專(zhuān)利名稱(chēng)：蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
目前，測(cè)定蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的方法主要有氣相色譜法、液相色譜法和酶抑制法。色譜法的優(yōu)點(diǎn)在于結(jié)果準(zhǔn)確，但需要昂貴的儀器、熟練的操作人員，且操作煩瑣、費(fèi)時(shí)、有機(jī)溶劑消耗量大，包括樣品預(yù)處理在內(nèi)，分析單個(gè)樣品需要大約2小時(shí)和幾百毫升有機(jī)溶劑。色譜法一般用作標(biāo)準(zhǔn)方法或仲裁方法，難以應(yīng)用于大量樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的快速測(cè)定。酶抑制法的優(yōu)點(diǎn)在于耗時(shí)少，單個(gè)樣品的測(cè)定從樣品預(yù)處理到得出結(jié)果所費(fèi)時(shí)間為15～30分鐘，已廣泛應(yīng)用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。但該方法的靈敏度與使用的酶、所利用的顯色反應(yīng)以及反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度有密切的關(guān)系，且測(cè)定結(jié)果容易受到其它物質(zhì)的干擾，經(jīng)常出現(xiàn)漏檢和誤檢。該方法的檢測(cè)限隨農(nóng)藥種類(lèi)的不同有很大的差異，測(cè)定結(jié)果與色譜法的相關(guān)性差，并不能真正反應(yīng)樣品中農(nóng)藥的殘留量。公開(kāi)號(hào)為CN1349094的專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N殘留有機(jī)磷、氨基甲酸酯農(nóng)藥速測(cè)方法及速測(cè)器。該方法通過(guò)被測(cè)水樣和不含農(nóng)藥普通水樣對(duì)底物(酯類(lèi)化合物)水解，以酶作為催化劑，對(duì)比檢測(cè)兩種水解后的底物或水解產(chǎn)物以顯色方法判斷酶是否被農(nóng)藥抑制，而使其催化活性喪失或降低，以此測(cè)定農(nóng)藥殘留量。速測(cè)器由塑料反應(yīng)管、塑料取樣管、隔離柱、封口膠組成，塑料反應(yīng)管內(nèi)裝有酶與緩沖劑和內(nèi)裝顯色劑的玻璃毛細(xì)管，塑料取樣管內(nèi)裝有內(nèi)裝底物溶液的玻璃毛細(xì)管、棉花。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度高，可以快速且準(zhǔn)確地測(cè)定蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的方法，主要用于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和蔬菜生產(chǎn)基地等場(chǎng)合的快速檢測(cè)。
本發(fā)明的步驟如下(1)萃取將蔬菜切碎或絞碎，稱(chēng)取5～20g于離心管中，加入2～10g無(wú)水硫酸鈉和10～20ml的有機(jī)溶劑，將離心管置于超聲波或機(jī)械振蕩器中萃取至少2分鐘，將萃取液轉(zhuǎn)移到另一離心管中，所說(shuō)的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，正己烷或它們的混合物。
(2)凈化往裝有萃取液的離心管中加入2～5g的無(wú)水硫酸鈉和0.01～0.2g的活性炭，振蕩試管，時(shí)間至少1分鐘，使活性炭和溶液充分接觸，靜置至少1分鐘，吸取上層溶液，并直接接入針筒式過(guò)濾器，過(guò)濾去除溶液中的懸浮物，濾液收集于試管中。
(3)濃縮將裝有濾液的試管置于溫度為35～70℃的水浴中，用氮?dú)饣蚩諝鈱⒃嚬苤械娜軇┣『猛耆祾吒蓛簟?br> (4)水解及衍生化往試管中加入0.5ml濃度為0.05M的NaOH溶液，靜置5～15分鐘，再加入0.5ml衍生化試劑溶液，靜置1～5分鐘。
(5)測(cè)定在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445～460nm的條件下，測(cè)定衍生化后溶液的熒光強(qiáng)度。絕大部分氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的分子量為200左右，每一分子的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥水解后得到一分子的甲胺。典型的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥甲萘威(西維因)的分子量為201，因此可以用甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線來(lái)計(jì)算實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量。
在步驟(1)中，稱(chēng)取的蔬菜可視樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留量多少而定，所加入的無(wú)水硫酸鈉可視樣品含水量多少而定，所加入的有機(jī)溶劑可視樣品體積而定，需將樣品浸沒(méi)。另外，衍生化試劑溶液的組成可為1L去離子水中含19.1g四硼酸鈉、0.1g鄰苯二甲醛、50μl巰基乙醇。在步驟(2)中，加入的活性炭要視萃取液的體積和顏色而定。在步驟(3)中，裝有濾液的試管的水浴溫度可視有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)而定。
