮液中，加入在THF(10mL)中的化合物315D(551mg，2.06mmol)的溶液，并于室溫?cái)嚢?.5h。于室溫，將在THF(10mL)中的4，6-二氯-2-甲基嘧啶(671.6mg，4.12mmol)溶液攪拌過(guò)夜。用醋酸淬滅反應(yīng)，真空除去溶劑。將水和飽和NaHCO3加至殘余物中，用CH2Cl2萃取。真空除去有機(jī)層，粗品經(jīng)柱色譜法提純得到444A(494mg)。
B.標(biāo)題化合物向化合物444A(30mg)中加入N-(2-氨基乙基)-嗎啉(300μ)，混合物于80℃加熱2小時(shí)。向反應(yīng)中加入水，過(guò)濾收集產(chǎn)物。HPLC保留時(shí)間為2.357min。
實(shí)施例445-461通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物445-461。


實(shí)施例462制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺 采用4，6-二氯嘧啶，按照類(lèi)似于制備444A的方法，制備化合物462A。
B.標(biāo)題化合物采用462A代替化合物444A，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例463-472通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物463-472。“HPLC保留時(shí)間B”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5ODS 4.6×33mm Turbo柱，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)的2分鐘梯度洗脫(100％溶劑B一分鐘)，流速4mL/min，λ＝220nM。

實(shí)施例473制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基-2-吡啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺
向在中DMF(350mL)中冷卻至0℃的NaH(2.83g，118mmol)的懸浮液中，加入化合物319A(31g，93.5mmol)?；旌衔镉?℃攪拌45分鐘，然后加入Bu4NI(6.9g，18.7mmol)，接著加入4-甲氧基芐基氯(18g，15mmol)。反應(yīng)加熱至室溫。用醋酸緩慢淬滅反應(yīng)，然后真空除去溶劑。向殘余物中加入水，并用飽和水性NaHCO3中和，混合物用EtOAc萃取3次，合并有機(jī)層，用水、然后用飽和NaC洗滌。真空濃縮EtOAc層，殘余物京柱色譜法純化得到473A(35g)。
向溶于THF(50mL)中的化合物473A(0.5g，1.1mmol)中，緩慢加入NaH(0.13g，5.5mmol)，接著加入2-溴-6-氨基吡啶(0.76g，4.4mmol)。反應(yīng)加熱至回流2h，然后冷卻至室溫，并用醋酸淬滅。真空除去溶劑，然后加入己烷，并于室溫?cái)嚢?。過(guò)濾收集固體沉淀，經(jīng)水和Et2O洗滌，得到473B(0.48g)。
向溶于TFA(5m)中的化合物473B(0.48g)中，加入茴香醚(2m)，接著加入三氟甲磺酸(1ml)。反應(yīng)室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后緩慢加至快速攪拌的冰、飽和NaHCO3、Et2O的CH2Cl2的混合物中。混合物低溫?cái)嚢?小時(shí)，然后經(jīng)過(guò)濾收集固體沉淀，經(jīng)水、接著Et2O/CH2Cl2混合物洗滌，得到473C(0.344g)。HPLC保留時(shí)間為3.85min。
D.標(biāo)題化合物采用473C代替化合物444A，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為2.80min。
實(shí)施例474-480通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備473D的方法，制備化合物474-480。

實(shí)施例481制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基-2-吡嗪基]氨基-5-噻唑甲酰胺
采用2-氯-6-氨基吡嗪基，按照類(lèi)似于制備473B的方法，制備化合物481A。
B.(化合物406之供選擇合成方法) 采用化合物481A代替混合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備化合物406。
C.標(biāo)題化合物采用406代替化合物444A，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為2.69min。
實(shí)施例482-486
通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備481C的方法，制備化合物482-486。
實(shí)施例487制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-(3-羥基-1-吡咯烷)-3-噠嗪基]氨基-5-噻唑甲酰胺
采用化合物3-氯-5-氨基噠嗪代替化合物2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，制備化合物487A。
采用化合物487A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備化合物487B。
C.標(biāo)題化合物以化合物487B代替化合物444A，和以3-羥基吡咯烷代替N-(2-氨基乙基)-嗎啉，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為2.493min。
實(shí)施例488
制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-(1H-咪唑-1-基)-3-噠嗪基]氨基-5-噻唑甲酰胺 采用咪唑代替3-羥基吡咯烷，按照類(lèi)似于制備487C的方法，制備化合物488。HPLC保留時(shí)間為2.61min。
實(shí)施例489制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[3-(甲基氨基)-2-吡嗪基]氨基-5-噻唑甲酰胺 采用化合物2-氯-3-氨基吡嗪基代替化合物2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，制備化合物489A。
采用化合物489A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備化合物489B。
C.標(biāo)題化合物以化合物489B代替化合物444A，和以甲胺代替N-(2-氨基乙基)-嗎啉，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為2.81min。
實(shí)施例490-494通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備489C的方法，制備化合物490-494。
實(shí)施例495制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(環(huán)己基氨基)-6-噻唑甲酰胺
采用環(huán)己基氨基代替N-(2-氨基乙基)-嗎啉，按照類(lèi)似于制備444A的方法，制備化合物495。HPLC保留時(shí)間為3.547min。
實(shí)施例496-500通用方法替換適宜胺，按照類(lèi)似于制備495的方法，制備化合物496-500。
實(shí)施例501制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-(甲氧基甲基)-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺
向70mL無(wú)水MeOH中甲基4-甲氧基乙酰乙酸甲酯(14.6g，0.1mol)和鹽酸甲脒(16.1g，0.2mol)的混合物中，分次(portionwise)加入在MeOH中的25％甲氧基鈉溶液(70mL，0.3mol)立即形成白色沉淀。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?.0h。加入醋酸(28.6mL，0.5mol)，真空濃縮反應(yīng)混合物。向殘余物中加入水，混合物用NaCl過(guò)飽和，用EtOAC(x5)萃取。合并的提取物經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到8.13g黃色固體化合物501A。
將化合物501A(5.3g，37.8mmol)和POCl3(40mL)的混合物加熱至回流2.0h。真空濃縮，將殘余物傾入冰-CH2Cl2混合物中。用濃NHOH將pH調(diào)至6.5-7。混合物用CH2Cl2(x3)萃取，合并的提取物經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥。真空濃縮，接著經(jīng)硅膠快速色譜法(CH2Cl2-EtOAc9∶1)，得到5.33g灰黃色油狀化合物501B。
與加壓試管中，將化合物501B(3.2g，20mmol)和NH4OH(50mL)的化合物加熱至85℃3.0小時(shí)。冷卻至室溫后，真空濃縮反應(yīng)混合物，殘余物用醚研磨，得到2.81g灰黃色固體化合物501C。
按照類(lèi)似于制備473B的方法，制備化合物501DE標(biāo)題化合物按照類(lèi)似于制備73C的方法，由化合物501D制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.25min。
實(shí)施例502制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-(羥甲基)-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺 向在CH2Cl2(3.0mL)中冷卻至0℃的化合物501(56mg，0.144mmol)的溶液中，加入無(wú)水(neat)BBr3(0.054mL，0.574mmol)。混合物于環(huán)境溫度攪拌1.0小時(shí)。于0℃，小心、緩慢加入MeOH，所得混合物真空濃縮。將水加入殘余物中，用飽和NaHCO3將pH調(diào)至7。過(guò)濾收集白色沉淀，用水/醚沖洗，高真空干燥，得到52mg灰白色固體化合物502。HPLC保留時(shí)間為2.84min。
實(shí)施例503制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-(4-嗎啉基甲基)-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺
向在0.5mL無(wú)水CH2Cl2中的化合物502(44.2mg，0.118mmol)的懸浮液中，加入亞硫酰氯(0.086mL，1.18mmol)。反應(yīng)混合物攪拌5.0h。真空濃縮，殘余物于CH2Cl2共沸蒸發(fā)，得到56mg黃色固體503。
B標(biāo)題化合物將在0.5mL無(wú)水二烷中化合物503A(20mg)、嗎啉(0.014mL)和二異丙基乙胺(0.09mL)的混合物加熱至85℃4.0h。真空濃縮，接著經(jīng)硅膠快速色譜法(CH2Cl2-MeOH-NH4OH95∶5∶0.5)，得到15mg灰白色固體標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為2.52min。
實(shí)施例504-513通用方法按照類(lèi)似于制備481C的方法，由503A制備化合物504-513。這些化合物具有以下結(jié)構(gòu)

實(shí)施例514制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-萘基氨基)-5-噻唑甲酰胺 用2-氨基萘基代替2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，由473A制備化合物514A。
B.標(biāo)題化合物用514A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，由473A制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為4.11min。
實(shí)施例515制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-喹啉基氨基)-5-噻唑甲酰胺
用2-氨基萘基代替2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，由473A制備化合物515A。
B.標(biāo)題化合物用515A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.94min。
實(shí)施例516制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-異喹啉基氨基)-5-噻唑甲酰胺
用3-氨基萘基代替2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，由473A制備化合物516A。
B.標(biāo)題化合物用516A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.94min。
實(shí)施例517制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-喹喔啉基氨基)-5-噻唑甲酰胺
用3-氨基喹喔啉代替2-溴-6-氨基吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，由473A制備化合物517A。
B.標(biāo)題化合物用517A代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.927min。
實(shí)施例518制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-4-甲基-2-[[2-甲基-6-(4-嗎啉基氨基]-5-噻唑甲酰胺
按照類(lèi)似于制備319A的方法，由144制備化合物518A。
用518A代替化合物319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物518B。

用518B代替化合物473A，和用4-氨基-6-氯-2-甲基嘧啶代替2-氨基-6-溴吡啶，按照類(lèi)似于制備473B的方法，制得化合物518C。
用518C代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制得化合物518D。
E.標(biāo)題化合物用517D代替化合物444A，按照類(lèi)似于制備444B的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為3.397min。
實(shí)施例519制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-4-甲基-2-[[2-甲基-6-[[2-(4-嗎啉基)乙基]氨基-4-嘧啶基]氨基-5-噻唑甲酰胺 用N-(2-氨基乙基)-嗎啉代替嗎啉，按照類(lèi)似于制備518E的方法，制得化合物519。保留時(shí)間為2.493min。
實(shí)施例520制備化合物321的另一方法
用N-(2-氨基乙基)-嗎啉代替嗎啉，按照UK專(zhuān)利申請(qǐng)GB2323595A描述的方法，由2-氨基噻唑制得化合物520A。
向在無(wú)水THF(10mL)中冷卻至-78℃的化合物520A(480mg，4.0mmol)的溶液中，通過(guò)注射器滴加在己烷中的2.5M n-BuLi(1.68mL，4.2mmol)溶液，其間保持內(nèi)部溫度低于-75℃。待完全加完后，得到淺褐色懸浮液。反應(yīng)混合物于-78℃攪拌15min。加入在5mL無(wú)水THF中的2-氯-6-甲基苯基異氰酸酯(0.6mL，4.4mmol)溶液，反應(yīng)混合物再于-78℃攪拌2.0h。加入飽和NH4Cl水溶液(10mL)，將混合物置于EtOAc-水中分配，并用EtOAC(x2)萃取。合并的提取物經(jīng)Na2SO4干燥，由EtOAc-己烷重結(jié)晶后，真空干燥，得到0.99g灰黃色晶體狀標(biāo)題化合物。
用520B代替319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物520C。
按照類(lèi)似于制備473B的方法，由化合物520C制得化合物520D。
3.標(biāo)題化合物按照類(lèi)似于制備473C的方法，制備化合物321。
實(shí)施例521制備′2-[(2，6-二甲基-4-嘧啶基)氨基]-N-苯基-5-噻唑甲酰胺
用異氰酸苯酯代替2-氯-6-甲基苯基異氰酸酯，按照類(lèi)似于制備473B的方法，由化合物520B制得化合物521A。
用521A代替319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物521B。

按照類(lèi)似于制備473B的方法，由化合物521B制得化合物521C。
D標(biāo)題化合物按照類(lèi)似于制備化合物473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為1.3min方法B。
實(shí)施例522制備′2-[(2，6-二甲基-4-嘧啶基)甲基氨基]-N-(2-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺 用2-甲基苯基異氰酸酯代替2-氯-6-甲基苯基異氰酸酯，按照類(lèi)似于制備520B的方法，制得化合物522A。
用522A代替319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物522B。
按照類(lèi)似于制備473B的方法，由化合物制522B得化合物522C。
于室溫，將氫化鈉(在油中，60％；40mg；1mmol)，加至在2ml DMF中的化合物522C(280mg；0.61mmol)的溶液中。攪拌30分鐘后，加入碘甲烷(0.2mL；3mmol)，反應(yīng)攪拌4h。將反應(yīng)混合物分配于乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)中，用水(2×50mL)和鹽水(50mL)洗滌有機(jī)層。干燥(MgSO4)并濃縮，得到油狀物，其上2.5×15cm硅膠柱進(jìn)行色譜分離(50-75％乙酸乙酯/己烷)。濃縮純的餾分，殘余物從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶，得的100mg淡黃色522D。
E標(biāo)題化合物按照類(lèi)似于制備化合物473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為1.21min方法B。
實(shí)施例523制備′2-(26-二甲基-4-嘧啶基)氨基]-N-(2-甲基苯基)-5-噻唑甲酰胺
用522C代替473B，按照類(lèi)似于制備473C的方法，制得化合物523。HPLC保留時(shí)間為1.24min方法B。
實(shí)施例524制備′N(xiāo)-(3，5-二甲氧基苯基)-2-[(2，6-二甲基-4-嘧啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 用3，5-二甲氧基苯基異氰酸酯代替甲基苯基異氰酸酯，按照類(lèi)似于制備520B的方法，制得化合物524A。
用524A代替319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物524B。
按照類(lèi)似于制備473B的方法，由524B制得化合物524C。
D標(biāo)題化合物用化合物524C代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備化合物473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為1.28min方法B。
實(shí)施例525制備′N(xiāo)-[2，6-雙(1-甲基乙基)苯基]-2-[(2，6-二甲基-4-嘧啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺
用2，2-二異丙基苯基異氰酸酯代替2-氯-6-甲基苯基異氰酸酯，按照類(lèi)似于制備520B的方法，制得化合物525A。
用525A代替319A，按照類(lèi)似于制備473A的方法，制得化合物525B。
按照類(lèi)似于制備473B的方法，由525B制得化合物525C。
D標(biāo)題化合物用化合物525C代替化合物473B，按照類(lèi)似于制備化合物473C的方法，制備標(biāo)題化合物。HPLC保留時(shí)間為1.6min方法B。
實(shí)施例526制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2，6-二甲基-4-嘧啶基)甲基氨基]-5-噻唑甲酰胺 于室溫，將在DMF中的化合物321(110mg；0.29mmol)、碳酸鉀(138mg；1mmol)和碘甲烷(0.06ml；1mmol)的混合物攪拌2h。將反應(yīng)混合物分配于乙酸乙酯(25m)和水(25m)中，用水(2×25m)和鹽水(25m)洗滌有機(jī)層。干燥(MgSO4)并濃縮，得到油狀物，其上2.5×15cm硅膠柱進(jìn)行色譜分離(1-4％MeOH/CH2Cl2)，收集含有化合物526的餾分，得到20mg產(chǎn)物。HPLC保留時(shí)間為1.3min方法B。
實(shí)施例527制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(2，6-二甲基-4-嘧啶基-)氨基]-N-甲基-5-噻唑甲酰胺 按照類(lèi)似于制備化合物526的方法，制備化合物527，收集含有化合物527的餾分，得到60mg產(chǎn)物。HPLC保留時(shí)間為1.23min方法B。
實(shí)施例528制備2-溴-N-，N-(2-氯-6-甲基苯基)-(4-甲氧芐基)-5-噻唑甲酰胺
向2-氯-6-甲基苯胺(2.86mL，23.3mmol，1.10當(dāng)量)的冷卻THF溶液(0℃)中，經(jīng)注射器滴加雙(三甲基硅烷基)氨基鋰(42.2mL，42.2mmol，2.00當(dāng)量)的1.0M溶液。將均勻溶液攪拌5分鐘，然后經(jīng)插管加入乙基2-溴-5-噻唑羧酸酯(5.00g，21.1mmol，1.00當(dāng)量，按照類(lèi)似于制備化合物319A的制備)的THF溶液。溶液攪拌15分鐘，直至經(jīng)TLC分析表明不再含有起始物質(zhì)。然后，向溶液中加入4-甲氧芐基氯(7.15mL，52.7mmol，2.5當(dāng)量)，接著加入催化量的碘化四丁銨(1.56g，4.22mmol，0.20當(dāng)量)。均勻溶液于環(huán)境溫度攪拌過(guò)夜，然后真空濃縮。將殘余物分配于乙酸乙酯和水中，有機(jī)提取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)。經(jīng)過(guò)濾和除去溶劑后，產(chǎn)物用快速色譜法純化(在己烷中的10-20％乙酸乙酯)，得到褐色固體標(biāo)題化合物(47％)。
實(shí)施例529制備N(xiāo)-′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-(4-甲氧芐基)-2-[(6-溴-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 采用528和6-溴-2-氨基吡啶為反應(yīng)物，按照類(lèi)似于制備化合物319B的方法，制備化合物529。
實(shí)施例530制備N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(6-溴-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺
將化合物529(0.500g，0.919mmol，1.00當(dāng)量)溶于5mL三氟乙酸中，并于環(huán)境溫度下加入2mL茴香醚，接著加入1mL三氟甲磺酸。將暗紅色的均勻溶液攪拌過(guò)夜，然后向溶液中小心傾入冰/碳酸氫鈉混合物淬滅反應(yīng)。濾出白色固體，并順序用水、1∶1己烷/醚、醚洗滌，得到標(biāo)題化合物(41％)。
實(shí)施例531-538通用方法按照下述方法制備化合物531-538。將含有530和過(guò)量胺的1-打蘭瓶加熱至90℃過(guò)夜。然后，用反相HPLC純化殘余物，得到純的化合物。531-555的“HPLC保留時(shí)間B”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC ODS-A C18 S7 3.0×5.0mm，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)的2分鐘梯度洗脫，流速5mL/min，λ＝220nM。

實(shí)施例539制備乙基-2-[(6-溴-2-吡啶基)氨基]-5-噻唑羧酸酯 采用乙基2-溴-5-噻唑羧酸酯和6-溴-2-氨基吡啶為反應(yīng)物，按照類(lèi)似于制備化合物319B的方法，制備化合物539。
實(shí)施例540-550通用方法按照下述方法制備化合物540-550。按照實(shí)施例528的方法，適宜苯胺縮合與化合物539(condense)，得到相應(yīng)的N-(4-甲氧芐基)酰胺。然后按照實(shí)施例531-538的方法，中間體溴吡啶與N-(3-氨基丙基)-咪唑反應(yīng)，得到相應(yīng)的二氨基吡啶啶。按照實(shí)施例530的方法，除掉4-甲氧芐基基團(tuán)，接著經(jīng)反相制備HPLC，得到化合物540-550。

實(shí)施例551制備乙基-2-[(6-溴-2-吡啶基)氨基]4-甲基-5-噻唑羧酸酯 采用乙基2-溴-5-噻唑羧酸酯和6-溴-2-氨基吡啶為反應(yīng)物，按照類(lèi)似于制備化合物319B的方法，制備化合物551。
實(shí)施例552和553采用化合物551為起始物，按照類(lèi)似于制備化合物540-550的方法，制備化合物552和553。
實(shí)施例554制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[3-[[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基]苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 于120℃，將在0.200mL DMSO中528(0.127g，0.281mmol，1.00當(dāng)量)和3-[N-，N-(叔丁氧羰基)-(3-氨基丙基)-咪唑基]-1，3-苯二胺(0.178g，0.563mmol，2.00當(dāng)量)的溶液置于密封的瓶中加熱過(guò)夜。經(jīng)反相制備HPLC純化，接著按照化合物530的方法實(shí)施脫保護(hù)，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例555制備′N(xiāo)-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[5-[[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基]-2-硝基苯]氨基-5-噻唑甲酰胺 向在乙腈中2，4-二氟硝基苯(0.400mL，3.65mmol，1.00當(dāng)量)的溶液中，加入K2CO3(0.605g，4.38mmol，1.20當(dāng)量)，即將遏制加入固體乙基-2-氨基-5-噻唑羧酸酯(0.628g，3.65mmol，1.00當(dāng)量)。密封均勻的混合物，并120℃加熱過(guò)夜。過(guò)濾溶液，然后真空濃縮。經(jīng)快速HPLC純化，得到黃色固體乙基-2-[(3-氟-6-硝基-1-苯基)氨基]-5-噻唑羧酸酯(9％)。按照實(shí)施例528的方法，用2-氯-6-甲基苯胺偶合(couple)該中間體，得到N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[3-(氟-6-硝基-1-苯基)氨基]-5-噻唑甲酰胺(21％)。該中間體與過(guò)量N-(3-氨基丙基)-咪唑于80℃反應(yīng)，接著經(jīng)反相制備HPLC純化，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例556-566通用方法按照下述方法制備化合物556-566。于120℃，將在正丁醇中2-溴-N-[2-氯-6-甲基苯基]-5-噻唑甲酰胺319A、苯胺(1當(dāng)量)、1.0N含水HCl(0.5當(dāng)量)的混合物置于密封瓶中加熱過(guò)夜。該混合物用甲醇稀釋?zhuān)a(chǎn)物用制備HPLC分離(YMC S5 ODS 30×100mm柱，梯度洗脫液包含兩種溶劑混合物混合物A10％MeOH、90％水和0.1％TFA；混合物B90％MeOH、10％水和0.1％TFA)。其中苯胺用羧酸基團(tuán)取代，反應(yīng)混合物用1N含水NaOH(5當(dāng)量)處理過(guò)夜，然后產(chǎn)物經(jīng)HPLC純化。
“HPLC保留時(shí)間B”是以下條件下的HPLC保留時(shí)間YMC S5 OSD4.6×30mm柱(用于556-560)，或YMC S7 ODS 3×50mm柱(用于561-566)，由100％溶劑A(10％MeOH、90％H2O、0.1％TFA)至100％溶劑B(90％MeOH、10％H2O、0.1％TFA)的2分鐘梯度洗脫，流速5mL/min，λ＝220nM。

實(shí)施例567N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[1-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]-1H-苯并咪唑-4-基]氨基]-5-噻唑甲酰胺 將1-溴-3-氯丙烷(10mL，0.10mmol)、咪唑(6.81g，0.10mmol)在乙醇鈉乙醇溶液(41.3mL，21wt％，1.1mmol)中的混合物加熱回流1h。冷卻到室溫后，將其過(guò)濾，濾餅用乙醇洗滌。從濾液中除去溶劑，得到油狀的3-氯-1-(咪唑-1-基)丙烷粗品。將一部分氯化物粗品(1.07gm，7.40mmol)加到4-硝基苯并咪唑(1.09gm，6.66mmol)和NaH(293mg，在油中60％，8.14mmol)在DMF(15m)中的混合物中。于60℃加熱過(guò)夜后，在75℃加熱3h，然后除去溶劑。殘余物分配在水和10％MeOH/DCM之中。分離出有機(jī)相，干燥(Na2SO4)，除去溶劑。環(huán)狀色譜法(4mm硅膠板，用含2、3、4...10％MeOH的DCM梯度洗脫)，得到主產(chǎn)物1-[3-咪唑-1-基丙基]-4-硝基苯并咪唑固體(513mg，28％)。在氫氣氛(氣瓶)下，將該物質(zhì)(250mg)和10％鈀/碳(200mg)在EtOH(10mL)中的混合物激烈攪拌1h。過(guò)濾除去催化劑，減壓去除溶劑，得到4-氨基-1-[3-咪唑-1-基丙基]苯并咪唑粗品固體。將一部分該物質(zhì)(46mg，0.19mmol)加到319A(63mg，1.0當(dāng)量)、鹽酸(0.24mL，1.0M，1.25當(dāng)量)和正丁醇(1m)的混合物中，在密封瓶中于120℃下加熱44h。冷卻到室溫后，經(jīng)制備HPLC分離出567(YMC ODS S5 4.6×30mm，HPLC保留時(shí)間1.20min)。
實(shí)施例568N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[2-(1H-咪唑-1-基)乙基]-1H-吲唑-6-基]氨基-5-噻唑甲酰胺 將1-溴-2-氯乙烷(4.6mL，0.055mol)、咪唑(3.40gm，0.050mol)在NaOEt乙醇溶液(19mL，21wt％，1當(dāng)量)中的混合物加熱回流2小時(shí)。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾餅用乙醇洗。除去濾液中的溶劑，得到2-氯-1-(咪唑-1-基)乙烷粗品。將部分氯化物粗品(2.24g，17.2mmol)加到在DMF(15m)中的6-硝基吲唑(1.63g，10.0mmol)、K2CO3(1.50mg，1.1當(dāng)量)和KI(1.70g，1.1當(dāng)量)的混合物中。于70℃加熱過(guò)夜，然后在90℃加熱4h，除去溶劑。殘余物分配在水和5％MeOH/DCM混合物中。分離出有機(jī)相，干燥(Na2SO4)，除去溶劑。環(huán)狀色譜法(4mm硅膠板，用含0、1、2％MeOH的DCM的梯度洗脫)，得到659mg 1-[2-咪唑-1-基乙基]-6-硝基吲唑和450mg異構(gòu)形式的2-[2-咪唑-1-基乙基]-6-硝基吲唑。在氫氣氛(氣瓶)下，將1-[2-咪唑-1-基乙基]-6-硝基吲唑(650mg)和10％鈀/碳(600mg)在乙醇(10mL)中的混合物激烈攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除去催化劑，減壓去除溶劑，得到6-氨基-1-[2-咪唑-1-基乙基]吲唑固體粗品。取部分粗品(68.1mg，1.5當(dāng)量)，加到556(99.3mg，0.300mmol)、鹽酸(0.45mL，1.0M，1.5當(dāng)量)和正丁醇(1.5m)的混合物中。將其在密封瓶中于120℃加熱44h。冷卻至室溫后，經(jīng)制備HPLC分離出化合物568(YMC ODSS7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.31min)。
實(shí)施例569N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[2-[2-(1H-咪唑-1-基)基]-2H-吲唑-6-基]氨基-5-噻唑甲酰胺
由異構(gòu)的2-[2-咪唑-1-基乙基]-6-硝基吲唑開(kāi)始，按照與568相同的方式，制備569(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.28min)。
實(shí)施例570N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(1-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 和實(shí)施例571N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)氨基]-5-噻唑甲酰胺 由5-硝基苯并咪唑和甲基碘開(kāi)始，按照與557和558相同的方式，制備570(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.23min)和571(YMC ODSS7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.23min)。
實(shí)施例572N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基]-1H-苯并咪唑-5-基]氨基-5-噻唑甲酰胺
將2-氯-5-硝基苯并咪唑(985mg，5.0mmol)和1-(3-氨基丙基)咪唑(1.8mL，3當(dāng)量)在甲苯(15m)中的混合物加熱回流5h。將反應(yīng)混合物分配在EtOAc和鹽水中以形成沉淀，過(guò)濾收集沉淀。將該物質(zhì)快速色譜分離(硅膠；用含1、2、3...10％MeOH的DCM混合物梯度洗脫)，得到固體2-[3-[咪唑-1-基]丙氨基]-5-硝基苯并咪唑(550mg)。將此物質(zhì)與10％Pd/碳(550mg)混合，懸浮于乙醇中，在氫氣氛(氣瓶)下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除去催化劑，減壓去除溶劑，得到的5-氨基-2-[3-咪唑-1-基丙氨基]苯并咪唑固體粗品。將部分該物質(zhì)(77mg，0.30mmol)，加到319A(99mg，1.0當(dāng)量)、鹽酸(0.60mL，1.0M，2當(dāng)量)和正丁醇(1.5m)的混合物中。在密封瓶?jī)?nèi)于120℃加熱20h。冷卻至室溫后，用制備HPLC分離出572(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.20min)。
實(shí)施例573N-(′2-氯-6-甲基苯基)-2-[[2-(4-嗎啉基甲基)-1H-苯并咪唑-5-基]氨基-5-噻唑甲酰胺 將在5.0N鹽酸水溶液(80mL)中的3，4-二氨基-硝基苯(15.3g，0.10mol)和氯乙酸(14.18g，1.5當(dāng)量)的混合物加熱回流1h。冷卻至室溫后，反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過(guò)濾，濾液在0℃貯存2天。收集形成的晶體，并自EtOH和水的混合物中重結(jié)晶，得到2-氯甲基-5-硝基苯并咪唑的鹽酸鹽7.2mg。取部分該鹽(528mg，2.13mmol)，與嗎啉(1.31mL，7當(dāng)量)在甲苯(15ml)中加熱回流4h。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾餅用甲苯洗滌。除去濾液中的溶劑，得到油狀2-[N-嗎啉基甲基]-5-硝基苯并咪唑粗品。于氫氣氛(氣瓶)下，取部分該粗品(657mg)，與10％鈀/碳(650mg)在乙醇(10mL)中攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除掉催化劑，去除溶劑，得到油狀5-氨基-2-[N-嗎啉基甲基]苯并咪唑粗品。取部分該粗品，按照570所述方法，與556偶合得到573(YMC ODSS7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間0.92min)。
實(shí)施例574N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[2-(1H-咪唑-1-基甲基)-1H-苯并咪唑-5-基]氨基-5-噻唑甲酰胺 由咪唑和2-氯甲基-5-硝基-苯并咪唑開(kāi)始，按照與570相同的方法，制得574(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.17min)。
實(shí)施例575N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[3-[5-(1H-咪唑-1-)-2-吡啶基]氨基]苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 將3-硝基苯胺(2.91g，21.1mmol)和2，5-二溴吡啶(5.0g，1當(dāng)量)的混合物在185℃加熱1h。冷卻至室溫后，將固體破碎，用飽和NaHCO3水溶液和DCM中10％MeOH/的混合物處理。過(guò)濾收集懸浮的固體，用少量DCM中的10％MeOH洗滌，然后用水洗滌，干燥后得到N-[5-溴吡啶-2-基]-5-硝基苯胺粗品3.72g。去部分粗品該物質(zhì)(500mg，1.70mmol)，與在DMF(2m)中的咪唑(116mg，1當(dāng)量)、CuI(81mg，0.25當(dāng)量)和K2CO3(235mg，1當(dāng)量)合并，混合物于130℃加熱2天。冷卻至室溫后，除去溶劑，殘余物分配在水和DCM中的20％MeOH混合物中。除去有機(jī)相，干燥(Na2SO4)，除去溶劑，得到N-[5-咪唑-1-基]吡啶-2-基]-5-硝基苯胺粗品固體。在氫氣氛下，用在EtOH中的10％鈀/碳(650mg)處理1.5h。除去催化劑和溶劑，得到N-[5-咪唑-1-基]吡啶-2-基]-5-氨基苯胺粗品。用環(huán)狀色譜法純化(4mm硅膠板，用含1、2、3...6％MeOH的DCM梯度洗脫)。隨后取該苯胺，按照570所述方法，與319A偶合得到575(YMC ODS S5 4.6×50mm，HPLC保留時(shí)間1.42min)。
實(shí)施例576N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[3-3-(1H-咪唑-1-丙氧基苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 和實(shí)施例577N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[4-[3-(1H-咪唑-1-基)丙氧基]苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 于120℃，將在DMF中的3-硝基苯酚(837mg，6.02mmol)、1-氯-3-[咪唑-1-基]丙烷(871mg，1當(dāng)量)、K2CO3(3.3g，4當(dāng)量)和NaI(1.0g，1.1當(dāng)量)的懸浮液加熱6h。冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾餅DMF洗滌。除去濾液中的溶劑，殘余物色譜分離(環(huán)狀色譜法；4mm硅膠板，用含0、1、2.5、5、7.5％MeOH的DCM梯度洗脫)，得到3-[3-咪唑-1-基丙氧基]硝基苯400mg。于氫氣氛下，用10％鈀/碳(400mg)在EtOH中處理4h。除去催化劑和溶劑，得到3-[3-咪唑-1-基丙氧基]苯胺，然后將其按照570方法與319A偶合，得到576(YMC ODS S54.6×30mm，HPLC保留時(shí)間1.33分)。
由4-硝基苯酚和1-氯-3-[咪唑-1-基]丙烷出發(fā)，按照與576相似的步驟，得到577(YMC ODS S5 4.6×30mm，HPLC保留時(shí)間1.42min)。
實(shí)施例578N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[[4-[2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基-3-甲氧基苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 由2-甲氧基-4-硝基苯酚和1-氯-3-[咪唑-1-基]-乙烷開(kāi)始，按照與576相同的方法，制得578(YMC ODS S5 4.6×30mm，HPLC保留時(shí)間1.35min)。
實(shí)施例579N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[3-[[[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基]磺酰]苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 和實(shí)施例580N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[4-[[[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]氨基]磺酰]苯基]氨基-5-噻唑甲酰胺 于室溫，向3-硝基苯磺酰氯(1.5g，6.77mmol)的THF(20mL)溶液中加入3-咪唑-1-基-丙胺(2.04mL，2.5當(dāng)量)。1h后，除去溶劑，殘余物分配在水和10％MeOH/DCM混合物中。分離出有機(jī)相，用水洗滌，干燥(Na2SO4)。在氫氣氛下，用在THF(60mL)中的10％鈀/碳(2g)對(duì)N-[3-(咪唑-1-基)丙基]-3-硝基-苯磺酰胺處理過(guò)夜。除去催化劑和溶劑，得到3-氨基-N-[3-(咪唑-1-基)丙基]苯磺酰胺粗品，然后按照570方法將其與319A偶合，得到579(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.22分)。由4-硝基苯磺酰氯和3-(咪唑-1-基)丙胺出發(fā)，按照與579相似的方式，得到580(YMC ODS S7 3×50mm，HPLC保留時(shí)間1.21分)。
權(quán)利要求
1.式IV化合物或其鹽在制備用于治療癌癥的藥物方面的用途 其中癌癥為慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、急性髓性白血病(AML)、肥大細(xì)胞增殖病、生殖細(xì)胞瘤、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、黑素瘤、胰腺癌、前列腺癌或小兒肉瘤。
2.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)。
3.按照權(quán)利要求2的用途，其中所述慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)耐STI-571。
4.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。
5.按照權(quán)利要求4的用途，其中胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)耐STI-571。
6.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥為急性髓性白血病(AML)。
7.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是肥大細(xì)胞增殖病。
8.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是生殖細(xì)胞瘤。
9.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是小細(xì)胞肺癌(SCLC)。
10.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是黑素瘤。
11.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是胰腺癌。
12.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是前列腺癌。
13.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥是小兒肉瘤。
14.按照權(quán)利要求1的用途，其中癌癥耐STI-571。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了新穎的環(huán)狀化合物及其鹽、含有該化合物的藥物組合物、以及采用該化合物治療蛋白酪氨酸激酶相關(guān)疾病例如免疫和腫瘤疾病的方法。
文檔編號(hào)C07D233/90GK1989969SQ20061017244
公開(kāi)日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2004年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月24日
發(fā)明者J·達(dá)斯, R·帕德馬納布哈, P·陳, D·J·諾爾里斯, A·M·P·多維科, J·巴里什, J·維特亞克, L·J·隆巴多, F·Y·F·李 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司