本發(fā)明的方法原理是將氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥在堿性條件下水解為甲胺，甲胺與衍生化試劑(鄰苯二甲醛和巰基乙醇)反應(yīng)，生成強(qiáng)熒光物質(zhì)，再以熒光檢測(cè)器檢測(cè)。最后由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算出蔬菜樣品中的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量。本發(fā)明具有如下特點(diǎn)；(1)測(cè)定速度快使用本方法，單人次測(cè)定一個(gè)樣品所需的時(shí)間約為15分鐘。本方法的萃取、濃縮、水解及衍生化步驟可以同時(shí)實(shí)施于多個(gè)樣品，使用本方法單人次測(cè)定12個(gè)樣品所需的時(shí)間約為40分鐘。(2)準(zhǔn)確度高本方法使用少量有機(jī)溶劑萃取樣品中的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥，借鑒的是色譜法的前處理方法，屬無(wú)基底干擾時(shí)氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法之一。因此本方法的穩(wěn)定性和可靠性高。本方法的測(cè)定結(jié)果和色譜法的測(cè)定結(jié)果有很好的一致性。(3)檢測(cè)限低本方法對(duì)各種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于0.1mg/kg，大大低于國(guó)家無(wú)公害蔬菜中典型氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的最大殘留限量(1-2mg/kg)。利用活性炭對(duì)萃取液進(jìn)行凈化，去除了其中的色素和其它干擾物，使空白樣品的熒光強(qiáng)度盡量小，從而獲得很低的檢測(cè)限。(4)設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低本方法所用的設(shè)備都是一些小型設(shè)備，在市場(chǎng)上容易購(gòu)得且價(jià)格低廉。所用試劑均為通用試劑，便宜易得。測(cè)定一個(gè)樣品所需的費(fèi)用不到1元。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1青菜10g，切碎，裝入離心管中；往離心管中加入10ml乙酸乙酯和3g無(wú)水硫酸鈉，將離心管置于超聲波振蕩器中萃取2分鐘，用微量移液器吸取約7ml萃取液于另一離心管中。
往裝有萃取液的離心管中加入2g無(wú)水硫酸鈉和0.025g活性炭，振蕩1分鐘，靜置1分鐘后用微量移液器吸取1ml上層溶液，將微量移液器吸頭直接接入針筒式過(guò)濾器，推出溶液，過(guò)濾去除懸浮于溶液中的活性炭。濾液收集于試管中。
將裝有濾液的試管置于溫度為65℃的水浴中，用壓縮空氣將試管中的乙酸乙酯恰好完全吹掃干凈。
往試管中加入濃度0.05mol/L的NaOH溶液0.5ml，靜置5分鐘，再加入0.5ml的衍生試劑溶液，靜置2分鐘。在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445nm的條件下，測(cè)得扣除空白后溶液的熒光強(qiáng)度為I為0.228，根據(jù)甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線C＝0.502I-0.02，可計(jì)算得到實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量為0.09mg/kg。
實(shí)施例2黃瓜10g，切碎，裝入離心管中；往離心管中加入15ml正己烷和2g無(wú)水硫酸鈉，將離心管置于超聲波振蕩器中萃取4分鐘，用微量移液器吸取約7ml萃取液于另一離心管中。
往裝有萃取液的離心管中加入5g無(wú)水硫酸鈉和0.2g活性炭，振蕩3分鐘，靜置2分鐘后用微量移液器吸取1ml上層溶液，將微量移液器吸頭直接接入針筒式過(guò)濾器，推出溶液，過(guò)濾去除懸浮于溶液中的活性炭。濾液收集于試管中。
將裝有濾液的試管置于溫度為55℃的水浴中，用壓縮空氣將試管中的正己烷恰好完全吹掃干凈。
往試管中加入濃度0.05mol/L的NaOH溶液0.5ml，靜置15分鐘，再加入0.5ml的衍生試劑溶液，靜置5分鐘。在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445nm的條件下，測(cè)得扣除空白后溶液的熒光強(qiáng)度為I為0.100，根據(jù)甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線C＝0.502I-0.02，可計(jì)算得到實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量為0.03mg/kg。
實(shí)施例3西紅柿10g，切碎，裝入離心管中；往離心管中加入5ml正己烷、5ml乙酸乙酯和5g無(wú)水硫酸鈉，將離心管置于超聲波振蕩器中萃取5分鐘，用微量移液器吸取約5ml萃取液于另一離心管中。
往裝有萃取液的離心管中加入3g無(wú)水硫酸鈉和0.015g活性炭，振蕩2分鐘，靜置3分鐘后用微量移液器吸取1ml上層溶液，將微量移液器吸頭直接接入針筒式過(guò)濾器，推出溶液，過(guò)濾去除懸浮于溶液中的活性炭。濾液收集于試管中。
將裝有濾液的試管置于溫度為70℃的水浴中，用壓縮空氣將試管中的正己烷和乙酸乙酯恰好完全吹掃干凈。
往試管中加入濃度0.05M的NaOH溶液0.5ml，靜置10分鐘，再加入0.5ml的衍生試劑溶液，靜置3分鐘。在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445nm的條件下，測(cè)得扣除空白后溶液的熒光強(qiáng)度為I為0.500，根據(jù)甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線C＝0.502I-0.02，可計(jì)算得到實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量為0.23mg/kg。
實(shí)施例4西紅柿10g，切碎，裝入離心管中；往離心管中加入5ml正己烷、10ml乙酸乙酯和10g無(wú)水硫酸鈉，將離心管置于超聲波振蕩器中萃取6分鐘，用微量移液器吸取約5ml萃取液于另一離心管中。
往裝有萃取液的離心管中加入4g無(wú)水硫酸鈉和0.01g活性炭，振蕩4分鐘，靜置4分鐘后用微量移液器吸取1ml上層溶液，將微量移液器吸頭直接接入針筒式過(guò)濾器，推出溶液，過(guò)濾去除懸浮于溶液中的活性炭。濾液收集于試管中。
將裝有濾液的試管置于溫度為35℃的水浴中，用壓縮空氣將試管中的正己烷和乙酸乙酯恰好完全吹掃干凈。
往試管中加入濃度0.05M的NaOH溶液0.5ml，靜置8分鐘，再加入0.5ml的衍生試劑溶液，靜置4分鐘。在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445nm的條件下，測(cè)得扣除空白后溶液的熒光強(qiáng)度為I為0.500，根據(jù)甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線C＝0.502I-0.02，可計(jì)算得到實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量為0.23mg/kg。
權(quán)利要求
1.蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定方法，其特征在于其步驟如下(1)萃取將蔬菜切碎或絞碎，稱(chēng)取5～20g于離心管中，加入2～10g無(wú)水硫酸鈉和10～20ml的有機(jī)溶劑，將離心管置于超聲波或機(jī)械振蕩器中萃取至少2分鐘，將萃取液轉(zhuǎn)移到另一離心管中，所說(shuō)的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，正己烷或它們的混合物；(2)凈化往裝有萃取液的離心管中加入2～5g的無(wú)水硫酸鈉和0.01～0.2g的活性炭，振蕩試管，時(shí)間至少1分鐘，使活性炭和溶液充分接觸，靜置至少1分鐘，吸取上層溶液，并直接接入針筒式過(guò)濾器，過(guò)濾去除溶液中的懸浮物，濾液收集于試管中；(3)濃縮將裝有濾液的試管置于溫度為35～70℃的水浴中，用氮?dú)饣蚩諝鈱⒃嚬苤械娜軇┣『猛耆祾吒蓛簦?4)水解及衍生化往試管中加入0.5ml濃度為0.05M的NaOH溶液，靜置5～15分鐘，再加入0.5ml衍生化試劑溶液，靜置1～5分鐘；(5)測(cè)定在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為445～460nm的條件下，測(cè)定衍生化后溶液的熒光強(qiáng)度，用甲萘威的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算實(shí)驗(yàn)樣品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量。
2.如權(quán)利要求1所述的蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定方法，其特征在于在步驟(1)中，衍生化試劑溶液的組成為1L去離子水中含19.1g四硼酸鈉、0.1g鄰苯二甲醛、50μl巰基乙醇。
全文摘要
涉及一種蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定方法，使用有機(jī)溶劑對(duì)蔬菜中的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥進(jìn)行萃取，利用活性炭去除萃取液中的色素和其它干擾物質(zhì)；用空氣或氮?dú)鈱艋蟮妮腿∫褐械娜軇┩耆祾吒蓛?，在殘余物中加入?qiáng)堿溶液，將氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥水解為甲胺；再加入衍生化試劑衍生甲胺，最后用熒光檢測(cè)器測(cè)定衍生物；由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算出蔬菜樣品中的氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的總殘留量。測(cè)定速度快，單人次測(cè)定12個(gè)樣品所需的時(shí)間約為40分鐘；準(zhǔn)確度高，測(cè)定結(jié)果和色譜法的測(cè)定結(jié)果有很好的一致性；檢測(cè)限低，對(duì)各種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于0.1mg/kg；設(shè)備簡(jiǎn)單、測(cè)定成本低，測(cè)定一個(gè)樣品所需的費(fèi)用不到1元。
文檔編號(hào)G01N21/75GK1584557SQ200410059679
公開(kāi)日2005年2月23日 申請(qǐng)日期2004年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月15日
發(fā)明者李權(quán)龍, 袁東星, 郭祥群 申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué)